一氧化氮对再灌注肌瓣微血管的作用
作者：李军辉 郭恩覃
单位：第二军医大学长海医院整形外科，上海，200433
关键词：再灌注损伤；一氧化氮；微循环
第二军医大学学报991151 在组织游离移植中，血管痉挛是比较常见的现象。目前研究表明，其发生机制可能与血管内皮细胞功能失调,一氧化氮(NO)释放障碍密切相关[1]。本实验观察了再灌注期肌瓣微血管的变化及左旋精氨酸(L-arg)对其的作用，旨在探讨一氧化氮对再灌注肌瓣微血管的影响。
1 材料和方法
1.1 动物模型和实验方法 大鼠提睾肌模型参照Pemberton等[2]的方法制备，实验大鼠分正常未缺血组(A组)、缺血5 h再灌注2 h生理盐水治疗组(B组)、缺血5 h再灌注2 h L-arg治疗组(C组)，每组 21只。模型制备后，于缺血前0 h，缺血1，2，3，4，5 h及再灌注 5 min，30 min，1 h, 2 h分别观察微动脉、微静脉和毛细血管的灌流状况并同步录像。L-arg (30 mg/kg)于再灌注前15 min经对侧股动脉插管注射给药，并以10 mg/(kg.min)维持2 h，另一组输等量的生理盐水。再灌注0.5 h及2 h活检肌瓣，参照改良的Griss法测定NO的含量[3]。
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1.2 观察指标 (1)复流之微动脉直径：肌瓣微动脉根据其自然分支，分为A1、A2、及A3，在最窄处测定其直径。(2)微动脉复流数目：在各时刻点分别计数复流的微动脉数目。(3)毛细血管灌流密度(PCD) ：参照Pemberton的方法[2]，计算一个视野中毛细血管数目来表示(条/视屏)。
1.3 统计学处理 数据以
±s表示，作方差分析。
2 结 果
2.1 微动脉直径 A组在各时刻点微血管A1、A2、A3直径无显著的差异。随着缺血时间延长，微动脉逐渐收缩，缺血5 h微动脉直径仅为缺血前的50%左右。再灌注30 min B组微血管A1、A2出现收缩，有的节断动脉痉挛，致其远端的微血管出现继发性“无复流现象”，持续5～30 min，甚至部分血管至再灌注2 h仍未见复流。C组微动脉在复流30 min,1 h, 2 h微血管收缩幅度均较生理盐水组明显减小(P<0.05)。而微动脉A3的血管收缩幅度3组间无显著差异 (表1)。
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表1 再灌注期微血管的直径 (n=21,±s, d/μm) 时间
A1
A2
A3
A组
B组
C组
A组
B组
C组
A组
B组
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C组
缺血前
112±5
117±5
109±6
69±6
72±5
75±5
39±4
38±3
32±5
再灌注0.1 h
107±3
, 百拇医药
74±4
67±5
63±3
44±5
51±5
37±3
30±4
29±2
0.5 h
107±5
61±4
75±4*
64±4
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39±5
59±6*
36±4
35±4
32±3
1h
108±3
70±4
88±5*
66±4
42±5
63±6*
, http://www.100md.com
37±3
38±3
31±5
2h
109±5
71±5
90±6*
65±5
44±5
62±4*
37±3
37±3
, http://www.100md.com 33±2
*P<0.05 与B组比较
2.2 微动脉复流数目和PCD(条/视屏) A组微动脉灌流始终保持100%；复流后0.1，0.5，1，2 h，C组微动脉复流比率分别为97%±7.5%，95%±8.7%，93%±6.7%，90%±8.2%,较B组的61%±9.6%，53%±10.4%，57%±9.8%，63%±10.6%均明显增多 (P<0.01)，其中微动脉A2、A3的复流率尤其低。复流0.5，1，2 h，B组PCD分别为3.5±1.5，2.9±1.7，3.3±1.4，与C组的5.8±1.2，6.5±1.3，6.2±1.5相比均有显著差异 (P<0.05)。
2.3 NO的含量 再灌注0.5 h和 2 h，C组肌瓣内NO含量分别为 (43.37±16.65)，(53.52±14.72) μmol/L，与B组的(25.34±15.70)，(33.18±16.99) μmol/L相比有显著差异 (P<0.05)，而B组较A组的(70.30±13.85)，(67.28±15.00) μmol/L有非常显著差异 (P<0.01)。
, 百拇医药
3 讨 论
缺血期微血管随着缺血时间延长，微动脉逐渐收缩；再灌注期部分微动脉出现原发性无复流，复流微动脉的直径较缺血前仍明显减小，部分复流微动脉的远端因血管痉挛出现继发性无复流，组织的灌流量进一步下降。L-arg是一种NO生成剂，对内皮细胞有保护作用[1]，我们发现它能使内皮细胞合成NO相对增加，同时亦证实，再灌注期早期输注L-arg能使复流的微动脉比率明显增加，最高达 97%，明显高于对照组；并能扩张微动脉，解除血管痉挛；使微血管流速加快，毛细血管灌流密度显著增加，能够显著增加组织的灌流量。因此L-arg作为一种NO生成剂，对解除组织游离移植后的血管痉挛，增加组织的灌流具有重要意义。
中图分类号 R 641 文献标识码：B
作者简介：李军辉，男，1970年8月生，硕士，住院医师
参考文献
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1 Wei ZW, Anderson G, Fleming JT, et al. Lack of nitric oxide contributed to vasospasm during ischemia/reperfusion injury[J]. Plast Reconstr Surg, 1997, 99(4): 1099
2 Pemberton M, Anderson GL, Barker JH. Characterization of microvascular vasoconstriction following ischemia/reperfusion in skeletal muscle using videomicroscopy[J]. Microsurgery, 1996, 17(1):9
3 许宏岳，李爱红，汪小农,等. 比色法测定血清亚硝酸盐和硝酸盐及初步临床应用[J]. 临床检验杂志, 1996, 14 (1): 28
(1998-10-11收稿，1999-05-11修回), 百拇医药
单位：第二军医大学长海医院整形外科，上海，200433
关键词：再灌注损伤；一氧化氮；微循环
第二军医大学学报991151 在组织游离移植中，血管痉挛是比较常见的现象。目前研究表明，其发生机制可能与血管内皮细胞功能失调,一氧化氮(NO)释放障碍密切相关[1]。本实验观察了再灌注期肌瓣微血管的变化及左旋精氨酸(L-arg)对其的作用，旨在探讨一氧化氮对再灌注肌瓣微血管的影响。
1 材料和方法
1.1 动物模型和实验方法 大鼠提睾肌模型参照Pemberton等[2]的方法制备，实验大鼠分正常未缺血组(A组)、缺血5 h再灌注2 h生理盐水治疗组(B组)、缺血5 h再灌注2 h L-arg治疗组(C组)，每组 21只。模型制备后，于缺血前0 h，缺血1，2，3，4，5 h及再灌注 5 min，30 min，1 h, 2 h分别观察微动脉、微静脉和毛细血管的灌流状况并同步录像。L-arg (30 mg/kg)于再灌注前15 min经对侧股动脉插管注射给药，并以10 mg/(kg.min)维持2 h，另一组输等量的生理盐水。再灌注0.5 h及2 h活检肌瓣，参照改良的Griss法测定NO的含量[3]。
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1.2 观察指标 (1)复流之微动脉直径：肌瓣微动脉根据其自然分支，分为A1、A2、及A3，在最窄处测定其直径。(2)微动脉复流数目：在各时刻点分别计数复流的微动脉数目。(3)毛细血管灌流密度(PCD) ：参照Pemberton的方法[2]，计算一个视野中毛细血管数目来表示(条/视屏)。
1.3 统计学处理 数据以
±s表示，作方差分析。2 结 果
2.1 微动脉直径 A组在各时刻点微血管A1、A2、A3直径无显著的差异。随着缺血时间延长，微动脉逐渐收缩，缺血5 h微动脉直径仅为缺血前的50%左右。再灌注30 min B组微血管A1、A2出现收缩，有的节断动脉痉挛，致其远端的微血管出现继发性“无复流现象”，持续5～30 min，甚至部分血管至再灌注2 h仍未见复流。C组微动脉在复流30 min,1 h, 2 h微血管收缩幅度均较生理盐水组明显减小(P<0.05)。而微动脉A3的血管收缩幅度3组间无显著差异 (表1)。
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表1 再灌注期微血管的直径 (n=21,
±s, d/μm) 时间A1
A2
A3
A组
B组
C组
A组
B组
C组
A组
B组
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C组
缺血前
112±5
117±5
109±6
69±6
72±5
75±5
39±4
38±3
32±5
再灌注0.1 h
107±3
, 百拇医药
74±4
67±5
63±3
44±5
51±5
37±3
30±4
29±2
0.5 h
107±5
61±4
75±4*
64±4
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39±5
59±6*
36±4
35±4
32±3
1h
108±3
70±4
88±5*
66±4
42±5
63±6*
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37±3
38±3
31±5
2h
109±5
71±5
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65±5
44±5
62±4*
37±3
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*P<0.05 与B组比较
2.2 微动脉复流数目和PCD(条/视屏) A组微动脉灌流始终保持100%；复流后0.1，0.5，1，2 h，C组微动脉复流比率分别为97%±7.5%，95%±8.7%，93%±6.7%，90%±8.2%,较B组的61%±9.6%，53%±10.4%，57%±9.8%，63%±10.6%均明显增多 (P<0.01)，其中微动脉A2、A3的复流率尤其低。复流0.5，1，2 h，B组PCD分别为3.5±1.5，2.9±1.7，3.3±1.4，与C组的5.8±1.2，6.5±1.3，6.2±1.5相比均有显著差异 (P<0.05)。
2.3 NO的含量 再灌注0.5 h和 2 h，C组肌瓣内NO含量分别为 (43.37±16.65)，(53.52±14.72) μmol/L，与B组的(25.34±15.70)，(33.18±16.99) μmol/L相比有显著差异 (P<0.05)，而B组较A组的(70.30±13.85)，(67.28±15.00) μmol/L有非常显著差异 (P<0.01)。
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3 讨 论
缺血期微血管随着缺血时间延长，微动脉逐渐收缩；再灌注期部分微动脉出现原发性无复流，复流微动脉的直径较缺血前仍明显减小，部分复流微动脉的远端因血管痉挛出现继发性无复流，组织的灌流量进一步下降。L-arg是一种NO生成剂，对内皮细胞有保护作用[1]，我们发现它能使内皮细胞合成NO相对增加，同时亦证实，再灌注期早期输注L-arg能使复流的微动脉比率明显增加，最高达 97%，明显高于对照组；并能扩张微动脉，解除血管痉挛；使微血管流速加快，毛细血管灌流密度显著增加，能够显著增加组织的灌流量。因此L-arg作为一种NO生成剂，对解除组织游离移植后的血管痉挛，增加组织的灌流具有重要意义。
中图分类号 R 641 文献标识码：B
作者简介：李军辉，男，1970年8月生，硕士，住院医师
参考文献
, http://www.100md.com
1 Wei ZW, Anderson G, Fleming JT, et al. Lack of nitric oxide contributed to vasospasm during ischemia/reperfusion injury[J]. Plast Reconstr Surg, 1997, 99(4): 1099
2 Pemberton M, Anderson GL, Barker JH. Characterization of microvascular vasoconstriction following ischemia/reperfusion in skeletal muscle using videomicroscopy[J]. Microsurgery, 1996, 17(1):9
3 许宏岳，李爱红，汪小农,等. 比色法测定血清亚硝酸盐和硝酸盐及初步临床应用[J]. 临床检验杂志, 1996, 14 (1): 28
(1998-10-11收稿，1999-05-11修回), 百拇医药