温经异位康冲剂治疗子宫内膜异位症的实验研究
作者：王钦茂，杨耀芳，陈光亮，王元勋，程 民，朱满芳
单位：
王钦茂，陈光亮，王元勋，程 民，朱满芳(安徽中医学院，安徽 合肥 230038)；杨耀芳(上海市第五人民医院，上海 200240)
关键词：温经异位康冲剂；子宫内膜异位症；痛经
中国中医基础医学杂志990810 摘 要 目的 观察温经异位康冲剂治疗子宫内膜异位症及痛经的作用。方法 手术制备大鼠子宫内膜异位模型，观察形态学改变，配合子宫内膜抗体及雌二醇、孕酮、PGF2α水平检测；以及动物子宫活动、抗炎等试验。结果 本品能抑制大鼠子宫内膜异位模型，降低子宫内膜抗体及阳性率、血清雌二醇、孕酮及PGF2α(P<0.01)。病理学观察，异位子宫的内膜腺体及腺上皮明显萎缩，呈剂量依赖性；其作用与丹那唑相似，可抑制大鼠离体子宫和家兔在体子宫的收缩活动，降低子宫的收缩幅度、频率和张力，并能拮抗缩宫素和麦角新碱对离体及在体子宫的兴奋作用，其作用比月月舒和丹那唑强。对大鼠卵巢的生长及卵泡发育无明显影响。对蛋白诱发的大鼠足肿胀及二甲苯所致的小鼠耳肿胀有良好的抑制作用。对醋酸致小鼠扭体反应和正常大鼠的免疫功能无明显影响。
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Experimental Study on Anti-Endometriosis of wenjing Yiweikang Granule
WANG Qin-mao YANG Yao-fang ChENG Guang-liang et al
(Anhui College of TCM Hefei 230038)
ABSTRACT Objective:To investigate the therapeutic effect of Wenjingyiweikang keli on endometriosis and dysmenorrhea.METHODS:The rat endometriosis model was produced by surgery,we observed the change of uterus tissue morphology,the antibody level of antiendometrium and the serum level of estradiol,progesterone and PGF2α. The effect on uterus activation,inflammation and pain was also observed.RESULTS:Wenjingyiweikang keli could inhibit the endometriosis of rat,reduced the antibody level of antiendometrium,decreaser the level of estradiol,progesterone and PGF2α n serum (p<0.01).Through pathological observation,the glands and glandular epithelium of abnormal endometrium were obviously withered,the effect was dose dependent,similar to Danazol.The uterus constriction of rat in vitro and of rbbit in vivo was both inhibited.In vitro,the range,the frequency and the tension of the constriction were decreased,the effectwas dose dependent,while in vivo,only the tension of the constriction was inhibited.So did the uterus constriction produce by oxytocin and ergotocine,and the effect was stronger than the effect of Yueyueshu and Danazol.The growth of ovary and folliculus were not effected.The egg-white-induced paw swelling of rat and the xylene-induced auricular swelling of mouse were inhibited.The mouse twisting induced by acetic acid was not influenced,either.The normal immune system of rat was not influenced.
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KEY WORDS:Wenjingyiweikang Keli Endometriosis Dysmenorrhea
温经异位康冲剂由党参、甘草、乳香、当归、阿胶、肉桂、川芎、牡丹皮等组成，有温经化瘀，理气止痛的功效，适用于子宫内膜异位症和痛经。本研究旨在阐明其药理作用，为临床提供治疗学基础。
实验材料
1 药物和试剂
温经异位康冲剂(以下简称异位康)，实验用1.675 g生药/ml的清膏，由河南省新乡常乐制药厂提供；辅料为50%糖粉和25%的糊精；丹那唑 胶囊，上海华联制药公司出品，批号950302；月月舒冲剂，河南宛西制药厂生产，批号950204；PGF2α放免试剂盒由中国医学科学院基础所药理室提供；血清雌二醇及孕酮放免试剂盒由中美合资天津九鼎医学生物工程有限公司供应；抗子宫内膜抗体(EMAb)试剂盒由南京军区总医院临床免疫科提供，其他试药均为市售产品。
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2 主要仪器
125I-放免测定仪及FJ-2107液体闪烁计数器，西安262厂；DC-001型离体器官测定仪，南京分析仪器厂；LMS-2B二道生理记录仪，成都仪器厂。
3 动物
昆明种小鼠、Wistar大鼠由安徽省医学研究所动物室提供；雌性白色家兔由本院动物室供应。
方法与结果
1 对大鼠子宫内膜异位的影响
1.1 模型制作
雌性未孕大鼠，体重135 g±15 g。皮下注射己烯雌酚0.2 mg/只促情，腹部脱毛，ip麻醉，常规消毒，开腹。左侧离卵巢约1 cm处分离子宫，结扎后在中间剪取约0.5 cm一段子宫体，置于盛生理盐水培养皿中备用。右侧子宫离卵巢约1 cm处分离子宫，缝上左侧切下的子宫段，剪开，以暴露子宫内膜，关腹缝合。每鼠ip庆大霉素0.1 ml×7 d。假手术组，只用镊子牵拉子宫，其余操作同上。
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1.2 分组和给药
正常饲养3周后，经病理组织学检查，异位内膜已成活。将大鼠随机分为异位康11.1 g/kg(高剂量组)和5.5 g/kg(低剂量组)，丹那唑0.17 g/kg，以及模型组和假手术组。ig给药，容量1.2 ml/100 g体重，模型组和假手术组给等容量辅料液，每日1次，连用3周。末次给药后24 h，乌拉坦麻醉，腹主动脉采血检测各项指标；并做病理学检查。
1.3 结果
1.3.1 一般情况 用药期间大鼠外表无明显异常。第2周，模型组大鼠的净增体重低于其他各组，至第3周则有显著性差异；而异位康与丹那唑 均能使子宫内膜异位大鼠生长缓慢的情况改善，与正常组比较P>0.05。摄食量各组间比较无明显差异性。
1.3.2 对大鼠血浆PGF2α水平的影响 将盛有肝素-消炎痛-生理盐水溶液的离心管置冰水浴内，注入全血，4℃离心分离血浆。取1 ml血浆，用1N HCl调pH至3.5，用乙酸乙酯5 ml提取、离心，重复2次，收集提取液，氮气吹干，加1 ml无水乙醇分样吹干，置于-40℃下保存，放射免疫测量，结果异位康能非常明显地降低子宫内膜异位模型大鼠血浆内PGF2α水平，其作用与丹那唑相似(见图1)。
, 百拇医药
图1 温经异位康对大鼠血浆PGF2α的影响(
±s)
1.3.3 对大鼠血清抗子宫内膜抗体的影响 采用酶联免疫吸附间接法检测大鼠血清内抗子宫内膜抗体(EMAb)，结果如表1显示。大鼠造模后，血清内EMAb的阳性率由假手术组的0%增加至90.91%。异位康与丹那唑一致，可使EMAb的阳性率下降，而且随剂量的增加，其作用增强。
表1 温经异位康对大鼠血清抗子宫内膜抗体的影响 组 别
剂量(g/kg)
鼠数
(n)
阳性例数
, 百拇医药
(n)
阳性率
(%)
假手术组
等量辅料
9
0
0
模型组
等量辅料
11
10
90.91
, 百拇医药 丹那唑组
0.17
11
1
9.1**
异位康组
11.1
11
2
18**
5.5
10
5
, 百拇医药
50*
注：与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01。
1.3.4 对大鼠血清雌二醇、孕酮水平的影响 采用双抗体放射免疫法，发现子宫内膜异位模型组大鼠血清雌二醇和孕酮水平显著高于假手术组，异位康能明显降低模型大鼠的雌二醇水平，对孕酮亦有下降作用(见图2)。
1.3.5 对大鼠卵巢重量及形态学的影响 大鼠采血致死后剖腹，分离卵巢，称重，计算脏器系数(卵巢mg/100 g体重)。常规石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察卵泡发育和黄体生成的情况，结果各组间卵巢的重量无明显差异性；组织学检查各动物均可见到各级卵泡或初级卵泡和黄体，无明显差异性。提示异位康对大鼠卵巢的生长及卵巢内卵泡发育和排卵无明显影响。
, 百拇医药 图2 温经异位康对大鼠血清雌二醇、孕酮水平的影响(±s，n=8)
1.3.6 异位子宫病理组织学检查 大鼠剖腹，肉眼观察除假手术组外，各组鼠均在右侧子宫角靠近卵巢0.5 cm处见有异位病灶，一般为米粒大小之结节，切面可见一线形闭合小孔。切取移植内膜异位处组织备检，光镜观察，见移植之宫内膜位于正常子宫肌层外浆膜处，其病变程度不一，分轻、中、重三种，作为疗效判断标准。轻度：一个低倍视野见0～2个内膜腺体；中度：一个低倍视野见3～5个内膜腺体；重度：一个低倍视野见6个以上内膜腺体。结果异位康及丹那唑均可使异位内膜萎缩，主要表现在间质体积缩小，内膜腺体减少(见表2)。
表2 温经异位康对实验性宫内膜异位的病理组学改变 组 别
剂量(g/100 g)
, 百拇医药
间质情况
腺体情况
病模组
等量辅料
正 常
重度
异位康(低)
5.5
面积缩小至1/2
中度
异位康(高)
11.1
面积缩小至1/3
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轻度
丹那唑组
0.17
面积缩小至1/3～1/4
轻度
假手术组
等量辅料
无异位宫内膜
无异位宫内膜
2 对动物子宫收缩活动的影响[1]
2.1 大鼠离体子宫实验
雌性未孕大鼠，体重180 g～220 g，实验前2d注射己烯雌酚促情，颈椎脱臼处死，迅速取子宫约2 cm，置于盛有30 ml洛氏液的浴槽中，温度30℃±0.5℃，下端固定，上端与张力换能器相连，使子宫保持2 g的张力，连续通入空气，平稳后开始实验，记录正常子宫收缩曲线及加入不同药物后子宫收缩曲线。结果异位康在终浓度1.67 mg/ml时便可明显抑制正常离体大鼠子宫收缩的频率、幅度和张力，与给药前相比，有显著性差异，且随浓度增加而抑制作用增强(P<0.05，P<0.01)。而月月舒冲剂在同等剂量下对子宫收缩活动无明显影响，当浓度增至13.3 mg/ml时，对子宫才有抑制作用。缩宫素(1.33×10-4u/ml)或麦角新碱(1.07×10-5 mg/ml)，可使子宫收缩幅度、张力明显增加(P<0.01)，异位康能显著拮抗缩宫素或麦角新碱引起的子宫收缩增强(P<0.01)。而月月舒冲剂在较大剂量(13.3 mg/ml)时才能对抗缩宫素和麦角新碱致子宫收缩幅度的增加(分别为P<0.05，P<0.01)。
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2.2 家兔在体子宫实验
雌性未孕家兔，禁食12 h后，麻醉，右上腹切口作十二指肠插管备给药用，中下腹切口，分离子宫，用蛙心夹夹住一侧子宫中心，与张力换能器相连，稳定后，记录子宫收缩曲线。由十二指肠分别给药，容量5 ml/kg，观察药前及药后10min、30min、60 min的子宫收缩曲线。在药后30 min已达作用高峰。表3、表4可见，异位康和月月舒冲剂对子宫收缩的频率和幅度影响较小，但可明显降低子宫收缩的张力。家兔缓慢静注缩宫素(0.8 u/kg)，子宫收缩的频率、张力、幅度均明显增加，异位康高、低剂量和月月舒冲剂均能明显对抗缩宫素引起的子宫收缩增强，降低子宫的收缩频率、张力和幅度。
3 抗炎作用
3.1 对大鼠足跖肿胀的影响
体重150 g～190 g雄性大鼠，给药7 d，末次ig后45 min，鼠右后跖注射新鲜蛋清0.1 ml/只，测量致炎前及致炎后30 min、60 min、90 min时踝关节以下的足容积，以肿胀率(致炎后容积一致，炎前容积/致炎前容积×100%)表示，结果温经异位康中、高剂量和月月舒冲剂对大鼠的足肿胀均有明显的抑制作用(P<0.05～0.01)，作用维持90 min以上。
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3.2 对小鼠耳廓肿胀的影响
雄性小鼠ig 7d，末次给药后45 min，每鼠右耳两侧涂二甲苯致炎。1 h后处死，取耳片称重，计算肿胀率。结果温经异位康中、高剂量对二甲苯所致小鼠耳部炎症有明显的抑制作用(P<0.01)； 临床等效剂量比，优于月月舒(P<0.05)和丹那唑 (P>0.05)。
表3 温经异位康对家兔在体子宫收缩活动的影响(±s,n=6) 组 别
剂量(g/kg)
频率(次/10 min)
张力(mm)
幅度(mm)
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药 前
药后30 min
药前
药后30 min
药 前
药后30 min
辅料组
等容量
6.2±2.7
6.6±2.2
0±0
1±2
, 百拇医药 21.0±8.3
23.2±9.9
异位康
3.5
9.8±2.5
9.1±1.4
0±0
-4.5±0.7**
16.9±7.4
20.4±6.9
7.0
12.6±1.9
, 百拇医药
9.3±2.5*
0±0
-4.7±2.5**
13.7±3.5
14.4±1.3
月月舒
3.5
8.0±2.1
7.2±1.6
0±0
-5.0±2.2**
16.5±4.6
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12.5±3.6
注：(1)给药前子宫收缩基线记为0(即张力记为0)；(2)药后指试验药或辅料；(3)与药前比较：*P<0.05，**P<0.01。
表4 温经异位康对抗缩宫素致家兔在体子宫的兴奋作用(n=6,±s) 组 别
剂量
(g/kg)
频率(次/10 min)
张力(mm)
幅度(mm)
正常
, 百拇医药
Oxy后
药后30 min
正常
Oxy后
药后30 min
正常
Oxy后
药后30 min
Oxy+辅料
等容量
7.9±1.5
13.5±2.6
12.6±1.5
, 百拇医药
0±0
10.0±2.4
8.9±1.8
10.8±3.7
16.4±4.4
14.8±4.1
Oxy+异位康
3.5
6.3±1.4
13.0±3.6
9.6±0.6*
0±0
, 百拇医药
5.1±1.4
-2.0±0.9**
15.3±4.1
27.9±5.7
15.8±5.1**
Oxy+异位康
7.0
8.3±0.6
14.6±3.0
8.7±1.2*
0±0
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6.0±2.8
-4.0±2.8**
16.8±3.8
22.2±6.4
14.3±4.4**
Oxy+月月舒
3.5
7.4±1.5
12.9±3.3
9.3±0.7*
0±0
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7.0±0.1
-4.5±1.8**
10.3±3.1
17.9±3.7
10.8±5.1**
注：Oxy剂量为0.8 u/kg，缓慢静注；余同表3。
此外，温经异位康冲剂对醋酸所致小鼠的扭体反应无明显影响(P>0.05)。对正常大鼠的细胞免疫和体液免疫功能无影响，用单向免疫扩散法则IgG，用郭峰改良法测红细胞C3b受体花环率[2]，用形态学法测淋巴细胞转化率均未见明显改变。
讨论
, 百拇医药
动物的子宫内膜异位模型多采用家兔的腹膜种植法[3、4]，最近亦有用大鼠腹腔种植法造模[5]。我们采用大鼠的子宫浆膜种植法，简单实用，成活率达100%，时间短，移植子宫3周可成活，子宫颜色红润与正常子宫无差异。异位内膜中腺体丰富，向腺腔内乳头状突起，腺上皮呈柱状或立方形。温经异位康与丹那唑 均能使异位子宫内膜的腺上皮萎缩，抗子宫内膜抗体阳性率减少，及雌二醇、孕酮及PGF2α水平降低，说明它们对子宫内膜异位的生长均有一定的抑制作用。而且温经异位康高剂量作用大于低剂量组。
温经异位康可抑制大鼠离体子宫和家兔在体子宫，并能拮抗缩宫素和麦角新碱诱发的子宫兴奋，其作用强于月月舒和(或)丹那唑，且有一定的量效关系。此外，还有明显的抗炎作用，对蛋清诱发的大鼠足跖肿胀及二甲苯引起的小鼠耳肿胀均有良好的抑制作用，提示对临床的痛经症亦有治疗作用。
子宫内膜异位症患者细胞免疫和体液免疫均有改变，异位内膜可因细胞缺陷而产生[6、7]。实际显示，温经异位康对正常大鼠的红细胞C3b受体花环率、淋巴细胞转化率及IgG均未见明显影响。
, 百拇医药
作者简介：王钦茂，男，62岁，教授，硕士生导师，从事中药新药的药理学研究。
参考文献
[1]王钦茂，姚道云，杨耀芳，等.孕康口服液保胎作用的实验研究.中国中西医结合杂志，1994，14(7)：418.
[2]杨耀芳，等(郭峰主编).红细胞免疫学新探(下卷).南京：南京大学出版社，1993.219.
[3]Hahn DW,Carraher RP,Foldesy RG,et al.Development of an animal model for guantatively evaluating effects of drugs on endometaiosis.Fertil Steril,1985，44(3):410.
[4]李娟，周美华，高允生，等.强效GnRH激动剂那法瑞林对兔异位子宫内膜的抑制作用.中国药理学通报，1998，14(2)：122.
[5]俞超芹，翟美芙，邢玲玲，等.内异方对SD大鼠子宫内膜异位症动物模型种植内膜作用的实验研究.中国实验方剂学杂志，1996，2(4)：34.
[6]郑怀美.妇产科学.第3版.北京：人民卫生出版社，1990.324.
[7]刘义.子宫内膜异位症免疫学研究进展.国外医学.妇产科分册，1995，22(4)：214.
(收稿日期 1998—11—10 修回日期 1998—12—28), 百拇医药
单位：
王钦茂，陈光亮，王元勋，程 民，朱满芳(安徽中医学院，安徽 合肥 230038)；杨耀芳(上海市第五人民医院，上海 200240)
关键词：温经异位康冲剂；子宫内膜异位症；痛经
中国中医基础医学杂志990810 摘 要 目的 观察温经异位康冲剂治疗子宫内膜异位症及痛经的作用。方法 手术制备大鼠子宫内膜异位模型，观察形态学改变，配合子宫内膜抗体及雌二醇、孕酮、PGF2α水平检测；以及动物子宫活动、抗炎等试验。结果 本品能抑制大鼠子宫内膜异位模型，降低子宫内膜抗体及阳性率、血清雌二醇、孕酮及PGF2α(P<0.01)。病理学观察，异位子宫的内膜腺体及腺上皮明显萎缩，呈剂量依赖性；其作用与丹那唑相似，可抑制大鼠离体子宫和家兔在体子宫的收缩活动，降低子宫的收缩幅度、频率和张力，并能拮抗缩宫素和麦角新碱对离体及在体子宫的兴奋作用，其作用比月月舒和丹那唑强。对大鼠卵巢的生长及卵泡发育无明显影响。对蛋白诱发的大鼠足肿胀及二甲苯所致的小鼠耳肿胀有良好的抑制作用。对醋酸致小鼠扭体反应和正常大鼠的免疫功能无明显影响。
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Experimental Study on Anti-Endometriosis of wenjing Yiweikang Granule
WANG Qin-mao YANG Yao-fang ChENG Guang-liang et al
(Anhui College of TCM Hefei 230038)
ABSTRACT Objective:To investigate the therapeutic effect of Wenjingyiweikang keli on endometriosis and dysmenorrhea.METHODS:The rat endometriosis model was produced by surgery,we observed the change of uterus tissue morphology,the antibody level of antiendometrium and the serum level of estradiol,progesterone and PGF2α. The effect on uterus activation,inflammation and pain was also observed.RESULTS:Wenjingyiweikang keli could inhibit the endometriosis of rat,reduced the antibody level of antiendometrium,decreaser the level of estradiol,progesterone and PGF2α n serum (p<0.01).Through pathological observation,the glands and glandular epithelium of abnormal endometrium were obviously withered,the effect was dose dependent,similar to Danazol.The uterus constriction of rat in vitro and of rbbit in vivo was both inhibited.In vitro,the range,the frequency and the tension of the constriction were decreased,the effectwas dose dependent,while in vivo,only the tension of the constriction was inhibited.So did the uterus constriction produce by oxytocin and ergotocine,and the effect was stronger than the effect of Yueyueshu and Danazol.The growth of ovary and folliculus were not effected.The egg-white-induced paw swelling of rat and the xylene-induced auricular swelling of mouse were inhibited.The mouse twisting induced by acetic acid was not influenced,either.The normal immune system of rat was not influenced.
, http://www.100md.com
KEY WORDS:Wenjingyiweikang Keli Endometriosis Dysmenorrhea
温经异位康冲剂由党参、甘草、乳香、当归、阿胶、肉桂、川芎、牡丹皮等组成，有温经化瘀，理气止痛的功效，适用于子宫内膜异位症和痛经。本研究旨在阐明其药理作用，为临床提供治疗学基础。
实验材料
1 药物和试剂
温经异位康冲剂(以下简称异位康)，实验用1.675 g生药/ml的清膏，由河南省新乡常乐制药厂提供；辅料为50%糖粉和25%的糊精；丹那唑 胶囊，上海华联制药公司出品，批号950302；月月舒冲剂，河南宛西制药厂生产，批号950204；PGF2α放免试剂盒由中国医学科学院基础所药理室提供；血清雌二醇及孕酮放免试剂盒由中美合资天津九鼎医学生物工程有限公司供应；抗子宫内膜抗体(EMAb)试剂盒由南京军区总医院临床免疫科提供，其他试药均为市售产品。
, http://www.100md.com
2 主要仪器
125I-放免测定仪及FJ-2107液体闪烁计数器，西安262厂；DC-001型离体器官测定仪，南京分析仪器厂；LMS-2B二道生理记录仪，成都仪器厂。
3 动物
昆明种小鼠、Wistar大鼠由安徽省医学研究所动物室提供；雌性白色家兔由本院动物室供应。
方法与结果
1 对大鼠子宫内膜异位的影响
1.1 模型制作
雌性未孕大鼠，体重135 g±15 g。皮下注射己烯雌酚0.2 mg/只促情，腹部脱毛，ip麻醉，常规消毒，开腹。左侧离卵巢约1 cm处分离子宫，结扎后在中间剪取约0.5 cm一段子宫体，置于盛生理盐水培养皿中备用。右侧子宫离卵巢约1 cm处分离子宫，缝上左侧切下的子宫段，剪开，以暴露子宫内膜，关腹缝合。每鼠ip庆大霉素0.1 ml×7 d。假手术组，只用镊子牵拉子宫，其余操作同上。
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1.2 分组和给药
正常饲养3周后，经病理组织学检查，异位内膜已成活。将大鼠随机分为异位康11.1 g/kg(高剂量组)和5.5 g/kg(低剂量组)，丹那唑0.17 g/kg，以及模型组和假手术组。ig给药，容量1.2 ml/100 g体重，模型组和假手术组给等容量辅料液，每日1次，连用3周。末次给药后24 h，乌拉坦麻醉，腹主动脉采血检测各项指标；并做病理学检查。
1.3 结果
1.3.1 一般情况 用药期间大鼠外表无明显异常。第2周，模型组大鼠的净增体重低于其他各组，至第3周则有显著性差异；而异位康与丹那唑 均能使子宫内膜异位大鼠生长缓慢的情况改善，与正常组比较P>0.05。摄食量各组间比较无明显差异性。
1.3.2 对大鼠血浆PGF2α水平的影响 将盛有肝素-消炎痛-生理盐水溶液的离心管置冰水浴内，注入全血，4℃离心分离血浆。取1 ml血浆，用1N HCl调pH至3.5，用乙酸乙酯5 ml提取、离心，重复2次，收集提取液，氮气吹干，加1 ml无水乙醇分样吹干，置于-40℃下保存，放射免疫测量，结果异位康能非常明显地降低子宫内膜异位模型大鼠血浆内PGF2α水平，其作用与丹那唑相似(见图1)。
, 百拇医药
图1 温经异位康对大鼠血浆PGF2α的影响(
±s)1.3.3 对大鼠血清抗子宫内膜抗体的影响 采用酶联免疫吸附间接法检测大鼠血清内抗子宫内膜抗体(EMAb)，结果如表1显示。大鼠造模后，血清内EMAb的阳性率由假手术组的0%增加至90.91%。异位康与丹那唑一致，可使EMAb的阳性率下降，而且随剂量的增加，其作用增强。
表1 温经异位康对大鼠血清抗子宫内膜抗体的影响 组 别
剂量(g/kg)
鼠数
(n)
阳性例数
, 百拇医药
(n)
阳性率
(%)
假手术组
等量辅料
9
0
0
模型组
等量辅料
11
10
90.91
, 百拇医药 丹那唑组
0.17
11
1
9.1**
异位康组
11.1
11
2
18**
5.5
10
5
, 百拇医药
50*
注：与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01。
1.3.4 对大鼠血清雌二醇、孕酮水平的影响 采用双抗体放射免疫法，发现子宫内膜异位模型组大鼠血清雌二醇和孕酮水平显著高于假手术组，异位康能明显降低模型大鼠的雌二醇水平，对孕酮亦有下降作用(见图2)。
1.3.5 对大鼠卵巢重量及形态学的影响 大鼠采血致死后剖腹，分离卵巢，称重，计算脏器系数(卵巢mg/100 g体重)。常规石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察卵泡发育和黄体生成的情况，结果各组间卵巢的重量无明显差异性；组织学检查各动物均可见到各级卵泡或初级卵泡和黄体，无明显差异性。提示异位康对大鼠卵巢的生长及卵巢内卵泡发育和排卵无明显影响。
, 百拇医药 图2 温经异位康对大鼠血清雌二醇、孕酮水平的影响(
±s，n=8)1.3.6 异位子宫病理组织学检查 大鼠剖腹，肉眼观察除假手术组外，各组鼠均在右侧子宫角靠近卵巢0.5 cm处见有异位病灶，一般为米粒大小之结节，切面可见一线形闭合小孔。切取移植内膜异位处组织备检，光镜观察，见移植之宫内膜位于正常子宫肌层外浆膜处，其病变程度不一，分轻、中、重三种，作为疗效判断标准。轻度：一个低倍视野见0～2个内膜腺体；中度：一个低倍视野见3～5个内膜腺体；重度：一个低倍视野见6个以上内膜腺体。结果异位康及丹那唑均可使异位内膜萎缩，主要表现在间质体积缩小，内膜腺体减少(见表2)。
表2 温经异位康对实验性宫内膜异位的病理组学改变 组 别
剂量(g/100 g)
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间质情况
腺体情况
病模组
等量辅料
正 常
重度
异位康(低)
5.5
面积缩小至1/2
中度
异位康(高)
11.1
面积缩小至1/3
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轻度
丹那唑组
0.17
面积缩小至1/3～1/4
轻度
假手术组
等量辅料
无异位宫内膜
无异位宫内膜
2 对动物子宫收缩活动的影响[1]
2.1 大鼠离体子宫实验
雌性未孕大鼠，体重180 g～220 g，实验前2d注射己烯雌酚促情，颈椎脱臼处死，迅速取子宫约2 cm，置于盛有30 ml洛氏液的浴槽中，温度30℃±0.5℃，下端固定，上端与张力换能器相连，使子宫保持2 g的张力，连续通入空气，平稳后开始实验，记录正常子宫收缩曲线及加入不同药物后子宫收缩曲线。结果异位康在终浓度1.67 mg/ml时便可明显抑制正常离体大鼠子宫收缩的频率、幅度和张力，与给药前相比，有显著性差异，且随浓度增加而抑制作用增强(P<0.05，P<0.01)。而月月舒冲剂在同等剂量下对子宫收缩活动无明显影响，当浓度增至13.3 mg/ml时，对子宫才有抑制作用。缩宫素(1.33×10-4u/ml)或麦角新碱(1.07×10-5 mg/ml)，可使子宫收缩幅度、张力明显增加(P<0.01)，异位康能显著拮抗缩宫素或麦角新碱引起的子宫收缩增强(P<0.01)。而月月舒冲剂在较大剂量(13.3 mg/ml)时才能对抗缩宫素和麦角新碱致子宫收缩幅度的增加(分别为P<0.05，P<0.01)。
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2.2 家兔在体子宫实验
雌性未孕家兔，禁食12 h后，麻醉，右上腹切口作十二指肠插管备给药用，中下腹切口，分离子宫，用蛙心夹夹住一侧子宫中心，与张力换能器相连，稳定后，记录子宫收缩曲线。由十二指肠分别给药，容量5 ml/kg，观察药前及药后10min、30min、60 min的子宫收缩曲线。在药后30 min已达作用高峰。表3、表4可见，异位康和月月舒冲剂对子宫收缩的频率和幅度影响较小，但可明显降低子宫收缩的张力。家兔缓慢静注缩宫素(0.8 u/kg)，子宫收缩的频率、张力、幅度均明显增加，异位康高、低剂量和月月舒冲剂均能明显对抗缩宫素引起的子宫收缩增强，降低子宫的收缩频率、张力和幅度。
3 抗炎作用
3.1 对大鼠足跖肿胀的影响
体重150 g～190 g雄性大鼠，给药7 d，末次ig后45 min，鼠右后跖注射新鲜蛋清0.1 ml/只，测量致炎前及致炎后30 min、60 min、90 min时踝关节以下的足容积，以肿胀率(致炎后容积一致，炎前容积/致炎前容积×100%)表示，结果温经异位康中、高剂量和月月舒冲剂对大鼠的足肿胀均有明显的抑制作用(P<0.05～0.01)，作用维持90 min以上。
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3.2 对小鼠耳廓肿胀的影响
雄性小鼠ig 7d，末次给药后45 min，每鼠右耳两侧涂二甲苯致炎。1 h后处死，取耳片称重，计算肿胀率。结果温经异位康中、高剂量对二甲苯所致小鼠耳部炎症有明显的抑制作用(P<0.01)； 临床等效剂量比，优于月月舒(P<0.05)和丹那唑 (P>0.05)。
表3 温经异位康对家兔在体子宫收缩活动的影响(
±s,n=6) 组 别剂量(g/kg)
频率(次/10 min)
张力(mm)
幅度(mm)
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药 前
药后30 min
药前
药后30 min
药 前
药后30 min
辅料组
等容量
6.2±2.7
6.6±2.2
0±0
1±2
, 百拇医药 21.0±8.3
23.2±9.9
异位康
3.5
9.8±2.5
9.1±1.4
0±0
-4.5±0.7**
16.9±7.4
20.4±6.9
7.0
12.6±1.9
, 百拇医药
9.3±2.5*
0±0
-4.7±2.5**
13.7±3.5
14.4±1.3
月月舒
3.5
8.0±2.1
7.2±1.6
0±0
-5.0±2.2**
16.5±4.6
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12.5±3.6
注：(1)给药前子宫收缩基线记为0(即张力记为0)；(2)药后指试验药或辅料；(3)与药前比较：*P<0.05，**P<0.01。
表4 温经异位康对抗缩宫素致家兔在体子宫的兴奋作用(n=6,
±s) 组 别剂量
(g/kg)
频率(次/10 min)
张力(mm)
幅度(mm)
正常
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Oxy后
药后30 min
正常
Oxy后
药后30 min
正常
Oxy后
药后30 min
Oxy+辅料
等容量
7.9±1.5
13.5±2.6
12.6±1.5
, 百拇医药
0±0
10.0±2.4
8.9±1.8
10.8±3.7
16.4±4.4
14.8±4.1
Oxy+异位康
3.5
6.3±1.4
13.0±3.6
9.6±0.6*
0±0
, 百拇医药
5.1±1.4
-2.0±0.9**
15.3±4.1
27.9±5.7
15.8±5.1**
Oxy+异位康
7.0
8.3±0.6
14.6±3.0
8.7±1.2*
0±0
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6.0±2.8
-4.0±2.8**
16.8±3.8
22.2±6.4
14.3±4.4**
Oxy+月月舒
3.5
7.4±1.5
12.9±3.3
9.3±0.7*
0±0
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7.0±0.1
-4.5±1.8**
10.3±3.1
17.9±3.7
10.8±5.1**
注：Oxy剂量为0.8 u/kg，缓慢静注；余同表3。
此外，温经异位康冲剂对醋酸所致小鼠的扭体反应无明显影响(P>0.05)。对正常大鼠的细胞免疫和体液免疫功能无影响，用单向免疫扩散法则IgG，用郭峰改良法测红细胞C3b受体花环率[2]，用形态学法测淋巴细胞转化率均未见明显改变。
讨论
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动物的子宫内膜异位模型多采用家兔的腹膜种植法[3、4]，最近亦有用大鼠腹腔种植法造模[5]。我们采用大鼠的子宫浆膜种植法，简单实用，成活率达100%，时间短，移植子宫3周可成活，子宫颜色红润与正常子宫无差异。异位内膜中腺体丰富，向腺腔内乳头状突起，腺上皮呈柱状或立方形。温经异位康与丹那唑 均能使异位子宫内膜的腺上皮萎缩，抗子宫内膜抗体阳性率减少，及雌二醇、孕酮及PGF2α水平降低，说明它们对子宫内膜异位的生长均有一定的抑制作用。而且温经异位康高剂量作用大于低剂量组。
温经异位康可抑制大鼠离体子宫和家兔在体子宫，并能拮抗缩宫素和麦角新碱诱发的子宫兴奋，其作用强于月月舒和(或)丹那唑，且有一定的量效关系。此外，还有明显的抗炎作用，对蛋清诱发的大鼠足跖肿胀及二甲苯引起的小鼠耳肿胀均有良好的抑制作用，提示对临床的痛经症亦有治疗作用。
子宫内膜异位症患者细胞免疫和体液免疫均有改变，异位内膜可因细胞缺陷而产生[6、7]。实际显示，温经异位康对正常大鼠的红细胞C3b受体花环率、淋巴细胞转化率及IgG均未见明显影响。
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作者简介：王钦茂，男，62岁，教授，硕士生导师，从事中药新药的药理学研究。
参考文献
[1]王钦茂，姚道云，杨耀芳，等.孕康口服液保胎作用的实验研究.中国中西医结合杂志，1994，14(7)：418.
[2]杨耀芳，等(郭峰主编).红细胞免疫学新探(下卷).南京：南京大学出版社，1993.219.
[3]Hahn DW,Carraher RP,Foldesy RG,et al.Development of an animal model for guantatively evaluating effects of drugs on endometaiosis.Fertil Steril,1985，44(3):410.
[4]李娟，周美华，高允生，等.强效GnRH激动剂那法瑞林对兔异位子宫内膜的抑制作用.中国药理学通报，1998，14(2)：122.
[5]俞超芹，翟美芙，邢玲玲，等.内异方对SD大鼠子宫内膜异位症动物模型种植内膜作用的实验研究.中国实验方剂学杂志，1996，2(4)：34.
[6]郑怀美.妇产科学.第3版.北京：人民卫生出版社，1990.324.
[7]刘义.子宫内膜异位症免疫学研究进展.国外医学.妇产科分册，1995，22(4)：214.
(收稿日期 1998—11—10 修回日期 1998—12—28), 百拇医药