三种维吾尔药抗脂质过氧化作用的研究△
作者：井立萍* 吴 霞 陶海英 王 力 刘庆华
单位：新疆药物研究所 乌鲁木齐 830002
关键词：欧洲菘蓝；侧柏；黑种草籽；抗脂质过氧化
中草药990725 摘 要 主要研究三种维吾尔药材欧洲菘蓝、侧柏、黑种草籽醇提物对肝微粒体脂质过氧化反应的影响。采用VitC-NADPH系统诱发肝微粒体脂质过氧化反应，TBA-比色法测定MDA含量。结果显示：三种维吾尔药材醇提物具有不同程度的对抗肝微粒体脂质过氧化的作用，提示抗脂质过氧化作用可能是这些药物抗衰老作用机制的一个方面。
新疆维吾尔药欧洲菘蓝Isatis tinctoria L. var tinctoria、侧柏Biota orientalis (L.) Endl.、黑种草Nigella glandulifera Preyn et Sint籽在新疆《维吾尔药志》、《中药大辞典》等中均有记载，具有生发、乌发、养发等抗衰老方面的作用，特别是生发方面，维吾尔族历代相传，民间应用，虽对其作用的机制不能充分的解释，但其结果已是众所周知。脂质过氧化是在机体清除氧化活性物质能力不足时，机体内外各种因素产生的强氧化性物质对机体造成损伤的结果，笔者采用体外诱发脂质过氧化的方法，研究了三种维吾尔药醇提物抗脂质过氧化的作用。
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1 材料和方法
1.1 支物：Wistar大鼠，♂，体重200～250 g，由中国医学科学院实验动物中心提供。
1.2 药品：欧洲菘蓝、黑种草籽、侧柏由新疆药物研究所提供。分别取一定量的药材，用乙醇回流提取蒸发浓缩成1 mL相当于1 g药材备用。NADPH(购于Sigma公司)，硫代巴比妥酸(TBA，上海试剂二厂)，Vit C及其它试剂均为国产分析纯。
1.3 仪器：上海721分光光度计，日立SCR20BA高速冷冻离心机。
1.4 方法：大鼠禁食过夜，次日断头处死，迅速取肝，用TMS缓冲液(Tris-HCl 0.05 mol/L、sucroseo 2 mol/L、MgCl2 3 mmol/L,pH 7.5)配制20%的匀浆，离心10 000×g，4℃，20 min。上清液于105 000×g，4℃，再离心60 min，弃去上清液(胞浆液)，收集微粒体沉淀，用TMS配制悬浮液，-20℃贮存，Lowry法测定蛋白含量[1]。反应液含肝微粒体(蛋白含量15 mg/mL)测试药物、1.5 mg/mL水的NADPH，用0.1 mol/L的PBS补充至1 mL。37℃温孵15 min后，加入5 μL 0.88 mg/mL Vit C，再于37℃温孵15 min后，加入1 mL 0.53%TBA，煮沸15 min，离心 3 000 r/min,10 min，上清液于532 nm比色，测MDA含量[2]，并观察药物对脂质过氧化过程中MDA生成的抑制作用。
, 百拇医药
1.5 统计方法：根据标准曲线计算各样本MDA生成量，以对照管为100%计算各样本抑制率。
2 结果
三种药材醇提物，对体外VitC-NADPH体系诱发肝微粒体脂质过氧化反应均有较明显的抑制作用，侧柏作用较强，欧洲菘蓝和黑种草籽作用相当，结果如表1所示。
表1 三种维吾尔药对大鼠肝微粒体MDA生成的影响(
±s,n=3) 药物
浓度
(mg生药/mL)
MDA
, 百拇医药
(nmol/mg蛋白)
抑制率
(%)
对照
-
14.940±0.851
-
欧洲菘蓝
50
12.980±0.201
13
100
10.152±0.451
, 百拇医药
32
200
4.102±0.120
72
黑种草籽
50
12.070±0.126
19
100
9.980±0.221
33
200
4.900±1.23
, 百拇医药
67
侧柏
5
12.730±0.301
15
10
3.890±0.472
74
20
0.872±0.120
94
3 讨论
机体内的过氧化反应参与各种病理过程，并与机体的衰老有着密切关系，当体内过氧化反应超出机体保护能力时，即可使机体受到损害，加速衰老过程的发展，而对过氧化反应的抑制就是保护机体免受伤害的方式之一。脂质过氧化是氧化损伤中重要的危害之一，它与机体内自由基的作用密切相关。MDA(malondialdehyde)是生物体内不饱和脂质发生过氧化反应的产物，它可反映过氧化反应的程度。本实验采用VitC-NADPH系统产生超氧阴离子，通过与肝微粒体作用生成MDA，在反应系统中加入待测药物，可以根据MDA的生成量评价药物对脂质过氧化反应的影响，客观地评价药物抗脂质过氧化作用[3]。目前，关于中药抗脂质过氧化作用的研究报道很多，但对本文所述三种维吾尔药材在这方面的作用还未见报道。
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本实验结果表明，所试药物醇提物均有抗脂质过氧化作用，其抗氧化作用可能是其药理活性的一个重要方面，三种维吾尔药的抗氧化作用与其药理作用的关系及其在抗衰老方面特别是生发、护发、养发方面的地位尚无阐明，对此需进一步研究，但可以认为其抗衰老作用特别是生发、护发、养发方面的作用与其抗氧化作用具有密切的关系。
致谢：中国医学科学院药物研究所药理室屈志伟、刘雨、张均田三位老师给本研究工作给予大力支持和帮助表示衷心感谢!
参考文献
1 Lowry O H, et al. J Biol Chem,1951,193:265
2 Willson R L,et al. Nature,1975,255:498
3 裘 月，等.中国药学杂志，1996，83(2)：86
收稿日期：1998-11-09, 百拇医药(井立萍* 吴 霞 陶海英 王 力 刘庆华)
单位：新疆药物研究所 乌鲁木齐 830002
关键词：欧洲菘蓝；侧柏；黑种草籽；抗脂质过氧化
中草药990725 摘 要 主要研究三种维吾尔药材欧洲菘蓝、侧柏、黑种草籽醇提物对肝微粒体脂质过氧化反应的影响。采用VitC-NADPH系统诱发肝微粒体脂质过氧化反应，TBA-比色法测定MDA含量。结果显示：三种维吾尔药材醇提物具有不同程度的对抗肝微粒体脂质过氧化的作用，提示抗脂质过氧化作用可能是这些药物抗衰老作用机制的一个方面。
新疆维吾尔药欧洲菘蓝Isatis tinctoria L. var tinctoria、侧柏Biota orientalis (L.) Endl.、黑种草Nigella glandulifera Preyn et Sint籽在新疆《维吾尔药志》、《中药大辞典》等中均有记载，具有生发、乌发、养发等抗衰老方面的作用，特别是生发方面，维吾尔族历代相传，民间应用，虽对其作用的机制不能充分的解释，但其结果已是众所周知。脂质过氧化是在机体清除氧化活性物质能力不足时，机体内外各种因素产生的强氧化性物质对机体造成损伤的结果，笔者采用体外诱发脂质过氧化的方法，研究了三种维吾尔药醇提物抗脂质过氧化的作用。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 支物：Wistar大鼠，♂，体重200～250 g，由中国医学科学院实验动物中心提供。
1.2 药品：欧洲菘蓝、黑种草籽、侧柏由新疆药物研究所提供。分别取一定量的药材，用乙醇回流提取蒸发浓缩成1 mL相当于1 g药材备用。NADPH(购于Sigma公司)，硫代巴比妥酸(TBA，上海试剂二厂)，Vit C及其它试剂均为国产分析纯。
1.3 仪器：上海721分光光度计，日立SCR20BA高速冷冻离心机。
1.4 方法：大鼠禁食过夜，次日断头处死，迅速取肝，用TMS缓冲液(Tris-HCl 0.05 mol/L、sucroseo 2 mol/L、MgCl2 3 mmol/L,pH 7.5)配制20%的匀浆，离心10 000×g，4℃，20 min。上清液于105 000×g，4℃，再离心60 min，弃去上清液(胞浆液)，收集微粒体沉淀，用TMS配制悬浮液，-20℃贮存，Lowry法测定蛋白含量[1]。反应液含肝微粒体(蛋白含量15 mg/mL)测试药物、1.5 mg/mL水的NADPH，用0.1 mol/L的PBS补充至1 mL。37℃温孵15 min后，加入5 μL 0.88 mg/mL Vit C，再于37℃温孵15 min后，加入1 mL 0.53%TBA，煮沸15 min，离心 3 000 r/min,10 min，上清液于532 nm比色，测MDA含量[2]，并观察药物对脂质过氧化过程中MDA生成的抑制作用。
, 百拇医药
1.5 统计方法：根据标准曲线计算各样本MDA生成量，以对照管为100%计算各样本抑制率。
2 结果
三种药材醇提物，对体外VitC-NADPH体系诱发肝微粒体脂质过氧化反应均有较明显的抑制作用，侧柏作用较强，欧洲菘蓝和黑种草籽作用相当，结果如表1所示。
表1 三种维吾尔药对大鼠肝微粒体MDA生成的影响(
±s,n=3) 药物浓度
(mg生药/mL)
MDA
, 百拇医药
(nmol/mg蛋白)
抑制率
(%)
对照
-
14.940±0.851
-
欧洲菘蓝
50
12.980±0.201
13
100
10.152±0.451
, 百拇医药
32
200
4.102±0.120
72
黑种草籽
50
12.070±0.126
19
100
9.980±0.221
33
200
4.900±1.23
, 百拇医药
67
侧柏
5
12.730±0.301
15
10
3.890±0.472
74
20
0.872±0.120
94
3 讨论
机体内的过氧化反应参与各种病理过程，并与机体的衰老有着密切关系，当体内过氧化反应超出机体保护能力时，即可使机体受到损害，加速衰老过程的发展，而对过氧化反应的抑制就是保护机体免受伤害的方式之一。脂质过氧化是氧化损伤中重要的危害之一，它与机体内自由基的作用密切相关。MDA(malondialdehyde)是生物体内不饱和脂质发生过氧化反应的产物，它可反映过氧化反应的程度。本实验采用VitC-NADPH系统产生超氧阴离子，通过与肝微粒体作用生成MDA，在反应系统中加入待测药物，可以根据MDA的生成量评价药物对脂质过氧化反应的影响，客观地评价药物抗脂质过氧化作用[3]。目前，关于中药抗脂质过氧化作用的研究报道很多，但对本文所述三种维吾尔药材在这方面的作用还未见报道。
, http://www.100md.com
本实验结果表明，所试药物醇提物均有抗脂质过氧化作用，其抗氧化作用可能是其药理活性的一个重要方面，三种维吾尔药的抗氧化作用与其药理作用的关系及其在抗衰老方面特别是生发、护发、养发方面的地位尚无阐明，对此需进一步研究，但可以认为其抗衰老作用特别是生发、护发、养发方面的作用与其抗氧化作用具有密切的关系。
致谢：中国医学科学院药物研究所药理室屈志伟、刘雨、张均田三位老师给本研究工作给予大力支持和帮助表示衷心感谢!
参考文献
1 Lowry O H, et al. J Biol Chem,1951,193:265
2 Willson R L,et al. Nature,1975,255:498
3 裘 月，等.中国药学杂志，1996，83(2)：86
收稿日期：1998-11-09, 百拇医药(井立萍* 吴 霞 陶海英 王 力 刘庆华)
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