ELISA法初筛献血员anti-HIV(1/2型)初探
作者：秦水春李忠俊 滕本秀
单位：秦水春李忠俊 滕本秀 第三军医大学附属新桥医院输血科 重庆，400037
关键词：献血员；ELISA；HIV
Priliminary investigation on the early screening of antiPriliminary investigation on the early screening of anti-HIV(1/2) of blood donors by ELISA
我科用4种不同厂家生产的酶联免疫吸附(ELISA)试剂2 277人次献血员初筛anti-HIV(1/2型)抗体，结果报道如下。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 标本的采集与处理
于献血前采集小标本，空腹肘静脉血2ml，不抗凝；采血后留取2ml不抗凝标本。标本充分吸收后，离心得到血清，以消除纤维蛋白的干扰。检测在4h内进行完毕。
1.2 方法
1.2.1 试剂 ELISA法试剂：卫生部规定anti-HIV检测试剂必须使用经卫生部药品生物制品检定所每批检定合格的产品(《关于对四种体外免疫诊断试剂生产、销售、使用、管理的补充通知》卫药发(1995)第32号文)。我们使用的4种ELISA试剂分别由：上海实业科华生物技术有限公司、珠海丽珠医药集团股份有限公司、华美生物工程公司、厦门新创科技有限公司所生产。试剂盒经卫生部药品生物制品检定所每批检定都合格。
每次实验都设空白对照、阴性对照、anti-HIV(1型)、anti-HIV(2型)阳性对照，以消除实验系统误差。实验由专人操作、固定加样器、水浴箱温度恒定37℃。具体操作按试剂盒说明书进行。
, 百拇医药
1.2.2 仪器 微量加样器定期进行校正，酶标仪使用DG3022A型单孔酶标仪。Dλ值测定取单波长450 mm。
结果判定：Dλ值≥cut off值为阳性，否则为阴性。
2 结果
4种ELISA试剂检测anti-HIV(1/2型)抗体结果见表1。
表1 4种ELISA试剂检测anti-HIV
(1/2型)抗体结果
试剂
实验总人次
阳性例数
, 百拇医药
比例
上海实业科华生物技术有限公司试剂
832
7
0.0084
华美生物工程公司试剂
428
4
0.0093
厦门新创科技有限公司试剂
273
2
0.0073
, http://www.100md.com
珠海丽珠医药集团股份有限公司试剂
744
40
0.0538
总 体
2277
53
0.0233
3 讨论
ELISA法初筛献血员anti-HIV时，凡献血员ELISA法检测anti-HIV(1/2型)阳性结果者要求进行双孔复试。复试阴性的可以确定为阴性，复试阳性的要求送HIV确认实验室进一步确认，现常用免疫印迹法(WB)和明胶颗粒法(PA)两种方法进行检测[1]。确认试验阴性的血制品可以应用临床，同时首次ELISA法阳性结果被判定为假阳性。本结果中53名初筛阳性者中50人双孔复试结果为阴性，3人双孔复试结果阳性，送交重庆市防疫站HIV确认实验室，经确认为阴性，故该53份阳性结果全都是假阳性。
, 百拇医药
我们在进行ELISA法初筛献血员的同时，对ELISA法首次试验阳性标本采用免疫金标记斑点渗滤法(总后勤部卫生部提供试剂)检测。结果与ELISA法双孔复试结果相符。
目前临床应用的anti-HIV ELISA法试剂灵敏度较高，但特异性较差，易出现假阳性结果。这可能缘于：加样方式影响ELISA法检测结果；加样时吹吸血清产生气泡；洗板不彻底；扣干不完全孔内残留液体过多等实验操作不标准因素。另一个最主要的原因是：献血员血清中所含有的高浓度的非特异性IgG[2，3]。献血员血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分，IgG对聚苯乙烯有较强的吸附性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后保留原来的免疫活性。ELISA板的制作过程中，为了增加聚苯乙烯对蛋白质尤其是免疫球蛋白的吸附性能，往往使用射线照射聚苯乙烯后再包被制板。如果包被过程中聚苯乙烯表面没有被蛋白质完全覆盖，或封闭过程不完全，实验时加入的血清标本中的免疫球蛋白甚至酶结合物中的蛋白质部分地吸附到包被抗原的表面上，从而使本底增加，出现假阳性[2，3]。
, 百拇医药
中图法分类号 R446.61;R512.91
*秦水春，女，43岁，主管技师
参考文献
1 肖星甫 主编.输血技术手册.成都：四川科学技术出版社，1992.478～479
2 陈 宇.加样方式影响ELISA检测抗HCV结果.临床检验杂志，1996，14(13)：151
3 陶义训 主编.免疫学和免疫学检验.北京：人民卫生出版社，1991.129～131
收稿：1997-09-04；修回：1998-12-29, 百拇医药
单位：秦水春李忠俊 滕本秀 第三军医大学附属新桥医院输血科 重庆，400037
关键词：献血员；ELISA；HIV
Priliminary investigation on the early screening of antiPriliminary investigation on the early screening of anti-HIV(1/2) of blood donors by ELISA
我科用4种不同厂家生产的酶联免疫吸附(ELISA)试剂2 277人次献血员初筛anti-HIV(1/2型)抗体，结果报道如下。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 标本的采集与处理
于献血前采集小标本，空腹肘静脉血2ml，不抗凝；采血后留取2ml不抗凝标本。标本充分吸收后，离心得到血清，以消除纤维蛋白的干扰。检测在4h内进行完毕。
1.2 方法
1.2.1 试剂 ELISA法试剂：卫生部规定anti-HIV检测试剂必须使用经卫生部药品生物制品检定所每批检定合格的产品(《关于对四种体外免疫诊断试剂生产、销售、使用、管理的补充通知》卫药发(1995)第32号文)。我们使用的4种ELISA试剂分别由：上海实业科华生物技术有限公司、珠海丽珠医药集团股份有限公司、华美生物工程公司、厦门新创科技有限公司所生产。试剂盒经卫生部药品生物制品检定所每批检定都合格。
每次实验都设空白对照、阴性对照、anti-HIV(1型)、anti-HIV(2型)阳性对照，以消除实验系统误差。实验由专人操作、固定加样器、水浴箱温度恒定37℃。具体操作按试剂盒说明书进行。
, 百拇医药
1.2.2 仪器 微量加样器定期进行校正，酶标仪使用DG3022A型单孔酶标仪。Dλ值测定取单波长450 mm。
结果判定：Dλ值≥cut off值为阳性，否则为阴性。
2 结果
4种ELISA试剂检测anti-HIV(1/2型)抗体结果见表1。
表1 4种ELISA试剂检测anti-HIV
(1/2型)抗体结果
试剂
实验总人次
阳性例数
, 百拇医药
比例
上海实业科华生物技术有限公司试剂
832
7
0.0084
华美生物工程公司试剂
428
4
0.0093
厦门新创科技有限公司试剂
273
2
0.0073
, http://www.100md.com
珠海丽珠医药集团股份有限公司试剂
744
40
0.0538
总 体
2277
53
0.0233
3 讨论
ELISA法初筛献血员anti-HIV时，凡献血员ELISA法检测anti-HIV(1/2型)阳性结果者要求进行双孔复试。复试阴性的可以确定为阴性，复试阳性的要求送HIV确认实验室进一步确认，现常用免疫印迹法(WB)和明胶颗粒法(PA)两种方法进行检测[1]。确认试验阴性的血制品可以应用临床，同时首次ELISA法阳性结果被判定为假阳性。本结果中53名初筛阳性者中50人双孔复试结果为阴性，3人双孔复试结果阳性，送交重庆市防疫站HIV确认实验室，经确认为阴性，故该53份阳性结果全都是假阳性。
, 百拇医药
我们在进行ELISA法初筛献血员的同时，对ELISA法首次试验阳性标本采用免疫金标记斑点渗滤法(总后勤部卫生部提供试剂)检测。结果与ELISA法双孔复试结果相符。
目前临床应用的anti-HIV ELISA法试剂灵敏度较高，但特异性较差，易出现假阳性结果。这可能缘于：加样方式影响ELISA法检测结果；加样时吹吸血清产生气泡；洗板不彻底；扣干不完全孔内残留液体过多等实验操作不标准因素。另一个最主要的原因是：献血员血清中所含有的高浓度的非特异性IgG[2，3]。献血员血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分，IgG对聚苯乙烯有较强的吸附性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后保留原来的免疫活性。ELISA板的制作过程中，为了增加聚苯乙烯对蛋白质尤其是免疫球蛋白的吸附性能，往往使用射线照射聚苯乙烯后再包被制板。如果包被过程中聚苯乙烯表面没有被蛋白质完全覆盖，或封闭过程不完全，实验时加入的血清标本中的免疫球蛋白甚至酶结合物中的蛋白质部分地吸附到包被抗原的表面上，从而使本底增加，出现假阳性[2，3]。
, 百拇医药
中图法分类号 R446.61;R512.91
*秦水春，女，43岁，主管技师
参考文献
1 肖星甫 主编.输血技术手册.成都：四川科学技术出版社，1992.478～479
2 陈 宇.加样方式影响ELISA检测抗HCV结果.临床检验杂志，1996，14(13)：151
3 陶义训 主编.免疫学和免疫学检验.北京：人民卫生出版社，1991.129～131
收稿：1997-09-04；修回：1998-12-29, 百拇医药