大肠腺癌中p16、bcl-2异常表达与多药耐药性关系的研究
作者：郑绍光 罗秉庆 唐青梅 陈贵诚 俞冬梅
单位：广西柳州地区人民医院病理科(柳州 545002)
关键词：结肠直肠肿瘤；腺癌；基因表达；多药耐药性；免疫组织化学
肿瘤990607 摘要：目的 研究大肠腺癌p16、bcl-2表达与多药耐药性的关系。方法 应用S-P免疫组化法检测52例大肠腺癌及30例癌旁组织中p16、bcl-2、p-gp的表达。结果 癌组织中p16阳性率61.5%(32/52)；bcl-2阳性率78.8%(41/52)；p-gp阳性率82.6%(43/52)。p16在不典型增生组织的表达高于正常粘膜上皮(P<0.05)，癌与不典型增生组织的表达无差异(P>0.05)。癌p16表达水平与癌组织分化呈正相关，与肿瘤细胞的浸润深度、淋巴结转移及p-gp表达水平呈负相关。bcl-2在癌旁的正常粘膜上皮无表达，在癌与不典型增生及p-gp的表达无差异(P>0.05)。p-gp在癌旁与癌的表达无差异(P>0.05)，与肿瘤的浸润深度及淋巴结转移呈正相关。结论 p16，bcl-2,mdr-1基因表达对判断病人耐药程度、设计治疗方案、判断预后具有重要的临床意义
, 百拇医药
中图分类号：R735.34 文章标识码：A 文章编号：1000-7431(1999)06-0341-04
STUDY ON RELATIONSHIP BETWEEN p16，bcl-2 EXPRESSION AND MULTIDRUG RESISTANCE IN ADENOCARCINOMA OF COLON
ZHENG Shao-guang,LUO Bing-qing,TANG Qing-mei,et al.
(Department of Pathology,Liuzhou Region People′s Hospital，Liuzhou 545002,China)
Abstract：Objective To study the relationship between p16,bcl-2 expression and multidrug resistance (MDR) in adenocarcinoma of colon.Methods The detection of p16,bcl-2 and P-gp expression was carried out on 52 cases of adenocarcinoma of colon and 30 cases of carcinoma adjacent tissue by using s-p immunohistochemical methods.Results The positive expresssions for p16, bcl-2 and P-gp were 61.5% (32/52 cases),78.8% (41/52 cases) and 82.6% (43/52 cases) respectively. P16 expression in atypical hyperplasia epithelium was higher than that in normal one (P<0.05),but not with carcinoma (P>0.05). P16 expresstion is positively correlated with degree of differentiation,but negatively with depth of invasion,lymph node metastasis and P-gp expressive value.Bcl-2 was not expressed in normal epithelium,and showed no significant difference between carcinoma,atypical hyperplasia epithelium and P-gp expression (P>0.05). P-gp expression in cancer adjacent tissue and in adenocarcinoma showed no significant difference (P>0.05). P-gp expression was positively correlated between the depth of invasion and lymph node metastasis.Conclusion Detection of p16,bcl-2 and P-gp expression may play an important role in evaluating the degree of drug resistence,the means of treatment and the prognosis.
, 百拇医药
Key words： Colorectal neoplasms；Adenocarcinoma;Gene expression；MDR；Immunohistochemistry
肿瘤抑癌基因p16蛋白和抑凋亡基因bcl-2蛋白的异常表达与肿瘤的发生和增殖相关[1，2]。肿瘤多药耐药性基因mdr-1的编码产物p-gp具有将抗癌药物泵出细胞、使细胞内药物浓度降低的功能，从而使细胞产生耐药性[3]。关于p16和bcl-2蛋白异常表达与mdr-1基因表达关系的研究，国内尚未见报道，作者应用免疫组化方法研究p16、bcl-2异常表达与大肠腺癌中MDR的关系，并探讨p16、bcl-2和mdr-1三个基因蛋白与大肠腺癌临床病理及浸润、转移的关系。
材料和方法
一、材料 收集柳州地区人民医院和柳州市肿瘤医院1990～1998年间手术切除的大肠腺癌根治标本52例及癌旁组织30例。在癌组中，乳头状腺癌18例、管状腺癌22例、粘液腺癌11例、印戒细胞癌1例。在癌旁组中，正常粘膜5例，轻度不典型增生8例，中度不典型增生10例，重度不典型增生7例。大肠腺癌按分化程度[4]分为Ⅰ级7例，Ⅱ级34例，Ⅲ级11例。肠系膜淋巴结有转移36例，淋巴结反应性增生16例。男性28例，女性24例，年龄10～81岁，平均51.7岁。所有患者术前未经化疗和放疗。送检标本经常规福尔马林固定，石蜡包埋，连续5μm厚度切片，分别作HE染色和免疫组化染色。
, 百拇医药
二、试剂及免疫组化染色 p16多抗为美国Santa Cruz公司产品，bcl-2(100)和p-gp(JSB1)单抗为美国Maxin公司产品，S-P kit为美国Zymed公司产品，均为即用型，购自福州迈新生物技术开发公司。检测用S-P免疫组化法，DAB显色，染色步骤按说明书进行，加入一抗前采用微波抗原修复，一抗温育时间延长至3 h。用已知阳性切片作阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。
三、免疫组化染色阳性结果判断 阳性信号为棕黄色，p16主要存在于细胞浆内，bcl-2、p-gp主要存在于胞浆和胞膜，每张免疫组化切片由两名病理医师双盲观察，根据Valm[5]判断标准，将结果分为阴性(一)、弱阳性(+)和阳性(++)，统计学分析采用χ2检验。
结果
一、p16基因的表达(见表1、2，图见封三图2) 正常粘膜上皮与不典型增生p16表达有明显差异(P<0.05)。癌与不典型增生p16表达未见明显差异(P>0.05)。乳头状腺癌和管状腺癌阳性率高于粘液腺癌和印戒细胞癌，高分化显著高于低分化(P<0.05)。肿瘤浸润至浆膜层阳性率显著低于肿瘤局限于粘膜及粘膜下层(P<0.01)。大肠腺癌组织与淋巴结转移灶中p16蛋白表达基本一致，淋巴结转移阳性组低于阴性组，(P<0.05)。
, 百拇医药
图2 大肠管状腺癌p16阳性表达(棕黄色)在肿瘤细胞的胞浆内(SP×100)
表1 p16、bcl-2、p-gp基因在大肠腺癌及癌旁组织的表达 组 织
n
p16
P值
bcl-2
P值
p-gp
P值
+
%
+
, http://www.100md.com
%
+
%
正常粘膜上皮
5
2
40.0
0
0
3
60.0
轻度不典型增生
8
5
, http://www.100md.com
62.5
<0.05*
5
62.5
<0.05*
5
62.5
>0.05*
中度不典型增生
10
8
80.0
, 百拇医药
7
70.0
7
70.0
重度不典型增生
7
6
85.7
6
85.7
6
85.7
大肠腺癌
, 百拇医药
52
32
61.5
>0.05**
41
78.9
>0.05**
43
82.6
>0.05**
*不典型增生与正常粘膜上皮比较，**癌与不典型增生比较。表2 大肠腺癌p16、bcl-2、p-gp表达与临床病理的关系 病 理 特 征
, 百拇医药
n
p16
P值
bcl-2
P值
p-gp
P值
+
%
+
%
+
%
病理分类
, http://www.100md.com
管状腺癌
22
16
72.7
19
86.4
19
86.4
乳头状腺癌
18
13
72.2
<0.05
, http://www.100md.com
13
72.2
<0.05
12
66.7
>0.05
粘液腺癌
11
3
27.2
8
72.7
11
, 百拇医药
100.0
印戒细胞癌
1
0
0
1
100.0
1
100.0
分化程度
Ⅰ
7
6
, 百拇医药 85.7
6
85.7
4
57.1
Ⅱ
34
25
73.5
<0.05
26
76.5
>0.05
, 百拇医药 28
82.4
>0.05
Ⅲ
11
1
9.1
9
81.8
11
100.0
浸润程度
粘膜及粘膜下
, 百拇医药 4
4
100.0
3
75.0
2
50.0
肌层
29
21
72.4
<0.01
25
86.2
, http://www.100md.com
>0.01
22
75.9
<0.01
浆膜层
19
7
36.8
13
68.4
19
100.0
淋巴结转移
, http://www.100md.com
阴性组
16
14
87.5
<0.05
12
75.0
>0.05
7
43.8
<0.05
阳性组
36
, 百拇医药
18
50.0
29
80.6
36
100.0
二、bcl-2基因表达(见表1、2，图见封三图3)bcl-2在癌旁正常粘膜上皮无表达，在不典型增生的表达随程度加重而增加，癌与不典型增生的表达无差异。不同组织类型及不同分化的大肠腺癌中bcl-2蛋白表达未见明显差异。与肿瘤的浸润程度、淋巴结转移及p-gp的表达水平无关(P>0.05)。
图3 大肠管状腺癌bcl-2阳性表达(棕黄色)在肿瘤细胞胞浆内(SP×100)
, 百拇医药
三、p-gp蛋白的表达(见表1、2，图见封三图4) 癌旁正常粘膜上皮比不典型增生p-gp表达略低，但未见明显差异，不同组织类型及不同分化的大肠腺癌中p-gp蛋白表达未见明显差异(P>0.05)。肿瘤浸润至浆肌层大肠腺癌的p-gp阳性率比肿瘤局限于粘膜及粘膜下层明显增高(P<0.01)。淋巴结转移阳性组高于阴性组，具有非常明显意义(P<0.01)。
图4 大肠管状腺癌P-gp阳性表达(棕黄色)在肿瘤细胞的胞浆及胞膜(SP×100)
四、大肠腺癌p16、bcl-2的表达与p-gp表达的关系(见表3) 32例p16阳性大肠腺癌中，p-gp阳性率75%(24/32)，20例p16阴性大肠腺癌中，p-gp阳性率95%(19/20)，大肠腺癌中p16异常表达与mdr-1的表达呈负相关(P<0.05)。41例bcl-2阳性大肠腺癌中，p-gp阳性率85.3%(35/41)，11例bcl-2阴性大肠腺癌中，p-gp阳性率72.7%(8/11)，大肠腺癌中bcl-2异常表达与mdr-1的表达无明显相关性(P>0.05)。
, 百拇医药
表3 大肠腺癌中p16、bcl-2表达与p-gp表达的关系 p-gp表达
n(%)
p16表达
bcl-2表达
-(%)
+(%)
-(%)
+(%)
阴性组
9(17.3)
1(11.1)
8(88.9)
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3(33.3)
6(66.7)
阳性组
43(82.6)
19(44.2)
24(55.8)
8(18.6)
35(81.4)
合 计
52(100.0)
20(38.5)
32(61.5)
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11(21.1)
41(78.9)
讨论
已知，mdr-1基因的表达水平与人体肿瘤细胞MDR有关，而mdr-2与耐药无关[3]。p-gp是细胞产生MDR表型的分子基础，具有MDR的肿瘤细胞，p-gp表达水平与耐药程度成正比[6]。目前通过对人体各种组织的检测显示，在人的许多正常组织中也有mdr-1表达，如结肠、肝、肾上腺等。这些正常组织表达p-gp的意义在于保护机体和器官免遭外源性毒素(包括抗癌药物)的侵害，排泄其代谢产物，转化内源性有害物质，具有重要的生理意义[3，6]。当然，正常组织中p-gp蛋白的表达也有不利的一面，这些正常组织和器官所发生的肿瘤也往往有较高的MDR基因表达，且多为天然性耐药，常常表现为对化疗不敏感，失去一种有效的治疗机会。本研究应用免疫组化检测方法发现82.6%的大肠腺癌有p-gp表达，癌旁正常粘膜上皮及不典型增生也有较高的表达。发现不同组织类型及不同分化的大肠腺癌中p-gp蛋白表达未见明显差异。而与肿瘤细胞的浸润程度及淋巴结转移呈明显的正相关。因此，检测大肠腺癌中p-gp表达水平，对判断病人耐药程度，设计治疗方案，判断预后都具有重要的临床意义。
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p16基因是一种新型的抑癌基因，定位于9号染色体短臂21区(9p21)，其编码产物p16蛋白直接参与细胞周期调节，是细胞G1期重要负调节蛋白[7，8]。p16(MTS1)基因的变异与人类多种恶性肿瘤有关。本组研究结果显示，p16蛋白在乳头状腺癌和管状腺癌的表达显著高于粘液腺癌和印戒细胞癌，在高分化表达显著高于低分化。p16蛋白与肿瘤浸润的深度和淋巴结转移及p-gp蛋白水平呈显著的负相关(P<0.05)。在p16蛋白阴性组，肿瘤分化低，浸润程度深，复发转移发生率明显高于阳性组。因为p16基因的突变率低，应用免疫组化检测的p16基因在大部分病例可能为野生型而非突变型，这与p53基因的情况恰好相反。p16蛋白的这一特点可能有一定的临床意义[9]。提示p16基因异常及p16蛋白表达缺失与大肠腺癌的发生及恶性进展有关。检测p16蛋白有可能成为判断大肠腺癌预后的一个指标。
近年来研究显示，大肠腺癌的发生不仅与癌基因的激活和抑癌基因的突变和缺失有关，还与细胞凋亡受抑制有关[10]。bcl-2是目前已知的一种抑制细胞凋亡的蛋白，它是由14/18染色体易位使bcl-2基因与免疫球蛋白重链位点并列，导致基因连续过度表达。本研究发现bcl-2在癌旁正常粘膜上皮无表达，在不典型增生的表达随程度的加重而增加，而在癌与不典型增生的表达无差异(P>0.05)，与组织学类型、组织分级及肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及p-gp表达水平无关(P>0.05)。提示在大肠腺癌发生早期即出现bcl-2表达及细胞凋亡异常，细胞凋亡可能随着癌发生过程中细胞增殖的旺盛而增多[1]，bcl-2表达与凋亡率呈显著负相关，此表达不断增强提示凋亡受抑制可能是大肠腺癌发生的一个重要机制。
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作者简介：郑绍光，男，大学本科，主任医师。
参考文献
[1]李 楠，徐采朴.p16基因与肿瘤〔J〕.国外医学肿瘤学分册，1995，22：257
[2]徐晓师，殷智榕，黄 颖，等.大肠腺癌及癌中细胞凋亡和基因的表达〔J〕.临床与实验病理学杂志，1998，14(4)：328
[3]纪小龙，施作霖.诊断免疫组织化学〔J〕.北京军事医学科学出版社，1997：251
[4]陈忠年，沈铭昌，郭慕依.实用外科病理学〔J〕.上海：上海医科大学出版社，1997：364
[5]Volm M,Mattern J,Samsel B.Overexpression of p-glycoprotein and glutathione S-transferase in resistant non-small cell lung carcinomas of smokers〔J〕. Br J Cancer,1991,64(4):700
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[6]施作霖，陈 林，陈梓甫，等.P糖蛋白和谷胱苷肽-S-转移酶在肾细胞癌中的表达〔J〕.临床与实验病理学杂志，1998，14(2)：132
[7]陆哲明，张 波.p16抑癌基因的发现和研究〔J〕.国外医学肿瘤学分册，1995，22：321
[8]高志安，张世羽，杨光华.横纹肌肉瘤p16基因及其蛋白表达的研究〔J〕.中华病理学杂志，1998，27(4)：292
[9]刘明利，楼方定，丁华野，等.非Hodgkins淋巴瘤p16基因和蛋白的表达〔J〕.中华病理学杂志，1998，27(5)：368
[10]郑德先.细胞凋亡的研究进展〔J〕.中华病理学杂志，1996，25(1)：50
[11]King ED,Matteson J,Jacobs SC, et al. Incidence of apoptosis,cell proliferation and bcl-2 expression in transitional cell carcinoma of the bladder:association with tumor progression〔J〕.J Urol,1996,155:316
(收稿日期：1999-05-26 修回日期：1999-08-03), http://www.100md.com
单位：广西柳州地区人民医院病理科(柳州 545002)
关键词：结肠直肠肿瘤；腺癌；基因表达；多药耐药性；免疫组织化学
肿瘤990607 摘要：目的 研究大肠腺癌p16、bcl-2表达与多药耐药性的关系。方法 应用S-P免疫组化法检测52例大肠腺癌及30例癌旁组织中p16、bcl-2、p-gp的表达。结果 癌组织中p16阳性率61.5%(32/52)；bcl-2阳性率78.8%(41/52)；p-gp阳性率82.6%(43/52)。p16在不典型增生组织的表达高于正常粘膜上皮(P<0.05)，癌与不典型增生组织的表达无差异(P>0.05)。癌p16表达水平与癌组织分化呈正相关，与肿瘤细胞的浸润深度、淋巴结转移及p-gp表达水平呈负相关。bcl-2在癌旁的正常粘膜上皮无表达，在癌与不典型增生及p-gp的表达无差异(P>0.05)。p-gp在癌旁与癌的表达无差异(P>0.05)，与肿瘤的浸润深度及淋巴结转移呈正相关。结论 p16，bcl-2,mdr-1基因表达对判断病人耐药程度、设计治疗方案、判断预后具有重要的临床意义
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中图分类号：R735.34 文章标识码：A 文章编号：1000-7431(1999)06-0341-04
STUDY ON RELATIONSHIP BETWEEN p16，bcl-2 EXPRESSION AND MULTIDRUG RESISTANCE IN ADENOCARCINOMA OF COLON
ZHENG Shao-guang,LUO Bing-qing,TANG Qing-mei,et al.
(Department of Pathology,Liuzhou Region People′s Hospital，Liuzhou 545002,China)
Abstract：Objective To study the relationship between p16,bcl-2 expression and multidrug resistance (MDR) in adenocarcinoma of colon.Methods The detection of p16,bcl-2 and P-gp expression was carried out on 52 cases of adenocarcinoma of colon and 30 cases of carcinoma adjacent tissue by using s-p immunohistochemical methods.Results The positive expresssions for p16, bcl-2 and P-gp were 61.5% (32/52 cases),78.8% (41/52 cases) and 82.6% (43/52 cases) respectively. P16 expression in atypical hyperplasia epithelium was higher than that in normal one (P<0.05),but not with carcinoma (P>0.05). P16 expresstion is positively correlated with degree of differentiation,but negatively with depth of invasion,lymph node metastasis and P-gp expressive value.Bcl-2 was not expressed in normal epithelium,and showed no significant difference between carcinoma,atypical hyperplasia epithelium and P-gp expression (P>0.05). P-gp expression in cancer adjacent tissue and in adenocarcinoma showed no significant difference (P>0.05). P-gp expression was positively correlated between the depth of invasion and lymph node metastasis.Conclusion Detection of p16,bcl-2 and P-gp expression may play an important role in evaluating the degree of drug resistence,the means of treatment and the prognosis.
, 百拇医药
Key words： Colorectal neoplasms；Adenocarcinoma;Gene expression；MDR；Immunohistochemistry
肿瘤抑癌基因p16蛋白和抑凋亡基因bcl-2蛋白的异常表达与肿瘤的发生和增殖相关[1，2]。肿瘤多药耐药性基因mdr-1的编码产物p-gp具有将抗癌药物泵出细胞、使细胞内药物浓度降低的功能，从而使细胞产生耐药性[3]。关于p16和bcl-2蛋白异常表达与mdr-1基因表达关系的研究，国内尚未见报道，作者应用免疫组化方法研究p16、bcl-2异常表达与大肠腺癌中MDR的关系，并探讨p16、bcl-2和mdr-1三个基因蛋白与大肠腺癌临床病理及浸润、转移的关系。
材料和方法
一、材料 收集柳州地区人民医院和柳州市肿瘤医院1990～1998年间手术切除的大肠腺癌根治标本52例及癌旁组织30例。在癌组中，乳头状腺癌18例、管状腺癌22例、粘液腺癌11例、印戒细胞癌1例。在癌旁组中，正常粘膜5例，轻度不典型增生8例，中度不典型增生10例，重度不典型增生7例。大肠腺癌按分化程度[4]分为Ⅰ级7例，Ⅱ级34例，Ⅲ级11例。肠系膜淋巴结有转移36例，淋巴结反应性增生16例。男性28例，女性24例，年龄10～81岁，平均51.7岁。所有患者术前未经化疗和放疗。送检标本经常规福尔马林固定，石蜡包埋，连续5μm厚度切片，分别作HE染色和免疫组化染色。
, 百拇医药
二、试剂及免疫组化染色 p16多抗为美国Santa Cruz公司产品，bcl-2(100)和p-gp(JSB1)单抗为美国Maxin公司产品，S-P kit为美国Zymed公司产品，均为即用型，购自福州迈新生物技术开发公司。检测用S-P免疫组化法，DAB显色，染色步骤按说明书进行，加入一抗前采用微波抗原修复，一抗温育时间延长至3 h。用已知阳性切片作阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。
三、免疫组化染色阳性结果判断 阳性信号为棕黄色，p16主要存在于细胞浆内，bcl-2、p-gp主要存在于胞浆和胞膜，每张免疫组化切片由两名病理医师双盲观察，根据Valm[5]判断标准，将结果分为阴性(一)、弱阳性(+)和阳性(++)，统计学分析采用χ2检验。
结果
一、p16基因的表达(见表1、2，图见封三图2) 正常粘膜上皮与不典型增生p16表达有明显差异(P<0.05)。癌与不典型增生p16表达未见明显差异(P>0.05)。乳头状腺癌和管状腺癌阳性率高于粘液腺癌和印戒细胞癌，高分化显著高于低分化(P<0.05)。肿瘤浸润至浆膜层阳性率显著低于肿瘤局限于粘膜及粘膜下层(P<0.01)。大肠腺癌组织与淋巴结转移灶中p16蛋白表达基本一致，淋巴结转移阳性组低于阴性组，(P<0.05)。
, 百拇医药
图2 大肠管状腺癌p16阳性表达(棕黄色)在肿瘤细胞的胞浆内(SP×100)
表1 p16、bcl-2、p-gp基因在大肠腺癌及癌旁组织的表达 组 织
n
p16
P值
bcl-2
P值
p-gp
P值
+
%
+
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%
+
%
正常粘膜上皮
5
2
40.0
0
0
3
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轻度不典型增生
8
5
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62.5
<0.05*
5
62.5
<0.05*
5
62.5
>0.05*
中度不典型增生
10
8
80.0
, 百拇医药
7
70.0
7
70.0
重度不典型增生
7
6
85.7
6
85.7
6
85.7
大肠腺癌
, 百拇医药
52
32
61.5
>0.05**
41
78.9
>0.05**
43
82.6
>0.05**
*不典型增生与正常粘膜上皮比较，**癌与不典型增生比较。表2 大肠腺癌p16、bcl-2、p-gp表达与临床病理的关系 病 理 特 征
, 百拇医药
n
p16
P值
bcl-2
P值
p-gp
P值
+
%
+
%
+
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病理分类
, http://www.100md.com
管状腺癌
22
16
72.7
19
86.4
19
86.4
乳头状腺癌
18
13
72.2
<0.05
, http://www.100md.com
13
72.2
<0.05
12
66.7
>0.05
粘液腺癌
11
3
27.2
8
72.7
11
, 百拇医药
100.0
印戒细胞癌
1
0
0
1
100.0
1
100.0
分化程度
Ⅰ
7
6
, 百拇医药 85.7
6
85.7
4
57.1
Ⅱ
34
25
73.5
<0.05
26
76.5
>0.05
, 百拇医药 28
82.4
>0.05
Ⅲ
11
1
9.1
9
81.8
11
100.0
浸润程度
粘膜及粘膜下
, 百拇医药 4
4
100.0
3
75.0
2
50.0
肌层
29
21
72.4
<0.01
25
86.2
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>0.01
22
75.9
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浆膜层
19
7
36.8
13
68.4
19
100.0
淋巴结转移
, http://www.100md.com
阴性组
16
14
87.5
<0.05
12
75.0
>0.05
7
43.8
<0.05
阳性组
36
, 百拇医药
18
50.0
29
80.6
36
100.0
二、bcl-2基因表达(见表1、2，图见封三图3)bcl-2在癌旁正常粘膜上皮无表达，在不典型增生的表达随程度加重而增加，癌与不典型增生的表达无差异。不同组织类型及不同分化的大肠腺癌中bcl-2蛋白表达未见明显差异。与肿瘤的浸润程度、淋巴结转移及p-gp的表达水平无关(P>0.05)。
图3 大肠管状腺癌bcl-2阳性表达(棕黄色)在肿瘤细胞胞浆内(SP×100)
, 百拇医药
三、p-gp蛋白的表达(见表1、2，图见封三图4) 癌旁正常粘膜上皮比不典型增生p-gp表达略低，但未见明显差异，不同组织类型及不同分化的大肠腺癌中p-gp蛋白表达未见明显差异(P>0.05)。肿瘤浸润至浆肌层大肠腺癌的p-gp阳性率比肿瘤局限于粘膜及粘膜下层明显增高(P<0.01)。淋巴结转移阳性组高于阴性组，具有非常明显意义(P<0.01)。
图4 大肠管状腺癌P-gp阳性表达(棕黄色)在肿瘤细胞的胞浆及胞膜(SP×100)
四、大肠腺癌p16、bcl-2的表达与p-gp表达的关系(见表3) 32例p16阳性大肠腺癌中，p-gp阳性率75%(24/32)，20例p16阴性大肠腺癌中，p-gp阳性率95%(19/20)，大肠腺癌中p16异常表达与mdr-1的表达呈负相关(P<0.05)。41例bcl-2阳性大肠腺癌中，p-gp阳性率85.3%(35/41)，11例bcl-2阴性大肠腺癌中，p-gp阳性率72.7%(8/11)，大肠腺癌中bcl-2异常表达与mdr-1的表达无明显相关性(P>0.05)。
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表3 大肠腺癌中p16、bcl-2表达与p-gp表达的关系 p-gp表达
n(%)
p16表达
bcl-2表达
-(%)
+(%)
-(%)
+(%)
阴性组
9(17.3)
1(11.1)
8(88.9)
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3(33.3)
6(66.7)
阳性组
43(82.6)
19(44.2)
24(55.8)
8(18.6)
35(81.4)
合 计
52(100.0)
20(38.5)
32(61.5)
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11(21.1)
41(78.9)
讨论
已知，mdr-1基因的表达水平与人体肿瘤细胞MDR有关，而mdr-2与耐药无关[3]。p-gp是细胞产生MDR表型的分子基础，具有MDR的肿瘤细胞，p-gp表达水平与耐药程度成正比[6]。目前通过对人体各种组织的检测显示，在人的许多正常组织中也有mdr-1表达，如结肠、肝、肾上腺等。这些正常组织表达p-gp的意义在于保护机体和器官免遭外源性毒素(包括抗癌药物)的侵害，排泄其代谢产物，转化内源性有害物质，具有重要的生理意义[3，6]。当然，正常组织中p-gp蛋白的表达也有不利的一面，这些正常组织和器官所发生的肿瘤也往往有较高的MDR基因表达，且多为天然性耐药，常常表现为对化疗不敏感，失去一种有效的治疗机会。本研究应用免疫组化检测方法发现82.6%的大肠腺癌有p-gp表达，癌旁正常粘膜上皮及不典型增生也有较高的表达。发现不同组织类型及不同分化的大肠腺癌中p-gp蛋白表达未见明显差异。而与肿瘤细胞的浸润程度及淋巴结转移呈明显的正相关。因此，检测大肠腺癌中p-gp表达水平，对判断病人耐药程度，设计治疗方案，判断预后都具有重要的临床意义。
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p16基因是一种新型的抑癌基因，定位于9号染色体短臂21区(9p21)，其编码产物p16蛋白直接参与细胞周期调节，是细胞G1期重要负调节蛋白[7，8]。p16(MTS1)基因的变异与人类多种恶性肿瘤有关。本组研究结果显示，p16蛋白在乳头状腺癌和管状腺癌的表达显著高于粘液腺癌和印戒细胞癌，在高分化表达显著高于低分化。p16蛋白与肿瘤浸润的深度和淋巴结转移及p-gp蛋白水平呈显著的负相关(P<0.05)。在p16蛋白阴性组，肿瘤分化低，浸润程度深，复发转移发生率明显高于阳性组。因为p16基因的突变率低，应用免疫组化检测的p16基因在大部分病例可能为野生型而非突变型，这与p53基因的情况恰好相反。p16蛋白的这一特点可能有一定的临床意义[9]。提示p16基因异常及p16蛋白表达缺失与大肠腺癌的发生及恶性进展有关。检测p16蛋白有可能成为判断大肠腺癌预后的一个指标。
近年来研究显示，大肠腺癌的发生不仅与癌基因的激活和抑癌基因的突变和缺失有关，还与细胞凋亡受抑制有关[10]。bcl-2是目前已知的一种抑制细胞凋亡的蛋白，它是由14/18染色体易位使bcl-2基因与免疫球蛋白重链位点并列，导致基因连续过度表达。本研究发现bcl-2在癌旁正常粘膜上皮无表达，在不典型增生的表达随程度的加重而增加，而在癌与不典型增生的表达无差异(P>0.05)，与组织学类型、组织分级及肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及p-gp表达水平无关(P>0.05)。提示在大肠腺癌发生早期即出现bcl-2表达及细胞凋亡异常，细胞凋亡可能随着癌发生过程中细胞增殖的旺盛而增多[1]，bcl-2表达与凋亡率呈显著负相关，此表达不断增强提示凋亡受抑制可能是大肠腺癌发生的一个重要机制。
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作者简介：郑绍光，男，大学本科，主任医师。
参考文献
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(收稿日期：1999-05-26 修回日期：1999-08-03), http://www.100md.com