老年慢性肺心病患者PBMC中IL-6分泌动力学变化及临床意义
作者：张捷 杨俊玲 安继红 王秀丽 邢力
单位：张捷 杨俊玲 安继红 王秀丽(白求恩医科大学第二临床学院呼吸科，长春 130041)；邢力(吉林省人民医院干部病房)
关键词：慢性肺心病；白细胞介素6(IL-6)；外周血单个核细胞(PBMC)
中国老年学杂志000112摘 要 目的 系统地观察老年慢性肺心病患者及正常人外周血单个核细胞(PBMC)自分泌及体外诱生IL-6的动力学变化与感染之间的关系。方法 采用MTT(噻唑蓝)比色法。结果 (1)老年慢性肺心病患者在不同时期、时相及自分泌和体外诱导情况下，PBMC的IL-6水平均明显高于正常人组(P<0.01)；(2)自分泌IL-6水平最高的是24 h的急发期组，显示出高峰前移，它与本组24 h的体外诱因和缓解期组的自分泌水平差异显著(P<0.05)；(3)体外诱生IL-6水平最高的72 h的急发期组，与缓解期组的72 h自分泌和急发期组的24 h诱生水平差异显著(P<0.05)。结论 本实验进一步证实了IL-6与感染密切相关，为IL-6的临床应用提供实验依据，同时有助于预测感染的程度。
, 百拇医药
The kinetics and clinical significance of IL-6 secreted by PBMC in the elderly patients with chronic corpulmonale
Zhang Jie,Yang Zunling,An Jihong et al
(Department of Respiratory The Second College of Norman Bethune University of Medical Sciences,Changchun 130041)
Abstract：The kinetics of IL-6 autosecreted and induced in PBMC of the elderly patients with chronic corpulmorale and healthy persons were investigated systemically.The results showed that the level of IL-6 antosecreted and induced in PBMC of the patients situated in all stages of the diseases were higher than in normal control(P<0.01).The peak of IL-6 autosecreted by PBMC was in acute stage at 24 hours and it was going formard.There was significant difference on IL-6 level whateven between autosecretion and induction at 24 hours and between in acutestage and in remisson stage(P<0.05).The peak of IL-6 induced was in acute stage at 72 hours.There was marked difference between that induced in acute stage and both that autosecreted in remission stage at 72 hours and that induced in acute stage at 24 hours(P<0.05).Above results indicated that there is dose.Connection between IL-6 and the inction.Which proved an experimental evidence for clinical use of IL-6.
, 百拇医药
Key words Chronic corpulmonale Peripheral blood mononuclar cell(PBMC) Interleukin-6(IL-6)
IL-6是一种由免疫细胞和其他多种相关细胞产生的具有广泛免疫调节作用的细胞因子，目前认为其主要功能之一是诱导CTL激活分化T细胞，增强NK和LAK活性〔1〕，Lin等〔2〕报道体内注射IL-6能显著抵抗细菌感染。然而在人体内受感染之后IL-6的分泌状态如何，则可能是机体抗感染的一种反应。本文观察了老年慢性肺心病患者PBMC自分泌和体外诱生IL-6分泌状态，并在不同的病期、时相，与正常人进行了比较，进一步证实了IL-6水平的分泌状态与感染密切相关，而慢性肺心病的发展始终都与感染不可分割，可以说肺心病患者IL-6水平的变化是感染免疫较典型的改变，现将结果报告如下。
1 材料与方法
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1.1 实验材料 (1)IL-6依赖性细胞株MH60，BSF2细胞由日本大阪大学Kishimoto教授惠赠。(2)重组人IL-6：由北京医科大学免疫研究室提供(8×109/10 ng)。(3)IMDM培养基：Sigma公司产品。(4)四甲基偶氮唑蓝(MTT)：瑞士Fluka公司产品。(5)二氧化碳培养箱：美国6100型。(6)DG220酶联免疫检测仪：上海华东电子管厂。
1.2 检测方法
1.2.1 IL-6的诱生方法 取静脉肝素抗凝血5 ml，常规分离PBMC，同时做无刺激原组和CD3单克隆抗体刺激组，置24孔培养板(2 ml/孔)，细胞浓度为1×106/ml，CD3单抗刺激组为全培养基和单抗1∶1 000稀释液各1 ml/孔，无刺激原组为全培养基2 ml/孔。置5%CO2，37℃条件下培养，分别于24 h、48 h、72 h各自收集培养上清，分别测定各时相的IL-6含量(U/ml)。
, 百拇医药
1.2.2 应用MTT方法检测IL-6〔3〕 首先用IMDM培养液洗涤处于对数生长期的MH60，BSF2细胞，以全培养基调整细胞浓度为5×104/ml，置96孔培养板中(100 nl/孔)，加入系列稀释的人重组IL-6或稀释的待测样本100 nl/孔(双复孔)，同时设全培养基和CD3单抗稀释液对照。5%CO2、37℃条件培养40 h，加入MTT 10 nl/孔，继续培养4～6 h，弃上清，加入酸化异丙醇100 nl/孔，吹打，震荡后，待甲月 赞颗粒完全溶解后，在酶联免疫检测仪上读取OD 570 mm值，作标准曲线，并以标准曲线计算出样本中IL-6含量。统计学处理采用t检验法。
1.3 实验对象及分组 正常对照组30例(男17，女13)，为我院退休工作人员体检健康者，平均年龄62.8±7.8岁。慢性肺心病组38例(男18，女20)，其中急发期组17例，缓解期组21例，平均年龄65.8±7.2岁，均为随机检测的我科1994年冬至1995年冬季住院病人，按1997年全国第二次肺心病专业会议修订标准确立诊断。
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2 结果与讨论
2.1 正常对照组PBMC的IL-6自分泌与诱生动力学观察 见表1。表1中可见正常对照组的PBMC的自分泌IL-6水平较低，而且较平稳，随时间推移略有增加，无显著性差异。体外诱生后逐渐升高，72 h增高明显，为68.0±12.5 U/ml，经统计学处理只有72 h两组差异显著(P<0.05)。
目前所报告的正常人IL-6水平值不完全一致，特别是体外诱生动力学的改变有所不同〔4〕，本文的例数有限，特别是老年人与青年人机体免疫状态不同，而且诱导剂的种类不同等因素可影响结果，本实验结果还是较接近的反映了老年人的IL-6分泌特点，但仍有待于进一步探讨。
表1 老年慢性肺心病患者PBMC中IL-6分泌动力学观察(U/ml)
自分泌
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体外诱生
24h
48h
72h
24h
48h
72h
正常对照组
26.0±5.66
29.6±11.8
33.4±8.5
28.1±11.9
32.0±10.8
, 百拇医药
68.0±12.5
急发期
294.9±61.6
210.0±92.0
206.6±90.0
164.0±72.0
205.0±11.5
333.9±92.0
缓解期
122.8±17.4
204.0±173.6
204.8±103.0
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170.0±98.9
227.7±68.8
330.0±110.5
2.2 老年慢性肺心病急发期患者PBMC的IL-6自分泌与诱生动力学观察 表1中可见老年慢性肺心病患者急发期自分泌水平明显增高，还表现出现高峰前移(24 h 294.9±61.6是最高水平，随时间推移有所降低)，体外诱生的IL-6水平也处于高水平，以72 h为最高(333.9±29.0 U/ml)。
由此可见，急发期患者IL-6水平24 h自分泌为最高峰，可能由于感染后激活了细胞因子网络系统，使其功能细胞分泌IL-6达高峰，参加抗感染过程，这时体外诱生后IL-6水平也无增高，甚至低于自分泌水平，可能与其抑制效应有关，随时间推移，自分泌水平自然下降，体外诱生的作用增强，使得24 h和72 h的自分泌与体外诱生水平均显著出明显差异(P<0.05)，急发期的自分泌IL-6高峰前移至24 h，体外诱生的高峰则在72 h之后。
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2.3 老年慢性肺心病缓解期患者PBMC、IL-6自分泌与诱生动力学观察 表1中可见，缓解期患者PBMC的IL-6自分泌水平也较高，体外诱生后逐渐升高，72 h则达到急性期水平，与24 h的自分泌水平相似，与急发期24 h诱生水平相比较差异显著(P<0.01)，自分泌与体外诱生值分别经统计学处理后，72 h的自分泌与体外诱生水平差异显著(P<0.05)。
总之，正常对照组与慢性肺心病组比较，不论是急发期还是缓解期，不论是自分泌还是体外诱生，老年肺心病组IL-6水平明显高于正常对照组，在24 h、48 h、72 h均示差异显著(P<0.01)。这说明肺心病患者由于感染的反复存在，整体的免疫功能处于紊乱状态，IL-6水平的升高可能为感染刺激的持续效应。自分泌的IL-6水平最高的是24 h的急发期组，与正常人和缓解期病人组相比较显示出最高峰前移，它与24 h本组的体外诱生和缓解期的自分泌水平差异显著(P<0.05)；体外诱生水平差异显著(P<0.05)。这提示我们：如果感染很严重或处于急发早期，体内自分泌IL-6水平被细菌等的代谢产物诱导达到最高水平，外界再给予刺激原，可因已有IL-6异常升高而出现暂时抑制效应，由于刺激原的持续存在，使得能够分泌IL-6的细胞最终将其全部释放出来达高峰。随着病情的缓解或时间的推移，自分泌IL-6水平在高峰，如这时再出现新的感染或体外刺激原的诱导，可能再次出现IL-6的分泌高峰。
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实验结果进一步证实了IL-6水平的变化与感染密切相关。动态观察IL-6的水平变化有利于判定病情的进展和预后，自身的免疫状态，为IL-6的临床应用提供实验依据，有关的机制仍有待进一步研究。 作者简介：张捷，女，41岁，副教授，从事慢性肺心病临床免疫学研究
参考文献
1，Mule JJ,Melntosh JK,Jablons DM et al.Antitumor activity of recombinant interleukin-6 in mice.J Exp Med，1990；171：629
2，Liu I,Simpson RJ,Cheers C et al.Recombinant interleukin-6 protects mice against experimental bacterial infection.Infect Immunity，1992；189：958
, 百拇医药
3，Dride D,Lote M,Cuomo AJ.Cytokines in sympotomatis asthme airways.Jallergy Clin Immunol，1992；189：958
4，田志刚，杨贵贞，孙 讷 et al.人白细胞介素6和白细胞介素6 mRNA的诱生动力学.中华微生物学和免疫学杂志，1991；11：49
5，许溟宇，黄 谨，安继红 et al.CD3单抗诱导的T细胞功能检测法.中华医学检验杂志，1994；17：34
收稿日期：1998-03-31
修回日期：1999-02-20, 百拇医药
单位：张捷 杨俊玲 安继红 王秀丽(白求恩医科大学第二临床学院呼吸科，长春 130041)；邢力(吉林省人民医院干部病房)
关键词：慢性肺心病；白细胞介素6(IL-6)；外周血单个核细胞(PBMC)
中国老年学杂志000112摘 要 目的 系统地观察老年慢性肺心病患者及正常人外周血单个核细胞(PBMC)自分泌及体外诱生IL-6的动力学变化与感染之间的关系。方法 采用MTT(噻唑蓝)比色法。结果 (1)老年慢性肺心病患者在不同时期、时相及自分泌和体外诱导情况下，PBMC的IL-6水平均明显高于正常人组(P<0.01)；(2)自分泌IL-6水平最高的是24 h的急发期组，显示出高峰前移，它与本组24 h的体外诱因和缓解期组的自分泌水平差异显著(P<0.05)；(3)体外诱生IL-6水平最高的72 h的急发期组，与缓解期组的72 h自分泌和急发期组的24 h诱生水平差异显著(P<0.05)。结论 本实验进一步证实了IL-6与感染密切相关，为IL-6的临床应用提供实验依据，同时有助于预测感染的程度。
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The kinetics and clinical significance of IL-6 secreted by PBMC in the elderly patients with chronic corpulmonale
Zhang Jie,Yang Zunling,An Jihong et al
(Department of Respiratory The Second College of Norman Bethune University of Medical Sciences,Changchun 130041)
Abstract：The kinetics of IL-6 autosecreted and induced in PBMC of the elderly patients with chronic corpulmorale and healthy persons were investigated systemically.The results showed that the level of IL-6 antosecreted and induced in PBMC of the patients situated in all stages of the diseases were higher than in normal control(P<0.01).The peak of IL-6 autosecreted by PBMC was in acute stage at 24 hours and it was going formard.There was significant difference on IL-6 level whateven between autosecretion and induction at 24 hours and between in acutestage and in remisson stage(P<0.05).The peak of IL-6 induced was in acute stage at 72 hours.There was marked difference between that induced in acute stage and both that autosecreted in remission stage at 72 hours and that induced in acute stage at 24 hours(P<0.05).Above results indicated that there is dose.Connection between IL-6 and the inction.Which proved an experimental evidence for clinical use of IL-6.
, 百拇医药
Key words Chronic corpulmonale Peripheral blood mononuclar cell(PBMC) Interleukin-6(IL-6)
IL-6是一种由免疫细胞和其他多种相关细胞产生的具有广泛免疫调节作用的细胞因子，目前认为其主要功能之一是诱导CTL激活分化T细胞，增强NK和LAK活性〔1〕，Lin等〔2〕报道体内注射IL-6能显著抵抗细菌感染。然而在人体内受感染之后IL-6的分泌状态如何，则可能是机体抗感染的一种反应。本文观察了老年慢性肺心病患者PBMC自分泌和体外诱生IL-6分泌状态，并在不同的病期、时相，与正常人进行了比较，进一步证实了IL-6水平的分泌状态与感染密切相关，而慢性肺心病的发展始终都与感染不可分割，可以说肺心病患者IL-6水平的变化是感染免疫较典型的改变，现将结果报告如下。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 实验材料 (1)IL-6依赖性细胞株MH60，BSF2细胞由日本大阪大学Kishimoto教授惠赠。(2)重组人IL-6：由北京医科大学免疫研究室提供(8×109/10 ng)。(3)IMDM培养基：Sigma公司产品。(4)四甲基偶氮唑蓝(MTT)：瑞士Fluka公司产品。(5)二氧化碳培养箱：美国6100型。(6)DG220酶联免疫检测仪：上海华东电子管厂。
1.2 检测方法
1.2.1 IL-6的诱生方法 取静脉肝素抗凝血5 ml，常规分离PBMC，同时做无刺激原组和CD3单克隆抗体刺激组，置24孔培养板(2 ml/孔)，细胞浓度为1×106/ml，CD3单抗刺激组为全培养基和单抗1∶1 000稀释液各1 ml/孔，无刺激原组为全培养基2 ml/孔。置5%CO2，37℃条件下培养，分别于24 h、48 h、72 h各自收集培养上清，分别测定各时相的IL-6含量(U/ml)。
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1.2.2 应用MTT方法检测IL-6〔3〕 首先用IMDM培养液洗涤处于对数生长期的MH60，BSF2细胞，以全培养基调整细胞浓度为5×104/ml，置96孔培养板中(100 nl/孔)，加入系列稀释的人重组IL-6或稀释的待测样本100 nl/孔(双复孔)，同时设全培养基和CD3单抗稀释液对照。5%CO2、37℃条件培养40 h，加入MTT 10 nl/孔，继续培养4～6 h，弃上清，加入酸化异丙醇100 nl/孔，吹打，震荡后，待甲月 赞颗粒完全溶解后，在酶联免疫检测仪上读取OD 570 mm值，作标准曲线，并以标准曲线计算出样本中IL-6含量。统计学处理采用t检验法。
1.3 实验对象及分组 正常对照组30例(男17，女13)，为我院退休工作人员体检健康者，平均年龄62.8±7.8岁。慢性肺心病组38例(男18，女20)，其中急发期组17例，缓解期组21例，平均年龄65.8±7.2岁，均为随机检测的我科1994年冬至1995年冬季住院病人，按1997年全国第二次肺心病专业会议修订标准确立诊断。
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2 结果与讨论
2.1 正常对照组PBMC的IL-6自分泌与诱生动力学观察 见表1。表1中可见正常对照组的PBMC的自分泌IL-6水平较低，而且较平稳，随时间推移略有增加，无显著性差异。体外诱生后逐渐升高，72 h增高明显，为68.0±12.5 U/ml，经统计学处理只有72 h两组差异显著(P<0.05)。
目前所报告的正常人IL-6水平值不完全一致，特别是体外诱生动力学的改变有所不同〔4〕，本文的例数有限，特别是老年人与青年人机体免疫状态不同，而且诱导剂的种类不同等因素可影响结果，本实验结果还是较接近的反映了老年人的IL-6分泌特点，但仍有待于进一步探讨。
表1 老年慢性肺心病患者PBMC中IL-6分泌动力学观察(U/ml)
自分泌
, 百拇医药
体外诱生
24h
48h
72h
24h
48h
72h
正常对照组
26.0±5.66
29.6±11.8
33.4±8.5
28.1±11.9
32.0±10.8
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68.0±12.5
急发期
294.9±61.6
210.0±92.0
206.6±90.0
164.0±72.0
205.0±11.5
333.9±92.0
缓解期
122.8±17.4
204.0±173.6
204.8±103.0
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170.0±98.9
227.7±68.8
330.0±110.5
2.2 老年慢性肺心病急发期患者PBMC的IL-6自分泌与诱生动力学观察 表1中可见老年慢性肺心病患者急发期自分泌水平明显增高，还表现出现高峰前移(24 h 294.9±61.6是最高水平，随时间推移有所降低)，体外诱生的IL-6水平也处于高水平，以72 h为最高(333.9±29.0 U/ml)。
由此可见，急发期患者IL-6水平24 h自分泌为最高峰，可能由于感染后激活了细胞因子网络系统，使其功能细胞分泌IL-6达高峰，参加抗感染过程，这时体外诱生后IL-6水平也无增高，甚至低于自分泌水平，可能与其抑制效应有关，随时间推移，自分泌水平自然下降，体外诱生的作用增强，使得24 h和72 h的自分泌与体外诱生水平均显著出明显差异(P<0.05)，急发期的自分泌IL-6高峰前移至24 h，体外诱生的高峰则在72 h之后。
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2.3 老年慢性肺心病缓解期患者PBMC、IL-6自分泌与诱生动力学观察 表1中可见，缓解期患者PBMC的IL-6自分泌水平也较高，体外诱生后逐渐升高，72 h则达到急性期水平，与24 h的自分泌水平相似，与急发期24 h诱生水平相比较差异显著(P<0.01)，自分泌与体外诱生值分别经统计学处理后，72 h的自分泌与体外诱生水平差异显著(P<0.05)。
总之，正常对照组与慢性肺心病组比较，不论是急发期还是缓解期，不论是自分泌还是体外诱生，老年肺心病组IL-6水平明显高于正常对照组，在24 h、48 h、72 h均示差异显著(P<0.01)。这说明肺心病患者由于感染的反复存在，整体的免疫功能处于紊乱状态，IL-6水平的升高可能为感染刺激的持续效应。自分泌的IL-6水平最高的是24 h的急发期组，与正常人和缓解期病人组相比较显示出最高峰前移，它与24 h本组的体外诱生和缓解期的自分泌水平差异显著(P<0.05)；体外诱生水平差异显著(P<0.05)。这提示我们：如果感染很严重或处于急发早期，体内自分泌IL-6水平被细菌等的代谢产物诱导达到最高水平，外界再给予刺激原，可因已有IL-6异常升高而出现暂时抑制效应，由于刺激原的持续存在，使得能够分泌IL-6的细胞最终将其全部释放出来达高峰。随着病情的缓解或时间的推移，自分泌IL-6水平在高峰，如这时再出现新的感染或体外刺激原的诱导，可能再次出现IL-6的分泌高峰。
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实验结果进一步证实了IL-6水平的变化与感染密切相关。动态观察IL-6的水平变化有利于判定病情的进展和预后，自身的免疫状态，为IL-6的临床应用提供实验依据，有关的机制仍有待进一步研究。 作者简介：张捷，女，41岁，副教授，从事慢性肺心病临床免疫学研究
参考文献
1，Mule JJ,Melntosh JK,Jablons DM et al.Antitumor activity of recombinant interleukin-6 in mice.J Exp Med，1990；171：629
2，Liu I,Simpson RJ,Cheers C et al.Recombinant interleukin-6 protects mice against experimental bacterial infection.Infect Immunity，1992；189：958
, 百拇医药
3，Dride D,Lote M,Cuomo AJ.Cytokines in sympotomatis asthme airways.Jallergy Clin Immunol，1992；189：958
4，田志刚，杨贵贞，孙 讷 et al.人白细胞介素6和白细胞介素6 mRNA的诱生动力学.中华微生物学和免疫学杂志，1991；11：49
5，许溟宇，黄 谨，安继红 et al.CD3单抗诱导的T细胞功能检测法.中华医学检验杂志，1994；17：34
收稿日期：1998-03-31
修回日期：1999-02-20, 百拇医药