IgG类血型抗体快速检测方法的研究及应用
作者：李 龙 林健伟
单位：广东省揭阳市中心血站(522031)
关键词：
实用医学杂志990836 通过交叉配血检测不相容的血型抗体是安全输血的重要保障。目前常用的盐水介质交叉配血法仅能检出IgM类血型抗体，而不能检出IgG类抗体，使输血存在潜在危险性。为此，我们研究了一种IgG类血型抗体的快速检测法，并用于临床交叉配血和血型鉴定，效果良好。现报道如下。
1 材料和方法
1.1 材料 抗人球蛋白：用人血清免疫家兔制备；木瓜酶：用生理盐水配成0.5%浓度，冰冻保存；谱红细胞：自制，4℃～10℃保存；标准血型抗体：抗D、C、c、E、e、K、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb、S、Kpa、Kpb。
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1.2 快速检测试剂制备 用下列各成分制备IgG类血型抗体快速检测试剂：鱼精蛋白(0.1%)，聚乙二醇(2.0%)，白蛋白(0.1%)，葡萄糖(2.5%)，枸橼酸钠(0.2%)，以灭菌双蒸水配制，4℃～10℃冰箱保存1年。
1.3 方法
1.3.1 传统实验 每份标本同时分别做盐水介质、木瓜酶和抗人球蛋白试验，按常规技术进行[1]。
1.3.2 快速配血试验 取待检血清2滴，加入相应待检3%～5%红细胞悬液2滴，混匀后再加入快速检测试剂2滴，摇匀后置离心机，2 000 r/min离心30秒钟，取出轻摇后对玻璃镜观察红细胞凝集情况，判断结果。
1.3.3 IgG类血型抗体的快速检测 方法同上，同时做抗人球蛋白试验和木瓜酶试验对照。
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2 结果
2.1 IgG类血型抗体检测 将抗C、c、D、E、e、K、k、Kpa、Kpb、Jka、Jkb、Fya、Fyb、S等14种IgG类血型抗体与已知血型的谱红细胞反应，结果全部抗体均被检出。用木瓜酶和抗人球蛋白试验对照检测，结果完全一致。
2.2 快速交叉配血 共进行了889人次快速交叉配血试验，均分别用盐水介质和快速检测试剂两种方法同时进行，仅用盐水介质配血时所有标本均无凝集反应；快速交叉配血法8例有凝集反应，检出IgG类不规则血型抗体，其中7例为主侧反应，1例为次侧反应。该8例阳性反应标本再分别用抗人球蛋白试验和木瓜酶试验检测，结果8例均为抗人球蛋白试验所证实，6例为木瓜酶试验所证实。抗体特异性分别为：抗D 3例，抗E 2例，抗c 1例，抗Jkb 1例，抗Fya 1例。
3 讨论
输血医学和血液免疫学的进展，对血型及血型抗体有了深入的认识，ABO血型系统的抗体为IgM类完全抗体，可在盐水介质用直接红细胞凝集试验检测；而ABO系统以外的血型系统的抗体则多为IgG类抗体，不能在盐水介质用直接红细胞凝集试验检测，必须通过抗人球蛋白或蛋白酶的作用才可检出。因此，仅用盐水介质交叉配血不能保证输血安全，可能发生IgG类血型抗体引起的迟发性溶血性输血反应。故交叉配血由盐水介质配血发展到多介质配血，既要检出不相容的IgM类抗体，也要检出IgG类抗体，这样才能在免疫学上保证输血安全。但多介质交叉配血费时费力，不能满足紧急抢救用血需要，也不易推广应用。因此，国内外学者一直在探索快速交叉配血法。国外研究较多的是Polybrene法[2]，国内赵进生1992年研究了鱼精蛋白交叉配血法[3]，杨江存等1994年研究了聚乙二醇交叉配血法[4，5]，上述各法较传统方法均简单、快速，但也有其不足之处：Polybrene法和鱼精蛋白法须分两步进行；聚乙二醇法是在抗人球蛋白试验中加入大分子聚乙二醇，使红细胞和抗体反应时间缩短，而整个操作的原理和方法仍是抗人球蛋白试验，并无优点。上述这些方法除研究者使用外，并未被广泛接受。我们研究的IgG类抗体快速检测法，既可检出IgM类抗体，又可检出IgG类抗体，而其操作则在盐水介质一步完成，简单易行。在本研究的889例交叉配血试验中，8例阳性反应均为抗人球蛋白试验所证实，而木瓜酶法仅证实6例，说明该快速法可取代抗人球蛋白试验，且优于木瓜酶试验。其原理是[6]：红细胞表面的唾液酸带负电荷形成负电荷层，负电荷层之间互相排斥而使红细胞间保持一定间距，大于35 μ m，只有大分子的IgM类抗体能凝集相应红细胞，而小分子的IgG类抗体分子长度短，仅25 μ m，可结合红细胞表面抗原，但不能凝集红细胞，鱼精蛋白带正电荷，可中和红细胞表面的负电荷层，从而使红细胞间距缩短到小于25 μ m，此时IgG类抗体便可与红细胞表面抗原特异结合，再通过离心作用产生红细胞凝集，从而检出相应抗体。因此，鱼精蛋白在反应中起主要作用，聚乙二醇可促进反应物之间的碰撞和免疫复合物形成，从而提高灵敏度，葡萄糖可维持溶液一定的渗透压，不致引起溶血，又不致使离子浓度升高，枸橼酸钠通过负离子作用而消除鱼精蛋白的非特异反应。除快速交叉配血外，该法亦可用于新生儿溶血病的实验室诊断，IgG类血型抗体的血型检测等各个方面。因此，IgG类抗体的快速检测法具有广阔的应用前景。
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4 参考文献
1 萧星甫，主编. 输血技术手册. 重庆：四川科技出版社，1992. 494～501.
2 Lalerazi P. The manual polybrene test. Transfusion,1987,27:295～301.
3 赵进生，旷婕萍. 不完全抗体快速促凝剂的研制和初步应用报告. 中国输血杂志，1992，5(1)：9～12.
4 杨江存，宗耀军，张崇信. 聚乙二醇间接抗人球蛋白试验影响因素探讨. 中华医学检验杂志，1994，17(2)：98.
5 杨江存，张崇信，宗耀军. 聚乙二醇间接抗球蛋白试验临床应用. 中国输血杂志，1994，7(4)：195～196.
6 王培华，主编. 输血技术学. 北京：人民卫生出版社，1998. 195., 百拇医药
单位：广东省揭阳市中心血站(522031)
关键词：
实用医学杂志990836 通过交叉配血检测不相容的血型抗体是安全输血的重要保障。目前常用的盐水介质交叉配血法仅能检出IgM类血型抗体，而不能检出IgG类抗体，使输血存在潜在危险性。为此，我们研究了一种IgG类血型抗体的快速检测法，并用于临床交叉配血和血型鉴定，效果良好。现报道如下。
1 材料和方法
1.1 材料 抗人球蛋白：用人血清免疫家兔制备；木瓜酶：用生理盐水配成0.5%浓度，冰冻保存；谱红细胞：自制，4℃～10℃保存；标准血型抗体：抗D、C、c、E、e、K、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb、S、Kpa、Kpb。
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1.2 快速检测试剂制备 用下列各成分制备IgG类血型抗体快速检测试剂：鱼精蛋白(0.1%)，聚乙二醇(2.0%)，白蛋白(0.1%)，葡萄糖(2.5%)，枸橼酸钠(0.2%)，以灭菌双蒸水配制，4℃～10℃冰箱保存1年。
1.3 方法
1.3.1 传统实验 每份标本同时分别做盐水介质、木瓜酶和抗人球蛋白试验，按常规技术进行[1]。
1.3.2 快速配血试验 取待检血清2滴，加入相应待检3%～5%红细胞悬液2滴，混匀后再加入快速检测试剂2滴，摇匀后置离心机，2 000 r/min离心30秒钟，取出轻摇后对玻璃镜观察红细胞凝集情况，判断结果。
1.3.3 IgG类血型抗体的快速检测 方法同上，同时做抗人球蛋白试验和木瓜酶试验对照。
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2 结果
2.1 IgG类血型抗体检测 将抗C、c、D、E、e、K、k、Kpa、Kpb、Jka、Jkb、Fya、Fyb、S等14种IgG类血型抗体与已知血型的谱红细胞反应，结果全部抗体均被检出。用木瓜酶和抗人球蛋白试验对照检测，结果完全一致。
2.2 快速交叉配血 共进行了889人次快速交叉配血试验，均分别用盐水介质和快速检测试剂两种方法同时进行，仅用盐水介质配血时所有标本均无凝集反应；快速交叉配血法8例有凝集反应，检出IgG类不规则血型抗体，其中7例为主侧反应，1例为次侧反应。该8例阳性反应标本再分别用抗人球蛋白试验和木瓜酶试验检测，结果8例均为抗人球蛋白试验所证实，6例为木瓜酶试验所证实。抗体特异性分别为：抗D 3例，抗E 2例，抗c 1例，抗Jkb 1例，抗Fya 1例。
3 讨论
输血医学和血液免疫学的进展，对血型及血型抗体有了深入的认识，ABO血型系统的抗体为IgM类完全抗体，可在盐水介质用直接红细胞凝集试验检测；而ABO系统以外的血型系统的抗体则多为IgG类抗体，不能在盐水介质用直接红细胞凝集试验检测，必须通过抗人球蛋白或蛋白酶的作用才可检出。因此，仅用盐水介质交叉配血不能保证输血安全，可能发生IgG类血型抗体引起的迟发性溶血性输血反应。故交叉配血由盐水介质配血发展到多介质配血，既要检出不相容的IgM类抗体，也要检出IgG类抗体，这样才能在免疫学上保证输血安全。但多介质交叉配血费时费力，不能满足紧急抢救用血需要，也不易推广应用。因此，国内外学者一直在探索快速交叉配血法。国外研究较多的是Polybrene法[2]，国内赵进生1992年研究了鱼精蛋白交叉配血法[3]，杨江存等1994年研究了聚乙二醇交叉配血法[4，5]，上述各法较传统方法均简单、快速，但也有其不足之处：Polybrene法和鱼精蛋白法须分两步进行；聚乙二醇法是在抗人球蛋白试验中加入大分子聚乙二醇，使红细胞和抗体反应时间缩短，而整个操作的原理和方法仍是抗人球蛋白试验，并无优点。上述这些方法除研究者使用外，并未被广泛接受。我们研究的IgG类抗体快速检测法，既可检出IgM类抗体，又可检出IgG类抗体，而其操作则在盐水介质一步完成，简单易行。在本研究的889例交叉配血试验中，8例阳性反应均为抗人球蛋白试验所证实，而木瓜酶法仅证实6例，说明该快速法可取代抗人球蛋白试验，且优于木瓜酶试验。其原理是[6]：红细胞表面的唾液酸带负电荷形成负电荷层，负电荷层之间互相排斥而使红细胞间保持一定间距，大于35 μ m，只有大分子的IgM类抗体能凝集相应红细胞，而小分子的IgG类抗体分子长度短，仅25 μ m，可结合红细胞表面抗原，但不能凝集红细胞，鱼精蛋白带正电荷，可中和红细胞表面的负电荷层，从而使红细胞间距缩短到小于25 μ m，此时IgG类抗体便可与红细胞表面抗原特异结合，再通过离心作用产生红细胞凝集，从而检出相应抗体。因此，鱼精蛋白在反应中起主要作用，聚乙二醇可促进反应物之间的碰撞和免疫复合物形成，从而提高灵敏度，葡萄糖可维持溶液一定的渗透压，不致引起溶血，又不致使离子浓度升高，枸橼酸钠通过负离子作用而消除鱼精蛋白的非特异反应。除快速交叉配血外，该法亦可用于新生儿溶血病的实验室诊断，IgG类血型抗体的血型检测等各个方面。因此，IgG类抗体的快速检测法具有广阔的应用前景。
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4 参考文献
1 萧星甫，主编. 输血技术手册. 重庆：四川科技出版社，1992. 494～501.
2 Lalerazi P. The manual polybrene test. Transfusion,1987,27:295～301.
3 赵进生，旷婕萍. 不完全抗体快速促凝剂的研制和初步应用报告. 中国输血杂志，1992，5(1)：9～12.
4 杨江存，宗耀军，张崇信. 聚乙二醇间接抗人球蛋白试验影响因素探讨. 中华医学检验杂志，1994，17(2)：98.
5 杨江存，张崇信，宗耀军. 聚乙二醇间接抗球蛋白试验临床应用. 中国输血杂志，1994，7(4)：195～196.
6 王培华，主编. 输血技术学. 北京：人民卫生出版社，1998. 195., 百拇医药