二倍体的不同品系与四倍体板蓝根中多糖的含量测定
作者：郑水庆 陈万生 曾 明 乔传卓
单位：第二军医大学药学院生药学教研室，上海，200433
关键词：板蓝根；多糖；化学；药物
第二军医大学学报991015 摘要 目的：测定二倍体的不同品系与四倍体板蓝根中多糖的含量，为综合利用板蓝根资源提供科学依据。方法：采用苯酚-浓硫酸反应后分光光度法测定多糖含量。结果和结论：各板蓝根样品中均有一定量多糖，但二倍体的不同品系板蓝根之间差异较大，变化幅度为9.38%～22.09%。
中图分类号 R 284.1 文献标识码：A
Determination of polysaccharide contents in different intervarietal of diploidy and tetraploidy Banlangen
, 百拇医药
Zheng Shuiqing, Chen Wansheng, Zeng Ming, Qiao Chuanzhuo
(Department of Pharmacognosy, College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
ABSTRACT Objective: To determine polysaccharide contents in different intervarietal of diploidy and tetraploidy Banlangen, and to provide scientific evidences for developing and utilizing resources of Banlangen. Methods: Polysaccharides in Banlangen were determined by UV spectrophotometry at 490 nm, with phenol-concentrated sulfuric acid as the color developer. Results and conclusion: The contents of polysaccharide in 13 intervarietal of diploidy Banlangen differed greatly and were in the range of 9.38%～22.09%.
, 百拇医药
KEY WORDS Banlangen; polysaccharide; chemistry, pharmaceutical
板蓝根为十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica Fort.)的干燥根，是一味常用中药，具清热解毒、凉血利咽之功效，用于防治病毒性感染，对流行性乙型脑炎、流行性感冒、急慢性肝炎、流行性腮腺炎等均有效。化学成分研究表明其含有靛蓝、靛玉红、有机酸、多糖等成分。文献报道板蓝根中多糖组分具有免疫调节作用，对特异性免疫和非特异性免疫，体液免疫或细胞免疫均有一定的促进作用[1,2]，此外尚有降血脂作用[3]。为此，我们采用苯酚-浓硫酸反应后分光光度法，对不同品系及四倍体板蓝根样品进行多糖的含量测定。
1 材料和方法
1.1 样品收集和异地栽培试验 将从全国各板蓝根主产地收集到的不同品系板蓝根(2n=14)种子13份，和人工培育的四倍体(2n=28)板蓝根种子[4]于1997年6月播种于上海市崇明县同一田块上，栽培环境及田间管理方法均相同。经鉴定原植物均为菘蓝(Isatis indigotica)。至同年11月收获异地栽培后的板蓝根及四倍体板蓝根药材样品共16份，以供测定实验用。品系来源及采收时间见表1。
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表1 不同品系及四倍体板蓝根中多糖的含量
Tab 1 The contents of polysaccharides in different
intervarietal of diploidy and tetraploidy Banlangen (n=5,
) No.
Origin
Collecting time
Contens(%)
1
Anhui, Fuyan
, 百拇医药
1997-11-07
9.82±0.56
2
Anhui, Sixian
1997-11-07
19.00±0.93
3
Anhui, Bozhou
1997-11-07
21.91±1.05
4
Henan, Yuzhou
, 百拇医药
1997-11-07
18.77±0.78
5
Neimenggu, Chifeng
1997-11-07
15.83±1.12
6
Shanxi,Taiguo
1997-11-07
9.38±0.98
7
Jiangsu, Taixin
, http://www.100md.com
1997-11-07
17.15±0.84
8
Jiangsu, Sheyang
1997-11-07
10.20±0.61
9
Liaoning, Shenyang
1997-11-07
22.04±1.34
10
Hebei, Anguo
, http://www.100md.com
1997-11-07
15.39±0.87
11
Hebei, Xingtai
1997-11-07
20.03±1.22
12
Shanxi, Xianyang
1997-11-07
15.69±1.01
13
Shanghai
, http://www.100md.com
1997-11-07
13.25±0.90
14
Shanghai
1997-11-17
22.09±1.39
15
Tetraploid
1997-11-07
17.79±0.87
16
Tetraploid
, http://www.100md.com
1997-11-17
15.98±0.73
1.2 仪器和试剂 UV-265FW型紫外分光光度计(日本岛津)。葡萄糖为标准品，其余试剂均为分析纯。5%苯酚溶液的配制：取苯酚100 g, 加铝片0.1 g和碳酸氢钠0.05 g, 蒸馏，收集182℃馏分，称取10 g, 加水溶解并稀释至200.0 ml，摇匀，置棕色瓶内，放冰箱中备用。对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品25 mg, 加水溶解并稀释至100 ml, 摇匀。
1.3 多糖的提取与精制 取过40目筛的上海品系(二倍体)板蓝根粉末100 g 置圆底烧瓶中，加石油醚(沸程60～90℃)500 ml，回流1 h以脱脂。过滤，滤渣挥干溶媒后用80% 乙醇500 ml回流1 h，过滤。滤渣置圆底烧瓶中，加蒸馏水1 500 ml，回流提取1 h, 趁热过滤，减压浓缩至150 ml，加0.1%活性炭脱色，过滤，加入95%乙醇使溶液含醇80%，静置过夜，过滤，沉淀物以无水乙醇、丙酮依次洗涤8次，每次5 ml，得到总多糖组分，以60℃烘干备用。
, 百拇医药
1.4 板蓝根多糖的含量测定
1.4.1 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.0, 2.0, 4.0, 8.0, 10.0, 12.0, 14.0 ml, 分别置50 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，各精取2.0 ml, 置具塞试管中，加入1.0 ml 5%苯酚溶液，再垂直快速加入浓硫酸5.0 ml，摇匀，放置5 min，沸水浴加热15 min，取出，流水速冷至室温，于490 nm波长处测光密度(D)，以D为横坐标，葡萄糖对照品量为纵坐标(c)，得回归方程：c=1.590×10-2D-1.417×10-3，r=0.999 3。
1.4.2 换算因素测定 精密称取总多糖100.0 mg，置100 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液10.0 ml，置100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，此为供试品溶液。精密量取供试品溶液2.0 ml，按标准曲线制备项下自“加入1.0 ml 5%苯酚溶液……”起，测定D，从回归方程中求出供试液中含量，按下式计算换算因素：J＝W/c，W为实际总多糖量，c为测得多糖液中总多糖含量。测得J=1.522 (n=4)。
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1.4.3 样品液制备和含量测定 精密称取样品粉末(过40目筛)0.3 g, 80%乙醇100 ml 回流提取1 h，趁热过滤，药渣用8 ml 80%热乙醇洗涤3次，药渣置圆底烧瓶中，加蒸馏水85 ml，回流1 h，趁热过滤，用5 ml热水洗涤烧瓶和药渣，待冷后移于250 ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，混匀置冰箱中备用。精密吸取各供试液0.5 ml，按标准曲线制备项下自“加入1.0 ml 5%苯酚溶液……”起，测定D。按回归方程求出供试液中葡萄糖含量，按下式计算样品中多糖含量。
式中c为供试液葡萄糖浓度，F为供试品溶液的稀释因素，f为换算因素，M为供试品质量。
1.4.4 加样回收率测定 精密称取板蓝根粉末0.1 g，加入板蓝根总多糖30.0 mg，按样品液制备和含量测定方法操作，计算加样回收率，结果为100.36% (n=5, RSD=1.13%)。
, 百拇医药
2 结果和讨论
不同品系及四倍体板蓝根中多糖含量见表1。
本实验测定方法的原理是先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、甙类等干扰性成分，然后用水提取其中所含的多糖类成分。多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法于适当波长处测定其多糖含量。本法简便，显色稳定，灵敏度高，重现性好。
异地栽培实验是考察影响药材品质因素的重要手段。我们将不同来源的板蓝根种植于相同的环境(包括土壤、气候等条件)中，以初步推断环境因素与遗传因素对板蓝根药材质量的影响程度。含量测定结果表明，所测板蓝根样品中均有一定量多糖，但不同品系板蓝根之间差异较大，变化幅度为9.38%～22.09%。另外，采收期对多糖的积累有一定的影响，如上海品系的板蓝根晚采10 d的样品多糖含量增加8%左右，而四倍体板蓝根则略有下降。
, 百拇医药
在板蓝根制剂(如板蓝根冲剂、板蓝根注射液)传统生产工艺中，多采用乙醇沉淀除去多糖，极大地浪费了这一资源，因此迫切需要改进制剂工艺，以充分利用板蓝根多糖资源。
文章编号：0258-879X(1999)10-0755-03
参考文献
1 陆平成,许益民,王永珍,等. 板蓝根多糖对小鼠的免疫调节作用[J]. 中药药理与临床， 1991,7(2):22
2 许益民,陆平成,王永珍,等. 板蓝根多糖促进免疫功能的实验研究[J]. 中西医结合杂志， 1991,11(6):357
3 冯群先,毕一俐,仇建明,等. 板蓝根多糖降脂作用的初步观察[J]. 中国医药学报, 1993,8(增刊):75
4 郭建平,乔传卓,张汉明,等. 用导数光谱考查两种倍性水平北板蓝根及鉴别南北板蓝根[J]. 第二军医大学学报, 1995,16(4):368
(1999-04-29收稿，1999-08-13修回), 百拇医药
单位：第二军医大学药学院生药学教研室，上海，200433
关键词：板蓝根；多糖；化学；药物
第二军医大学学报991015 摘要 目的：测定二倍体的不同品系与四倍体板蓝根中多糖的含量，为综合利用板蓝根资源提供科学依据。方法：采用苯酚-浓硫酸反应后分光光度法测定多糖含量。结果和结论：各板蓝根样品中均有一定量多糖，但二倍体的不同品系板蓝根之间差异较大，变化幅度为9.38%～22.09%。
中图分类号 R 284.1 文献标识码：A
Determination of polysaccharide contents in different intervarietal of diploidy and tetraploidy Banlangen
, 百拇医药
Zheng Shuiqing, Chen Wansheng, Zeng Ming, Qiao Chuanzhuo
(Department of Pharmacognosy, College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
ABSTRACT Objective: To determine polysaccharide contents in different intervarietal of diploidy and tetraploidy Banlangen, and to provide scientific evidences for developing and utilizing resources of Banlangen. Methods: Polysaccharides in Banlangen were determined by UV spectrophotometry at 490 nm, with phenol-concentrated sulfuric acid as the color developer. Results and conclusion: The contents of polysaccharide in 13 intervarietal of diploidy Banlangen differed greatly and were in the range of 9.38%～22.09%.
, 百拇医药
KEY WORDS Banlangen; polysaccharide; chemistry, pharmaceutical
板蓝根为十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica Fort.)的干燥根，是一味常用中药，具清热解毒、凉血利咽之功效，用于防治病毒性感染，对流行性乙型脑炎、流行性感冒、急慢性肝炎、流行性腮腺炎等均有效。化学成分研究表明其含有靛蓝、靛玉红、有机酸、多糖等成分。文献报道板蓝根中多糖组分具有免疫调节作用，对特异性免疫和非特异性免疫，体液免疫或细胞免疫均有一定的促进作用[1,2]，此外尚有降血脂作用[3]。为此，我们采用苯酚-浓硫酸反应后分光光度法，对不同品系及四倍体板蓝根样品进行多糖的含量测定。
1 材料和方法
1.1 样品收集和异地栽培试验 将从全国各板蓝根主产地收集到的不同品系板蓝根(2n=14)种子13份，和人工培育的四倍体(2n=28)板蓝根种子[4]于1997年6月播种于上海市崇明县同一田块上，栽培环境及田间管理方法均相同。经鉴定原植物均为菘蓝(Isatis indigotica)。至同年11月收获异地栽培后的板蓝根及四倍体板蓝根药材样品共16份，以供测定实验用。品系来源及采收时间见表1。
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表1 不同品系及四倍体板蓝根中多糖的含量
Tab 1 The contents of polysaccharides in different
intervarietal of diploidy and tetraploidy Banlangen (n=5,
) No.Origin
Collecting time
Contens(%)
1
Anhui, Fuyan
, 百拇医药
1997-11-07
9.82±0.56
2
Anhui, Sixian
1997-11-07
19.00±0.93
3
Anhui, Bozhou
1997-11-07
21.91±1.05
4
Henan, Yuzhou
, 百拇医药
1997-11-07
18.77±0.78
5
Neimenggu, Chifeng
1997-11-07
15.83±1.12
6
Shanxi,Taiguo
1997-11-07
9.38±0.98
7
Jiangsu, Taixin
, http://www.100md.com
1997-11-07
17.15±0.84
8
Jiangsu, Sheyang
1997-11-07
10.20±0.61
9
Liaoning, Shenyang
1997-11-07
22.04±1.34
10
Hebei, Anguo
, http://www.100md.com
1997-11-07
15.39±0.87
11
Hebei, Xingtai
1997-11-07
20.03±1.22
12
Shanxi, Xianyang
1997-11-07
15.69±1.01
13
Shanghai
, http://www.100md.com
1997-11-07
13.25±0.90
14
Shanghai
1997-11-17
22.09±1.39
15
Tetraploid
1997-11-07
17.79±0.87
16
Tetraploid
, http://www.100md.com
1997-11-17
15.98±0.73
1.2 仪器和试剂 UV-265FW型紫外分光光度计(日本岛津)。葡萄糖为标准品，其余试剂均为分析纯。5%苯酚溶液的配制：取苯酚100 g, 加铝片0.1 g和碳酸氢钠0.05 g, 蒸馏，收集182℃馏分，称取10 g, 加水溶解并稀释至200.0 ml，摇匀，置棕色瓶内，放冰箱中备用。对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品25 mg, 加水溶解并稀释至100 ml, 摇匀。
1.3 多糖的提取与精制 取过40目筛的上海品系(二倍体)板蓝根粉末100 g 置圆底烧瓶中，加石油醚(沸程60～90℃)500 ml，回流1 h以脱脂。过滤，滤渣挥干溶媒后用80% 乙醇500 ml回流1 h，过滤。滤渣置圆底烧瓶中，加蒸馏水1 500 ml，回流提取1 h, 趁热过滤，减压浓缩至150 ml，加0.1%活性炭脱色，过滤，加入95%乙醇使溶液含醇80%，静置过夜，过滤，沉淀物以无水乙醇、丙酮依次洗涤8次，每次5 ml，得到总多糖组分，以60℃烘干备用。
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1.4 板蓝根多糖的含量测定
1.4.1 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.0, 2.0, 4.0, 8.0, 10.0, 12.0, 14.0 ml, 分别置50 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，各精取2.0 ml, 置具塞试管中，加入1.0 ml 5%苯酚溶液，再垂直快速加入浓硫酸5.0 ml，摇匀，放置5 min，沸水浴加热15 min，取出，流水速冷至室温，于490 nm波长处测光密度(D)，以D为横坐标，葡萄糖对照品量为纵坐标(c)，得回归方程：c=1.590×10-2D-1.417×10-3，r=0.999 3。
1.4.2 换算因素测定 精密称取总多糖100.0 mg，置100 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液10.0 ml，置100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，此为供试品溶液。精密量取供试品溶液2.0 ml，按标准曲线制备项下自“加入1.0 ml 5%苯酚溶液……”起，测定D，从回归方程中求出供试液中含量，按下式计算换算因素：J＝W/c，W为实际总多糖量，c为测得多糖液中总多糖含量。测得J=1.522 (n=4)。
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1.4.3 样品液制备和含量测定 精密称取样品粉末(过40目筛)0.3 g, 80%乙醇100 ml 回流提取1 h，趁热过滤，药渣用8 ml 80%热乙醇洗涤3次，药渣置圆底烧瓶中，加蒸馏水85 ml，回流1 h，趁热过滤，用5 ml热水洗涤烧瓶和药渣，待冷后移于250 ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，混匀置冰箱中备用。精密吸取各供试液0.5 ml，按标准曲线制备项下自“加入1.0 ml 5%苯酚溶液……”起，测定D。按回归方程求出供试液中葡萄糖含量，按下式计算样品中多糖含量。
式中c为供试液葡萄糖浓度，F为供试品溶液的稀释因素，f为换算因素，M为供试品质量。
1.4.4 加样回收率测定 精密称取板蓝根粉末0.1 g，加入板蓝根总多糖30.0 mg，按样品液制备和含量测定方法操作，计算加样回收率，结果为100.36% (n=5, RSD=1.13%)。
, 百拇医药
2 结果和讨论
不同品系及四倍体板蓝根中多糖含量见表1。
本实验测定方法的原理是先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、甙类等干扰性成分，然后用水提取其中所含的多糖类成分。多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法于适当波长处测定其多糖含量。本法简便，显色稳定，灵敏度高，重现性好。
异地栽培实验是考察影响药材品质因素的重要手段。我们将不同来源的板蓝根种植于相同的环境(包括土壤、气候等条件)中，以初步推断环境因素与遗传因素对板蓝根药材质量的影响程度。含量测定结果表明，所测板蓝根样品中均有一定量多糖，但不同品系板蓝根之间差异较大，变化幅度为9.38%～22.09%。另外，采收期对多糖的积累有一定的影响，如上海品系的板蓝根晚采10 d的样品多糖含量增加8%左右，而四倍体板蓝根则略有下降。
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在板蓝根制剂(如板蓝根冲剂、板蓝根注射液)传统生产工艺中，多采用乙醇沉淀除去多糖，极大地浪费了这一资源，因此迫切需要改进制剂工艺，以充分利用板蓝根多糖资源。
文章编号：0258-879X(1999)10-0755-03
参考文献
1 陆平成,许益民,王永珍,等. 板蓝根多糖对小鼠的免疫调节作用[J]. 中药药理与临床， 1991,7(2):22
2 许益民,陆平成,王永珍,等. 板蓝根多糖促进免疫功能的实验研究[J]. 中西医结合杂志， 1991,11(6):357
3 冯群先,毕一俐,仇建明,等. 板蓝根多糖降脂作用的初步观察[J]. 中国医药学报, 1993,8(增刊):75
4 郭建平,乔传卓,张汉明,等. 用导数光谱考查两种倍性水平北板蓝根及鉴别南北板蓝根[J]. 第二军医大学学报, 1995,16(4):368
(1999-04-29收稿，1999-08-13修回), 百拇医药