盐酸小檗碱的原子吸收光谱间接测定方法
作者：邓世林 李新凤
单位：(中心实验室分析测试中心 长沙 410078)
关键词：盐酸小檗碱；光谱法；原子吸收；方法
湖南医科大学学报990626 提要 探讨离子对一原子吸收光谱法间接测定黄连素片剂中盐酸小檗碱的方法。在一定pH值条件下，将盐酸小檗碱与[Co(SCN)4]2-络合，经有机溶剂萃取后再转入水相，用火焰原子吸收光谱法测定水相中的钴，从而间接求得盐酸小檗碱的含量。用本法测定实际样品的结果与药典法一致，方法灵敏可靠，精确适用。
中国图书分类号 O657.31
Indirect determination of berberine hydrochloride
, 百拇医药
by atomic abs orption spectrometry
Deng Shilin Li Xinfeng
(Analytical Testing Center, Hunan Medical University, Changsha 410078)
A method for the indirect determination of berberine in tabellae berber ine hydrochloride by ion pair extraction and atomic absorption spectrometry was described. Berberine reacted with inorganic complex tetrathiocyanate cobalt(Ⅱ) to form a stable ion pair associated complex at certain pH value. The ion pair a ssociated complex was extracted with organic solvent and then transferred into a queous solution. The content of cobalt in the solution was measured by flame at omic absorption spectrometry and the amount of berberine hydrochloride was calcu lated according to the content of cobalt. The result of the present method agreed with pharmacopeia method. This method is sensitive, dependable, precise, and a pplicable.
, 百拇医药
Key words berberine; spectrometry,atomic absorption; methods
盐酸黄连素是广泛应用于肠道疾病的抗菌消炎药物，盐酸小檗碱(berberine hydrochloride)是其主要的有效成分。盐酸小檗碱的测定通常采用容量分析法[1]、分光光度法[2，3]和薄层扫描法[4，5]。本文主要探讨离子对测定法应用于原子吸收光谱法(AAS法)来间接测定药物中的有效成分，从而扩大AAS法测定有机物的应用范围。方法基于一定pH值，盐酸小檗碱能与[Co(SCN)4]2-络阴离子形成稳定的离子对缔合物(2∶1)，同时可被有机溶剂所萃取，测定有机相中的钴或转入水相后测定水相中的钴即可求得盐酸小檗碱的含量[6]。笔者优选了离子对的形成和萃取测定的有关条件，并直接使用钴标准水溶液作校准曲线，建立了盐酸小檗碱的AAS间接测定方法。方法的选择性和准确性好，精密度高。用本法测定实际样品，所得结果与药典法一致。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 日本岛津AA-680型原子吸收分光光度计，钴空心阴极灯，PR-5型数据处理机；Orion920型pH计；钴的测定条件：灯电流6mA，波长240.7nm，狭缝0.2nm，乙炔气流量2.0L.min-1，压力0.9kg.cm-2，空气流量8.0L.min-1，压力3.5kg.cm-2；钴标准贮备液(1g.L-1)：准确称取1.000g高纯金属钴溶解于少量1+1(V/V)HNO3中，用1%盐酸稀释至1000ml；盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所)；0.3mol.L-1的硫氰酸钴铵溶液；1，2-二氯乙烷分析纯；其余试剂均为分析纯；水为二次蒸馏水。
, 百拇医药
1.2 实验方法 准确称取0.2500g经磨细后的黄连素片剂粉样溶于约400ml热蒸馏水中，冷却后定容至500ml。取2.5ml于50ml烧杯中，加入5ml0.3mol.L-1的[Co(SCN)4]2-和30ml水，用1%盐酸调pH为2.0，转入分液漏斗中静置6h。加入10ml1，2-二氯乙烷，萃取2min，分出有机相后再重复萃取一次。合并有机相，置通风厨中在砂浴上低温加热除去有机相后，加入5mlHNO3及1mlHClO4，升高温度继续加热消化至冒高氯酸白烟。溶液清亮无色，取下冷却后转入25ml容量瓶并用蒸馏水定容至刻度。按拟定的仪器条件测定钴量并换算成样品中盐酸小檗碱的含量。
2 结果与讨论
2.1 离子对的形成及萃取条件的选择
2.1.1 pH的影响 溶液的酸度对离子对缔合物的定量形成和稳定性及萃取至关重要。不同pH值时萃取离子缔合物后的测定结果如图1。当溶液的pH值在1.8～2.2范围内时，测得的钴浓度最高且保持稳定，曲线出现一小段平台。低于或高于此范围，测得的钴浓度均下降。故实验选定钴浓度最高时的pH值；即2.0。
, 百拇医药
2.1.2 硫氰酸钴铵溶液浓度的选择 加入硫氰酸钴铵溶液的体积固定为5.0ml，改变其浓度对测定结果的影响如图2。硫氰酸钴胺溶液的浓度在0.25～0.4mol.L-1范围内最合适，过低影响缔合物的定量形成，过高则会给定量萃取带来困难，致使测定结果反而降低。
图1 酸度对离子对的形成及萃取的影响
Fig. 1 Influence of acidity on the fo rm and extraction of ion pair
图2 [Co(SCN)4]2-浓度对测定的影响
, http://www.100md.com
Fig. 2 Influence of the concentration of [Co(SCN)4]2- on determination
2.1.3 萃取剂和萃取时间的选择 对三氯 甲烷、1， 2-二氯乙烷、硝基苯、丙酮、环己烷和MIBK等多种萃取溶剂进行试验，发现以1.2-二氯 乙烷效果最好。萃取实验表明，在50ml水相中，取10ml1，2-二氯乙烷，萃取1min ，两次萃取即能将缔合物萃取完全。
2.1.4 静置时间 考查定量形成稳定的离子对缔合物所需的时间，证 明盐酸小檗碱与[Co(SCN)4]2-反应生成离子对缔合物，必须静置6h以上才能 定量形成并达到稳定。
2.1.5 线性范围和最小检出限 测定不同浓度钴标准系列溶液并换 算为溶液中盐酸小檗碱的量，得盐酸小檗碱测定的线性范围为0～2.5μg.ml-1。 该法最小检出限为0.012μg.ml-1。
, 百拇医药
2.2 准确度和精密度 分别用本法和药典法平行测定同一样品5次， 结果见附表。盐酸小壁碱含量的测定平均值本法为97.2%，药典法为97.6%。相对标准偏差 本法为0.41%，药典法为0.32%。采用F检验和t检验得出 两法的测定平 均值之间差异无显著性 (P>0.05)。方法的精密度和准确度满足要求。
附表 样品测定结果(n=5) 方法
实测值
(%)
平 均值
(%)
相对标准
偏差(%)
本 法
, 百拇医药
97.3
97.7
97.2
96.6
97.0
97.2
0.41
药典法
97.5
97.8
97.1
97.5
97.9
, http://www.100md.com
97.6
0.32
参 考 文 献
1 中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国药典(二部). 北京：人民卫生出版社，1990：437～439
2 迟家平，韩守智.紫外分光光度法测定桂林西瓜霜中盐酸小檗碱的含量.中成药，1991 ，13(11)：17～18
3 吕慧怡，张洪昌，杨令家，等.二阶导数光谱法测定复方黄连素片中小檗碱的含量.中 成药，1992，14(4)：16～17
4 梅洪勇，江利强，汪建生.双波长薄层扫描法测定葛根芩连片中小檗碱的含量.中成药 ，1989，11(10)：42～43
5 贾元印，勾建刚，赵渤年.薄层扫描法测定石斛液光丸中小檗碱的含量.中成药，1995 ，17(8)：17～18
6 叶毓琼，杨军.原子发射光谱法间接测定黄连素片剂中盐酸小檗碱的研究.分析化学，1 993，21(3)：342～344, 百拇医药
单位：(中心实验室分析测试中心 长沙 410078)
关键词：盐酸小檗碱；光谱法；原子吸收；方法
湖南医科大学学报990626 提要 探讨离子对一原子吸收光谱法间接测定黄连素片剂中盐酸小檗碱的方法。在一定pH值条件下，将盐酸小檗碱与[Co(SCN)4]2-络合，经有机溶剂萃取后再转入水相，用火焰原子吸收光谱法测定水相中的钴，从而间接求得盐酸小檗碱的含量。用本法测定实际样品的结果与药典法一致，方法灵敏可靠，精确适用。
中国图书分类号 O657.31
Indirect determination of berberine hydrochloride
, 百拇医药
by atomic abs orption spectrometry
Deng Shilin Li Xinfeng
(Analytical Testing Center, Hunan Medical University, Changsha 410078)
A method for the indirect determination of berberine in tabellae berber ine hydrochloride by ion pair extraction and atomic absorption spectrometry was described. Berberine reacted with inorganic complex tetrathiocyanate cobalt(Ⅱ) to form a stable ion pair associated complex at certain pH value. The ion pair a ssociated complex was extracted with organic solvent and then transferred into a queous solution. The content of cobalt in the solution was measured by flame at omic absorption spectrometry and the amount of berberine hydrochloride was calcu lated according to the content of cobalt. The result of the present method agreed with pharmacopeia method. This method is sensitive, dependable, precise, and a pplicable.
, 百拇医药
Key words berberine; spectrometry,atomic absorption; methods
盐酸黄连素是广泛应用于肠道疾病的抗菌消炎药物，盐酸小檗碱(berberine hydrochloride)是其主要的有效成分。盐酸小檗碱的测定通常采用容量分析法[1]、分光光度法[2，3]和薄层扫描法[4，5]。本文主要探讨离子对测定法应用于原子吸收光谱法(AAS法)来间接测定药物中的有效成分，从而扩大AAS法测定有机物的应用范围。方法基于一定pH值，盐酸小檗碱能与[Co(SCN)4]2-络阴离子形成稳定的离子对缔合物(2∶1)，同时可被有机溶剂所萃取，测定有机相中的钴或转入水相后测定水相中的钴即可求得盐酸小檗碱的含量[6]。笔者优选了离子对的形成和萃取测定的有关条件，并直接使用钴标准水溶液作校准曲线，建立了盐酸小檗碱的AAS间接测定方法。方法的选择性和准确性好，精密度高。用本法测定实际样品，所得结果与药典法一致。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 日本岛津AA-680型原子吸收分光光度计，钴空心阴极灯，PR-5型数据处理机；Orion920型pH计；钴的测定条件：灯电流6mA，波长240.7nm，狭缝0.2nm，乙炔气流量2.0L.min-1，压力0.9kg.cm-2，空气流量8.0L.min-1，压力3.5kg.cm-2；钴标准贮备液(1g.L-1)：准确称取1.000g高纯金属钴溶解于少量1+1(V/V)HNO3中，用1%盐酸稀释至1000ml；盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所)；0.3mol.L-1的硫氰酸钴铵溶液；1，2-二氯乙烷分析纯；其余试剂均为分析纯；水为二次蒸馏水。
, 百拇医药
1.2 实验方法 准确称取0.2500g经磨细后的黄连素片剂粉样溶于约400ml热蒸馏水中，冷却后定容至500ml。取2.5ml于50ml烧杯中，加入5ml0.3mol.L-1的[Co(SCN)4]2-和30ml水，用1%盐酸调pH为2.0，转入分液漏斗中静置6h。加入10ml1，2-二氯乙烷，萃取2min，分出有机相后再重复萃取一次。合并有机相，置通风厨中在砂浴上低温加热除去有机相后，加入5mlHNO3及1mlHClO4，升高温度继续加热消化至冒高氯酸白烟。溶液清亮无色，取下冷却后转入25ml容量瓶并用蒸馏水定容至刻度。按拟定的仪器条件测定钴量并换算成样品中盐酸小檗碱的含量。
2 结果与讨论
2.1 离子对的形成及萃取条件的选择
2.1.1 pH的影响 溶液的酸度对离子对缔合物的定量形成和稳定性及萃取至关重要。不同pH值时萃取离子缔合物后的测定结果如图1。当溶液的pH值在1.8～2.2范围内时，测得的钴浓度最高且保持稳定，曲线出现一小段平台。低于或高于此范围，测得的钴浓度均下降。故实验选定钴浓度最高时的pH值；即2.0。
, 百拇医药
2.1.2 硫氰酸钴铵溶液浓度的选择 加入硫氰酸钴铵溶液的体积固定为5.0ml，改变其浓度对测定结果的影响如图2。硫氰酸钴胺溶液的浓度在0.25～0.4mol.L-1范围内最合适，过低影响缔合物的定量形成，过高则会给定量萃取带来困难，致使测定结果反而降低。
图1 酸度对离子对的形成及萃取的影响
Fig. 1 Influence of acidity on the fo rm and extraction of ion pair
图2 [Co(SCN)4]2-浓度对测定的影响
, http://www.100md.com
Fig. 2 Influence of the concentration of [Co(SCN)4]2- on determination
2.1.3 萃取剂和萃取时间的选择 对三氯 甲烷、1， 2-二氯乙烷、硝基苯、丙酮、环己烷和MIBK等多种萃取溶剂进行试验，发现以1.2-二氯 乙烷效果最好。萃取实验表明，在50ml水相中，取10ml1，2-二氯乙烷，萃取1min ，两次萃取即能将缔合物萃取完全。
2.1.4 静置时间 考查定量形成稳定的离子对缔合物所需的时间，证 明盐酸小檗碱与[Co(SCN)4]2-反应生成离子对缔合物，必须静置6h以上才能 定量形成并达到稳定。
2.1.5 线性范围和最小检出限 测定不同浓度钴标准系列溶液并换 算为溶液中盐酸小檗碱的量，得盐酸小檗碱测定的线性范围为0～2.5μg.ml-1。 该法最小检出限为0.012μg.ml-1。
, 百拇医药
2.2 准确度和精密度 分别用本法和药典法平行测定同一样品5次， 结果见附表。盐酸小壁碱含量的测定平均值本法为97.2%，药典法为97.6%。相对标准偏差 本法为0.41%，药典法为0.32%。采用F检验和t检验得出 两法的测定平 均值之间差异无显著性 (P>0.05)。方法的精密度和准确度满足要求。
附表 样品测定结果(n=5) 方法
实测值
(%)
平 均值
(%)
相对标准
偏差(%)
本 法
, 百拇医药
97.3
97.7
97.2
96.6
97.0
97.2
0.41
药典法
97.5
97.8
97.1
97.5
97.9
, http://www.100md.com
97.6
0.32
参 考 文 献
1 中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国药典(二部). 北京：人民卫生出版社，1990：437～439
2 迟家平，韩守智.紫外分光光度法测定桂林西瓜霜中盐酸小檗碱的含量.中成药，1991 ，13(11)：17～18
3 吕慧怡，张洪昌，杨令家，等.二阶导数光谱法测定复方黄连素片中小檗碱的含量.中 成药，1992，14(4)：16～17
4 梅洪勇，江利强，汪建生.双波长薄层扫描法测定葛根芩连片中小檗碱的含量.中成药 ，1989，11(10)：42～43
5 贾元印，勾建刚，赵渤年.薄层扫描法测定石斛液光丸中小檗碱的含量.中成药，1995 ，17(8)：17～18
6 叶毓琼，杨军.原子发射光谱法间接测定黄连素片剂中盐酸小檗碱的研究.分析化学，1 993，21(3)：342～344, 百拇医药