胃癌组织cyclin E表达的临床病理意义
作者：刘晓波 李 里 庄宝珠 姜彦多 王继红
单位：刘晓波 李 里 中国人民解放军沈阳202医院 消化内科; 姜彦多 王继红 病理科 辽宁省沈阳市 110003; 庄宝珠 中国医科大学附属一院消化内科 辽宁省沈阳市 110001
关键词：细胞周期蛋白；胃肿瘤/病理学；免疫组织化学；基因表达
世界华人消化杂志990805 中国图书馆分类号 R735.2
摘 要
目的 Cyclin E蛋白在细胞周期的G1晚期起作用，加速G1-S期转化，与人类肿瘤有关. 本研究探讨cyclin E蛋白在胃癌的意义.
方法 用敏感而特异的免疫组化S-P法测定胃癌石蜡切片中cyclin E蛋白的异常表达.
, 百拇医药
结果 Cyclin E在胃癌中表达62%(n=60,M=43,F=17,32岁～73岁)，与癌旁组织26%相比有显著差异(P<0.05). Cyclin E表达与组织病理分化程度呈负相关. 分化差的胃癌组织cyclin E蛋白表达越强，cyclin E与肿瘤侵袭、淋巴结转移、远处转移无明显关系.
结论 Cyclin E蛋白与胃癌发生有关，与胃癌进展无关. Cyclin E蛋白可做为胃癌的一个潜在的诊断和判断预后的指标.
Cyclin E expression in gastric carcinoma and its clinicopathological significance
LIU Xiao-Bo1, LI Li1, ZHUANG Bao-Zhu3, JIANG Yan-Duo2 and WANG Ji-Hong2
, 百拇医药
1Department of Gastroenterology and 2Department of Pathology, The 202 Hospital of PLA, Shenyang 110003, Liaoning Province, China
3Department of Gastroenterology, The First Affiliated Hospital, China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China
Subject headings cyclin E; stomach neoplasms/pathology; immunohistochemistry; gene expression
Abstract
, 百拇医药
AIM Cyclin E protein acts in late G1 of cell cycle and accelerates the G1 to S transition, cyclin E is associated with the human cancer. The aim of this study was to investigate the significance of the cyclin E protein expression in gastric carcinoma.
METHODS Cyclin E protein overexpression was studied in paraffin embedded sections of gastric carcinoma by means of a specific and sensitive immunohistochemical SP assay.
, 百拇医药
RESULTS Cyclin E protein expression was present in 62%(37/60) gastric carcinoma, which showed a significant difference from those of normal tissues adjacent to tumors (26%) (P<0.05). Cyclin E expression was negatively correlated with histological differentiation. Gastric carcinoma with poor differentiation showed increased cyclin E expression, cyclin E was not related to the invasion of tumor, lymph node and distant metastasis.
CONCLUSION Cyclin E is involved in the genesis of gastric carcinoma and not contributes to its development. Cyclin E protein is a potential diagnostic and prognostic marker for gastric cancer.
, http://www.100md.com
0 引言
细胞周期素是调节细胞周期的一组基因，其机制目前已被广泛研究[1-2]，它们控制一系列CDKs的活动周期和底物特性. 每一种细胞周期素与特异的CDKs结合发挥作用. Cyclin E与CDK2结合并在细胞周期的G1晚期起作用[2-5]，它的过度表达能加速G1至S期转化，在多种肿瘤发生过程中起作用[6]. 目前胃癌的发生机制尚未彻底弄清，我们应用免疫组化方法观察了cyclin E在胃癌组织中的表达情况，并与癌旁组织做了比较，研究cyclin E在胃癌发生中的作用.
1 材料和方法
1.1 材料 手术切除胃癌标本60例，男43例，女17例，年龄32岁～73岁，平均53岁，取材后用100mL/L中性福尔马林固定，石蜡包埋，制成5μm厚切片，经HE染色和组织学观察，按WHO标准分类：管状腺癌38例，粘液癌15例，未分化癌7例. 病理学分级和PTNM分期按国际抗癌协会标准.
, http://www.100md.com
1.2 方法 采用链菌素亲生物素-过氧化物酶法(SP法). SP试剂盒为Zymed公司产品. 步骤如下：石蜡切片常规二甲苯脱腊，梯度酒精水化，PBS洗2min×3；30mL/L H2O2 10min；PBS洗2min×3；10%山羊血清15min；cyclin E一抗(单克隆抗体，Santa Cruz公司，1∶50)室温过夜，PBS洗2min×3；生物素标记二抗(1∶100)15min，PBS洗2min×3；加SP15min，PBS洗2min×3；DAB(Sigma公司)显色5min～10min；自来水充分冲洗，苏木精复染；脱水，透明，封固. 以PBS置换一抗作空白对照，用已知阳性切片作阳性对照. 以细胞呈清晰棕色为阳性，按阳性细胞所占比例分为：+：阳性细胞〈25%，++：阳性细胞数25%～50%，+++：阳性细胞数〉50%，以细胞无棕色或与背景一致浅棕色为阴性.
统计学处理 应用卡方检验.
2 结果
, 百拇医药
2.1 胃癌和癌旁组织中cyclin E蛋白的表达 Cyclin E蛋白产物在胃癌组织中表达的总阳性率为62%，其中管状腺癌58%，粘液癌53%，未分化癌全部为阳性. Cyclin E蛋白产物的阳性部位主要位于细胞核. 癌旁组织中的阳性率为26%. 与胃癌组织相比有显著性差异(P<0.05，表1).
表1 Cyclin E在胃癌和癌旁组织中的表达 组织学分型
n
-
+
++
+++
阳性率(%)
胃癌
, 百拇医药
60
23
14
14
9
62
粘液癌
15
7
7
1
0
53
管状腺癌
, http://www.100md.com
38
16
6
11
5
58
未分化癌
7
0
1
2
4
100
癌旁上皮
, 百拇医药
31
0
5
3
0
26
正常上皮
19
0
3
1
0
21
不典型增生
, 百拇医药
12
0
2
2
0
33
2.2 Cyclin E蛋白表达与胃癌分化程度及PTNM分期的关系 Cyclin E蛋白的异常表达与病理学分级关系密切，随组织分化程度的降低表达阳性率增加，低分化癌的阳性表达率显著高于高、中分化癌，7例未分化癌全部为阳性，有显著性差异(表2). Cyclin E蛋白表达随肿瘤浸润深度增加而增加，但无显著性差异，与淋巴结转移及远处转移等因素无明显关系.表2 Cyclin E蛋白表达与胃癌分化程度及PTNM分期的关系 生物学指标
n
, 百拇医药
阳性例数(%)
高、中分化癌
35
15(43)
低分化癌
18
15(83)a
未分化癌
7
7(100)
肿瘤深度T1—T2
25
, 百拇医药
15(60)
肿瘤深度T3—T4
35
13(66)
无淋巴结转移N0
33
21(64)
有淋巴结转移N1-N2
27
16(59)
无远处转移M0
, 百拇医药
47
29(62)
有远处转移M1
13
8(62)
aP<0.05，vs中高分化.
图1 胃高分化腺癌Cyclin E阳性，×400
图2 胃低分化腺癌Cyclin E阳性，×400
3 讨论
, http://www.100md.com
Cyclin E是一种核蛋白，最初是从酿酒酵母菌中提取出来的[7，8]. Cyclin E的过度表达可引起p27kipl基因的减少[9]. Cyclin E是一个致癌基因，在肿瘤组织中它的表达在质和量上都有异常. Cyclin E的增加不仅与肿瘤分级和分期有关，而且与不良预后及死亡率有关. Cyclin E的表达被用来作为肿瘤的一个诊断标志[10]. 我们的研究结果显示胃癌组织中cyclin E的表达阳性率为62%，癌旁组织阳性率26%，与胃癌组织相比有显著性差异(P<0.05). 正常上皮与不典型增生之间无显著性差异. 管状腺癌与粘液癌无显著性差异，未分化癌7例全部为阳性.
Cyclin E的表达与肿瘤病理学分级有显著相关性，高、中分化癌中阳性率43%，低分化癌83%，7例未分化癌全部为阳性，说明随着肿瘤恶性程度的升高，分化程度的降低，cyclin E的表达率增加，提示与细胞的分化和肿瘤的发生有关. 此项检查可作为胃癌预后的一个指标. Cyclin E的表达与PTNM分期无关. Cyclin E的阳性率随着肿瘤浸润深度增加而增加. 但无显著差异，与淋巴结转移及远处转移无明显相关性，表明cyclin E的表达与肿瘤进展无关.
, http://www.100md.com
作者简介：刘晓波，女，1964-06-27生，辽宁省沈阳市人，汉族. 1986年上海第二军医大学军医系毕业，主治医师，1999年获硕士学位，主要从事各种消化系疾病的诊治研究，发表论文4篇.
通讯作者 刘晓波，110003，中国人民解放军沈阳202医院消化内科.
Correspondence to:LIU Xiao-Bo, Department of Gastroenterology, Chinese PLA 202 Hospital, Shenyang 110003, Liaoning Province, China
Tel. +86.24.23053501
Email. Syhuibo@pub.sy.ln.cn
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 Hunter T, Pines J. Cyclins and cancer Ⅱ: Cyclin D and CDK inhibitors come of age. Cell, 1994;79:573-582
2 Sherr CJ. G1 phase progression: cycling on cue. Cell, 1994;79:551-555
3 Heichman KA, Roberts JM. Rules to replicate by. Cell, 1994;79:557-562
4 King RW, Jackson PK, Kirschner MW. Mitosis in transition. Cell, 1994;79:563-571
, 百拇医药
5 Nurse P. Ordering S phase and M phase in the cell cycle. Cell, 1994;79:547-550
6 Ohtsubo M, Roberts JM. Cyclin-dependent regulation of G1 in mammalian fibroblasts. Science, 1993;259:1908-1912
7 Koff A, Cross F, Fisher A, Schumacher J, Leguellec K, Philippe M, Roberts JM. Human cyclin E, a new cyclin that interacts with two members of the CDC2 gene family. Cell, 1991;66:1217-1228
, http://www.100md.com
8 Lew DJ, Dulic V, Reed SI. Isolation of three novel human cyclins by rescue of G1 cyclin(cln) function in yeast. Cell, 1991;66:1197-1206
9 Sgambato A, Han EKH, Zhou P, Schieren I, Weinstein IB. Overexpression of cyclin E in the HC11 mouse mammary epithelial cell line is associated with growth inhibition and increased expression of p27kipl. Cancer research, 1996;56:1389-1399
10 Keyomarsi K, O'Leary N, Molnar G, Lees E, Fingert HJ, Pardee AB. Cyclin E, a potential prognostic marker for breast cancer. Cancer research, 1994;54:380-385
收稿日期 1999-04-08 修回日期 1999-06-06, 百拇医药
单位：刘晓波 李 里 中国人民解放军沈阳202医院 消化内科; 姜彦多 王继红 病理科 辽宁省沈阳市 110003; 庄宝珠 中国医科大学附属一院消化内科 辽宁省沈阳市 110001
关键词：细胞周期蛋白；胃肿瘤/病理学；免疫组织化学；基因表达
世界华人消化杂志990805 中国图书馆分类号 R735.2
摘 要
目的 Cyclin E蛋白在细胞周期的G1晚期起作用，加速G1-S期转化，与人类肿瘤有关. 本研究探讨cyclin E蛋白在胃癌的意义.
方法 用敏感而特异的免疫组化S-P法测定胃癌石蜡切片中cyclin E蛋白的异常表达.
, 百拇医药
结果 Cyclin E在胃癌中表达62%(n=60,M=43,F=17,32岁～73岁)，与癌旁组织26%相比有显著差异(P<0.05). Cyclin E表达与组织病理分化程度呈负相关. 分化差的胃癌组织cyclin E蛋白表达越强，cyclin E与肿瘤侵袭、淋巴结转移、远处转移无明显关系.
结论 Cyclin E蛋白与胃癌发生有关，与胃癌进展无关. Cyclin E蛋白可做为胃癌的一个潜在的诊断和判断预后的指标.
Cyclin E expression in gastric carcinoma and its clinicopathological significance
LIU Xiao-Bo1, LI Li1, ZHUANG Bao-Zhu3, JIANG Yan-Duo2 and WANG Ji-Hong2
, 百拇医药
1Department of Gastroenterology and 2Department of Pathology, The 202 Hospital of PLA, Shenyang 110003, Liaoning Province, China
3Department of Gastroenterology, The First Affiliated Hospital, China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China
Subject headings cyclin E; stomach neoplasms/pathology; immunohistochemistry; gene expression
Abstract
, 百拇医药
AIM Cyclin E protein acts in late G1 of cell cycle and accelerates the G1 to S transition, cyclin E is associated with the human cancer. The aim of this study was to investigate the significance of the cyclin E protein expression in gastric carcinoma.
METHODS Cyclin E protein overexpression was studied in paraffin embedded sections of gastric carcinoma by means of a specific and sensitive immunohistochemical SP assay.
, 百拇医药
RESULTS Cyclin E protein expression was present in 62%(37/60) gastric carcinoma, which showed a significant difference from those of normal tissues adjacent to tumors (26%) (P<0.05). Cyclin E expression was negatively correlated with histological differentiation. Gastric carcinoma with poor differentiation showed increased cyclin E expression, cyclin E was not related to the invasion of tumor, lymph node and distant metastasis.
CONCLUSION Cyclin E is involved in the genesis of gastric carcinoma and not contributes to its development. Cyclin E protein is a potential diagnostic and prognostic marker for gastric cancer.
, http://www.100md.com
0 引言
细胞周期素是调节细胞周期的一组基因，其机制目前已被广泛研究[1-2]，它们控制一系列CDKs的活动周期和底物特性. 每一种细胞周期素与特异的CDKs结合发挥作用. Cyclin E与CDK2结合并在细胞周期的G1晚期起作用[2-5]，它的过度表达能加速G1至S期转化，在多种肿瘤发生过程中起作用[6]. 目前胃癌的发生机制尚未彻底弄清，我们应用免疫组化方法观察了cyclin E在胃癌组织中的表达情况，并与癌旁组织做了比较，研究cyclin E在胃癌发生中的作用.
1 材料和方法
1.1 材料 手术切除胃癌标本60例，男43例，女17例，年龄32岁～73岁，平均53岁，取材后用100mL/L中性福尔马林固定，石蜡包埋，制成5μm厚切片，经HE染色和组织学观察，按WHO标准分类：管状腺癌38例，粘液癌15例，未分化癌7例. 病理学分级和PTNM分期按国际抗癌协会标准.
, http://www.100md.com
1.2 方法 采用链菌素亲生物素-过氧化物酶法(SP法). SP试剂盒为Zymed公司产品. 步骤如下：石蜡切片常规二甲苯脱腊，梯度酒精水化，PBS洗2min×3；30mL/L H2O2 10min；PBS洗2min×3；10%山羊血清15min；cyclin E一抗(单克隆抗体，Santa Cruz公司，1∶50)室温过夜，PBS洗2min×3；生物素标记二抗(1∶100)15min，PBS洗2min×3；加SP15min，PBS洗2min×3；DAB(Sigma公司)显色5min～10min；自来水充分冲洗，苏木精复染；脱水，透明，封固. 以PBS置换一抗作空白对照，用已知阳性切片作阳性对照. 以细胞呈清晰棕色为阳性，按阳性细胞所占比例分为：+：阳性细胞〈25%，++：阳性细胞数25%～50%，+++：阳性细胞数〉50%，以细胞无棕色或与背景一致浅棕色为阴性.
统计学处理 应用卡方检验.
2 结果
, 百拇医药
2.1 胃癌和癌旁组织中cyclin E蛋白的表达 Cyclin E蛋白产物在胃癌组织中表达的总阳性率为62%，其中管状腺癌58%，粘液癌53%，未分化癌全部为阳性. Cyclin E蛋白产物的阳性部位主要位于细胞核. 癌旁组织中的阳性率为26%. 与胃癌组织相比有显著性差异(P<0.05，表1).
表1 Cyclin E在胃癌和癌旁组织中的表达 组织学分型
n
-
+
++
+++
阳性率(%)
胃癌
, 百拇医药
60
23
14
14
9
62
粘液癌
15
7
7
1
0
53
管状腺癌
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38
16
6
11
5
58
未分化癌
7
0
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100
癌旁上皮
, 百拇医药
31
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26
正常上皮
19
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3
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21
不典型增生
, 百拇医药
12
0
2
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33
2.2 Cyclin E蛋白表达与胃癌分化程度及PTNM分期的关系 Cyclin E蛋白的异常表达与病理学分级关系密切，随组织分化程度的降低表达阳性率增加，低分化癌的阳性表达率显著高于高、中分化癌，7例未分化癌全部为阳性，有显著性差异(表2). Cyclin E蛋白表达随肿瘤浸润深度增加而增加，但无显著性差异，与淋巴结转移及远处转移等因素无明显关系.表2 Cyclin E蛋白表达与胃癌分化程度及PTNM分期的关系 生物学指标
n
, 百拇医药
阳性例数(%)
高、中分化癌
35
15(43)
低分化癌
18
15(83)a
未分化癌
7
7(100)
肿瘤深度T1—T2
25
, 百拇医药
15(60)
肿瘤深度T3—T4
35
13(66)
无淋巴结转移N0
33
21(64)
有淋巴结转移N1-N2
27
16(59)
无远处转移M0
, 百拇医药
47
29(62)
有远处转移M1
13
8(62)
aP<0.05，vs中高分化.
图1 胃高分化腺癌Cyclin E阳性，×400
图2 胃低分化腺癌Cyclin E阳性，×400
3 讨论
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Cyclin E是一种核蛋白，最初是从酿酒酵母菌中提取出来的[7，8]. Cyclin E的过度表达可引起p27kipl基因的减少[9]. Cyclin E是一个致癌基因，在肿瘤组织中它的表达在质和量上都有异常. Cyclin E的增加不仅与肿瘤分级和分期有关，而且与不良预后及死亡率有关. Cyclin E的表达被用来作为肿瘤的一个诊断标志[10]. 我们的研究结果显示胃癌组织中cyclin E的表达阳性率为62%，癌旁组织阳性率26%，与胃癌组织相比有显著性差异(P<0.05). 正常上皮与不典型增生之间无显著性差异. 管状腺癌与粘液癌无显著性差异，未分化癌7例全部为阳性.
Cyclin E的表达与肿瘤病理学分级有显著相关性，高、中分化癌中阳性率43%，低分化癌83%，7例未分化癌全部为阳性，说明随着肿瘤恶性程度的升高，分化程度的降低，cyclin E的表达率增加，提示与细胞的分化和肿瘤的发生有关. 此项检查可作为胃癌预后的一个指标. Cyclin E的表达与PTNM分期无关. Cyclin E的阳性率随着肿瘤浸润深度增加而增加. 但无显著差异，与淋巴结转移及远处转移无明显相关性，表明cyclin E的表达与肿瘤进展无关.
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作者简介：刘晓波，女，1964-06-27生，辽宁省沈阳市人，汉族. 1986年上海第二军医大学军医系毕业，主治医师，1999年获硕士学位，主要从事各种消化系疾病的诊治研究，发表论文4篇.
通讯作者 刘晓波，110003，中国人民解放军沈阳202医院消化内科.
Correspondence to:LIU Xiao-Bo, Department of Gastroenterology, Chinese PLA 202 Hospital, Shenyang 110003, Liaoning Province, China
Tel. +86.24.23053501
Email. Syhuibo@pub.sy.ln.cn
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 Hunter T, Pines J. Cyclins and cancer Ⅱ: Cyclin D and CDK inhibitors come of age. Cell, 1994;79:573-582
2 Sherr CJ. G1 phase progression: cycling on cue. Cell, 1994;79:551-555
3 Heichman KA, Roberts JM. Rules to replicate by. Cell, 1994;79:557-562
4 King RW, Jackson PK, Kirschner MW. Mitosis in transition. Cell, 1994;79:563-571
, 百拇医药
5 Nurse P. Ordering S phase and M phase in the cell cycle. Cell, 1994;79:547-550
6 Ohtsubo M, Roberts JM. Cyclin-dependent regulation of G1 in mammalian fibroblasts. Science, 1993;259:1908-1912
7 Koff A, Cross F, Fisher A, Schumacher J, Leguellec K, Philippe M, Roberts JM. Human cyclin E, a new cyclin that interacts with two members of the CDC2 gene family. Cell, 1991;66:1217-1228
, http://www.100md.com
8 Lew DJ, Dulic V, Reed SI. Isolation of three novel human cyclins by rescue of G1 cyclin(cln) function in yeast. Cell, 1991;66:1197-1206
9 Sgambato A, Han EKH, Zhou P, Schieren I, Weinstein IB. Overexpression of cyclin E in the HC11 mouse mammary epithelial cell line is associated with growth inhibition and increased expression of p27kipl. Cancer research, 1996;56:1389-1399
10 Keyomarsi K, O'Leary N, Molnar G, Lees E, Fingert HJ, Pardee AB. Cyclin E, a potential prognostic marker for breast cancer. Cancer research, 1994;54:380-385
收稿日期 1999-04-08 修回日期 1999-06-06, 百拇医药