食管鳞癌bcl-2和p53蛋白的表达及相互关系和临床意义
作者：张惠忠 李海刚 沈溪明 张 华 董书坤 熊利华
单位：张惠忠 李海刚 沈溪明 张 华 董书坤 熊利华 中山医科大学孙逸仙纪念医院(510120)
关键词：食管肿瘤；癌，鳞状细胞；bcl-2；蛋白质p53；免疫组织化学
实用医学杂志990808 摘 要 目的：探讨bcl-2、p53蛋白在食管鳞癌(ESC)的发生、发展中的作用及相互间的关系。方法：利用免疫组织化学技术(LSAB)，检测了65例ESC和53例癌旁鳞状上皮组织中bcl-2与p53蛋白的表达。结果：bcl-2蛋白与ESC的分化程度关系密切，且其表达与1年生存率呈负相关；p53蛋白在ESC组织中的表达明显高于癌旁鳞状上皮组织，且与ESC的临床分期呈负相关，与淋巴结转移呈负相关。结论：bcl-2和p53蛋白可能在ESC的发生过程中起重要作用，且与ESC的发展关系密切，bcl-2和p53蛋白在ESC的发生发展中可能协同作用。
近年来的研究表明，恶性肿瘤的发生不仅与癌基因的激活和抑癌基因的突变或缺失有关，还与细胞凋亡的抑制有关，当细胞凋亡出现反常调控时，可促使肿瘤等多种疾病发生[1]。细胞凋亡在肿瘤的发生和发展中的作用越来越受到人们的重视。参与细胞凋亡调控的基因包括bcl-2和抑癌基因p53等。这两种基因在食管鳞癌(ESC)的发生、发展中都有重要的作用[2，3]。但两者之间的关系尚未见报道。本文拟通过免疫组织化学技术(LSAB法)检测ESC组织中bcl-2和p53蛋白的表达，探讨两者在ESC的发生、发展中的作用及相互关系。
1 材料和方法
1.1 材料 65例标本选自我院胸外科1984～1996年行根治切除的ESC，其中早期5例，中期8例，晚期52例。42例有随访资料。所有病例术前均未经化疗、放疗。标本由10%福尔马林固定，石蜡包埋切片。
1.2 方法 bcl-2和p53单克隆抗体及LSAB试剂均为DAKO公司产品，抗体滴度为1∶80。切片均先经微波炉(乐声NN-5252型)作抗原修复处理(解冻档10分钟)。按LSAB法操作，DAB显色。以已知阳性切片作为阳性对照。PBS代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判断 阳性染色信号为棕黄色。
1.4 统计学处理 χ2检验。
2 结果
2.1 bcl-2的表达 ESC和癌旁鳞状上皮中bcl-2蛋白表达于细胞浆，阳性率分别为38.5%和35.8%，两组比较，差异无显著性；高分化组ESC组织中，bcl-2蛋白的阳性率明显低于中低分化组(χ2=4.74，P<0.05)；bcl-2阳性组1年生存率明显低于bcl-2阴性组(χ2=4.39，P<0.05)；病理分期、淋巴结转移情况与bcl-2蛋白的阳性率之间无显著性差异，见表1、2。
2.2 p53的表达 ESC和癌旁鳞状上皮中p53蛋白均表达于细胞核，阳性率分别为60.0%和18.9%，两组比较，差异有极显著意义(χ2=20.34，P<0.05)；晚期组p53蛋白的阳性率明显低于早中期组(χ2=4.10，P<0.05)；淋巴结转移组病例的阳性率明显低于无淋巴结转移组(χ2=4.81，P<0.05)；分化高、低和预后情况与p53蛋白阳性率之间均未见显著联系，见表1、2。
表1 ESC组织和癌旁鳞状上皮中bcl-2
及p53蛋白的表达
n
bcl-2
p53
-
+
-
+
癌旁鳞状上皮
53
34
19
43
10
鳞癌
65
40
25
26
39*
分化程度
高
37
27
10
14
23
中
16
8
8
6
10
低
12
5
7**
6
6
病理分期
早
5
4
1
0
5
中
8
6
2
2
6
晚
52
30
22
24
28**
淋巴结转移
阳性
20
12
8
12
8
阴性
45
28
17
14
31**
* P<0.001，** P<0.05
2.3 bcl-2和p53蛋白间的关系 两者间呈明显的
表2 ESC的预后与bcl-2、p53蛋白表达的关系
生存期
<1年
≥1年
bcl-2(-)
6
25
(+)
6
5*
p53(-)
6
14
(+)
6
16
* P<0.05
正相关性(χ2=4.33，P<0.05)，见表3。
表3 ESC组织中bcl-2与p53蛋白表达的关系
bcl-2
p53
-
+
-
20
20
+
6
19*
* P<0.05
3 讨论
bcl-2基因是1984年Jsujimoto等从滤泡性淋巴瘤细胞中分离出来的一种癌基因，是细胞凋亡的拮抗基因，其表达产物bcl-2蛋白是由于14/18染色体易位使bcl-2基因与免疫蛋白重链位点并列而导致基因的联系过度表达而产生的。后来的研究发现，其他一些肿瘤如食管鳞癌[3]、乳腺癌[4]、肺小细胞癌[5]和胃腺癌[6]均可检测到bcl-2的过度表达，提示bcl-2在上皮性肿瘤的发生中起着重要作用。Juensuu等[4]发现，bcl-2阳性的乳腺癌患者的预后较阴性者好。Pezzella等[5]也发现bcl-2阳性患者的预后较阴性者好。Gregory等[6]发现，bcl-2蛋白的表达与肠型胃癌的发展有着非常密切的关系，但其与分化程度、病理分期、淋巴结转移情况和预后等无关。Mario等[3]研究发现，bcl-2蛋白可表达于正常食管粘膜、重度不典型增生的鳞状上皮和原位癌组织中，在ESC中的阳性率为32%(48/150)，且与肿瘤的分化呈高度的负相关性，而与其他指标如肿瘤大小、浸润程度、淋巴结转移情况和预后等均无显著联系。
本组实验结果与Mario等报道相类似，在癌旁鳞状上皮组织和ESC组织中均可见bcl-2蛋白的表达，但两组比较未见明显差异，低中分化组ESC的bcl-2阳性率明显高于高分化组；ESC组织中bcl-2蛋白的表达与病理分期、淋巴结转移和预后等情况无显著联系。
p53基因是一种抑癌基因，野生型的p53基因在细胞的增殖调控中起重要作用，参与G1期细胞的调节和控制基因的扩增[7]。研究表明，在人类恶性病变的发展过程中常出现p53的突变，这些突变引起氨基酸的取代，出现蛋白质结构的变化，导致一种较长半衰期的被检测为过度表达的p53蛋白[8]。Benett等[9]和董琰滨等[2]的研究发现：食管癌变过程中，p53基因突变和蛋白产物的聚积先于肿瘤的浸润，是癌变过程中的早期事件。本组研究发现，ESC组织中p53蛋白的阳性率明显高于癌旁鳞状上皮组织，说明p53突变而产生的p53蛋白与ESC的发生有着密切的关系；晚期组和伴淋巴结转移组p53蛋白的阳性率分别明显低于早中期组和无淋巴结转移组，提示随着ESC的浸润和淋巴结转移的发生，可能p53蛋白产物的聚积在癌变后得不到保留，其意义尚待进一步的研究。
野生型p53基因对有DNA损伤的细胞来说，是诱导凋亡所必不可少的基因，可以诱导细胞进入G1期，抑制细胞增殖，直到有损伤的DNA修复[10]。p53基因突变使细胞DNA不能有效修复，导致bcl-2的过度表达，从而抑制了正常细胞凋亡而促使细胞增殖和向恶性方向转化。本组研究发现，ESC组织中bcl-2和p53蛋白的表达呈正相关，提示两种蛋白在ESC的形成和发展中起着协同作用。
4 参考文献
1 Baker SJ,Fearon ER,Nigro JM,et al. Chromosome 17 deletions and p53 gene mutations in coloretal carcinoma. Science,1989,244:217.
2 董琰滨，刘树范. 食管癌及癌前病变组织p53蛋白表达的研究. 中华肿瘤杂志，1996，18(1)：58.
3 Mario S,Fernando B,Rainer P,et al. bcl-2 expression and prognosis in squamous-cell carcinoma of the esophagus. Int J Cancer,1996,69:324.
4 Joensuu H,Pylkanen L,Toikkanen S. bcl-2 protein expression and long-term survival in breast cancer. Am J Pathol,1994,145:1191.
5 Pezzella F,Turley H,Kuzu I,et al. bcl-2 protein in non-small-cell lung carcinoma. New Engl J Med,1993,329:690.
6 Gregory YL,Gregory VS,Martin SK. Immunohistochemical evaluation of bcl-2 protein expression in gastric adenocarcinomas. Cancer,1995,75(9):2209.
7 Yin YX,Tainsky MA,Bischaff FZ,et al. Wild-type p53 restores cell cycle control and inhibits gene amplification in cells with mutant p53 alleles. Cell,1992,70:937.
8 Finley CA,Hinds PW,Tan TH,et al. Activating mutations for transformation by p53 produce a gene product that forms an hsc-p53 complex with an altered halflife. Mol Cell Biol，1988，8：531.
9 Benett WP,Hollstein MC,Metcalf RA,et al. P53 mutation and protein accumulation during multistage human esophageal carcinogenesis. Cancer Res,1992,52:6092.
10 陈汝福. 细胞凋亡在肝胆肿瘤形成和治疗中的意义. 国外医学肿瘤学分册，1997，24(2)：90.