立明法检测女性生殖道感染及不孕症患者沙眼衣原体
作者：高玮 马竟 张秀峰
单位：深圳市南山区计划生育指导中心(518052)
关键词：沙眼衣原体；生殖道感染；不孕症；立明
广东医学990929 【摘要】 目的 探讨立明法在女性生殖道沙眼衣原体感染的检测及应用前景。方法 用Unipath公司的clearview chlamydia kit(简称立明衣原体快速试剂)对该中心的195例生殖道感染、40例不孕症妇女作宫颈细胞衣原体抗原检测。结果 CT感染的总阳性数为60例，总阳性率为25.5%(60/235)，生殖道感染阳性率为23.5%(46/195)，不孕症患者的阳性率为35%(14/40)。研究还发现，随宫颈糜烂程度的增加，结果窗颜色密度有增加的趋势。结论 立明衣原体快速试剂对女性生殖道沙眼衣原体感染的诊断具有快速、简便、特异、实用的优点，具有广阔的应用前景。
近年来，生殖道沙眼衣原体(chlamydia trachomatis, CT)感染在发达国家是主要的性传播疾病之一。 WHO估计全球每年有生殖道CT感染者为19.4%[1]。而在性病患者中，CT感染率高达55.88%[2]。CT感染可引起盆腔炎、输卵管炎及子宫内膜炎，导致流产、不孕、围产期感染和胎儿宫内感染。CT感染的诊断主要依靠实验室检查。传统的Hela229或McCoy细胞培养法被视为金标准，但费时费力，而且，对标本的运送和保存要求较高，若处理不当，则对实验结果影响很大。近年来，Unipath公司提供的Clearview chlamydia kit,是一种快速、固相三明治式的免疫法——立明法(clearview chlamydia, CC)，使用沙眼衣原体单克隆抗体包被的检测板，具有简便、特异、敏感、实用的特点。我们对在本中心就诊的女性生殖道炎及不孕患者共235名，用CC快速免疫法检测其阴道拭子标本中的沙眼衣原体，并对该法的应用前景进行评估。
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1 资料与方法
1.1 一般资料 随机选择1998年到我中心妇产科门诊就诊的阴道炎、宫颈炎、盆腔炎和不孕症患者共235名，年龄在16～49岁，平均32.5岁。
1.2 标本采集 用阴道窥器扩张后，先用棉拭子去除宫颈口过多的粘液，再用另一拭子插入宫颈内1～2 cm处旋转10～30 s，取含柱状上皮细胞标本。取材后可立即检测或置无菌试管内，在2℃～8℃冰箱可保存1周。
1.3 方法 用Unipath公司提供的试剂盒，先将试剂、标本置室温30 min复温后，置80℃水浴加热10～12 min提取LPS(lipopolysaccaharide)抗原，转动拭子并沿管壁挤压，弃去拭子，提取液置室温冷却。将测试卡置台面上，逐滴加入5滴提取液于检测窗，静置15 min后观察结果。如果LPS抗原存在，则在质控窗内出现一条蓝带，同时也在结果窗出现一条深浅不同的蓝带，强阳性者可在15 min内出现。若LPS抗原不存在，则仅在质控窗内出现一条蓝带，如30 min内无蓝色显示，应另取测试卡进行测试。
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2 结果
235中阳性患者60例，总阳性率25.5%，见表1。在宫颈炎患者中，宫颈糜烂程度与CC法颜色密度关系见表2。
表1 沙眼衣原体CC法检测结果 类别
标本例数
阳性例数
阳性率(%)
阴道炎
74
14
18.9
宫颈炎
, http://www.100md.com 82
20
24.3
盆腔炎
39
12
30.7
不孕症
40
14
35.0
合计
235
60
, 百拇医药
25.5
表2 宫颈炎糜烂程度与CC法结果窗颜色改变程度的关系 (例) CC法颜色密度
宫 颈 糜 烂 程 度
Ⅰ度
Ⅱ度
Ⅲ度
1+
3
1
0
2+
1
3
, 百拇医药
2
3+
0
2
3
4+
0
0
5
3 讨论
3.1 CT感染与不孕的关系 本组沙眼衣原体女性生殖道感染引起的不孕症的比例最高(占35.0%)。CT易侵袭子宫颈鳞柱上皮交界处的柱状上皮引起宫颈管和宫颈粘液栓的屏障作用消失，上行到子宫体引起子宫内膜炎、输卵管炎导致不孕、流产。女性生殖道的CT感染，70%无明显临床症状[3]，有时可有阴道分泌物轻微增加，轻微下腹疼痛及排尿困难。无明显症状的患者往往延误诊断和治疗，引起继发性输卵管粘膜损伤，导致不孕和异位妊娠。
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3.2 CT感染与宫颈糜烂的关系 本组82例宫颈炎患者CC法检测为阳性的20例患者中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度糜烂分别为4例(20%)、6例(30%)及10例(50%)。提示随宫颈糜烂程度增加，CT感染呈升高趋势。与国内其它报道相似[4]。将其宫颈糜烂的严重程度与CC法结果窗颜色改变深浅程度进行分析发现，随着宫颈糜烂程度的增加，CC法结果窗内蓝色条带颜色密度有增加的趋势。在Nicolas等[5]的报告中发现，CC法颜色密度的深浅与沙眼衣原体包涵体形成的数量呈正比，颜色越深，包涵体数量就越多，说明CT感染也越严重。本文由于宫颈炎的阳性标本数有限，宫颈糜烂程度是否与CT感染的包涵体数呈正比尚待进一步研究。
3.3 对CC法的应用评估 细胞培养法自70年代以来，一直作为检测CT的金标准。然而，由于其受标本采集和运送条件、所培养细胞的敏感性和标本中抑制因子等因素的影响，敏感性为80%～90%。而目前国内外使用的PCR技术，由于其操作复杂，需特殊设备，花费时间长，而且假阳性较高，难以给临床医生提供准确诊断。但近来新一代的酶免疫法——立明法(CC)在检测女性生殖道沙眼衣原体感染，国外文献报其敏感性和特异性分别为95.0%和98.0%[5]。笔者认为CC法有以下优点：①标本用干棉拭子获取后在室温下运送即可，可避免液体运送、冰冻保存的麻烦，在临床实践中易于操作，特别适合门诊患者；②快速、简便，仅须一种试剂，且标本与试剂反应仅需1 min，整个操作过程仅需30 min;③所需仪器简单，仅需一台加热80℃的恒温设备，可作单一标本和成批标本检测；④操作方法容易掌握。因此，我们认为立明法快速试剂在女性生殖道的防治及不孕症的诊治等方面具有广阔的应用前景。
, 百拇医药
4 参考文献
1 李永哲，倪安平，李汪波，等.应用荧光免疫法检测泌尿生殖道沙眼衣原体.中华医学检验杂志，1995，1：29
2 赵季文，徐翠瑜，汪 宁.我国三个地区性病患者和健康人尿支原体、人型支原体和沙眼衣原体感染的流行病学研究.中华流行病学杂志，1992，4：216
3 Aksoy AM. Detection of chlamydial trachomatis antigen in cases of cervicitis and patients with vaginal discharge. Microbiol Bull，1993,27(4):323
4 梁永霓，孙江川，王宁遂，等.应用PCR对女性生殖道沙眼衣原体感染的快速诊断.重庆医科大学学报，1996，21(1)：26
5 Nicolas JS, Lisa H, Fred H, et al. Evaluation of the rapid clearview chlamydia test for direct detection of chlamydia from cervical specimens. J Clin Microbiol， 1991,29(7):1551, http://www.100md.com
单位：深圳市南山区计划生育指导中心(518052)
关键词：沙眼衣原体；生殖道感染；不孕症；立明
广东医学990929 【摘要】 目的 探讨立明法在女性生殖道沙眼衣原体感染的检测及应用前景。方法 用Unipath公司的clearview chlamydia kit(简称立明衣原体快速试剂)对该中心的195例生殖道感染、40例不孕症妇女作宫颈细胞衣原体抗原检测。结果 CT感染的总阳性数为60例，总阳性率为25.5%(60/235)，生殖道感染阳性率为23.5%(46/195)，不孕症患者的阳性率为35%(14/40)。研究还发现，随宫颈糜烂程度的增加，结果窗颜色密度有增加的趋势。结论 立明衣原体快速试剂对女性生殖道沙眼衣原体感染的诊断具有快速、简便、特异、实用的优点，具有广阔的应用前景。
近年来，生殖道沙眼衣原体(chlamydia trachomatis, CT)感染在发达国家是主要的性传播疾病之一。 WHO估计全球每年有生殖道CT感染者为19.4%[1]。而在性病患者中，CT感染率高达55.88%[2]。CT感染可引起盆腔炎、输卵管炎及子宫内膜炎，导致流产、不孕、围产期感染和胎儿宫内感染。CT感染的诊断主要依靠实验室检查。传统的Hela229或McCoy细胞培养法被视为金标准，但费时费力，而且，对标本的运送和保存要求较高，若处理不当，则对实验结果影响很大。近年来，Unipath公司提供的Clearview chlamydia kit,是一种快速、固相三明治式的免疫法——立明法(clearview chlamydia, CC)，使用沙眼衣原体单克隆抗体包被的检测板，具有简便、特异、敏感、实用的特点。我们对在本中心就诊的女性生殖道炎及不孕患者共235名，用CC快速免疫法检测其阴道拭子标本中的沙眼衣原体，并对该法的应用前景进行评估。
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1 资料与方法
1.1 一般资料 随机选择1998年到我中心妇产科门诊就诊的阴道炎、宫颈炎、盆腔炎和不孕症患者共235名，年龄在16～49岁，平均32.5岁。
1.2 标本采集 用阴道窥器扩张后，先用棉拭子去除宫颈口过多的粘液，再用另一拭子插入宫颈内1～2 cm处旋转10～30 s，取含柱状上皮细胞标本。取材后可立即检测或置无菌试管内，在2℃～8℃冰箱可保存1周。
1.3 方法 用Unipath公司提供的试剂盒，先将试剂、标本置室温30 min复温后，置80℃水浴加热10～12 min提取LPS(lipopolysaccaharide)抗原，转动拭子并沿管壁挤压，弃去拭子，提取液置室温冷却。将测试卡置台面上，逐滴加入5滴提取液于检测窗，静置15 min后观察结果。如果LPS抗原存在，则在质控窗内出现一条蓝带，同时也在结果窗出现一条深浅不同的蓝带，强阳性者可在15 min内出现。若LPS抗原不存在，则仅在质控窗内出现一条蓝带，如30 min内无蓝色显示，应另取测试卡进行测试。
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2 结果
235中阳性患者60例，总阳性率25.5%，见表1。在宫颈炎患者中，宫颈糜烂程度与CC法颜色密度关系见表2。
表1 沙眼衣原体CC法检测结果 类别
标本例数
阳性例数
阳性率(%)
阴道炎
74
14
18.9
宫颈炎
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20
24.3
盆腔炎
39
12
30.7
不孕症
40
14
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合计
235
60
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25.5
表2 宫颈炎糜烂程度与CC法结果窗颜色改变程度的关系 (例) CC法颜色密度
宫 颈 糜 烂 程 度
Ⅰ度
Ⅱ度
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3 讨论
3.1 CT感染与不孕的关系 本组沙眼衣原体女性生殖道感染引起的不孕症的比例最高(占35.0%)。CT易侵袭子宫颈鳞柱上皮交界处的柱状上皮引起宫颈管和宫颈粘液栓的屏障作用消失，上行到子宫体引起子宫内膜炎、输卵管炎导致不孕、流产。女性生殖道的CT感染，70%无明显临床症状[3]，有时可有阴道分泌物轻微增加，轻微下腹疼痛及排尿困难。无明显症状的患者往往延误诊断和治疗，引起继发性输卵管粘膜损伤，导致不孕和异位妊娠。
, http://www.100md.com
3.2 CT感染与宫颈糜烂的关系 本组82例宫颈炎患者CC法检测为阳性的20例患者中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度糜烂分别为4例(20%)、6例(30%)及10例(50%)。提示随宫颈糜烂程度增加，CT感染呈升高趋势。与国内其它报道相似[4]。将其宫颈糜烂的严重程度与CC法结果窗颜色改变深浅程度进行分析发现，随着宫颈糜烂程度的增加，CC法结果窗内蓝色条带颜色密度有增加的趋势。在Nicolas等[5]的报告中发现，CC法颜色密度的深浅与沙眼衣原体包涵体形成的数量呈正比，颜色越深，包涵体数量就越多，说明CT感染也越严重。本文由于宫颈炎的阳性标本数有限，宫颈糜烂程度是否与CT感染的包涵体数呈正比尚待进一步研究。
3.3 对CC法的应用评估 细胞培养法自70年代以来，一直作为检测CT的金标准。然而，由于其受标本采集和运送条件、所培养细胞的敏感性和标本中抑制因子等因素的影响，敏感性为80%～90%。而目前国内外使用的PCR技术，由于其操作复杂，需特殊设备，花费时间长，而且假阳性较高，难以给临床医生提供准确诊断。但近来新一代的酶免疫法——立明法(CC)在检测女性生殖道沙眼衣原体感染，国外文献报其敏感性和特异性分别为95.0%和98.0%[5]。笔者认为CC法有以下优点：①标本用干棉拭子获取后在室温下运送即可，可避免液体运送、冰冻保存的麻烦，在临床实践中易于操作，特别适合门诊患者；②快速、简便，仅须一种试剂，且标本与试剂反应仅需1 min，整个操作过程仅需30 min;③所需仪器简单，仅需一台加热80℃的恒温设备，可作单一标本和成批标本检测；④操作方法容易掌握。因此，我们认为立明法快速试剂在女性生殖道的防治及不孕症的诊治等方面具有广阔的应用前景。
, 百拇医药
4 参考文献
1 李永哲，倪安平，李汪波，等.应用荧光免疫法检测泌尿生殖道沙眼衣原体.中华医学检验杂志，1995，1：29
2 赵季文，徐翠瑜，汪 宁.我国三个地区性病患者和健康人尿支原体、人型支原体和沙眼衣原体感染的流行病学研究.中华流行病学杂志，1992，4：216
3 Aksoy AM. Detection of chlamydial trachomatis antigen in cases of cervicitis and patients with vaginal discharge. Microbiol Bull，1993,27(4):323
4 梁永霓，孙江川，王宁遂，等.应用PCR对女性生殖道沙眼衣原体感染的快速诊断.重庆医科大学学报，1996，21(1)：26
5 Nicolas JS, Lisa H, Fred H, et al. Evaluation of the rapid clearview chlamydia test for direct detection of chlamydia from cervical specimens. J Clin Microbiol， 1991,29(7):1551, http://www.100md.com