618环氧树脂平板在免疫电镜包埋中的应用
作者:周萍
单位:第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,重庆 400042
关键词:618环氧树脂;免疫电镜
中图法分类号 R446
中图法分类号 R446.8 文献标识码 B
Use of 618 EPON plate in embeding of immune electromicroscopy
免疫电镜超薄切片在样品的制备过程中过去常采用载玻片摊片,该法使硬化后摊在栽玻片上的组织与样品头不易剥离,成功率较低,我们在工作中摸索应用618环氧树脂包埋剂制备的薄片进行摊片,较好的解决了剥离困难,提高了制样的成功率,现将该方法简介如下。
1 操作步骤
①切片10~20 μm,用3%的戊二醛固定,如为包埋前染色则在染色后用冷二钾砷酸钠缓冲液漂洗,转入3%戊二醛固定;②冷二钾砷酸钠缓冲液漂洗;③1%OsO4后固定2 h;④50%,70%丙酮各脱水8~10 min;⑤饱和醋酸铀过夜;⑥90%丙酮脱水8~10 min;⑦100%丙酮脱水4次,每次8~10 min;⑧环氧丙烷置换10~15 min;⑨环氧丙烷∶618=1∶1,1 h 35°C~40°C;⑩纯包埋剂(不加DMP-30),2 h 35°C~40°C;包埋剂(加DMP-30),3 h 35°C~40°C;包埋:用已配好的618包埋剂倒在塑料包埋框背面,尽量让其平,薄。然后放入60°C~70°C烤箱中硬化。制成大小不等的618包埋剂平板备用。
将已制作好的618载玻片平板放平。把已在包埋剂(加DMP-30)中浸透好的厚片(10~20 ml)用小镊子夹起放在平板上(记住各厚片的编号)。用牙签把厚片辗平整。使其不卷屈,不皱折。然后用已废弃的包埋头后端放在辗平的原片上,放入烤箱过夜,升温至60°C~70°C硬化48 h。
2 体会
用618环氧树脂制备的平板代替过去用玻璃栽玻片来摊片,解决了包埋头子不易与玻璃栽片相分离的缺点。
用618环氧树脂制备的平板直接摊片,由于平板和废弃的包埋头子同质,因此能紧密牢固的结合,合制成的免疫电镜包埋块中的厚片平整,不卷屈,易于切出理想的片子来。
废弃的包埋头,节约材料,降低成本,具有经济实用的优点。
作者简介:周 萍,女,35岁,主管技师
参考文献
[1] 蔡文琴,王泊 主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术[M].成都:四川科技出版社,P133-149.
[2]蔡文琴.胶体金标记法在免疫细胞化学电镜的应用[J].解剖学杂志,1998,8(2):19-21.
[3]孙 瑜,蔡文琴,李 巍,等.改良低温包埋胶体金免疫电镜技术[J].第三军医大学学报,1991,13(8):417-418.
收稿日期:1999-06-15;修回日期:1999-09-20, 百拇医药
单位:第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心,重庆 400042
关键词:618环氧树脂;免疫电镜
中图法分类号 R446
中图法分类号 R446.8 文献标识码 B
Use of 618 EPON plate in embeding of immune electromicroscopy
免疫电镜超薄切片在样品的制备过程中过去常采用载玻片摊片,该法使硬化后摊在栽玻片上的组织与样品头不易剥离,成功率较低,我们在工作中摸索应用618环氧树脂包埋剂制备的薄片进行摊片,较好的解决了剥离困难,提高了制样的成功率,现将该方法简介如下。
1 操作步骤
①切片10~20 μm,用3%的戊二醛固定,如为包埋前染色则在染色后用冷二钾砷酸钠缓冲液漂洗,转入3%戊二醛固定;②冷二钾砷酸钠缓冲液漂洗;③1%OsO4后固定2 h;④50%,70%丙酮各脱水8~10 min;⑤饱和醋酸铀过夜;⑥90%丙酮脱水8~10 min;⑦100%丙酮脱水4次,每次8~10 min;⑧环氧丙烷置换10~15 min;⑨环氧丙烷∶618=1∶1,1 h 35°C~40°C;⑩纯包埋剂(不加DMP-30),2 h 35°C~40°C;包埋剂(加DMP-30),3 h 35°C~40°C;包埋:用已配好的618包埋剂倒在塑料包埋框背面,尽量让其平,薄。然后放入60°C~70°C烤箱中硬化。制成大小不等的618包埋剂平板备用。
将已制作好的618载玻片平板放平。把已在包埋剂(加DMP-30)中浸透好的厚片(10~20 ml)用小镊子夹起放在平板上(记住各厚片的编号)。用牙签把厚片辗平整。使其不卷屈,不皱折。然后用已废弃的包埋头后端放在辗平的原片上,放入烤箱过夜,升温至60°C~70°C硬化48 h。
2 体会
用618环氧树脂制备的平板代替过去用玻璃栽玻片来摊片,解决了包埋头子不易与玻璃栽片相分离的缺点。
用618环氧树脂制备的平板直接摊片,由于平板和废弃的包埋头子同质,因此能紧密牢固的结合,合制成的免疫电镜包埋块中的厚片平整,不卷屈,易于切出理想的片子来。
废弃的包埋头,节约材料,降低成本,具有经济实用的优点。
作者简介:周 萍,女,35岁,主管技师
参考文献
[1] 蔡文琴,王泊 主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术[M].成都:四川科技出版社,P133-149.
[2]蔡文琴.胶体金标记法在免疫细胞化学电镜的应用[J].解剖学杂志,1998,8(2):19-21.
[3]孙 瑜,蔡文琴,李 巍,等.改良低温包埋胶体金免疫电镜技术[J].第三军医大学学报,1991,13(8):417-418.
收稿日期:1999-06-15;修回日期:1999-09-20, 百拇医药