健身悦颜丹质量标准研究
作者：李鸿雁 张立壮 陈进 梁生旺
单位：河南竹林众生制药股份有限公司(郑州 450001)
关键词：薄层层析；薄层扫描法；何首乌；白芍；女贞子；大黄素
中草药991113摘 要 用薄层层析对健身悦颜丹中女贞子、白芍进行定性鉴别，用薄层扫描法测定大黄素含量。并用正交设计实验对定量条件进行了优选，回收率97.36%，精密度好(RSD=2.28%)，可起到控制本品质量之目的。
健身悦颜丹由制何首乌、女贞子、当归、白芍等组成。具有滋补精血、养肝和肝、行气化瘀之功，适用于面部黄褐斑、妇女乳房肿块、子宫肌瘤等症。
本品中制何首乌为君药，含蒽醌类成分，主要为大黄素、大黄酚和大黄酸等，故拟测定大黄素的含量来控制其内在质量。并用正交设计试验对提取条件进行优选，并获得满意结果。又对女贞子、白芍进行了定性鉴别。
, 百拇医药
1 仪器与试药
岛津CS-930型薄层扫描仪(日本)：定量毛细管(美国)；PBQ-I型薄层铺板器(重庆)；薄层层析用硅胶G(青岛海洋化工厂)；大黄素、齐墩果酸、芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所)；其它试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
2.1 女贞子的鉴别
2.1.1 供试品溶液：取本品粉末1 g，加乙醚20 mL加热回流2 h，滤过，滤液蒸发至干，残渣加无水乙醇2 mL溶解。
2.1.2 阴性对照溶液：取阴性对照粉末(缺女贞子)1 g，按供试品溶液方法制备。
2.1.3 对照品溶液：取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成1 mg/mL的溶液。
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2.1.4 薄层层析；取供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-甲酸(40∶1∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液在105℃烘约5 min。见图1。
1-供试品溶液 2-齐墩果酸对照品 3-阴性对照溶液
图1 女贞子TLC图谱
2.2 白芍的鉴别
2.2.1 供试品溶液：取本品粉末10 g，加乙醇40 mL，温浸2 h，滤过，滤液蒸发至干。残渣加水30 mL使溶解，转入分液漏斗，用正丁醇提取4次(20，20，15，15 mL)，合并正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣用乙醇定容至1 mL。
, 百拇医药 2.2.2 阴性对照溶液：取阴性对照样品(缺白芍)10 g，按供试品溶液方法制备。
2.2.3 对照品溶液：取芍药苷对照品，加乙醇制成2 mg/mL的溶液。
2.2.4 薄层层析：取供试品溶液、阴性对照溶液、芍药苷对照品溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液热风吹至显色清晰。见图2。
1-供试品溶液 2-芍药苷对照品 3-阴性对照溶液
图2 白芍TLC图谱
3 定量测定
3.1 测定条件的确定：将大黄素对照品2 μL(0.530 mg/mL)、供试品溶液4 μL、阴性对照溶液(缺何首乌)4 μL，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30℃～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，结果见图3。放入薄层扫描仪内扫描λs=430 nm,λR=600 nm。
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1-供试品溶液 2-大黄素对照品 3-阴性对照溶液
图3 何首乌TLC图谱
3.2 提取条件的选择：用L8(27)正交设计表安排试验，对提取方法、水解条件、水解时间及提取溶剂等进行了优选，选出了最佳条件。
因素水平的建立：据大黄素及其苷都溶于甲醇、乙醇的性质[1]，提取方法选取热乙醇提取和甲醇冷浸(有报道甲醇冷浸可提取完全[2])两个水平。水解条件：选取5 mol/L硫酸及混合酸两个水平[3～5]。水解时间选1、2 h两个水平，提取溶剂选取乙醚、氯仿两个水平(因为游离的大黄素易溶于乙醚及氯仿)，提取6次(20，20，15，15，10，10 mL第七次检识无大黄素)。合并乙醚或氯仿，蒸干，用氯仿定容至5 mL，按3.1项 下条件进行测定。实验结果确定最佳条件为：取样5 g，用乙醇在索氏提取器内提取至无色，回收乙醇至干，加混合酸20 mL，水解45 min，再用氯仿提取6次。
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3.3 线性范围试验：取大黄素对照品溶液(0.217 mg/mL)1，2，3，4，5，6 μL分别点于同一块硅胶H板上，按3.1项下条件进行测定，以浓度(C)为横座标，积分值(A)为纵座标，做标准曲线，其回归方程为A=224.9+24642.4C,r=0.9993。可见大黄素在0.217～1.302 μg之间，浓度(C)与积分值(A)呈一不通过原点的直线，故用外标两点法定量。
3.4 稳定性试验：将大黄素对照品(1.018 mg/mL)1，2 μL点于同一块硅胶H薄层板上，按3.1项下条件展开，间隔不同时间扫描测定。结果表明：大黄素在3 h内稳定。
3.5 精密度试验：对同一供试品溶液，分别点于不同薄层板上，进行测定，结果RSD=2.72%(n=5)。
3.6 重复试验：按3.1及3.2项下的条件，对同一样品进行多次测定(5块薄层板)，结果含量为0.0129%，RSD=2.78%(n=5)。
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3.7 加样回收率试验：取本品粉末约2.5 g，精密称定，分别加入大黄素对照品适量，按上述条件进行测定，结果平均回收率97.36%，RSD=2.74%(n=5)。
3.8 含量测定：取本品粉末约5 g，精密称定，置索氏提取器中，用乙醇提取至无色。按3.1及3.2项下进行测定，结果见表1。
表1 样品含量测定 批号
总大黄素含量(%)
平均含
量(%)
RSD
(%)
1
, 百拇医药 2
3
4
5
920902
0.0104
0.0112
0.0107
0.0108
0.0110
0.0108
2.80
920903
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0.0125
0.0121
0.0124
0.0120
0.0126
0.0123
2.10
920906
0.00931
0.00928
0.00906
0.00919
, 百拇医药
0.00920
0.00928
1.06
920908
0.00892
0.00985
0.00921
0.00918
0.00907
0.00907
1.21
920910
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0.0136
0.0131
0.0135
0.0129
0.0133
0.0133
2.16
4 讨论
4.1 据文献[6]报道，制何首乌中大黄素含量炮制时间越长，降低越多，并对首乌九蒸九晒炮制方法提出异议。本文用大黄素为定量指标，控制本品质量是可行的。
4.2 样品经水解后用乙醚提取而易产生乳化，影响含量，故以氯仿提取为好。
, 百拇医药
注释：梁生旺，河南中医学院中药系
参考文献
1 北京医学院等编.中草药化学成分.北京：人民卫生出版社，1980
2 何丽一，等.药学学报，1980，15(9)：555
3 Paris, et al.Ann Pharm Franl,1958,16:561
4 王慕邹，等.药学学报，1963，10(12)：720
5 丁安伟，等.中药通报，1988，13(5)：293
6 叶定江，等.中药通报，1986，11(12)：727
收稿日期：1998-12-25, http://www.100md.com
单位：河南竹林众生制药股份有限公司(郑州 450001)
关键词：薄层层析；薄层扫描法；何首乌；白芍；女贞子；大黄素
中草药991113摘 要 用薄层层析对健身悦颜丹中女贞子、白芍进行定性鉴别，用薄层扫描法测定大黄素含量。并用正交设计实验对定量条件进行了优选，回收率97.36%，精密度好(RSD=2.28%)，可起到控制本品质量之目的。
健身悦颜丹由制何首乌、女贞子、当归、白芍等组成。具有滋补精血、养肝和肝、行气化瘀之功，适用于面部黄褐斑、妇女乳房肿块、子宫肌瘤等症。
本品中制何首乌为君药，含蒽醌类成分，主要为大黄素、大黄酚和大黄酸等，故拟测定大黄素的含量来控制其内在质量。并用正交设计试验对提取条件进行优选，并获得满意结果。又对女贞子、白芍进行了定性鉴别。
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1 仪器与试药
岛津CS-930型薄层扫描仪(日本)：定量毛细管(美国)；PBQ-I型薄层铺板器(重庆)；薄层层析用硅胶G(青岛海洋化工厂)；大黄素、齐墩果酸、芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所)；其它试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
2.1 女贞子的鉴别
2.1.1 供试品溶液：取本品粉末1 g，加乙醚20 mL加热回流2 h，滤过，滤液蒸发至干，残渣加无水乙醇2 mL溶解。
2.1.2 阴性对照溶液：取阴性对照粉末(缺女贞子)1 g，按供试品溶液方法制备。
2.1.3 对照品溶液：取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成1 mg/mL的溶液。
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2.1.4 薄层层析；取供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-甲酸(40∶1∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液在105℃烘约5 min。见图1。
1-供试品溶液 2-齐墩果酸对照品 3-阴性对照溶液
图1 女贞子TLC图谱
2.2 白芍的鉴别
2.2.1 供试品溶液：取本品粉末10 g，加乙醇40 mL，温浸2 h，滤过，滤液蒸发至干。残渣加水30 mL使溶解，转入分液漏斗，用正丁醇提取4次(20，20，15，15 mL)，合并正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣用乙醇定容至1 mL。
, 百拇医药 2.2.2 阴性对照溶液：取阴性对照样品(缺白芍)10 g，按供试品溶液方法制备。
2.2.3 对照品溶液：取芍药苷对照品，加乙醇制成2 mg/mL的溶液。
2.2.4 薄层层析：取供试品溶液、阴性对照溶液、芍药苷对照品溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液热风吹至显色清晰。见图2。
1-供试品溶液 2-芍药苷对照品 3-阴性对照溶液
图2 白芍TLC图谱
3 定量测定
3.1 测定条件的确定：将大黄素对照品2 μL(0.530 mg/mL)、供试品溶液4 μL、阴性对照溶液(缺何首乌)4 μL，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30℃～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，结果见图3。放入薄层扫描仪内扫描λs=430 nm,λR=600 nm。
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1-供试品溶液 2-大黄素对照品 3-阴性对照溶液
图3 何首乌TLC图谱
3.2 提取条件的选择：用L8(27)正交设计表安排试验，对提取方法、水解条件、水解时间及提取溶剂等进行了优选，选出了最佳条件。
因素水平的建立：据大黄素及其苷都溶于甲醇、乙醇的性质[1]，提取方法选取热乙醇提取和甲醇冷浸(有报道甲醇冷浸可提取完全[2])两个水平。水解条件：选取5 mol/L硫酸及混合酸两个水平[3～5]。水解时间选1、2 h两个水平，提取溶剂选取乙醚、氯仿两个水平(因为游离的大黄素易溶于乙醚及氯仿)，提取6次(20，20，15，15，10，10 mL第七次检识无大黄素)。合并乙醚或氯仿，蒸干，用氯仿定容至5 mL，按3.1项 下条件进行测定。实验结果确定最佳条件为：取样5 g，用乙醇在索氏提取器内提取至无色，回收乙醇至干，加混合酸20 mL，水解45 min，再用氯仿提取6次。
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3.3 线性范围试验：取大黄素对照品溶液(0.217 mg/mL)1，2，3，4，5，6 μL分别点于同一块硅胶H板上，按3.1项下条件进行测定，以浓度(C)为横座标，积分值(A)为纵座标，做标准曲线，其回归方程为A=224.9+24642.4C,r=0.9993。可见大黄素在0.217～1.302 μg之间，浓度(C)与积分值(A)呈一不通过原点的直线，故用外标两点法定量。
3.4 稳定性试验：将大黄素对照品(1.018 mg/mL)1，2 μL点于同一块硅胶H薄层板上，按3.1项下条件展开，间隔不同时间扫描测定。结果表明：大黄素在3 h内稳定。
3.5 精密度试验：对同一供试品溶液，分别点于不同薄层板上，进行测定，结果RSD=2.72%(n=5)。
3.6 重复试验：按3.1及3.2项下的条件，对同一样品进行多次测定(5块薄层板)，结果含量为0.0129%，RSD=2.78%(n=5)。
, http://www.100md.com
3.7 加样回收率试验：取本品粉末约2.5 g，精密称定，分别加入大黄素对照品适量，按上述条件进行测定，结果平均回收率97.36%，RSD=2.74%(n=5)。
3.8 含量测定：取本品粉末约5 g，精密称定，置索氏提取器中，用乙醇提取至无色。按3.1及3.2项下进行测定，结果见表1。
表1 样品含量测定 批号
总大黄素含量(%)
平均含
量(%)
RSD
(%)
1
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0.0125
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0.00892
0.00985
0.00921
0.00918
0.00907
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0.0136
0.0131
0.0135
0.0129
0.0133
0.0133
2.16
4 讨论
4.1 据文献[6]报道，制何首乌中大黄素含量炮制时间越长，降低越多，并对首乌九蒸九晒炮制方法提出异议。本文用大黄素为定量指标，控制本品质量是可行的。
4.2 样品经水解后用乙醚提取而易产生乳化，影响含量，故以氯仿提取为好。
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注释：梁生旺，河南中医学院中药系
参考文献
1 北京医学院等编.中草药化学成分.北京：人民卫生出版社，1980
2 何丽一，等.药学学报，1980，15(9)：555
3 Paris, et al.Ann Pharm Franl,1958,16:561
4 王慕邹，等.药学学报，1963，10(12)：720
5 丁安伟，等.中药通报，1988，13(5)：293
6 叶定江，等.中药通报，1986，11(12)：727
收稿日期：1998-12-25, http://www.100md.com