胃癌多基因和癌胚抗原同步检测的临床意义
作者：秦环龙 林擎天 张惠箴
单位：秦环龙 林擎天 上海市第六人民医院 1普外科 上海市 200233；张惠箴 上海市第六人民医院 病理科 上海市 200233
关键词：胃肿瘤/ 诊断；p53基因；c-erbB2基因；癌胚抗原/ 分析；免疫组织化学
中国图书馆分类号 R 735中国图书馆分类号 R 735.2
Subject headings stomach neoplasms/ diagnosis; p53 gene; c-erbB2 gene; carcinoembryonic antigen/ analysis; immunohistochemistry
胃癌的发生发展是一个涉及多基因、多分子水平的多阶段过程. 目前，文献报道癌基因产物的检测，多数针对某单一癌基因的变化，其结果可比性较差，结论常常不一致. 我们采用免疫组化方法，从胃癌的连续切片中同步检测p53，p21 ras, C-erbB-2和癌胚抗原(CEA)的蛋白产物，分析它们在胃癌形成过程中的变化规律和临床意义.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 胃癌组织100例取自我院1996-01/ 1997-11之手术标本. 标本均经常规100 mL/ L中性福尔马林固定，石蜡包埋，5 μm厚连续切片，分别进行免疫组化和HE染色. 鼠抗人p53单克隆抗体(Novocastra)、鼠抗人pan-ras单克隆抗体(Oncogene Science, Inc)、兔抗人c-erbB-2多克隆抗体(Dako)、CEA多克隆抗体(Dako)、LSAB试剂盒(Dako)和ABC试剂盒(Vector)购于上海华美公司.
1.2 方法 p53和p21 ras表达的检测用LSAB法，Ⅰ抗浓度分别为1∶50和1∶25，CEA和c-erbB-2表达的检测用标准ABC法，Ⅰ抗浓度均为1∶50. 上述检测均做阳性和阴性对照. DAB显色，苏木素复染. 细胞呈明显棕色反应即为阳性，根据染色深浅和阳性细胞百分比，将阳性强调判断为(+)、(++)和(+++).
, 百拇医药
统计学处理 用χ2检验和四格表确切概率法分析.
2 结果
p53，C-erbB-2, p21 ras和CEA在癌组织中的表达率分别为51%，36%，46%和33%. p53阳性反应均位于细胞核内，C-erbB-2和p21 ras主要位于细胞膜，少部分位于胞质. CEA为胞质着色. 多基因表达与胃癌的临床病理特征关系见表1.
表1 胃癌多基因表达与临床病理特征关系 n(%)
临床因素
n
阳性表达(%)
p53
c-erbB-2
, http://www.100md.com
p21 ras
CEA
性别 男
62
29(46.8)
17(27.5)
30(48.4)
22(35.5)
女
38
22(57.9)
9(23.6)
16(42.1)
, http://www.100md.com
11(28.9)
年龄(岁)<60
43
19(44.2)
12(27.9)
18(41.9)
13(30.2)
≥60
57
32(52.6)
14(24.6)
28(49.1)
, http://www.100md.com
20(35.1)
部位 贲门
17
9(52.9)
5(29.4)
8(47.1)
5(29.4)
胃体
26
13(50.0)
8(30.8)
11(42.3)
, 百拇医药 10(38.5)
胃窦
57
29(50.8)
13(22.8)
27(47.4)
18(31.6)
Borrman分型
Ⅰ/ Ⅱ型
42
19(45.2)
12(28.6)
, 百拇医药 16(38.1)
10(23.8)
Ⅲ/ Ⅳ型
58
32(55.2)a
14(24.1)
30(51.7)a
23(39.7)a
分化程度
Ⅰ/ Ⅱ级
38
17(40.5)
, http://www.100md.com
6(15.8)
14(36.8)
9(23.7)
Ⅲ/ Ⅳ级
62
34(58.6)a
20(32.3)a
32(51.6)a
24(38.7)a
浸润深度
浆膜以内
, 百拇医药
36
21(58.3)
10(27.8)
17(47.2)
12(33.3)
超出浆膜
64
30(46.9)a
16(25.0)
29(45.3)
21(32.8)
淋巴结转移
, 百拇医药
无
40
13(32.5)
14(35.0)
13(32.5)
14(35.0)
有
60
38(63.3)a
12(20.0)a
33(55.0)a
19(31.7)
, 百拇医药
aP<0.05.
3 讨论
近年来，抑癌基因在癌变化中的作用，越来越受到重视. 野生型p53基因是一种抑癌基因，通过对细胞生长的调控和促进程序性细胞死亡(apoptosis)的发生而起抑癌作用，当其发生突变后，即变成突变型p53基因，从而失去抑癌功能，反而具有促进恶性转化的活性，并使静止期的细胞进入细胞周期，使细胞无限增殖. 关于p53基因在胃癌中的意义，张学镛et al[1]报道p53基因突变与胃癌的转移和不良的预后有关. 我们发现，胃癌组织有较高的P53蛋白过度表达(51%)，其表达程度随癌组织浸润深度增加而增强，以浸出浆膜的肿瘤表达率为最高；在淋巴结转移中的阳性率比无转移者高(P<0.01). 这些结果提示，p53基因在胃癌的发生和发展中可能起着重要作用，其过度表达使肿瘤细胞具有更大的侵袭力[2，3]. 因此对P53蛋白表达阳性的病例应予重视，密切随访.
, http://www.100md.com
癌基因c-erbB-2(又称HER-2/ neu)编码一组生长因子受体，其序列与上皮生长因子受体(EGFR)相似，其蛋白产物激活苏氨酸蛋白酶活性，参与细胞的生长与分化，许多研究证明[4]，c-erbB-2癌基因表达对多种恶性肿瘤患者预后、术后复发和生存期有重要影响. 本结果表明，c-erbB-2在分化较好，浸润尚未超出浆膜，无淋巴结转移者，其表达明显高于相应对照组. 另外，Mori et al[5]用电镜观察到，c-erbB-2的免疫组化染色部位主要位于细胞膜，尤其在微绒毛上，而高分化腺癌的微绒毛比较发达，这可能是c-erbB-2表达多见于高分化腺癌的原因. 本结果还表明，不同分化程度胃癌的c-erbB-2含量均明显高于癌旁组织和正常组织. 提示c-erbB-2表达出现于胃粘膜癌变的早期，c-erbB-2的过度表达是胃粘膜恶性变的标志，可见c-erbB-2的定量表达的检测有助于胃癌的早期诊断.
p21 ras表达变化与肿瘤病理学特征间的关系各作者报道不尽一致. Carneiro et al[6]发现p21 ras表达与胃癌组织分型显著相关. 而与胃癌浸润，淋巴转移及静脉侵袭无关. 而Deng et al[7]发现p21 ras表达与肿瘤浸润和转移有关. 我们的研究表明，P21 ras蛋白表达阳性率与性别、年龄和肿瘤浸润深度无关，而与组织分型、细胞增殖和淋巴转移显著相关，提示p21 ras基因异常表达在肿瘤细胞增殖、发展和转移中起重要作用.
, 百拇医药
已知CEA水平升高与胃肠癌转移密切相关，CEA促进肿瘤转移的可能机制是：干扰原发灶内肿瘤细胞间连接，降低其粘附力，使细胞间连接易于断裂，肿瘤细胞更易脱离、移位. 我们的研究表明，不同分化程度胃癌CEA含量均不相同，高分化腺癌CEA呈极性分布，细胞游离缘CEA含量较高. 低分化腺癌CEA弥漫分布，细胞内CEA含量高于前者(P<0.01). 表明根据不同分化程度胃癌细胞内CEA分布和含量特点，能够辅助病理确定胃癌分化程度. 另外，我们的研究还发现，癌旁组织及正常胃粘膜上皮未见阳性反应，表明CEA表达出现于胃粘膜癌变的后期，是胃粘膜细胞恶性变的标志，提示CEA表达的检测有助于胃癌的鉴别诊断.
通讯作者 秦环龙
4 参考文献
1 张学镛. 胃癌的基础研究与临床. 北京：科学出版社，1996：30-36
2 Hsu HC, Peng SY, Shen JC, Chen DS, Lin LI, Slagle BL, Butel JS. Allelotype and loss of heterozyosity of p53 in primary and recurrent hepatocellular carcinomas. Cancer, 1994;73:42-47
, http://www.100md.com
3 Martin HM, Filipe ME, Morris RW, Lane DP, Silvestre F. p53 expression and prognosis in gastric carcinoma. Int J Cancer, 1992;50:859-862
4 安伟德，胡祥，郭武斌，张波. c-erbB-2基因扩增与胃癌预后的关系. 中国肿瘤临床，1996；23：841-844
5 Mori S. c-erbB-2 gene product: a membrance protein commonly expressed on human fetal eithelial cells. Lab Invest, 1984;61:93-97
6 Carneiro F, David I, Sunkel L, Lopes C, Sobrinho-Simoes M. Immunohistochemical analysis of ras oncogene 21 ras product in human gastric carcinomas and their adjacent mucosas. Pathol Res Pract, 1992;188:263-272
7 Deng GR, Liu XH, Wang JR. Correlation of mutations of oncogene c-H-ras at colon 12 with metastasis and survival of gastric cancer patients. Oncogene Res, 1991;6:33-38
收稿日期 1999-04-08 修回日期 1999-06-06, 百拇医药
单位：秦环龙 林擎天 上海市第六人民医院 1普外科 上海市 200233；张惠箴 上海市第六人民医院 病理科 上海市 200233
关键词：胃肿瘤/ 诊断；p53基因；c-erbB2基因；癌胚抗原/ 分析；免疫组织化学
中国图书馆分类号 R 735中国图书馆分类号 R 735.2
Subject headings stomach neoplasms/ diagnosis; p53 gene; c-erbB2 gene; carcinoembryonic antigen/ analysis; immunohistochemistry
胃癌的发生发展是一个涉及多基因、多分子水平的多阶段过程. 目前，文献报道癌基因产物的检测，多数针对某单一癌基因的变化，其结果可比性较差，结论常常不一致. 我们采用免疫组化方法，从胃癌的连续切片中同步检测p53，p21 ras, C-erbB-2和癌胚抗原(CEA)的蛋白产物，分析它们在胃癌形成过程中的变化规律和临床意义.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 胃癌组织100例取自我院1996-01/ 1997-11之手术标本. 标本均经常规100 mL/ L中性福尔马林固定，石蜡包埋，5 μm厚连续切片，分别进行免疫组化和HE染色. 鼠抗人p53单克隆抗体(Novocastra)、鼠抗人pan-ras单克隆抗体(Oncogene Science, Inc)、兔抗人c-erbB-2多克隆抗体(Dako)、CEA多克隆抗体(Dako)、LSAB试剂盒(Dako)和ABC试剂盒(Vector)购于上海华美公司.
1.2 方法 p53和p21 ras表达的检测用LSAB法，Ⅰ抗浓度分别为1∶50和1∶25，CEA和c-erbB-2表达的检测用标准ABC法，Ⅰ抗浓度均为1∶50. 上述检测均做阳性和阴性对照. DAB显色，苏木素复染. 细胞呈明显棕色反应即为阳性，根据染色深浅和阳性细胞百分比，将阳性强调判断为(+)、(++)和(+++).
, 百拇医药
统计学处理 用χ2检验和四格表确切概率法分析.
2 结果
p53，C-erbB-2, p21 ras和CEA在癌组织中的表达率分别为51%，36%，46%和33%. p53阳性反应均位于细胞核内，C-erbB-2和p21 ras主要位于细胞膜，少部分位于胞质. CEA为胞质着色. 多基因表达与胃癌的临床病理特征关系见表1.
表1 胃癌多基因表达与临床病理特征关系 n(%)
临床因素
n
阳性表达(%)
p53
c-erbB-2
, http://www.100md.com
p21 ras
CEA
性别 男
62
29(46.8)
17(27.5)
30(48.4)
22(35.5)
女
38
22(57.9)
9(23.6)
16(42.1)
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11(28.9)
年龄(岁)<60
43
19(44.2)
12(27.9)
18(41.9)
13(30.2)
≥60
57
32(52.6)
14(24.6)
28(49.1)
, http://www.100md.com
20(35.1)
部位 贲门
17
9(52.9)
5(29.4)
8(47.1)
5(29.4)
胃体
26
13(50.0)
8(30.8)
11(42.3)
, 百拇医药 10(38.5)
胃窦
57
29(50.8)
13(22.8)
27(47.4)
18(31.6)
Borrman分型
Ⅰ/ Ⅱ型
42
19(45.2)
12(28.6)
, 百拇医药 16(38.1)
10(23.8)
Ⅲ/ Ⅳ型
58
32(55.2)a
14(24.1)
30(51.7)a
23(39.7)a
分化程度
Ⅰ/ Ⅱ级
38
17(40.5)
, http://www.100md.com
6(15.8)
14(36.8)
9(23.7)
Ⅲ/ Ⅳ级
62
34(58.6)a
20(32.3)a
32(51.6)a
24(38.7)a
浸润深度
浆膜以内
, 百拇医药
36
21(58.3)
10(27.8)
17(47.2)
12(33.3)
超出浆膜
64
30(46.9)a
16(25.0)
29(45.3)
21(32.8)
淋巴结转移
, 百拇医药
无
40
13(32.5)
14(35.0)
13(32.5)
14(35.0)
有
60
38(63.3)a
12(20.0)a
33(55.0)a
19(31.7)
, 百拇医药
aP<0.05.
3 讨论
近年来，抑癌基因在癌变化中的作用，越来越受到重视. 野生型p53基因是一种抑癌基因，通过对细胞生长的调控和促进程序性细胞死亡(apoptosis)的发生而起抑癌作用，当其发生突变后，即变成突变型p53基因，从而失去抑癌功能，反而具有促进恶性转化的活性，并使静止期的细胞进入细胞周期，使细胞无限增殖. 关于p53基因在胃癌中的意义，张学镛et al[1]报道p53基因突变与胃癌的转移和不良的预后有关. 我们发现，胃癌组织有较高的P53蛋白过度表达(51%)，其表达程度随癌组织浸润深度增加而增强，以浸出浆膜的肿瘤表达率为最高；在淋巴结转移中的阳性率比无转移者高(P<0.01). 这些结果提示，p53基因在胃癌的发生和发展中可能起着重要作用，其过度表达使肿瘤细胞具有更大的侵袭力[2，3]. 因此对P53蛋白表达阳性的病例应予重视，密切随访.
, http://www.100md.com
癌基因c-erbB-2(又称HER-2/ neu)编码一组生长因子受体，其序列与上皮生长因子受体(EGFR)相似，其蛋白产物激活苏氨酸蛋白酶活性，参与细胞的生长与分化，许多研究证明[4]，c-erbB-2癌基因表达对多种恶性肿瘤患者预后、术后复发和生存期有重要影响. 本结果表明，c-erbB-2在分化较好，浸润尚未超出浆膜，无淋巴结转移者，其表达明显高于相应对照组. 另外，Mori et al[5]用电镜观察到，c-erbB-2的免疫组化染色部位主要位于细胞膜，尤其在微绒毛上，而高分化腺癌的微绒毛比较发达，这可能是c-erbB-2表达多见于高分化腺癌的原因. 本结果还表明，不同分化程度胃癌的c-erbB-2含量均明显高于癌旁组织和正常组织. 提示c-erbB-2表达出现于胃粘膜癌变的早期，c-erbB-2的过度表达是胃粘膜恶性变的标志，可见c-erbB-2的定量表达的检测有助于胃癌的早期诊断.
p21 ras表达变化与肿瘤病理学特征间的关系各作者报道不尽一致. Carneiro et al[6]发现p21 ras表达与胃癌组织分型显著相关. 而与胃癌浸润，淋巴转移及静脉侵袭无关. 而Deng et al[7]发现p21 ras表达与肿瘤浸润和转移有关. 我们的研究表明，P21 ras蛋白表达阳性率与性别、年龄和肿瘤浸润深度无关，而与组织分型、细胞增殖和淋巴转移显著相关，提示p21 ras基因异常表达在肿瘤细胞增殖、发展和转移中起重要作用.
, 百拇医药
已知CEA水平升高与胃肠癌转移密切相关，CEA促进肿瘤转移的可能机制是：干扰原发灶内肿瘤细胞间连接，降低其粘附力，使细胞间连接易于断裂，肿瘤细胞更易脱离、移位. 我们的研究表明，不同分化程度胃癌CEA含量均不相同，高分化腺癌CEA呈极性分布，细胞游离缘CEA含量较高. 低分化腺癌CEA弥漫分布，细胞内CEA含量高于前者(P<0.01). 表明根据不同分化程度胃癌细胞内CEA分布和含量特点，能够辅助病理确定胃癌分化程度. 另外，我们的研究还发现，癌旁组织及正常胃粘膜上皮未见阳性反应，表明CEA表达出现于胃粘膜癌变的后期，是胃粘膜细胞恶性变的标志，提示CEA表达的检测有助于胃癌的鉴别诊断.
通讯作者 秦环龙
4 参考文献
1 张学镛. 胃癌的基础研究与临床. 北京：科学出版社，1996：30-36
2 Hsu HC, Peng SY, Shen JC, Chen DS, Lin LI, Slagle BL, Butel JS. Allelotype and loss of heterozyosity of p53 in primary and recurrent hepatocellular carcinomas. Cancer, 1994;73:42-47
, http://www.100md.com
3 Martin HM, Filipe ME, Morris RW, Lane DP, Silvestre F. p53 expression and prognosis in gastric carcinoma. Int J Cancer, 1992;50:859-862
4 安伟德，胡祥，郭武斌，张波. c-erbB-2基因扩增与胃癌预后的关系. 中国肿瘤临床，1996；23：841-844
5 Mori S. c-erbB-2 gene product: a membrance protein commonly expressed on human fetal eithelial cells. Lab Invest, 1984;61:93-97
6 Carneiro F, David I, Sunkel L, Lopes C, Sobrinho-Simoes M. Immunohistochemical analysis of ras oncogene 21 ras product in human gastric carcinomas and their adjacent mucosas. Pathol Res Pract, 1992;188:263-272
7 Deng GR, Liu XH, Wang JR. Correlation of mutations of oncogene c-H-ras at colon 12 with metastasis and survival of gastric cancer patients. Oncogene Res, 1991;6:33-38
收稿日期 1999-04-08 修回日期 1999-06-06, 百拇医药