流式细胞术在急性淋巴细胞白血病免疫分型中的应用
作者：李建勇 阮长耿 华 东 夏学鸣 王爱青 陈 黎 耿美菊 何海龙 刘笑梅 柴忆欢
单位：李建勇 阮长耿 华 东 夏学鸣 苏州医学院附属第一医院 邮政编码：215006；王爱青 陈 黎 耿美菊 苏州医学院核医学生物技术重点实验室；何海龙 刘笑梅 柴忆欢 苏州医学院附属儿童医院
关键词：急性淋巴细胞白血病 免疫表型 流式细胞术
江苏医药991012 摘要 采用流式细胞术对130例初治急性淋巴细胞白血病(ALL)免疫分型。T、B、T/B及NuLL-ALL分别占31.5%、55.4%、8.5%及4.6%。分别有20.8%及34.6%的患者表达髓系抗原(My)及CD34。T-ALL在儿童(41.3%)高于成人(22.4%)(P<0.05)，而B-ALL在成人(64.2%)高于儿童(46.0%)(P<0.05)。儿童B-ALL中CD10、T-ALL中CD3表达均显著高于成人(P<0.05)。My+ALL中CD34表达(70.4%)显著高于My-者(25.2%)(P<0.001)。
, 百拇医药
免疫分型对急性淋巴细胞白血病(ALL)具有重要的诊断及预后价值，流式细胞术(FCM)大大提高了ALL的免疫分型水平。我们采用FCM对130例初治ALL进行免疫分型，现报告如下。
材料和方法
一、病例：1994年12月～1997年5月苏州医学院附属第一医院及儿童医院收治的130例初治ALL。儿童63例，男39例，女24例，年龄2～14岁。成人67例，男39例，女28例，年龄15～76岁。根据FAB标准诊断分型。
二、免疫分型：肝素抗凝骨髓，常规分离单个核细胞，原始+幼稚细胞>70%。活细胞间接免疫荧光法标记，FCM(Epics XL型，Coulter)检测分析。所用单抗包括T淋系的CD2、CD3、CD7；B淋系的CD10、CD19、CD22；髓系的CD13、CD14、CD33、CD42b、CD61及干/祖细胞标志CD34。单抗购自法国Immunotech公司。荧光阳性细胞百分数≥20%(CD34≥10%)为阳性标准。
, 百拇医药
三、统计学处理：采用卡方检验。
结 果
一、ALL的免疫亚型(表1)：130例ALL可分成四种免疫亚型：T、B、T/B及Null。B-ALL比例最高，其次为T-ALL。T-ALL在儿童中的比例高于成人(P<0.05)，而B-ALL在成人中的比例显著高于儿童(P<0.05)。T/B混合型、Null型在两者间无显著差异(P>0.05)。
二、ALL免疫亚型与性别的关系(表2)：儿童T-ALL男女比例相同，成人中男性是女性的两倍；成人B-ALL男女比例接近，儿童则男性多于女性(2.6∶1)；T/B混合型及My+ALL无论在儿童还是在成人均以男性居多；Null型在儿童及成人中男女比例均相同；CD34在儿童中男性表达较高，成人中则男女比例接近。
三、髓系抗原及CD34在ALL中的表达(表3)：23.9%的成人表达髓系抗原，稍高于儿童的17.5%，但两者无显著性差异(P>0.05)；My+ALL在T/B混合型中比例最高，B及T-ALL中分别为18.7%及19.5%。成人中CD34阳性率高于儿童，但无统计学意义(P>0.05)；T/B混合型CD34表达最高，其次为B及T-ALL；CD34在儿童T-ALL中的表达低于B-ALL及成人ALL，但可能由于病例较少，相比无显著性差异(P>0.05)。My+ALL的CD34阳性率为70.4%，显著高于My-者的25.2%(P<0.001)；儿童及成人My+患者的CD34阳性率分别为54.5%及81.3%，明显高于相应阴性者的23.1%及27.5%，P分别<0.05及0.001。
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表1 儿童与成人ALL免疫亚型比较(%)
儿童
成人
合计
T
26(41.3)
15(22.4)
41(31.5)
B
29(46.0)
43(64.2)
72(55.4)
, 百拇医药
T/B
6(9.5)
5(7.5)
11(8.5)
Null
2(3.2)
4(6.0)
6(4.6)
合计
63
67
130
表2 ALL免疫亚型与性别的关系(例)
, 百拇医药
儿 童
成 人
合 计
男
女
男
女
男
女
T
13
13
10
5
, http://www.100md.com
23
18
B
21
8
22
21
43
29
T/B
4
2
5
0
, http://www.100md.com
9
2
Null
1
1
2
2
3
3
My+
8
3
11
5
, http://www.100md.com
19
8
CD34+
12
6
15
12
27
18
表3 髓系抗原及CD34在ALL免疫亚型中的表达
儿童(%)
成人(%)
合计(%)
, http://www.100md.com
My+
CD34
My+
CD34
My+
CD34
T
4/26
(15)
4/26
(15)
4/15
, 百拇医药
(27)
6/15
(40)
8/41
(20)
10/41
(24)
B
5/29
(17)
10/29
(35)
9/43
, 百拇医药
(21)
17/43
(40)
14/72
(19)
27/72
(38)
T/B
2/6
(33)
4/6
(67)
3/5
, 百拇医药
(60)
3/5
(60)
5/11
(46)
7/11
(64)
Null
0/2
(0)
0/2
(0)
0/4
, 百拇医药
(0)
1/4
(25)
0/6
(0)
1/6
(17)
合计
(%)
11/63
(17)
18/63
(29)
, 百拇医药
16/67
(24)
27/67
(40)
27/130
(21)
45/130
(35)
四、T及B-ALL中主要免疫标志的表达特点：B-ALL中以CD19表达最高(95.8%，69/72)，其次为CD10(81.9%，59/72)及CD22(43.1%，31/72)，在儿童CD10的阳性率为93.1%(27/29)明显高于成人的74.4%(32/43)(P<0.05)。18.1%的B-ALL表达CD2。T-ALL中以CD7表达最高(90.2%，37/41)，其次CD2(85.4%，35/41)及CD3(78.0%，32/41)，儿童中CD3阳性率为88.5%(23/26)，明显高于成人的60.0%(9/15)(P<0.05)。19.5%的T-ALL表达CD10。讨 论
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67例初治成人ALL中，B-ALL占64.2%，T-ALL占22.4%，与文献报道一致[1]。陈璋等报道成人ALL中Null-ALL的比例高达29%[2]。本组病例中仅4.6%，与Jakubas等的结果接近[3]。T-ALL在儿童ALL中的比例高于成人[1]，本组得到类似结果，但在63例儿童中占41.3%，高于一般文献报道[2，4]。王玉龙等报道儿童Null型占5.2%[2，4]，与本组的3.2%接近，而明显低于陈璋等的28%[2]。20.8%的患者表达髓系抗原，与Preti等及Thomas等的结果一致[5，6]，My+者的CD34阳性率显著高于My?者。T/B混合型CD34及髓系抗原均高表达。上述结果提示My+及T/B混合型ALL可能系较早期造血细胞的恶性转化。Thomas等发现CD34表达与B-ALL相关[6]，本研究在成人患者中未发现相同规律，但儿童B-ALL中CD34表达较高。
, 百拇医药
文献报道ALL亚型与性别具有一定相关性。T-ALL特别是儿童T-ALL中男女比例达8～9∶1[2，4]，本研究结果则显示儿童T-ALL中两性别比例相同，但成人T-ALL中男多于女。我们的结果还显示T/B混合型、My+患者中男多于女。
与大多文献结果一致，B-ALL中以CD19阳性率最高，达95.8%，高于CD10的81.9%。近20%T-ALL表达CD10，国外文献报道为30%～40%，T-ALL中未见CD19表达，表明CD19在B-ALL中的诊断价值高于CD10，CD19是B-ALL的敏感性、特异性高的一个标志，也进一步证明欧洲急性白血病免疫分型小组将CD10作为T-ALL的一个标志是有根据的[7]。CD22在B-ALL中表达较低，为43.1%，在T-ALL未见表达，表明CD22是B-ALL诊断的高特异、低敏感指标。
CD7在T-ALL中表达最高，为90.2%，B-ALL中未见表达，故CD7在T、B-ALL的鉴别中具有重要作用。CD2在T-ALL中的表达率为85.4%，但有18.1%的B-ALL表达CD2，表明CD2在T-ALL的诊断中特异性不高。CD3在T-ALL中表达率为78.0%，B-ALL中未见表达，表明CD3是T-ALL诊断的特异性高、敏感性也较高的标志。CD3在儿童T-ALL中的表达率高于成人，表明其在儿童T-ALL中的诊断价值高于成人。
, 百拇医药
参考文献
[1] Copelan EA，et al.Blood 1995；85：1151.
[2] 陈璋，等.中华血液学杂志 1991；12(7)：358.
[3] Jakubas PB，et al.Acta Haematol Pol 1996；27：33.
[4] 王玉龙，等.中华血液学杂志 1996；17(2)：70.
[5] Preti HA，et al.Cancer 1995；76：1564.
[6] Thomas X，et al.Leukemia 1995；9：249.
[7] Bene MC，et al.Leukemia 1995；9：1783.
(1997年12月18日收稿 1999年2月10日修回), 百拇医药
单位：李建勇 阮长耿 华 东 夏学鸣 苏州医学院附属第一医院 邮政编码：215006；王爱青 陈 黎 耿美菊 苏州医学院核医学生物技术重点实验室；何海龙 刘笑梅 柴忆欢 苏州医学院附属儿童医院
关键词：急性淋巴细胞白血病 免疫表型 流式细胞术
江苏医药991012 摘要 采用流式细胞术对130例初治急性淋巴细胞白血病(ALL)免疫分型。T、B、T/B及NuLL-ALL分别占31.5%、55.4%、8.5%及4.6%。分别有20.8%及34.6%的患者表达髓系抗原(My)及CD34。T-ALL在儿童(41.3%)高于成人(22.4%)(P<0.05)，而B-ALL在成人(64.2%)高于儿童(46.0%)(P<0.05)。儿童B-ALL中CD10、T-ALL中CD3表达均显著高于成人(P<0.05)。My+ALL中CD34表达(70.4%)显著高于My-者(25.2%)(P<0.001)。
, 百拇医药
免疫分型对急性淋巴细胞白血病(ALL)具有重要的诊断及预后价值，流式细胞术(FCM)大大提高了ALL的免疫分型水平。我们采用FCM对130例初治ALL进行免疫分型，现报告如下。
材料和方法
一、病例：1994年12月～1997年5月苏州医学院附属第一医院及儿童医院收治的130例初治ALL。儿童63例，男39例，女24例，年龄2～14岁。成人67例，男39例，女28例，年龄15～76岁。根据FAB标准诊断分型。
二、免疫分型：肝素抗凝骨髓，常规分离单个核细胞，原始+幼稚细胞>70%。活细胞间接免疫荧光法标记，FCM(Epics XL型，Coulter)检测分析。所用单抗包括T淋系的CD2、CD3、CD7；B淋系的CD10、CD19、CD22；髓系的CD13、CD14、CD33、CD42b、CD61及干/祖细胞标志CD34。单抗购自法国Immunotech公司。荧光阳性细胞百分数≥20%(CD34≥10%)为阳性标准。
, 百拇医药
三、统计学处理：采用卡方检验。
结 果
一、ALL的免疫亚型(表1)：130例ALL可分成四种免疫亚型：T、B、T/B及Null。B-ALL比例最高，其次为T-ALL。T-ALL在儿童中的比例高于成人(P<0.05)，而B-ALL在成人中的比例显著高于儿童(P<0.05)。T/B混合型、Null型在两者间无显著差异(P>0.05)。
二、ALL免疫亚型与性别的关系(表2)：儿童T-ALL男女比例相同，成人中男性是女性的两倍；成人B-ALL男女比例接近，儿童则男性多于女性(2.6∶1)；T/B混合型及My+ALL无论在儿童还是在成人均以男性居多；Null型在儿童及成人中男女比例均相同；CD34在儿童中男性表达较高，成人中则男女比例接近。
三、髓系抗原及CD34在ALL中的表达(表3)：23.9%的成人表达髓系抗原，稍高于儿童的17.5%，但两者无显著性差异(P>0.05)；My+ALL在T/B混合型中比例最高，B及T-ALL中分别为18.7%及19.5%。成人中CD34阳性率高于儿童，但无统计学意义(P>0.05)；T/B混合型CD34表达最高，其次为B及T-ALL；CD34在儿童T-ALL中的表达低于B-ALL及成人ALL，但可能由于病例较少，相比无显著性差异(P>0.05)。My+ALL的CD34阳性率为70.4%，显著高于My-者的25.2%(P<0.001)；儿童及成人My+患者的CD34阳性率分别为54.5%及81.3%，明显高于相应阴性者的23.1%及27.5%，P分别<0.05及0.001。
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表1 儿童与成人ALL免疫亚型比较(%)
儿童
成人
合计
T
26(41.3)
15(22.4)
41(31.5)
B
29(46.0)
43(64.2)
72(55.4)
, 百拇医药
T/B
6(9.5)
5(7.5)
11(8.5)
Null
2(3.2)
4(6.0)
6(4.6)
合计
63
67
130
表2 ALL免疫亚型与性别的关系(例)
, 百拇医药
儿 童
成 人
合 计
男
女
男
女
男
女
T
13
13
10
5
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23
18
B
21
8
22
21
43
29
T/B
4
2
5
0
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9
2
Null
1
1
2
2
3
3
My+
8
3
11
5
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19
8
CD34+
12
6
15
12
27
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表3 髓系抗原及CD34在ALL免疫亚型中的表达
儿童(%)
成人(%)
合计(%)
, http://www.100md.com
My+
CD34
My+
CD34
My+
CD34
T
4/26
(15)
4/26
(15)
4/15
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6/15
(40)
8/41
(20)
10/41
(24)
B
5/29
(17)
10/29
(35)
9/43
, 百拇医药
(21)
17/43
(40)
14/72
(19)
27/72
(38)
T/B
2/6
(33)
4/6
(67)
3/5
, 百拇医药
(60)
3/5
(60)
5/11
(46)
7/11
(64)
Null
0/2
(0)
0/2
(0)
0/4
, 百拇医药
(0)
1/4
(25)
0/6
(0)
1/6
(17)
合计
(%)
11/63
(17)
18/63
(29)
, 百拇医药
16/67
(24)
27/67
(40)
27/130
(21)
45/130
(35)
四、T及B-ALL中主要免疫标志的表达特点：B-ALL中以CD19表达最高(95.8%，69/72)，其次为CD10(81.9%，59/72)及CD22(43.1%，31/72)，在儿童CD10的阳性率为93.1%(27/29)明显高于成人的74.4%(32/43)(P<0.05)。18.1%的B-ALL表达CD2。T-ALL中以CD7表达最高(90.2%，37/41)，其次CD2(85.4%，35/41)及CD3(78.0%，32/41)，儿童中CD3阳性率为88.5%(23/26)，明显高于成人的60.0%(9/15)(P<0.05)。19.5%的T-ALL表达CD10。讨 论
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67例初治成人ALL中，B-ALL占64.2%，T-ALL占22.4%，与文献报道一致[1]。陈璋等报道成人ALL中Null-ALL的比例高达29%[2]。本组病例中仅4.6%，与Jakubas等的结果接近[3]。T-ALL在儿童ALL中的比例高于成人[1]，本组得到类似结果，但在63例儿童中占41.3%，高于一般文献报道[2，4]。王玉龙等报道儿童Null型占5.2%[2，4]，与本组的3.2%接近，而明显低于陈璋等的28%[2]。20.8%的患者表达髓系抗原，与Preti等及Thomas等的结果一致[5，6]，My+者的CD34阳性率显著高于My?者。T/B混合型CD34及髓系抗原均高表达。上述结果提示My+及T/B混合型ALL可能系较早期造血细胞的恶性转化。Thomas等发现CD34表达与B-ALL相关[6]，本研究在成人患者中未发现相同规律，但儿童B-ALL中CD34表达较高。
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文献报道ALL亚型与性别具有一定相关性。T-ALL特别是儿童T-ALL中男女比例达8～9∶1[2，4]，本研究结果则显示儿童T-ALL中两性别比例相同，但成人T-ALL中男多于女。我们的结果还显示T/B混合型、My+患者中男多于女。
与大多文献结果一致，B-ALL中以CD19阳性率最高，达95.8%，高于CD10的81.9%。近20%T-ALL表达CD10，国外文献报道为30%～40%，T-ALL中未见CD19表达，表明CD19在B-ALL中的诊断价值高于CD10，CD19是B-ALL的敏感性、特异性高的一个标志，也进一步证明欧洲急性白血病免疫分型小组将CD10作为T-ALL的一个标志是有根据的[7]。CD22在B-ALL中表达较低，为43.1%，在T-ALL未见表达，表明CD22是B-ALL诊断的高特异、低敏感指标。
CD7在T-ALL中表达最高，为90.2%，B-ALL中未见表达，故CD7在T、B-ALL的鉴别中具有重要作用。CD2在T-ALL中的表达率为85.4%，但有18.1%的B-ALL表达CD2，表明CD2在T-ALL的诊断中特异性不高。CD3在T-ALL中表达率为78.0%，B-ALL中未见表达，表明CD3是T-ALL诊断的特异性高、敏感性也较高的标志。CD3在儿童T-ALL中的表达率高于成人，表明其在儿童T-ALL中的诊断价值高于成人。
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参考文献
[1] Copelan EA，et al.Blood 1995；85：1151.
[2] 陈璋，等.中华血液学杂志 1991；12(7)：358.
[3] Jakubas PB，et al.Acta Haematol Pol 1996；27：33.
[4] 王玉龙，等.中华血液学杂志 1996；17(2)：70.
[5] Preti HA，et al.Cancer 1995；76：1564.
[6] Thomas X，et al.Leukemia 1995；9：249.
[7] Bene MC，et al.Leukemia 1995；9：1783.
(1997年12月18日收稿 1999年2月10日修回), 百拇医药