威灵仙中挥发性成分的GC-MS分析

http://www.100md.com 《中草药》 1999年第11期

     作者：何明 张静华 胡昌奇 蔡建国 邓修

    单位：(何明 张静华 胡昌奇)上海医科大学药学院 (200032)；(蔡建国 邓修)华东理工大学

    关键词：威灵仙；水蒸气蒸馏法；超临界CO2萃取；GC-MC挥发性成分

    中草药991104摘 要 采用水蒸气蒸馏法和超临界CO₂流体萃取技术分别从威灵仙中提取出挥发性成分，并用GC-MS联用技术对其进行了分离测定。水蒸气蒸馏提取物得率是0.15 %，测定了25个化合物，超临界提取物得率是0.4 %，测定了21个化合物。结果表明超临界技术提取效率高。该结果与我们的化学分离工作相比，没有得到我们分离的化合物，说明GC-MC的应用有其局限性。

    威灵仙，为毛茛科植物威灵仙Clematis chinensis Osbeck的根，具有祛风湿、通经络、止痛等功效^〔1〕。临床上用其水蒸液作针剂，有抗炎镇痛等疗效。威灵仙中化学成分复杂，其中对皂苷的研究比较深入^〔2〕，但对挥发性成分的研究，目前还未见报道。提取威灵仙挥发性成分的常规工艺是水蒸气蒸馏法，该法提取温度高，时间长，易使对湿热不稳定的挥发性成分发生变化。而超临界CO₂流体萃取技术是一门高新化工分离技术，对于某些高沸点、热敏性物质的分离，有其独特的优点^〔3〕。

    我们用水蒸气蒸馏法和超临界CO₂流体萃取技术分别从威灵仙中提取出挥发性成分，并用GC-MC联用技术对其进行了研究。水蒸气蒸馏法提取物分离鉴定了25个挥发性成分，超临界CO₂流体萃取物则分离鉴定了21个挥发性成分，并用峰面积归一法测定了相对含量，并与我们水蒸液中化学分离得到的成分进行了比较。

    1 材料与仪器

    药材威灵仙产自辽宁，经上海医科大学药学院生药教研室潘胜利教授鉴定为 Clematis chinensis Osbeck；超临界CO₂萃取装置：瑞士NOVAF公司生产的200 mL超临界流体萃取装置；气质联用仪为MD 800型，色谱柱为OV101 (30m×0.25 mm)，柱温：150 ℃停3 min，5 ℃/min 升到250 ℃，柱前压：35 MPa；进样口温度：250 ℃，离子源：EI (250 ℃)，倍增电压：350 V，电子能量：70 eV，色谱进样量：0.2 μL，载气：氦气。

    2 威灵仙挥发性成分的提取

    超临界CO₂提取：将威灵仙粉碎后投入超临界CO₂萃取釜中，萃取温度为40 ℃，萃取压力为15 MPa，经循环萃取，并保持恒温恒压2 h后分离器出口出料，得到超临界萃取的挥发性成分。

    水蒸气蒸馏法提取：将威灵仙加水浸泡，然后水蒸气蒸馏，蒸馏液用乙醚萃取，得到挥发性成分。

    3 GC-MS分离与鉴定

    将上述得到的挥发性成分用氯仿溶解，分别进行GC-MS测定分析，并联机检索。水蒸气蒸馏提取物分离鉴定了25个挥发性成分，超临界萃取物分离鉴定了21个，分析结果列于下表1，2。

    表1 水蒸气蒸馏出的挥发性成分 峰号

    化合物名称

    相对

    含量(%)

    1

    正己酸

    0.38

    2

    正庚酸

    0.16

    3

    3A,4,7,7A-四氢-3A-甲基-2(3H)-苯并呋喃酮

    0.19

    4

    苯乙醇

    0.15

    5

    4-乙基苯甲醛

    0.22

    6

    未鉴定

    0.38

    7

    1，2，4-三乙苯

    0.48

    8

    1-(2-羟基-5-甲苯)-乙酮

    0.18

    9

    未鉴定

    0.27

    10

    1-(2-羟基-5-苯甲醚)-乙酮

    0.54

    11

    顺-细辛脑

    0.35

    12

    细辛脑

    0.17

    13

    未鉴定

    3.07

    14

    γ-桉叶油醇

    0.97

    15

    3H-3A,7-methanoazulene. 2,4,5,6,7,8-hexahydro-1,4,9,9-tetramethy1,3A-

    0.24

    16

    正十四酸

    0.30

    17

    正十五酸

    1.26

    18

    环十六烷

    0.25

    19

    9-烯十六酸甲酯

    0.14

    20

    正十六酸甲酯

    1.04

    21

    邻苯二甲酸丁酯

    4.20

    22

    正十六酸

    65.06

    23

    正十七酸

    0.30

    24

    亚油酸甲酯

    3.14

    25

    9，12-十八二烯酸

    14.83

    26

    邻苯二甲酸二庚酯

    0.66

    27

    邻苯二甲酸二-(2-乙基)丁酯

    0.58

    28

    葵二酸二-(2-乙基)己酯

    0.49

    表2 超临界CO₂萃取的挥发性成分 峰号

    化合物名称

    相对含量(%)

    1

    正辛酸

    0.30

    2

    顺-四氢-5-甲基糠醇

    0.27

    3

    香草醛

    0.11

    4

    1-(2-羟基-4-甲氧基苯)-乙酮

    0.11

    5

    2-甲基-6-丙基十二烷

    0.05

    6

    未鉴定

    0.11

    7

    顺-细辛脑

    0.14

    8

    正十五酸

    0.28

    9

    7-烯16酸甲酯

    0.64

    10

    正十六酸

    26.97

    11

    正十六酸乙酯

    0.17

    12

    正十七酸

    0.63

    13

    亚油酸甲酸

    0.41

    14

    9，12-十八二烯酸

    48.56

    15

    亚油酸乙酯

    4.09

    16

    邻苯二甲酸二-(2-乙基)己酯

    0.43

    17

    五味子素

    0.43

    18

    未鉴定

    2.10

    19

    5-烯麦角甾醇

    1.91

    20

    豆甾醇

    3.13

    21

    γ-谷甾醇

    7.58

    22

    羽扇豆醇

    0.96

    23

    4-烯豆甾酮

    0.61

    4 结果与讨论

    本文首次研究报道了威灵仙中的挥发性成分。水蒸气蒸馏法提取得率为0.15 %，主要成分为有机酸、有机酸酯、苯丙素、倍半萜、酚类等，而超临界CO₂萃取得率为0.4%，主要成分为有机酸、有机酸酯、苯丙素、酚类、三萜、甾醇等。2种提取方法获得的大多数成分是共同的，而超临界CO₂萃取比水蒸气蒸馏可以获得更多的提取物，如三萜、甾醇等高沸点物质，这些物质在水蒸气蒸馏时很难获得。由于GS-MS中气相层析中分离条件的限制，有些组分并没有分开，尤其是超临界提取的组分多，分离情况就更差些，这就影响了组分的结构鉴定。在GC-MS分析的同时，我们从水蒸气蒸馏物中分离提到了白头翁素，异阿魏酸，齐墩果酮，β-谷甾醇，而在GC-MS分析中这些化合物都没有，这说明GC-MS分析有其局限性。究其原因除了气相色谱分离中，有些化合物没有分开，分子离子峰以及碎片离子峰混杂在一起之外，也可能由于气相中柱温为250 ℃，在该温度下有些化合物结构发生了变化。

    基金项目：上海市科委资助项目

    联系人：胡昌奇

    参考文献

    1 江苏新医学院编.中药大辞典.下册.上海：上海人民出版社，1975：1635

    2 Kizu H, et al. Chem Pharm Bull, 1982,30:3340

    3 葛发欢，等.中药材，1995，18(6)：316

    收稿日期：1999-06-29

    百拇医药网 http://www.100md.com/html/analecta/1999/11/01/31/175.htm