消萎灵对大鼠胃粘膜癌前病变的逆转作用
作者：王 文张仲海夏 天
单位：第四军医大学西京医院中医科,陕西省西安市长乐路17号(710032)
关键词：胃粘膜；病理学；＠消萎灵；药效学；癌前病变；药物作用
新中医990721 提 要 为了研究消萎灵对大鼠胃粘膜癌前病变的逆转作用。复制慢性萎缩性胃炎模型后，随机分为自然恢复组、消萎灵治疗组及维酶素对照组。结果：模型恢复组见胃粘膜变薄，腺体萎缩发生率88%，肠化和不典型增生发生率分别为63%和38%；消萎灵治疗组萎缩性胃炎、肠化及不典型增生的发生率明显下降(P<0.05)，与模型恢复组比较胃液酸度、胃蛋白酶活性、胃粘膜跨膜电位差增高(P<0.05)。提示：消萎灵能有效地治疗慢性萎缩性胃炎及肠化、不典型增生，逆转胃粘膜癌前病变。
慢性萎缩性胃炎(CAG)伴肠上皮化生(IM)及胃粘膜不典型增生(ATP)等被称为胃癌前病变。消萎灵具有活血化瘀、软坚散结的功效，临床用于治疗慢性萎缩性胃炎及肠上皮化生、不典型增生已取得良好疗效。本实验从胃粘膜病理变化、胃粘膜跨膜电位差(PD)、胃液pH值及胃蛋白酶活性等方面加以观察。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 雄性SD大鼠，体重180±20 g，由第四军医大学实验动物中心提供。
1.1.2 药品 消萎灵(当归、赤芍、三棱、莪术、黄药子等)水煎浓缩液，含生药量3 g/ml，由本实验室制备。维酶素：河南省医药工业公司新星制药厂生产，批号911118，0.2 g/片，研碎用清水配成混悬液。完全弗氏佐剂(freund佐剂)由本校病理教研室提供。去氧胆酸钠SERVA进口分装，批号920815。
1.2 方法
1.2.1 大鼠慢性萎缩性胃炎模型的复制 参照赵敏等方法〔1〕。主动免疫：每只大鼠足底注射佐剂抗原(同种大鼠胃粘膜匀浆与freund佐剂以1：1配成乳剂)0.3 ml/次，1次/4周，共2次。去氧胆酸钠自由饮用：浓度为20 mmol/L。寒凉胆汁灌胃：将猪胆汁离心后置-20℃冰箱备用，灌胃前用自来水化至冰水各半，按12.5 ml/kg，给大鼠灌胃，1次/天，共90天。饥饱失常：2天喂鼠料，1天停食。
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1.2.2 分组及给药方法 40只大鼠随机分为4组，每组10只。正常组：不造模，灌服生理盐水12.5 ml/kg。模型恢复组：造模90天后，每天每只大鼠灌服生理盐水2 ml，共50天。消萎灵治疗组：造模后，每天每只大鼠灌服消萎灵水煎液20 g/kg，共50天。维酶素治疗组：造模后每日每只大鼠灌服维酶素水溶液1 g/kg，共50天。
1.2.3 标本采集及指标测定 实验进展到预定阶段，各组大鼠禁食24 小时，自由饮水。
将大鼠称重，用25%乌拉坦液1.25 g/kg腹腔注射，于麻醉状态下开腹，结扎幽门，在前胃底部开一3 mm切口，经切口埋置一个三通管结扎固定以备冲洗胃腔及抽取胃液。在食管与贲门交界处开一小口，经切口、食管、贲门向胃内插入充满3%琼脂3 mol/L氯化钾溶液的聚乙烯管，并结扎固定。另一根同样的电极插入腹腔作参比电极；将2根电极的另一端分别与DT890c+型数字毫伏仪的正负端连接。手术完毕后以37℃生理盐水3 ml分2次冲洗胃腔，经三通管收集冲洗液，离心备用，然后注入2 ml生理盐水，待PD值稳定后抽净液体，记录胃粘膜跨膜电位差。
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从胃腔冲洗液中抽取1 ml采用Mett法〔2〕测定胃蛋白酶活性，其余应用数字型酸度计测定胃液pH值。
将摘除的大鼠胃沿胃大弯剪开，将其平展固定于薄纸板上，固定于10%中性福尔马林液中，4℃冰箱中冷固定48小时后，按统一标准取材，分别在胃窦部和胃体部剪取组织病理标本，经过脱水-石蜡包埋-连续切片，切片为3 μm厚，共切2套片，分别作HE染色及AB/PAS染色。
2 结果
2.1 各组大鼠PD值、pH值及胃蛋白酶活性变化 见表1。
模型恢复组PD值、胃蛋白酶活性较正常组下降(P<0.05)，pH值升高(P<0.05)。消萎灵治疗组PD值、胃蛋白酶活性均升高(P<0.05)，pH值降低(P<0.05)。维酶素治疗组除胃蛋白酶活性外，PD值、pH值与模型恢复组亦存在差异(P<0.05)。但消萎灵组与维酶素组间比较差异有显著性意义(P<0.05)。
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2.2 各组大鼠胃粘膜病理改变 见表2。
正常组胃粘膜表面光滑，附有较多粘液，粘膜皱襞规整，粘膜上皮完整，腺体排列规则，AB/PAS染色为AB(-)、PAS(+)。模型恢复组大鼠88%出现胃粘膜薄而平滑，皱襞变浅，镜下示腺上皮萎缩，腺体变小，有的伴囊性扩张；100%的大鼠粘膜固有层存有不同程度的淋巴细胞和浆细胞浸润；63%的大鼠出现肠上皮化生，化生上皮未见刷毛缘及潘氏细胞，AB/PAS染色，AB(+)、PAS(+)；38%大鼠出现轻-中度不典型增生，表现为腺体稍不规则，排列较紧密，病变深部可见囊性扩张，上皮细胞核增大，位于细胞的下1/2～下2/3，呈假复层排列。消萎灵治疗组胃粘膜肉眼观类似模型恢复组形态，个别大鼠胃粘膜可见散在出血点。镜下各病理变化较模型恢复组均有改善(P<0.05)。
表1 各组大鼠PD值、pH值及胃蛋白酶活性比较(
±s) 组别
, 百拇医药
n
PD值(mv)
pH值
胃蛋白酶活性(活力/100 g)
正常组
10
37.61±4.39
2.99±0.23
243.3±50.4
模型恢复组
8
11.97±4.53※
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4.63±0.46※
124.1±47.2※
维酶素治疗组
9
19.72±4.02※
4.07±0.25※△
153.8±43.6※
消萎灵治疗组
10
33.78±5.37△#
, 百拇医药
3.17±0.29△#
234.6±70.8△#
※与正常组比较P<0.05，△与模型恢复组比较P<0.05，#与维酶素组比较P<0.05。模型恢复组在造模过程中死亡2只，维酶素治疗组造模过程中死亡1只表2 各组大鼠胃粘膜病理改变比较[例(%)] 组 别
n
粘膜变薄
腺体萎缩
炎细胞浸润
肠上皮化生
不典型增生
正常组
, 百拇医药
10
0(0)
0(0)
1(0)
0(0)
0(0)
模型恢复组
8
7(88)※
7(88)※
8(100)※
5(63)※
, 百拇医药
3(38)※
维酶素治疗组
9
4(44)※
4(44)※
5(55)※
2(22)
2(22)
消萎灵治疗组
10
1(10)△
, 百拇医药
1(10)△
2(20)△
0(0)△
0(0)△
※与正常组比较P<0.05，△与模型恢复组比较P<0.05
3 讨论
胃癌前病变中医学根据其临床症状归于“胃痛”、“胃痞”或“嘈杂”范畴。胃癌前病变在胃镜下有“花斑样改变”、“血管扭曲，血管壁显露”、粘膜表面凹凸不平或呈结节隆起状。中医理论均认为是瘀血的表现，加之胃癌前病变的形成要经历一个漫长的胃粘膜演变过程；从慢性胃炎→胃粘膜萎缩→肠化→不典型增生，中医理论认为“久病多瘀”。现代研究亦表明，活血化瘀法在调节机体反应性的基础上，直接或间接地起到抗菌作用，可改善微循环，加快血流速度，改善组织营养，促进局部炎症吸收，使增生性病变软化及萎缩腺体再生。消萎灵就是在结合中医理论及现代研究的基础上研制的治疗胃癌前病变的有效方剂。本实验表明，通过当归、赤芍、三棱、莪术等活血化瘀药物的直接或间接抗菌作用，抑制了炎症向胃粘膜固有层的进一步深入。对于固有层腺体已被破坏，发生萎缩、肠化者通过改善其微循环，加速局部血流、提高组织供养，使已被损伤的胃粘膜得以修复，从而胃粘膜的完整性提高，跨膜电位差升高。胃粘膜修复后其壁细胞分泌H+及主细胞合成胃蛋白酶原的能力恢复，故其胃液pH值下降，胃蛋白酶原在胃酸作用下生成的胃蛋白酶活性升高，胃粘膜癌前病变的病理及生化指标得以改善。 参考文献
[1] 赵 敏，张占海，危北海，等.胃安素防治慢性萎缩性胃炎及胃癌前病变的实验病理研究.中国中西医结合脾胃杂志，1996，4(4)∶225～229
[2] 徐淑云.药理实验方法学.第2版.北京∶人民卫生出版社，1994.1141
(收稿日期：1999-01-26)
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单位：第四军医大学西京医院中医科,陕西省西安市长乐路17号(710032)
关键词：胃粘膜；病理学；＠消萎灵；药效学；癌前病变；药物作用
新中医990721 提 要 为了研究消萎灵对大鼠胃粘膜癌前病变的逆转作用。复制慢性萎缩性胃炎模型后，随机分为自然恢复组、消萎灵治疗组及维酶素对照组。结果：模型恢复组见胃粘膜变薄，腺体萎缩发生率88%，肠化和不典型增生发生率分别为63%和38%；消萎灵治疗组萎缩性胃炎、肠化及不典型增生的发生率明显下降(P<0.05)，与模型恢复组比较胃液酸度、胃蛋白酶活性、胃粘膜跨膜电位差增高(P<0.05)。提示：消萎灵能有效地治疗慢性萎缩性胃炎及肠化、不典型增生，逆转胃粘膜癌前病变。
慢性萎缩性胃炎(CAG)伴肠上皮化生(IM)及胃粘膜不典型增生(ATP)等被称为胃癌前病变。消萎灵具有活血化瘀、软坚散结的功效，临床用于治疗慢性萎缩性胃炎及肠上皮化生、不典型增生已取得良好疗效。本实验从胃粘膜病理变化、胃粘膜跨膜电位差(PD)、胃液pH值及胃蛋白酶活性等方面加以观察。
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1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 雄性SD大鼠，体重180±20 g，由第四军医大学实验动物中心提供。
1.1.2 药品 消萎灵(当归、赤芍、三棱、莪术、黄药子等)水煎浓缩液，含生药量3 g/ml，由本实验室制备。维酶素：河南省医药工业公司新星制药厂生产，批号911118，0.2 g/片，研碎用清水配成混悬液。完全弗氏佐剂(freund佐剂)由本校病理教研室提供。去氧胆酸钠SERVA进口分装，批号920815。
1.2 方法
1.2.1 大鼠慢性萎缩性胃炎模型的复制 参照赵敏等方法〔1〕。主动免疫：每只大鼠足底注射佐剂抗原(同种大鼠胃粘膜匀浆与freund佐剂以1：1配成乳剂)0.3 ml/次，1次/4周，共2次。去氧胆酸钠自由饮用：浓度为20 mmol/L。寒凉胆汁灌胃：将猪胆汁离心后置-20℃冰箱备用，灌胃前用自来水化至冰水各半，按12.5 ml/kg，给大鼠灌胃，1次/天，共90天。饥饱失常：2天喂鼠料，1天停食。
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1.2.2 分组及给药方法 40只大鼠随机分为4组，每组10只。正常组：不造模，灌服生理盐水12.5 ml/kg。模型恢复组：造模90天后，每天每只大鼠灌服生理盐水2 ml，共50天。消萎灵治疗组：造模后，每天每只大鼠灌服消萎灵水煎液20 g/kg，共50天。维酶素治疗组：造模后每日每只大鼠灌服维酶素水溶液1 g/kg，共50天。
1.2.3 标本采集及指标测定 实验进展到预定阶段，各组大鼠禁食24 小时，自由饮水。
将大鼠称重，用25%乌拉坦液1.25 g/kg腹腔注射，于麻醉状态下开腹，结扎幽门，在前胃底部开一3 mm切口，经切口埋置一个三通管结扎固定以备冲洗胃腔及抽取胃液。在食管与贲门交界处开一小口，经切口、食管、贲门向胃内插入充满3%琼脂3 mol/L氯化钾溶液的聚乙烯管，并结扎固定。另一根同样的电极插入腹腔作参比电极；将2根电极的另一端分别与DT890c+型数字毫伏仪的正负端连接。手术完毕后以37℃生理盐水3 ml分2次冲洗胃腔，经三通管收集冲洗液，离心备用，然后注入2 ml生理盐水，待PD值稳定后抽净液体，记录胃粘膜跨膜电位差。
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从胃腔冲洗液中抽取1 ml采用Mett法〔2〕测定胃蛋白酶活性，其余应用数字型酸度计测定胃液pH值。
将摘除的大鼠胃沿胃大弯剪开，将其平展固定于薄纸板上，固定于10%中性福尔马林液中，4℃冰箱中冷固定48小时后，按统一标准取材，分别在胃窦部和胃体部剪取组织病理标本，经过脱水-石蜡包埋-连续切片，切片为3 μm厚，共切2套片，分别作HE染色及AB/PAS染色。
2 结果
2.1 各组大鼠PD值、pH值及胃蛋白酶活性变化 见表1。
模型恢复组PD值、胃蛋白酶活性较正常组下降(P<0.05)，pH值升高(P<0.05)。消萎灵治疗组PD值、胃蛋白酶活性均升高(P<0.05)，pH值降低(P<0.05)。维酶素治疗组除胃蛋白酶活性外，PD值、pH值与模型恢复组亦存在差异(P<0.05)。但消萎灵组与维酶素组间比较差异有显著性意义(P<0.05)。
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2.2 各组大鼠胃粘膜病理改变 见表2。
正常组胃粘膜表面光滑，附有较多粘液，粘膜皱襞规整，粘膜上皮完整，腺体排列规则，AB/PAS染色为AB(-)、PAS(+)。模型恢复组大鼠88%出现胃粘膜薄而平滑，皱襞变浅，镜下示腺上皮萎缩，腺体变小，有的伴囊性扩张；100%的大鼠粘膜固有层存有不同程度的淋巴细胞和浆细胞浸润；63%的大鼠出现肠上皮化生，化生上皮未见刷毛缘及潘氏细胞，AB/PAS染色，AB(+)、PAS(+)；38%大鼠出现轻-中度不典型增生，表现为腺体稍不规则，排列较紧密，病变深部可见囊性扩张，上皮细胞核增大，位于细胞的下1/2～下2/3，呈假复层排列。消萎灵治疗组胃粘膜肉眼观类似模型恢复组形态，个别大鼠胃粘膜可见散在出血点。镜下各病理变化较模型恢复组均有改善(P<0.05)。
表1 各组大鼠PD值、pH值及胃蛋白酶活性比较(
±s) 组别, 百拇医药
n
PD值(mv)
pH值
胃蛋白酶活性(活力/100 g)
正常组
10
37.61±4.39
2.99±0.23
243.3±50.4
模型恢复组
8
11.97±4.53※
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4.63±0.46※
124.1±47.2※
维酶素治疗组
9
19.72±4.02※
4.07±0.25※△
153.8±43.6※
消萎灵治疗组
10
33.78±5.37△#
, 百拇医药
3.17±0.29△#
234.6±70.8△#
※与正常组比较P<0.05，△与模型恢复组比较P<0.05，#与维酶素组比较P<0.05。模型恢复组在造模过程中死亡2只，维酶素治疗组造模过程中死亡1只表2 各组大鼠胃粘膜病理改变比较[例(%)] 组 别
n
粘膜变薄
腺体萎缩
炎细胞浸润
肠上皮化生
不典型增生
正常组
, 百拇医药
10
0(0)
0(0)
1(0)
0(0)
0(0)
模型恢复组
8
7(88)※
7(88)※
8(100)※
5(63)※
, 百拇医药
3(38)※
维酶素治疗组
9
4(44)※
4(44)※
5(55)※
2(22)
2(22)
消萎灵治疗组
10
1(10)△
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1(10)△
2(20)△
0(0)△
0(0)△
※与正常组比较P<0.05，△与模型恢复组比较P<0.05
3 讨论
胃癌前病变中医学根据其临床症状归于“胃痛”、“胃痞”或“嘈杂”范畴。胃癌前病变在胃镜下有“花斑样改变”、“血管扭曲，血管壁显露”、粘膜表面凹凸不平或呈结节隆起状。中医理论均认为是瘀血的表现，加之胃癌前病变的形成要经历一个漫长的胃粘膜演变过程；从慢性胃炎→胃粘膜萎缩→肠化→不典型增生，中医理论认为“久病多瘀”。现代研究亦表明，活血化瘀法在调节机体反应性的基础上，直接或间接地起到抗菌作用，可改善微循环，加快血流速度，改善组织营养，促进局部炎症吸收，使增生性病变软化及萎缩腺体再生。消萎灵就是在结合中医理论及现代研究的基础上研制的治疗胃癌前病变的有效方剂。本实验表明，通过当归、赤芍、三棱、莪术等活血化瘀药物的直接或间接抗菌作用，抑制了炎症向胃粘膜固有层的进一步深入。对于固有层腺体已被破坏，发生萎缩、肠化者通过改善其微循环，加速局部血流、提高组织供养，使已被损伤的胃粘膜得以修复，从而胃粘膜的完整性提高，跨膜电位差升高。胃粘膜修复后其壁细胞分泌H+及主细胞合成胃蛋白酶原的能力恢复，故其胃液pH值下降，胃蛋白酶原在胃酸作用下生成的胃蛋白酶活性升高，胃粘膜癌前病变的病理及生化指标得以改善。 参考文献
[1] 赵 敏，张占海，危北海，等.胃安素防治慢性萎缩性胃炎及胃癌前病变的实验病理研究.中国中西医结合脾胃杂志，1996，4(4)∶225～229
[2] 徐淑云.药理实验方法学.第2版.北京∶人民卫生出版社，1994.1141
(收稿日期：1999-01-26)
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