肝动脉栓塞化疗联合中药治疗对肝癌细胞凋亡的作用
作者：李胜新 廖锦歧
单位：惠州市中心人民医院肝胆外科(516001)
关键词：细胞凋亡；原发性肝癌；栓塞化疗；黄参冲剂
广东医学990604摘要：目的 了解肝动脉栓塞化疗(TACE)联合中药黄参冲剂治疗对肝癌细胞凋亡的诱导作用。方法将41例原发性肝癌分成两组：TACE组(20例)单纯给予TACE治疗；联合组(21例)在TACE治疗后给予中药黄参冲剂治疗。疗程结束后进行肝癌组织活检，用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术检测肝癌细胞凋亡状态。采用Karnofsry评分标准评价临床症状改善情况。结果 治疗结束后TACE组和联合组肝癌细胞凋亡指数分别为(35.3±15.7)%和(58.1±26.4)%。联合组临床症状改善优于TACE组。结论 肝动脉栓塞化疗联合中药黄参冲剂治疗能增强肝癌细胞凋亡，改善患者的临床症状。
Effects of liver cancer cell apoptosis by transcatheter arterial chemoembolization combined with the treatment of huangshenchongji
, http://www.100md.com
Li Shengxin, Liao Jinqi.
Hepatobiliary Surgery, Huizhou Central People's Hospital, Huizhou 516001
Abstract Objective To study the effects of liver cancer cell apoptosis by transcatheter arterial chemoembolization (TACE) combined with the treatment of huangshenchongji for primary hepatocellular carcinoma.Methods 41 cases with primary hepatocellular carcinoma (PHC) were divided into two groups. In group A, 20 patients treated with TACE, and in group B, 21 patients were treated with TACE and huangshenchongji. Results In group A and B, the apoptosis indexes were (35.3±15.7)% and (58.1±26.4)% respectively. Conclusion Treatments of TACE combined with huangshenchongji can enhanced apoptosis on primary hepatocellular carcionma.
, 百拇医药
Key words Apoptosis Primary hepatocellular carcinoma Chemoembolization Huangshenchongji
经导管肝动脉栓塞化疗术(transcatheter arterial chemoembolization, TACE)是目前被公认为治疗不能手术切除肝癌的首选方法之一，然而临床上发现仍有相当部分病例疗效不佳，其最主要的原因是未能解决肿瘤细胞完全坏死的问题[1]。从细胞凋亡的机制出发，诱导肿瘤细胞凋亡，寻找抗肿瘤的新途径，是目前肿瘤治疗研究的热门课题。我们研究了TACE联合中药黄参冲剂治疗原发性肝癌对肝癌细胞凋亡的影响，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本组41例，男35例，女6例。年龄20～73岁，平均48岁。病例选择标准：①AFP>400 ng/mL，并排除其他部位的肿瘤，AFP阴性者有病理学诊断；②肿瘤最大径为3～12 cm；③CT显示肿块无法切除或患者拒绝手术治疗；④无下腔静脉或门静脉主干癌栓形成；⑤未发现远处转移。所有病人随机分成两组，两组情况见表1，各项指标差异无统计学意义。
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表1 TACE组和联合组病例临床资料 组别
例数
性别
(男∶女)
平均年龄
(岁)
Child分级(例)
主瘤最大径
(cm)
A
B
C
TACE组
, 百拇医药
20
17∶2
49
15
4
2
7.4±4.3
联合组
21
17∶4
48
14
5
, http://www.100md.com 2
7.5±4.5
1.2 治疗方法 TACE治疗经皮股动脉或手术插管，置导管于肝固有动脉。病灶局限者置导管于肝左或肝右动脉。将表阿霉素50～80 mg(平均60 mg)、丝裂霉素8～10 mg、卡铂300 mg和碘化油10～20 mL制成混悬剂，在X线荧屏监视下缓慢注射。TACE术后TACE组给予齐墩果酸片护肝治疗，联合组加用黄参冲剂[2]，每日3包，连服4周治疗。
1.3 细胞凋亡检测 所有病例于TACE术后4周行B超导向病灶中心部取活检。福尔马林固定，石蜡包埋，4μm切片。细胞凋亡检测试剂盒购自德国Boehringer Mannbeim公司。Protk购自华美生物工程公司。主要步骤：切片脱蜡、水化、Protk消化。加TUNEL MIX至切片上，石蜡覆盖，放至37℃湿盒1 h，再洗涤，干燥。加converter-AP,放至37℃湿盒30 min，用PBS液洗涤，加底物于室温10 min后终止反应，甲醛绿衬染，封片。胞核呈蓝紫色着染颗粒者，为凋亡阳性细胞。每例观察5个视野，每个视野计数100个细胞核，计核细胞中凋亡细胞比率的均数为凋亡指数。
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1.4 临床症状改善评价 采用Karnofsry评分标准。
1.5 统计学方法 用χ2检验和t检验进行显著性检验。
2 结果
2.1 凋亡检测 41例患者肝癌组织切片均可见不同程度的蓝紫着染阳性细胞。凋亡阳性细胞可呈单个、点状或片状分布。两组病人的凋亡细胞分布方式和凋亡指数见表2。表2 TACE组和联合组凋亡细胞的分布方式与凋亡指数 组别
例数
阳性细胞分布方式[例(%)]
凋亡指数(%)
散在点状
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片状
TACE组
20
14(70.0)
6(30.0)
35.3±15.7
联合组
21
1(4.8)*
20(95.2)*
58.1±26.4*
*与TACE组比较，P<0.05
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2.2 临床症状改善 根据Karnofsky评分标准，治疗前TACE组和联合组行为状态评分分别平均为60±23分和59±25分，两组间差异无显著性(P>0.05)。治疗后分别为65±28分和82±33分，治疗后联合组明显高于TACE组(P<0.05)。
2.3 副作用 两组均主要为栓塞后综合征、发热、消化道反应等，发生率两组间未见明显差异。
3 讨论
在实体肿瘤中，癌细胞的死亡通常有两种方式，一类是小结中心的团块样细胞坏死，一类是散在于整个肿瘤组织的细胞凋亡。在肝细胞癌中，同样存在着这两种细胞死亡形式。近年来的研究表明，肝细胞凋亡的过度受抑作为主要的病理机制之一，参与肝癌的发生发展。Buisch等[3]在化学致癌物诱导大鼠肝癌的研究中发现，在肝癌癌前病变期停止使用致癌物酚巴比妥时，病变肝细胞凋亡数增加，重新给药时细胞凋亡受抑制，提示细胞凋亡与肝癌生长负相关。用增殖性刺激与致癌剂协同作用诱导肝细胞癌的研究也发现，在细胞增殖过程中，若伴有细胞凋亡，则不发生肝癌，如果不伴细胞凋亡，则出现肝癌[4]。说明肝细胞凋亡的受抑参与癌变的发生发展。从细胞凋亡的机制出发，了解抗癌疗法和药物能否诱导癌细胞凋亡，诱导凋亡能力的强弱以及通过何种机制诱导细胞凋亡，已成为新的治疗目标和筛选抗癌新药的新指引[5]。Sachs等[6]认为，有效实用的抗肿瘤治疗可能是诱导癌细胞凋亡，而不仅是抑制肿瘤细胞增殖和使用毒性药物杀死肿瘤细胞。姜小清等[7]研究了不同治疗方法对肝癌残癌细胞凋亡的影响，发现一期切除肝癌组织的细胞凋亡率为(4.9±3.4)%，TACE术后二期切除标本残癌细胞的凋亡率为(25.3±10.8)%，经导管血管紧张素Ⅱ介导升压化疗栓塞术后二期切除标本则为(42.8±27.4)%，显示不同的治疗方法影响肝癌细胞的凋亡和临床治疗效果。
, 百拇医药
从中草药中筛选肿瘤细胞凋亡诱导剂，是我国抗肿瘤治疗研究的可行方法，符合我国国情。王洁等[8]证实，主要成分为蟾蜍的中成药得力生，在适当浓度下，能成功地诱导肺癌细胞凋亡。许岸高等[2，9]研究发现，中药黄参冲剂能诱导胃癌细胞凋亡，对胃癌患者显示了良好的疗效。本组研究发现，黄参冲剂与TACE联合应用，能显著提高肝癌细胞的凋亡发生率，并改变凋亡细胞的分布方式，将片状凋亡的出现率从30%提高到95.2%，显示了良好的凋亡诱导作用，并改善了患者的生活质量。TACE联合黄参冲剂对肝癌的远期疗效有待进一步观察研究。 参考文献
1 吴沛宏，李力，张益民，等.肝动脉栓塞化疗联合CT导向下碘油乙醇注射治疗原发性肝细胞癌疗效观察.中华肿瘤杂志，1998，20(5)：391
2 许岸高，刘集鸿，甘爱华，等.黄参冲剂联合化疗治疗晚期胃癌.广东医学，1999，20(2)：150
, http://www.100md.com
3 Buisch W, Dberhammer F, Schulfe R. Apoptosis in cancer and immune development. Carcinogenesis, 1984,5(4):453
4 Ledda-Columbabo GM. Apoptosis and cancer. Carcinogenesis, 1989,10(5):847
5 McDonnell TJ, Megn RE, Rodertson LE. Implication of apoptotic cell death regulation in cancer therapy. Semin Cancer Biol, 1995,6:53
6 Sachs L, Loten J. Control of programmed cell death in normal and leukemic cells: new implications for therapy. Blood, 1998,82(2):15
, http://www.100md.com
7 姜小清，段广福，苏卡青，等.经导管升压化疗栓塞后二期肝切除肝癌细胞凋亡的研究.肿瘤防治研究，1996，23(6)：350
8 王 洁，王增礼，朱 元，等.化疗药物对肺癌细胞凋亡诱导作用的研究.中华内科杂志，1998，37(8)：532
9 Xu Angao, Li Shaoguang, Liu Jihong, et al. Studies on effects of dahuangzhechongwan huancaifang on gastric cancer cell proliferation and apoptosis. International Journal of Modern Cancer Therapy, 1998,1(1):117, 百拇医药
单位：惠州市中心人民医院肝胆外科(516001)
关键词：细胞凋亡；原发性肝癌；栓塞化疗；黄参冲剂
广东医学990604摘要：目的 了解肝动脉栓塞化疗(TACE)联合中药黄参冲剂治疗对肝癌细胞凋亡的诱导作用。方法将41例原发性肝癌分成两组：TACE组(20例)单纯给予TACE治疗；联合组(21例)在TACE治疗后给予中药黄参冲剂治疗。疗程结束后进行肝癌组织活检，用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术检测肝癌细胞凋亡状态。采用Karnofsry评分标准评价临床症状改善情况。结果 治疗结束后TACE组和联合组肝癌细胞凋亡指数分别为(35.3±15.7)%和(58.1±26.4)%。联合组临床症状改善优于TACE组。结论 肝动脉栓塞化疗联合中药黄参冲剂治疗能增强肝癌细胞凋亡，改善患者的临床症状。
Effects of liver cancer cell apoptosis by transcatheter arterial chemoembolization combined with the treatment of huangshenchongji
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Li Shengxin, Liao Jinqi.
Hepatobiliary Surgery, Huizhou Central People's Hospital, Huizhou 516001
Abstract Objective To study the effects of liver cancer cell apoptosis by transcatheter arterial chemoembolization (TACE) combined with the treatment of huangshenchongji for primary hepatocellular carcinoma.Methods 41 cases with primary hepatocellular carcinoma (PHC) were divided into two groups. In group A, 20 patients treated with TACE, and in group B, 21 patients were treated with TACE and huangshenchongji. Results In group A and B, the apoptosis indexes were (35.3±15.7)% and (58.1±26.4)% respectively. Conclusion Treatments of TACE combined with huangshenchongji can enhanced apoptosis on primary hepatocellular carcionma.
, 百拇医药
Key words Apoptosis Primary hepatocellular carcinoma Chemoembolization Huangshenchongji
经导管肝动脉栓塞化疗术(transcatheter arterial chemoembolization, TACE)是目前被公认为治疗不能手术切除肝癌的首选方法之一，然而临床上发现仍有相当部分病例疗效不佳，其最主要的原因是未能解决肿瘤细胞完全坏死的问题[1]。从细胞凋亡的机制出发，诱导肿瘤细胞凋亡，寻找抗肿瘤的新途径，是目前肿瘤治疗研究的热门课题。我们研究了TACE联合中药黄参冲剂治疗原发性肝癌对肝癌细胞凋亡的影响，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本组41例，男35例，女6例。年龄20～73岁，平均48岁。病例选择标准：①AFP>400 ng/mL，并排除其他部位的肿瘤，AFP阴性者有病理学诊断；②肿瘤最大径为3～12 cm；③CT显示肿块无法切除或患者拒绝手术治疗；④无下腔静脉或门静脉主干癌栓形成；⑤未发现远处转移。所有病人随机分成两组，两组情况见表1，各项指标差异无统计学意义。
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表1 TACE组和联合组病例临床资料 组别
例数
性别
(男∶女)
平均年龄
(岁)
Child分级(例)
主瘤最大径
(cm)
A
B
C
TACE组
, 百拇医药
20
17∶2
49
15
4
2
7.4±4.3
联合组
21
17∶4
48
14
5
, http://www.100md.com 2
7.5±4.5
1.2 治疗方法 TACE治疗经皮股动脉或手术插管，置导管于肝固有动脉。病灶局限者置导管于肝左或肝右动脉。将表阿霉素50～80 mg(平均60 mg)、丝裂霉素8～10 mg、卡铂300 mg和碘化油10～20 mL制成混悬剂，在X线荧屏监视下缓慢注射。TACE术后TACE组给予齐墩果酸片护肝治疗，联合组加用黄参冲剂[2]，每日3包，连服4周治疗。
1.3 细胞凋亡检测 所有病例于TACE术后4周行B超导向病灶中心部取活检。福尔马林固定，石蜡包埋，4μm切片。细胞凋亡检测试剂盒购自德国Boehringer Mannbeim公司。Protk购自华美生物工程公司。主要步骤：切片脱蜡、水化、Protk消化。加TUNEL MIX至切片上，石蜡覆盖，放至37℃湿盒1 h，再洗涤，干燥。加converter-AP,放至37℃湿盒30 min，用PBS液洗涤，加底物于室温10 min后终止反应，甲醛绿衬染，封片。胞核呈蓝紫色着染颗粒者，为凋亡阳性细胞。每例观察5个视野，每个视野计数100个细胞核，计核细胞中凋亡细胞比率的均数为凋亡指数。
, http://www.100md.com
1.4 临床症状改善评价 采用Karnofsry评分标准。
1.5 统计学方法 用χ2检验和t检验进行显著性检验。
2 结果
2.1 凋亡检测 41例患者肝癌组织切片均可见不同程度的蓝紫着染阳性细胞。凋亡阳性细胞可呈单个、点状或片状分布。两组病人的凋亡细胞分布方式和凋亡指数见表2。表2 TACE组和联合组凋亡细胞的分布方式与凋亡指数 组别
例数
阳性细胞分布方式[例(%)]
凋亡指数(%)
散在点状
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片状
TACE组
20
14(70.0)
6(30.0)
35.3±15.7
联合组
21
1(4.8)*
20(95.2)*
58.1±26.4*
*与TACE组比较，P<0.05
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2.2 临床症状改善 根据Karnofsky评分标准，治疗前TACE组和联合组行为状态评分分别平均为60±23分和59±25分，两组间差异无显著性(P>0.05)。治疗后分别为65±28分和82±33分，治疗后联合组明显高于TACE组(P<0.05)。
2.3 副作用 两组均主要为栓塞后综合征、发热、消化道反应等，发生率两组间未见明显差异。
3 讨论
在实体肿瘤中，癌细胞的死亡通常有两种方式，一类是小结中心的团块样细胞坏死，一类是散在于整个肿瘤组织的细胞凋亡。在肝细胞癌中，同样存在着这两种细胞死亡形式。近年来的研究表明，肝细胞凋亡的过度受抑作为主要的病理机制之一，参与肝癌的发生发展。Buisch等[3]在化学致癌物诱导大鼠肝癌的研究中发现，在肝癌癌前病变期停止使用致癌物酚巴比妥时，病变肝细胞凋亡数增加，重新给药时细胞凋亡受抑制，提示细胞凋亡与肝癌生长负相关。用增殖性刺激与致癌剂协同作用诱导肝细胞癌的研究也发现，在细胞增殖过程中，若伴有细胞凋亡，则不发生肝癌，如果不伴细胞凋亡，则出现肝癌[4]。说明肝细胞凋亡的受抑参与癌变的发生发展。从细胞凋亡的机制出发，了解抗癌疗法和药物能否诱导癌细胞凋亡，诱导凋亡能力的强弱以及通过何种机制诱导细胞凋亡，已成为新的治疗目标和筛选抗癌新药的新指引[5]。Sachs等[6]认为，有效实用的抗肿瘤治疗可能是诱导癌细胞凋亡，而不仅是抑制肿瘤细胞增殖和使用毒性药物杀死肿瘤细胞。姜小清等[7]研究了不同治疗方法对肝癌残癌细胞凋亡的影响，发现一期切除肝癌组织的细胞凋亡率为(4.9±3.4)%，TACE术后二期切除标本残癌细胞的凋亡率为(25.3±10.8)%，经导管血管紧张素Ⅱ介导升压化疗栓塞术后二期切除标本则为(42.8±27.4)%，显示不同的治疗方法影响肝癌细胞的凋亡和临床治疗效果。
, 百拇医药
从中草药中筛选肿瘤细胞凋亡诱导剂，是我国抗肿瘤治疗研究的可行方法，符合我国国情。王洁等[8]证实，主要成分为蟾蜍的中成药得力生，在适当浓度下，能成功地诱导肺癌细胞凋亡。许岸高等[2，9]研究发现，中药黄参冲剂能诱导胃癌细胞凋亡，对胃癌患者显示了良好的疗效。本组研究发现，黄参冲剂与TACE联合应用，能显著提高肝癌细胞的凋亡发生率，并改变凋亡细胞的分布方式，将片状凋亡的出现率从30%提高到95.2%，显示了良好的凋亡诱导作用，并改善了患者的生活质量。TACE联合黄参冲剂对肝癌的远期疗效有待进一步观察研究。 参考文献
1 吴沛宏，李力，张益民，等.肝动脉栓塞化疗联合CT导向下碘油乙醇注射治疗原发性肝细胞癌疗效观察.中华肿瘤杂志，1998，20(5)：391
2 许岸高，刘集鸿，甘爱华，等.黄参冲剂联合化疗治疗晚期胃癌.广东医学，1999，20(2)：150
, http://www.100md.com
3 Buisch W, Dberhammer F, Schulfe R. Apoptosis in cancer and immune development. Carcinogenesis, 1984,5(4):453
4 Ledda-Columbabo GM. Apoptosis and cancer. Carcinogenesis, 1989,10(5):847
5 McDonnell TJ, Megn RE, Rodertson LE. Implication of apoptotic cell death regulation in cancer therapy. Semin Cancer Biol, 1995,6:53
6 Sachs L, Loten J. Control of programmed cell death in normal and leukemic cells: new implications for therapy. Blood, 1998,82(2):15
, http://www.100md.com
7 姜小清，段广福，苏卡青，等.经导管升压化疗栓塞后二期肝切除肝癌细胞凋亡的研究.肿瘤防治研究，1996，23(6)：350
8 王 洁，王增礼，朱 元，等.化疗药物对肺癌细胞凋亡诱导作用的研究.中华内科杂志，1998，37(8)：532
9 Xu Angao, Li Shaoguang, Liu Jihong, et al. Studies on effects of dahuangzhechongwan huancaifang on gastric cancer cell proliferation and apoptosis. International Journal of Modern Cancer Therapy, 1998,1(1):117, 百拇医药