胃粘膜对阿斯匹林适应性的实验研究
作者：薛会光 易粹琼
单位：同济医科大学附属协和医院消化内科 湖北省武汉市 430022
关键词：胃粘膜/药物作用；阿斯匹林；一氧化氮；表皮生长因子
世界华人消化杂志990826 中国图书馆分类号 R573.1
Subject headings gastric mucosa/drug effects; aspirin; nitric oxide; epidermal growth factor
阿斯匹林有损伤胃粘膜的作用. 胃粘膜对阿斯匹林的适应性细胞保护，多有报道. 但胃粘膜对阿斯匹林的适应性，国内尚无报道. 我们通过动物试验，探讨胃粘膜对阿斯匹林的适应性及其机制.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 阿斯匹林购自武汉同济明治医药有限公司，L-Arg购自上海伯奥生物科技有限公司，L-NAME购自美国Sigma公司，表皮生长因子(EGF)放射免疫测定试剂盒购自北京北方生物技术研究所. ♂ Wistar大鼠96只，体重180g～220g，由同济医科大学实验医学动物中心提供.
1.2 方法 大鼠分为5组，每组6只，每组大鼠用药前1d 17：00禁食，可自由饮水，至d2 10：00经胃管给予酸化阿斯匹林(acidified aspirin, ASA)100mg/kg(溶于1.5mL 0.2mol/L HCl). 其中1组1h后处死，其余各组1h后进饮食至17：00，再禁食至次日10：00，给予ASA(剂量同上)，1h处死一组动物，其余各组按上法继续用药及处死动物至d5. 用药1d为第一组，用药2d为第二组，依此类推. 观察0.2mol/L HCl对胃粘膜作用，大鼠分3组，每组6只. 对照组给予生理盐水1.5mL，另两组按上法每只大鼠给予0.2mol/L HCl 1.5mL，分别用药1，4d，观察0.2mol/L HCl对胃粘膜的作用. 为观察NO在胃粘膜对ASA适应性中的作用，大鼠分4组，每组12只，应用ASA前30min，经大鼠尾静脉分别注入生理盐水、L-Arg(200mg/kg)、L-NAME(10mg/kg)及L-Arg+L-NAME，用药1d和4d，观察胃粘膜损伤面积和损伤深度. ①胃粘膜损伤面积和深度计算：处死大鼠后，即刻剖腹取出胃，沿大弯侧将胃剪开，采用小格图纸法计算胃粘膜损伤面积，取损伤最重的胃组织，石蜡包埋，切片，HE染色，观察胃粘膜损伤深度占全层的百分比. ②EGF的测定：取胃腺体区粘膜组织(约100mg)立刻称重，用眼科剪将其剪碎，放入匀浆器，加入匀浆液，研磨成匀浆，4℃ 2500r/min，离心20min，取上清液-20℃保存，用RIA法测EGF.
, 百拇医药
统计学处理 采用q检验，P<0.05被认为有显著性差异.
2 结果
大鼠初次应用ASA后，胃粘膜平均损伤面积为50.4mm2±6.2mm2，损伤深度为44.5%±8.7%，随着继续应用ASA，损伤面积和深度逐渐减轻，与第一组相比有显著差异(P<0.01)，表示胃粘膜对ASA具有适应性. 至d5损伤面积和d4相比无显著差异(P>0.05)，表示已形成完全适应. 胃粘膜组织内EGF的含量随着应用ASA的天数增加而增加，与第一组相比有显著差异(P<0.01，表1). 给大鼠应用0.2mol/L HCl，用药1，4d，胃粘膜损伤面积均为0，表示无损伤. 胃组织内EGF含量无明显改变(P>0.05，表2). L-Arg，L-NAME和L-Arg+L-NAME组胃粘膜对ASA均具有适应性，但L-NAME组损伤面积重于L-Arg组(表3).
表1 ASA所致胃粘膜损伤面积深度及EGF含量 (
±s)
, 百拇医药
损伤面积(mm2)
损伤深度(%)
EGF(ng/g)
第一组
50.4±6.2b
44.5±8.7b
55±6b
第二组
28.3±5.1
23.5±7.5
75±6
, 百拇医药
第三组
12.8±2.3
13.4±6.6
96±9
第四组
8.1±1.8
7.3±3.7
165±9
第五组
6.3±1.1
5.6±1.6
218±16
, 百拇医药 bP<0.01，vs 第二组～第五组.
表2 0.2mol/L HCl致胃粘膜损伤面积及EGF含量 (±s) 分组
损伤面积(mm2)
EGF(ng/g)
对照
0
48±5
第一组
0
51±4
, 百拇医药
第四组
0
52±6
表3 各组胃粘膜损伤面积、深度 (±s) 分组
第一组
第四组
损伤面积(mm2)
损伤深度(%)
损伤面积(mm2)
损伤深度(%)
对照
, 百拇医药
50.6±6.6
40.0±5.2
8.2±1.1
8.1±1.5
L-Arg
26.2±4.3b
13.3±3.9b
8.8±1.5a
6.6±1.7a
L-NAME
70.3±12.3b
, 百拇医药
61.9±7.7b
24.7±5.5ba
13.6±2.8ba
L-Arg+L-NAME
42.4±4.6
37.9±4.8
9.9±1.7a
8.4±2.2a
bP<0.01，vs 对照组；aP<0.01 vs 第一组.
, 百拇医药 3 讨论
在阿斯匹林造成大鼠胃粘膜损伤模型中，多采用经胃管灌入ASA 100mg/kg，因为单用阿斯匹林，胃粘膜损伤面积既小且不清晰[1]. 我们给大鼠应用0.2mol/L HCl 1，4d，发现大鼠胃粘膜均无损伤，EGF含量也无显著增加. 给大鼠连续应用ASA，发现胃粘膜损伤逐渐减轻，即具有适应性. 至d5胃粘膜损伤面积与d4相比无显著差异性，证明形成了完全适应，这与Brzozowski et al[2]报道相同.
胃粘膜传统的适应性细胞保护，是胃粘膜对弱刺激产生的即刻反应，持续时间约2h，其产生机制在于刺激胃粘膜内源性前列腺素的合成. 然而胃粘膜对ASA适应性完全产生需要4d～5d，持续时间7d，检测其胃粘膜前列腺素合成始终受抑约90%[1，2].
Konturek et al[3]研究发现，初次应用ASA可造成粘膜广泛损害，胃粘膜内DNA合成明显受抑，随着ASA的继续应用，DNA合成增加，Levi et al[4]发现服用非甾体类药物的关节炎患者胃粘膜细胞有丝分裂增加. 这说明持续应用ASA可刺激胃粘膜的增殖. 但促使其增殖的因素还不清楚. 本试验发现随着ASA用药天数的增加，大鼠胃粘膜组织内EGF含量显著增加. 说明胃粘膜组织内EGF含量的增加可能是促使其增殖的因素之一. 关于胃粘膜组织内增加的EGF来源，据研究来源于ASA刺激颌下腺及局部组织产生[1].
, http://www.100md.com
胃粘膜血流量在胃粘膜防御机制中起重要作用. Wallace et al研究表明，健康人连续应用ASA后，胃粘膜血流量逐渐增加，且与胃粘膜对ASA适应性产生呈线性关系. NO是由血管内皮细胞合成的一种扩血管物质. 本试验应用L-NAME抑制NO的合成，发现并不影响胃粘膜对ASA适应性的产生，但损伤程度较L-Arg组重，说明NO在胃粘膜对ASA的适应性中起一定作用. 胃粘膜对ASA适应性是多因素的，除NO外，尚有其他因素参与.
通讯作者 薛会光
4 参考文献
1 Konturek SJ, Brzozowski T, Stachura T, Dembinski A, Majka J. Role of gastric blood flow, neutrophil infiltration, and mucosal cell proliferation in gastric adaptation to aspirin in the rat. Gut, 1994;35:1189-1196
, 百拇医药
2 Brzozowski T, Konturek PC, Konturek SJ, Ernst H, Stachura J, Hahn EG. Gastric adaptation to injury by repeated doses of aspirin strenghthens mucosal defence against subsequent exposure to various strong irritants in rats. Gut, 1995;37:749-757
3 Konturek JW, Dembinski A, Stoll R, Domschke W, Konturek SJ. Mucosal adaptation to aspirin induced gastric damage in humans. Studies on blood flow, gastric mucosal growth, and neutrophil activation. Gut, 1994；35：1197-1204
4 Levi S, Goodland RA, Lee CY, Stomp G, Walport MJ, Wright NA. Inhibitory effect of non-steroidal anti-inflammatory drugs on mucosal cell proliferation associated with gastric ulcer healing. Lancet, 1990;343:82-85
收稿日期 1999-01-20 修回日期 1999-04-25, 百拇医药
单位：同济医科大学附属协和医院消化内科 湖北省武汉市 430022
关键词：胃粘膜/药物作用；阿斯匹林；一氧化氮；表皮生长因子
世界华人消化杂志990826 中国图书馆分类号 R573.1
Subject headings gastric mucosa/drug effects; aspirin; nitric oxide; epidermal growth factor
阿斯匹林有损伤胃粘膜的作用. 胃粘膜对阿斯匹林的适应性细胞保护，多有报道. 但胃粘膜对阿斯匹林的适应性，国内尚无报道. 我们通过动物试验，探讨胃粘膜对阿斯匹林的适应性及其机制.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 阿斯匹林购自武汉同济明治医药有限公司，L-Arg购自上海伯奥生物科技有限公司，L-NAME购自美国Sigma公司，表皮生长因子(EGF)放射免疫测定试剂盒购自北京北方生物技术研究所. ♂ Wistar大鼠96只，体重180g～220g，由同济医科大学实验医学动物中心提供.
1.2 方法 大鼠分为5组，每组6只，每组大鼠用药前1d 17：00禁食，可自由饮水，至d2 10：00经胃管给予酸化阿斯匹林(acidified aspirin, ASA)100mg/kg(溶于1.5mL 0.2mol/L HCl). 其中1组1h后处死，其余各组1h后进饮食至17：00，再禁食至次日10：00，给予ASA(剂量同上)，1h处死一组动物，其余各组按上法继续用药及处死动物至d5. 用药1d为第一组，用药2d为第二组，依此类推. 观察0.2mol/L HCl对胃粘膜作用，大鼠分3组，每组6只. 对照组给予生理盐水1.5mL，另两组按上法每只大鼠给予0.2mol/L HCl 1.5mL，分别用药1，4d，观察0.2mol/L HCl对胃粘膜的作用. 为观察NO在胃粘膜对ASA适应性中的作用，大鼠分4组，每组12只，应用ASA前30min，经大鼠尾静脉分别注入生理盐水、L-Arg(200mg/kg)、L-NAME(10mg/kg)及L-Arg+L-NAME，用药1d和4d，观察胃粘膜损伤面积和损伤深度. ①胃粘膜损伤面积和深度计算：处死大鼠后，即刻剖腹取出胃，沿大弯侧将胃剪开，采用小格图纸法计算胃粘膜损伤面积，取损伤最重的胃组织，石蜡包埋，切片，HE染色，观察胃粘膜损伤深度占全层的百分比. ②EGF的测定：取胃腺体区粘膜组织(约100mg)立刻称重，用眼科剪将其剪碎，放入匀浆器，加入匀浆液，研磨成匀浆，4℃ 2500r/min，离心20min，取上清液-20℃保存，用RIA法测EGF.
, 百拇医药
统计学处理 采用q检验，P<0.05被认为有显著性差异.
2 结果
大鼠初次应用ASA后，胃粘膜平均损伤面积为50.4mm2±6.2mm2，损伤深度为44.5%±8.7%，随着继续应用ASA，损伤面积和深度逐渐减轻，与第一组相比有显著差异(P<0.01)，表示胃粘膜对ASA具有适应性. 至d5损伤面积和d4相比无显著差异(P>0.05)，表示已形成完全适应. 胃粘膜组织内EGF的含量随着应用ASA的天数增加而增加，与第一组相比有显著差异(P<0.01，表1). 给大鼠应用0.2mol/L HCl，用药1，4d，胃粘膜损伤面积均为0，表示无损伤. 胃组织内EGF含量无明显改变(P>0.05，表2). L-Arg，L-NAME和L-Arg+L-NAME组胃粘膜对ASA均具有适应性，但L-NAME组损伤面积重于L-Arg组(表3).
表1 ASA所致胃粘膜损伤面积深度及EGF含量 (
±s), 百拇医药
损伤面积(mm2)
损伤深度(%)
EGF(ng/g)
第一组
50.4±6.2b
44.5±8.7b
55±6b
第二组
28.3±5.1
23.5±7.5
75±6
, 百拇医药
第三组
12.8±2.3
13.4±6.6
96±9
第四组
8.1±1.8
7.3±3.7
165±9
第五组
6.3±1.1
5.6±1.6
218±16
, 百拇医药 bP<0.01，vs 第二组～第五组.
表2 0.2mol/L HCl致胃粘膜损伤面积及EGF含量 (
±s) 分组损伤面积(mm2)
EGF(ng/g)
对照
0
48±5
第一组
0
51±4
, 百拇医药
第四组
0
52±6
表3 各组胃粘膜损伤面积、深度 (
±s) 分组第一组
第四组
损伤面积(mm2)
损伤深度(%)
损伤面积(mm2)
损伤深度(%)
对照
, 百拇医药
50.6±6.6
40.0±5.2
8.2±1.1
8.1±1.5
L-Arg
26.2±4.3b
13.3±3.9b
8.8±1.5a
6.6±1.7a
L-NAME
70.3±12.3b
, 百拇医药
61.9±7.7b
24.7±5.5ba
13.6±2.8ba
L-Arg+L-NAME
42.4±4.6
37.9±4.8
9.9±1.7a
8.4±2.2a
bP<0.01，vs 对照组；aP<0.01 vs 第一组.
, 百拇医药 3 讨论
在阿斯匹林造成大鼠胃粘膜损伤模型中，多采用经胃管灌入ASA 100mg/kg，因为单用阿斯匹林，胃粘膜损伤面积既小且不清晰[1]. 我们给大鼠应用0.2mol/L HCl 1，4d，发现大鼠胃粘膜均无损伤，EGF含量也无显著增加. 给大鼠连续应用ASA，发现胃粘膜损伤逐渐减轻，即具有适应性. 至d5胃粘膜损伤面积与d4相比无显著差异性，证明形成了完全适应，这与Brzozowski et al[2]报道相同.
胃粘膜传统的适应性细胞保护，是胃粘膜对弱刺激产生的即刻反应，持续时间约2h，其产生机制在于刺激胃粘膜内源性前列腺素的合成. 然而胃粘膜对ASA适应性完全产生需要4d～5d，持续时间7d，检测其胃粘膜前列腺素合成始终受抑约90%[1，2].
Konturek et al[3]研究发现，初次应用ASA可造成粘膜广泛损害，胃粘膜内DNA合成明显受抑，随着ASA的继续应用，DNA合成增加，Levi et al[4]发现服用非甾体类药物的关节炎患者胃粘膜细胞有丝分裂增加. 这说明持续应用ASA可刺激胃粘膜的增殖. 但促使其增殖的因素还不清楚. 本试验发现随着ASA用药天数的增加，大鼠胃粘膜组织内EGF含量显著增加. 说明胃粘膜组织内EGF含量的增加可能是促使其增殖的因素之一. 关于胃粘膜组织内增加的EGF来源，据研究来源于ASA刺激颌下腺及局部组织产生[1].
, http://www.100md.com
胃粘膜血流量在胃粘膜防御机制中起重要作用. Wallace et al研究表明，健康人连续应用ASA后，胃粘膜血流量逐渐增加，且与胃粘膜对ASA适应性产生呈线性关系. NO是由血管内皮细胞合成的一种扩血管物质. 本试验应用L-NAME抑制NO的合成，发现并不影响胃粘膜对ASA适应性的产生，但损伤程度较L-Arg组重，说明NO在胃粘膜对ASA的适应性中起一定作用. 胃粘膜对ASA适应性是多因素的，除NO外，尚有其他因素参与.
通讯作者 薛会光
4 参考文献
1 Konturek SJ, Brzozowski T, Stachura T, Dembinski A, Majka J. Role of gastric blood flow, neutrophil infiltration, and mucosal cell proliferation in gastric adaptation to aspirin in the rat. Gut, 1994;35:1189-1196
, 百拇医药
2 Brzozowski T, Konturek PC, Konturek SJ, Ernst H, Stachura J, Hahn EG. Gastric adaptation to injury by repeated doses of aspirin strenghthens mucosal defence against subsequent exposure to various strong irritants in rats. Gut, 1995;37:749-757
3 Konturek JW, Dembinski A, Stoll R, Domschke W, Konturek SJ. Mucosal adaptation to aspirin induced gastric damage in humans. Studies on blood flow, gastric mucosal growth, and neutrophil activation. Gut, 1994；35：1197-1204
4 Levi S, Goodland RA, Lee CY, Stomp G, Walport MJ, Wright NA. Inhibitory effect of non-steroidal anti-inflammatory drugs on mucosal cell proliferation associated with gastric ulcer healing. Lancet, 1990;343:82-85
收稿日期 1999-01-20 修回日期 1999-04-25, 百拇医药