抑癌基因P16P21和PRB与胃癌发生
作者：邬淑杭 马丽萍 金 伟 隋延仿
单位：邬淑杭 马丽萍 金 伟 解放军465医院内科 吉林省吉林市 132013； 隋延仿 第四军医大学病理教研室 陕西省西安市 710033
关键词：基因，抑制，肿瘤；胃肿瘤/遗传学
世界华人消化杂志990634 中国图书馆分类号 R735.2
Subject headings genes, supressor, tumor stomach; neoplasms/genetics
0 引言
胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展涉及多种癌基因激活和抑癌基因失活的过程. 抑癌基因p16，p21和pRB在许多原发性肿瘤组织中都有缺失或产生高频率的突变. 为探讨抑制基因p16，p21和pRB在胃癌组织中表达水平及与胃癌发生的关系，本文采用免疫组织化学及原位分子杂交方法对80例胃癌组织石蜡切片进行了检测.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 将西京医院1994/1995间经手术证实的胃癌标本80例，慢性萎缩性胃炎标本40例作为研究对象. 标本经100L/L福尔马林固定，常规石蜡包埋后存档. 病理分型按WHO方法，高分化腺癌16例，中分化腺癌26例，低分化腺癌24例，粘液癌14例. 另选10例正常胃粘膜组织标本作为对照. 全部标本均做5μm厚连续切片4张，1张行HE染色复查诊断，另3张行免疫组织化学及原位分子杂交研究.
1.2 方法 免疫组织化学染色采用S-P法. S-P试剂盒购自北京中山生物技术公司，实验用兔抗人p16，pRB多克隆抗体及鼠抗人p21单克隆抗体均购自美国Santa Cruz生物技术公司，详细实验方法同参考文献[1]. Dig DNA Labeling and Detection Kit为德国宝灵曼IBM公司产品. 原位分子杂交按Dig使用手册规定方法进行，具体方法同文献[2]. 实验中以神经胶质细胞瘤阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照. 免疫组织化学染色以细胞核呈清晰棕黄色或胞质胞核呈棕黄色为阳性，胞质胞核无着色为阴性. 原位杂交以细胞核、细胞质或细胞膜呈清晰棕色为阳性，以细胞无着色或与背景一致呈淡棕色为阴性.
, 百拇医药
2 结果
胃癌组织中抑癌基因p16，p21和pRB的检出率明显低于癌旁组织、慢性萎缩性胃炎和正常胃粘膜组织(表1). 比较胃癌组织病理分型间抑癌基因p16，p21和pRB检出率变化，见到p16检出率随着肿瘤分化程度降低而显著下降，而p21和pRB检出率在各病理分型间无明显差异(表2).
表1 胃癌组织中抑癌基因P16，P21和PRB检测结果 (%) 组织
n
p16
p21
PRB
阳性
阳性率
, 百拇医药
阳性
阳性率
阳性
阳性率
胃癌
80
25
31.2
30
37.50
16
20.00
癌旁组织
, http://www.100md.com
57
35
61.4b
45
78.9b
35
61.4b
萎缩性胃炎
40
26
65.0b
32
, 百拇医药
80.0b
30
75.0b
正常胃组织
10
9
90.0b
8
80.0b
9
90.0b
bP<0.01，vs 胃癌组织.
, http://www.100md.com
表2 胃癌组织病理分型抑癌基因检出率 (%) 分型
n
p16
p21
PRB
阳性
阳性率
阳性
阳性率
阳性
阳性率
高分化腺癌
16
, http://www.100md.com
9
56.0
7
43.7
3
18.8
中分化腺癌
26
10
38.5b
10
38.5
5
, http://www.100md.com
19.2
低分化腺癌
24
2
16.7b
7
29.2
5
20.8
粘液腺癌
14
2
14.3b
, 百拇医药
6
42.7
3
21.4
bP<0.01，vs 高分化腺癌.
3 讨论
肿瘤抑制基因是能够抑制细胞的恶性转化，对正常细胞起负调节作用的基因. 细胞周期的正常进行依赖于周期蛋白和抑制蛋白的调节而完成. 现已证实，p16蛋白对细胞周期具有负调节作用，p16基因在食管癌，胰腺癌等原发性肿瘤中有缺失或产生高频率的突变[3]，从而确定了p16基因的改变与肿瘤的发生关系密切. p21是所有CDKS的阻滞剂，从而抑制细胞周期的进程，其过量表达可以阻止细胞的生长，诱导p21的表达。可以阻止DNA损伤的细胞生长，有利于DNA的修复或细胞凋零的进行[4]. Shiohara et al[5]研究发现在肾细胞癌、结肠癌、卵巢癌等都有p21染色体区域的缺失，说明p21的缺失与肿瘤的发生有关. RB基因是人们发现并克隆出的第一个抗癌基因. pRB是RB基因的表达产物. RB基因丧失可造成细胞无限制生长和增殖，最后导致肿瘤形成. RB基因的缺失不仅与视网膜母细胞瘤的发生有关，而且在肺癌、乳腺癌、膀胱癌、食管癌、前列腺癌等癌组织中均发现有缺失或突变.
, http://www.100md.com
本研究表明，胃癌组织中抑癌基因p16，p21及pRB阳性表达率均明显低于相应的癌旁组织、慢性萎缩性胃炎和正常胃组织，提示抑癌基因p16，p21及pRB与胃癌的发生有密切关系. 比较胃癌组织病理分型间3种抑癌基因检出率变化，见到p16检出率随着肿瘤分化程度降低而下降，而p21及pRB检出率在各病理分型间无明显变化，提示抑癌基因p16表达减低与肿瘤的恶性程度密切相关. 抑癌基因p16，p21及pRB对细胞周期的正常进行起重要调节作用，并在不同的路径上共同发挥抑癌作用，其在胃癌组织表达率降低，提示抑癌基因p16，p21及pRB在胃肿瘤组织有缺失或突变，而失去抑癌作用.
通讯作者 邬淑杭
4 参考文献
1 姜彦多，何安光，夏书月. 肺癌nm23基因产物/核苷酸激酶表达的研究. 中华结核和呼吸杂志，1995；18：209-211
, http://www.100md.com
2 Furuta Y, Shinohara T, Sano K, Meguro M, Nagashima K. In situ hybridization with digoxigarin-labelled DNA probes for detection of viral genomes. J Clin Pathol, 1990;43:806-809
3 Kamb A, Gruis NA, Weaver-Feldhaus J, Liu Q, Harshman K, Tavigian SV , Stockert E, Day RS, Johnson EB, Skolnick MH. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumour types. Science, 1994;264:436-440
4 Waga S, Hannon GJ, Beach D and Stillman B. The p21 inhibtor of cyclin-dependent kinases controls DNA replication by interaction with PCNA. Nature(Land,) 1994;369:574-578
5 Shiohara BM, EI-Deiry WS, Wada M, Nakamaki T, Takeuchi S, Yang R, Chen DL, Vogelstein B and Koeffler HP. Absence of WAFI mutations in a variety of human maligancies. Blood, 1994;84:3781-3784
收稿日期：1999-03-06 修改日期：1999-03-30, 百拇医药
单位：邬淑杭 马丽萍 金 伟 解放军465医院内科 吉林省吉林市 132013； 隋延仿 第四军医大学病理教研室 陕西省西安市 710033
关键词：基因，抑制，肿瘤；胃肿瘤/遗传学
世界华人消化杂志990634 中国图书馆分类号 R735.2
Subject headings genes, supressor, tumor stomach; neoplasms/genetics
0 引言
胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展涉及多种癌基因激活和抑癌基因失活的过程. 抑癌基因p16，p21和pRB在许多原发性肿瘤组织中都有缺失或产生高频率的突变. 为探讨抑制基因p16，p21和pRB在胃癌组织中表达水平及与胃癌发生的关系，本文采用免疫组织化学及原位分子杂交方法对80例胃癌组织石蜡切片进行了检测.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 将西京医院1994/1995间经手术证实的胃癌标本80例，慢性萎缩性胃炎标本40例作为研究对象. 标本经100L/L福尔马林固定，常规石蜡包埋后存档. 病理分型按WHO方法，高分化腺癌16例，中分化腺癌26例，低分化腺癌24例，粘液癌14例. 另选10例正常胃粘膜组织标本作为对照. 全部标本均做5μm厚连续切片4张，1张行HE染色复查诊断，另3张行免疫组织化学及原位分子杂交研究.
1.2 方法 免疫组织化学染色采用S-P法. S-P试剂盒购自北京中山生物技术公司，实验用兔抗人p16，pRB多克隆抗体及鼠抗人p21单克隆抗体均购自美国Santa Cruz生物技术公司，详细实验方法同参考文献[1]. Dig DNA Labeling and Detection Kit为德国宝灵曼IBM公司产品. 原位分子杂交按Dig使用手册规定方法进行，具体方法同文献[2]. 实验中以神经胶质细胞瘤阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照. 免疫组织化学染色以细胞核呈清晰棕黄色或胞质胞核呈棕黄色为阳性，胞质胞核无着色为阴性. 原位杂交以细胞核、细胞质或细胞膜呈清晰棕色为阳性，以细胞无着色或与背景一致呈淡棕色为阴性.
, 百拇医药
2 结果
胃癌组织中抑癌基因p16，p21和pRB的检出率明显低于癌旁组织、慢性萎缩性胃炎和正常胃粘膜组织(表1). 比较胃癌组织病理分型间抑癌基因p16，p21和pRB检出率变化，见到p16检出率随着肿瘤分化程度降低而显著下降，而p21和pRB检出率在各病理分型间无明显差异(表2).
表1 胃癌组织中抑癌基因P16，P21和PRB检测结果 (%) 组织
n
p16
p21
PRB
阳性
阳性率
, 百拇医药
阳性
阳性率
阳性
阳性率
胃癌
80
25
31.2
30
37.50
16
20.00
癌旁组织
, http://www.100md.com
57
35
61.4b
45
78.9b
35
61.4b
萎缩性胃炎
40
26
65.0b
32
, 百拇医药
80.0b
30
75.0b
正常胃组织
10
9
90.0b
8
80.0b
9
90.0b
bP<0.01，vs 胃癌组织.
, http://www.100md.com
表2 胃癌组织病理分型抑癌基因检出率 (%) 分型
n
p16
p21
PRB
阳性
阳性率
阳性
阳性率
阳性
阳性率
高分化腺癌
16
, http://www.100md.com
9
56.0
7
43.7
3
18.8
中分化腺癌
26
10
38.5b
10
38.5
5
, http://www.100md.com
19.2
低分化腺癌
24
2
16.7b
7
29.2
5
20.8
粘液腺癌
14
2
14.3b
, 百拇医药
6
42.7
3
21.4
bP<0.01，vs 高分化腺癌.
3 讨论
肿瘤抑制基因是能够抑制细胞的恶性转化，对正常细胞起负调节作用的基因. 细胞周期的正常进行依赖于周期蛋白和抑制蛋白的调节而完成. 现已证实，p16蛋白对细胞周期具有负调节作用，p16基因在食管癌，胰腺癌等原发性肿瘤中有缺失或产生高频率的突变[3]，从而确定了p16基因的改变与肿瘤的发生关系密切. p21是所有CDKS的阻滞剂，从而抑制细胞周期的进程，其过量表达可以阻止细胞的生长，诱导p21的表达。可以阻止DNA损伤的细胞生长，有利于DNA的修复或细胞凋零的进行[4]. Shiohara et al[5]研究发现在肾细胞癌、结肠癌、卵巢癌等都有p21染色体区域的缺失，说明p21的缺失与肿瘤的发生有关. RB基因是人们发现并克隆出的第一个抗癌基因. pRB是RB基因的表达产物. RB基因丧失可造成细胞无限制生长和增殖，最后导致肿瘤形成. RB基因的缺失不仅与视网膜母细胞瘤的发生有关，而且在肺癌、乳腺癌、膀胱癌、食管癌、前列腺癌等癌组织中均发现有缺失或突变.
, http://www.100md.com
本研究表明，胃癌组织中抑癌基因p16，p21及pRB阳性表达率均明显低于相应的癌旁组织、慢性萎缩性胃炎和正常胃组织，提示抑癌基因p16，p21及pRB与胃癌的发生有密切关系. 比较胃癌组织病理分型间3种抑癌基因检出率变化，见到p16检出率随着肿瘤分化程度降低而下降，而p21及pRB检出率在各病理分型间无明显变化，提示抑癌基因p16表达减低与肿瘤的恶性程度密切相关. 抑癌基因p16，p21及pRB对细胞周期的正常进行起重要调节作用，并在不同的路径上共同发挥抑癌作用，其在胃癌组织表达率降低，提示抑癌基因p16，p21及pRB在胃肿瘤组织有缺失或突变，而失去抑癌作用.
通讯作者 邬淑杭
4 参考文献
1 姜彦多，何安光，夏书月. 肺癌nm23基因产物/核苷酸激酶表达的研究. 中华结核和呼吸杂志，1995；18：209-211
, http://www.100md.com
2 Furuta Y, Shinohara T, Sano K, Meguro M, Nagashima K. In situ hybridization with digoxigarin-labelled DNA probes for detection of viral genomes. J Clin Pathol, 1990;43:806-809
3 Kamb A, Gruis NA, Weaver-Feldhaus J, Liu Q, Harshman K, Tavigian SV , Stockert E, Day RS, Johnson EB, Skolnick MH. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumour types. Science, 1994;264:436-440
4 Waga S, Hannon GJ, Beach D and Stillman B. The p21 inhibtor of cyclin-dependent kinases controls DNA replication by interaction with PCNA. Nature(Land,) 1994;369:574-578
5 Shiohara BM, EI-Deiry WS, Wada M, Nakamaki T, Takeuchi S, Yang R, Chen DL, Vogelstein B and Koeffler HP. Absence of WAFI mutations in a variety of human maligancies. Blood, 1994;84:3781-3784
收稿日期：1999-03-06 修改日期：1999-03-30, 百拇医药