肺鳞癌人乳头瘤病毒感染与P53蛋白表达
作者：周本成 罗祝泉 张 伟
单位：广州军区广州总医院病理科(510010)
关键词：肺鳞癌；HPV；P53；免疫组织化学
广东医学991208 【摘要】 目的 探讨肺鳞癌中HPV与P53蛋白的表达状况、两者的关系及其在肺鳞癌发生机制中可能的作用。方法 使用免疫组化LSAB法检测37例肺鳞组织中HPV及P53蛋白的表达。结果 37例肺鳞癌其中9例(24.3%)HPV阳性，23例(62.2%)P53蛋白阳性。肺鳞癌的分化程度与HPV和P53的阳性表达无关。结论 HPV感染可能与部分肺鳞癌的发生有关。P53基因突变或野生型P53蛋白与HPV合成的E6蛋白结合可能会导致肺鳞癌的发生。
Human papillomavirus infection and expression of P53 protein in squamous cell carcinoma of the lung
, 百拇医药
Zhou Bencheng, Luo Zhuquan, Zhang Wei.
Department of Pathology, General Hospital of Guangzhou Command of PLA, Guangzhou 510010
【Abstract】 Objective To investigate the expression and possible roles of human papillomavirus (HPV) and P53 protein in squamous cell carcinoma of the lung (SCCL). Methods LSAB immunohistochemical staining was used to detect the expression of HPV and P53 protein in 37 cases of SCCL. Results HPV was expressed in 9(24.3%), SCCL and P53 protein in 23(62.2%). No correlations were found between the expression of HPV and P53 protein and histological grading of carcinoma. Conclusion HPV may be involved in the development of some SCCL. Mutations in P53 gene or interactions of wild-type p53 protein with E6 protein synthesized by HPV may result in SCCL.
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【Key words】 Squamous cell carcinoma of the lung HPV P53 Immunohistochemistry
一般认为，人类乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染与宫颈良、恶性肿瘤及某些上消化道和上呼吸道肿瘤的发生密切相关，但有关HPV与肺鳞癌关系的研究国内外文献少见。P53基因是一种公认的肿瘤抑制基因，对引起细胞周期阻滞，诱导凋亡及促进细胞分化起着重要的作用。本实验目的在于探讨肺鳞癌组织中的HPV与P53蛋白表达状况、二者的关系及其在肺鳞癌发生中可能的作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料 随机收集我院1995～1998年肺鳞癌标本37例，所有标本均经4%甲醛固定，石蜡包埋。37例中，男34例(91.9%)，女3例(8.1%)；年龄24～76岁，平均年龄59.8岁，～39岁2例(5.4%)，～49岁4例(10.8%)，～59岁7例(18.9%)，～69岁20例(54.1%)，≥70岁4例(10.8%)。患者术前均未进行放疗、化疗及免疫治疗。
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1.2 试剂 多克隆抗HPV抗体、单克隆抗P53蛋白抗体D 0～7及LSAB试剂盒均为DAKO公司产品。
1.3 方法 37例标本每例任选一肺鳞癌蜡块，另选其中7例带有癌旁正常支气管(距癌灶边缘2 cm以上)的蜡块。将每一蜡块连续切片，厚4 μm，分别做HE染色及HPV、P53蛋白免疫组化检测，程序基本同试剂盒操作过程，每次染色设阳性及阴性对照。HE切片光镜观察后将肺鳞癌分为高、中、低分化三组。免疫组化结果判定：HPV及P53均以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞数在10%～25%者为(+)；25%～50%者为(++)；>50%者为(+++)。
1.4 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
2.1 组织病理学检查 37例肺鳞癌中，高分化7例，中分化21例，低分化9例。
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2.2 HPV及P53免疫组化结果 见表1。HPV及P53阳性染色者细胞核均出现棕黄色颗粒。37例肺癌HPV阳性者9例(24.3%)，P53阳性者23例(62.2%)。其中HPV阴性，但P53阳性者14例，二者均阳性者9例；二者均阴性者14例。未见HPV阳性而P53阴性者。
表1 肺鳞癌及癌旁正常支气管上皮HPV及P53免疫组化结果 分化程度
例数
HPV表达
P53表达
-
+
++
+++
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阳性率(%)
-
+
++
+++
阳性率(%)
高发化
7
5
2
28.6
5
1
1
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28.6
中分化
21
16
3
1
1
23.8
6
5
5
5
71.4
低分化
, 百拇医药
9
7
2
22.2
3
3
1
2
66.7
支气管上皮
7
5
1
1
, 百拇医药
28.6
4
1
1
1
42.8
经χ2检验，HPV及P53在高、中、低分化肺鳞癌中的表达差别无显著性(P值均大于0.05)
3 讨论
肺鳞癌为常见的恶性肿瘤之一，主要见于男性，本组资料女性仅例(8.1%)，患者年龄偏大，平均年龄为59.8岁，50岁以上者占83.8%。
有关肺鳞癌与HPV关系的研究文献较少，方法与结果不甚一致，阳性率在9%～30%[1～3]。我们的观察结果显示HPV在24.3%的肺鳞癌呈阳性，在28.6%癌旁支气管纤毛柱状上皮中亦有表达，提示部分肺鳞癌的发生可能与HPV有关。目前文献报道HPV6和11为低危型，与宫颈湿疣、喉乳头状瘤等良性病变的发生密切相关，而HPV16和18为高危型，具有致癌作用。HPV感染支气管粘膜上皮后，其存在方式或为游离型，或为整合型。前者为HPV繁殖状态，后者为HPV片段整合进宿主细胞核基因组内，其结果使高危型病毒基因E6得以持续表达[4]，其编码的E6蛋白与野生型P53蛋白结合，加速其降解，进而被灭活，因而失去抑癌功能[5]，导致肿瘤的发生，而低危型HPV6和11之E6蛋白促P53蛋白降解作用不甚有效[6]。肺鳞癌时感染的HPV究竟为何种亚型，文献报道不一[1～3]。多数认为是HPV16或18，亦有作者报告有HPV6和11感染，有待进一步研究。
, 百拇医药
我们的结果显示肺鳞癌的分化程度与HPV和P53的阳性表达并无关系。二者均可在部分肺鳞癌病灶附近的正常支气管纤毛柱状上皮呈阳性反应，提示有可能在肺鳞癌发生之前，HPV的感染已引起P53基因突变，这可能是HPV致癌的另一途径。文献报道突变型P53蛋白可能具有抗原性，从而激发宿主特异性免疫反应。各种不同肿瘤患者血清P53抗体阳性率不同程度的升高，某些患者术后P53抗体水平则下降，因此提示P53抗体检测在诊断和病情监测方面具有实际使用价值。
本组病例有14例P53阳性而HPV阴性，我们认为有可能是这些病例肺鳞癌的发生与HPV并无关系，亦可能是HPV致癌后此病毒于癌组织已不复存在。为了探讨P53基因突变是否确实存在于HPV阳性的肺鳞癌组织中，对HPV阳性及阴性表达的肺鳞癌进一步进行P53基因分析是必要的。此外，可能与肺鳞癌发生有关的HPV究竟为何种亚型及除鳞癌之外的其他病理类型肺癌与HPV的关系如何亦有待进一步探讨。
参考文献
, 百拇医药
1 Syrjanen KJ, Syrjanen SM. Human papillomavirus DNA in bronchial squamous cell carcinoma. Lancet,1987,1:168
2 Bejui-Thivolet F, Liagre N, Chignol MC, et al. Detection of human papillomavirus DNA in squamous bronchial metaplasia and squamous cell carcinomas of the lung by in situ hybridization using biotinylated probes in paraffin-embedded specimens. Hum Pathol,1990,21:111
3 Bohlmeyer T, Le TN, Shroyer AL, et al. Detection of human papillomavirus in squamous cell carcinomas of the lung by polymerase chain reaction. Am J Respir Cell Mol Biol,1998,18:265
, 百拇医药
4 Zur Hausen H. Human papillomaviruses in the pathogenesis of anogenital cancer. Virology,1991,184:9
5 Scheffner M, Werness BA, Huibregtse JM, et al. The E6 oncoprotein encoded by human papillomavirus types 16 and 18 promotes the degradation of P53. Cell,1990,63:1129
6 Chand F, Syrjanen S, Syrjanen K. Impilcations of the P53 tumor-suppressor gene in clinical oncology. J Clin Oncol,1995,13:1009, 百拇医药
单位：广州军区广州总医院病理科(510010)
关键词：肺鳞癌；HPV；P53；免疫组织化学
广东医学991208 【摘要】 目的 探讨肺鳞癌中HPV与P53蛋白的表达状况、两者的关系及其在肺鳞癌发生机制中可能的作用。方法 使用免疫组化LSAB法检测37例肺鳞组织中HPV及P53蛋白的表达。结果 37例肺鳞癌其中9例(24.3%)HPV阳性，23例(62.2%)P53蛋白阳性。肺鳞癌的分化程度与HPV和P53的阳性表达无关。结论 HPV感染可能与部分肺鳞癌的发生有关。P53基因突变或野生型P53蛋白与HPV合成的E6蛋白结合可能会导致肺鳞癌的发生。
Human papillomavirus infection and expression of P53 protein in squamous cell carcinoma of the lung
, 百拇医药
Zhou Bencheng, Luo Zhuquan, Zhang Wei.
Department of Pathology, General Hospital of Guangzhou Command of PLA, Guangzhou 510010
【Abstract】 Objective To investigate the expression and possible roles of human papillomavirus (HPV) and P53 protein in squamous cell carcinoma of the lung (SCCL). Methods LSAB immunohistochemical staining was used to detect the expression of HPV and P53 protein in 37 cases of SCCL. Results HPV was expressed in 9(24.3%), SCCL and P53 protein in 23(62.2%). No correlations were found between the expression of HPV and P53 protein and histological grading of carcinoma. Conclusion HPV may be involved in the development of some SCCL. Mutations in P53 gene or interactions of wild-type p53 protein with E6 protein synthesized by HPV may result in SCCL.
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【Key words】 Squamous cell carcinoma of the lung HPV P53 Immunohistochemistry
一般认为，人类乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染与宫颈良、恶性肿瘤及某些上消化道和上呼吸道肿瘤的发生密切相关，但有关HPV与肺鳞癌关系的研究国内外文献少见。P53基因是一种公认的肿瘤抑制基因，对引起细胞周期阻滞，诱导凋亡及促进细胞分化起着重要的作用。本实验目的在于探讨肺鳞癌组织中的HPV与P53蛋白表达状况、二者的关系及其在肺鳞癌发生中可能的作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料 随机收集我院1995～1998年肺鳞癌标本37例，所有标本均经4%甲醛固定，石蜡包埋。37例中，男34例(91.9%)，女3例(8.1%)；年龄24～76岁，平均年龄59.8岁，～39岁2例(5.4%)，～49岁4例(10.8%)，～59岁7例(18.9%)，～69岁20例(54.1%)，≥70岁4例(10.8%)。患者术前均未进行放疗、化疗及免疫治疗。
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1.2 试剂 多克隆抗HPV抗体、单克隆抗P53蛋白抗体D 0～7及LSAB试剂盒均为DAKO公司产品。
1.3 方法 37例标本每例任选一肺鳞癌蜡块，另选其中7例带有癌旁正常支气管(距癌灶边缘2 cm以上)的蜡块。将每一蜡块连续切片，厚4 μm，分别做HE染色及HPV、P53蛋白免疫组化检测，程序基本同试剂盒操作过程，每次染色设阳性及阴性对照。HE切片光镜观察后将肺鳞癌分为高、中、低分化三组。免疫组化结果判定：HPV及P53均以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞数在10%～25%者为(+)；25%～50%者为(++)；>50%者为(+++)。
1.4 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
2.1 组织病理学检查 37例肺鳞癌中，高分化7例，中分化21例，低分化9例。
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2.2 HPV及P53免疫组化结果 见表1。HPV及P53阳性染色者细胞核均出现棕黄色颗粒。37例肺癌HPV阳性者9例(24.3%)，P53阳性者23例(62.2%)。其中HPV阴性，但P53阳性者14例，二者均阳性者9例；二者均阴性者14例。未见HPV阳性而P53阴性者。
表1 肺鳞癌及癌旁正常支气管上皮HPV及P53免疫组化结果 分化程度
例数
HPV表达
P53表达
-
+
++
+++
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阳性率(%)
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+
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阳性率(%)
高发化
7
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中分化
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低分化
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支气管上皮
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42.8
经χ2检验，HPV及P53在高、中、低分化肺鳞癌中的表达差别无显著性(P值均大于0.05)
3 讨论
肺鳞癌为常见的恶性肿瘤之一，主要见于男性，本组资料女性仅例(8.1%)，患者年龄偏大，平均年龄为59.8岁，50岁以上者占83.8%。
有关肺鳞癌与HPV关系的研究文献较少，方法与结果不甚一致，阳性率在9%～30%[1～3]。我们的观察结果显示HPV在24.3%的肺鳞癌呈阳性，在28.6%癌旁支气管纤毛柱状上皮中亦有表达，提示部分肺鳞癌的发生可能与HPV有关。目前文献报道HPV6和11为低危型，与宫颈湿疣、喉乳头状瘤等良性病变的发生密切相关，而HPV16和18为高危型，具有致癌作用。HPV感染支气管粘膜上皮后，其存在方式或为游离型，或为整合型。前者为HPV繁殖状态，后者为HPV片段整合进宿主细胞核基因组内，其结果使高危型病毒基因E6得以持续表达[4]，其编码的E6蛋白与野生型P53蛋白结合，加速其降解，进而被灭活，因而失去抑癌功能[5]，导致肿瘤的发生，而低危型HPV6和11之E6蛋白促P53蛋白降解作用不甚有效[6]。肺鳞癌时感染的HPV究竟为何种亚型，文献报道不一[1～3]。多数认为是HPV16或18，亦有作者报告有HPV6和11感染，有待进一步研究。
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我们的结果显示肺鳞癌的分化程度与HPV和P53的阳性表达并无关系。二者均可在部分肺鳞癌病灶附近的正常支气管纤毛柱状上皮呈阳性反应，提示有可能在肺鳞癌发生之前，HPV的感染已引起P53基因突变，这可能是HPV致癌的另一途径。文献报道突变型P53蛋白可能具有抗原性，从而激发宿主特异性免疫反应。各种不同肿瘤患者血清P53抗体阳性率不同程度的升高，某些患者术后P53抗体水平则下降，因此提示P53抗体检测在诊断和病情监测方面具有实际使用价值。
本组病例有14例P53阳性而HPV阴性，我们认为有可能是这些病例肺鳞癌的发生与HPV并无关系，亦可能是HPV致癌后此病毒于癌组织已不复存在。为了探讨P53基因突变是否确实存在于HPV阳性的肺鳞癌组织中，对HPV阳性及阴性表达的肺鳞癌进一步进行P53基因分析是必要的。此外，可能与肺鳞癌发生有关的HPV究竟为何种亚型及除鳞癌之外的其他病理类型肺癌与HPV的关系如何亦有待进一步探讨。
参考文献
, 百拇医药
1 Syrjanen KJ, Syrjanen SM. Human papillomavirus DNA in bronchial squamous cell carcinoma. Lancet,1987,1:168
2 Bejui-Thivolet F, Liagre N, Chignol MC, et al. Detection of human papillomavirus DNA in squamous bronchial metaplasia and squamous cell carcinomas of the lung by in situ hybridization using biotinylated probes in paraffin-embedded specimens. Hum Pathol,1990,21:111
3 Bohlmeyer T, Le TN, Shroyer AL, et al. Detection of human papillomavirus in squamous cell carcinomas of the lung by polymerase chain reaction. Am J Respir Cell Mol Biol,1998,18:265
, 百拇医药
4 Zur Hausen H. Human papillomaviruses in the pathogenesis of anogenital cancer. Virology,1991,184:9
5 Scheffner M, Werness BA, Huibregtse JM, et al. The E6 oncoprotein encoded by human papillomavirus types 16 and 18 promotes the degradation of P53. Cell,1990,63:1129
6 Chand F, Syrjanen S, Syrjanen K. Impilcations of the P53 tumor-suppressor gene in clinical oncology. J Clin Oncol,1995,13:1009, 百拇医药