子宫内膜癌中HSP70的表达及其与ER、PR相关性探讨
作者：李春梅 彭芝兰 王和 姚先莹
单位：李春梅 彭芝兰 王和(华西医科大学附属第二医院妇产科 成都 610041)； 姚先莹(华西医科大学附属第一医院病理科)
关键词：子宫内膜癌 HSP70 ER PR 免疫组织化学
重庆医学000103
摘 要：目的：为探讨HSP70与子宫内膜癌预后的关系，肿瘤细胞有HSP70的高度表达。方法：用免疫组化ABC法分别检测44例子宫内膜癌组织HSP70、ER和PR的表达。结果示内膜癌HSP70表达阳性率为56.82%，HSP70随肿瘤细胞分化程度降低HSP70表达升高。结果：内膜癌HSP70表达与PR呈明显负相关。结论：HSP70与PR联合有可能成为内膜癌预后判断的有效指标之一。
Expression of Heat Shock Protein(HSP70) in Endometrial Carcinomas and the Correlation between HSP70 and Sex Steroid Receptor Status
, 百拇医药
Li Chunmei,Pen Zhilan,Wang Huo,et al.
(The Second Hospital,West China University of Medical Sciences,Chengdu,610041)
Abstract：Aim:To determine the HSP70 expression in Endometrial carcinomas and the relationship between HSP70 pathology and sex steroid receptor.Methods:The immunohistochemical reactivities of monoclonal antibody against HSP70,ER and PR were examined in 44 endometrial cacinomas.Results:Expression of HSP70 was found in 56.82% of endometrial carcinomas and was correlated with histological grade.Expression of HSP70 was signficantly inverse correlated with the expression of PR in endometrial carcinomas.Conclusions:The expression of HSP70 combined with the expression of PR might beauseful prognostic factor of endometrial carcinomas .
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Key Words：Endometrial carcinoma HSP70 ER PR Immunohistochemistry(IHC)
热休克蛋白(HSP)是Ritossa在1962年发现在热刺激下生物合成的一组特殊蛋白。近来研究表明除热以外的各种刺激(包括恶性变)可诱导产生HSP。在肿瘤细胞中有HSP70的过度表达，HSP70表达高低与细胞分化程度有关〔1〕，本文检测内膜癌中HSP70的表达，并对HSP70表达与预后关系进行探讨。
1 材料与方法
1.1 实验标本均取自1989年1月～1996年6月我院经手术治疗，病理诊断内膜癌者44例，病理分级为G1、G2、G3。临床分期按1989年FIGO标准。
1.2 免疫组化ABC法检测：切片经二甲苯脱蜡，酒精水化，抗原暴露，用单抗作用过夜，ABC复合物作用后经DAB显色封片观察。每批试验均以PBS液代替一抗设置阴性对照。阳性对照表现为胞浆、胞核均为深棕色颗粒沉着(抗原暴露：HSP70用微波炉暴露法；ER、PR用高压锅抗原修复参照Bankfalvl[2]等的方法，切片置柠檬酸液中，放入高压锅预热5～7分钟，升压7分钟，1.2kPa122℃维持10分钟，缓慢放气降压。)
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1.3 为方便统计分析和阳性率的分析，采用两种计算方法：(1)根据Femandes等文献报道标准[3]，组织化学计分(Histochemistry Score H)H=(i+1)×Pi，其中i是着色的分级(0、1、2)，Pi则是相应的阳性细胞百分数。(2)H值<70为阴性表达，H值≥70为阳性表达。统计分析采用x2检验，直线相关分析。
2 结 果
2.1 子宫内膜癌HSP70表达及其与组织学类型及分级等的关系。
HSP70在内膜癌细胞的胞浆、胞核中均有表达。44例内膜癌HSP70表达阳性例数为25例(56.8%)。
2.1.1 HSP70阳性与内膜癌组织学分级的关系：HSP70阳性在不同细胞分级中出现不同阳性率，由分级性率分别为36.36%、50.00%、90.91%，(G1→G3)HSP70阳采用双向有序等级资料的x2检验，p=0.021，p<0.05，有统计学差异，说明低分化肿瘤细胞的HSP70阳性率最高。
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表1 HSP70表达与癌细胞分级的关系 分级
检查例数
HSP70阳性
阳性率%
p
G1
11
4
36.36
G2
22
11
, http://www.100md.com
50.00
p<0.05
G3
11
10
90.91
合计
44
25
56.82
2.1.2 HSP70阳性与内膜癌组织学类型的关系：研究比较三组的H值，其中用腺鳞癌的腺癌成份H值进行分析，统计学处理无差异，但可看出浆液性乳头状腺癌表达最高77.78%。表2 HSP70表达与组织学类型的关系 分类
, 百拇医药
例数
HSP70阳性
阳性率%
p值
内膜样癌
21
11
52.35
腺鳞癌
12
6
50.00
p=0.1468
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浆液乳头状腺癌
9
7
77.78
腺棘癌
2
1
1/2(未统计)
2.1.3 内膜癌病例的HSP70阳性表达与临床分期、肌层浸润、淋巴结转移等预后相关因素的比较，统计学处理p>0.05，说明HSP70阳性表达与临床分期，肌层浸润及淋巴结转移无关。
2.2 内膜癌组织中ER、PR的表达主要在胞核。44例内膜癌中ER阳性者27例(61.36%)，PR阳性者31例(70.50%)。
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2.3 内膜癌中HSP70与ER、PR表达相关性分析。
2.3.1 44例内膜癌HSP70的H值与PR的H值进行直线相关分析(见表3)。经统计学处理，其相关系数r=-0.3261，得出HSP70与PR的直线回归方程y=111.7492-0.3378x。回归方程经假设检验p=0.0308(p<0.05)，表明内膜癌中HSP70与PR呈负相关。表3 内膜癌HSP70与ER、PR表达相关分析 变量
均数
标准差
x1(PR)
96.8636
40.1379
x2(ER)
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110.2955
54.9662
x(HSP70)
82.0227
41.5801
2.3.2 44例内膜癌HSP70的H值与ER的H值进行相关分析(见表3)。统计学处理作直线相关分析，相关系数的r=-0.0348，相关系数的t检验p>0.05，表明HSP70与ER表达虽呈负相关趋势，但尚不具备统计学差异。
3 讨 论
3.1 HSP70为目前肿癌防治的研究热点之一，在恶性肿癌常出现HSP70的高度表达，HSP70参与肿瘤识别和排斥，在肿瘤的免疫反应中起重要作用，并且有研究发现阻断HSP70的基因表达可抑制肿瘤细胞增生，并诱导凋亡[4，5]。
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3.2 本研究显示在内膜癌中细胞分化程度越低，HSP70的表达越高，表明HSP70的表达随细胞分化程度低而增强，临床上肿瘤细胞分化程度高低与预后有密切关系，故推测HSP70表达与预后有关，即HSP70表达越强患者预后越差。
3.3 HSP70与内膜癌不同组织学类型的关系，尽管本研究中两者无关，但浆液性乳头状腺癌仅9例，本研究中其阳性率最高77.78%，临床上其5年生存率低，恶性程度高，故HSP70与组织学关系有待今后进一步加大样本确定。
大多数内膜癌是一种激素依赖性肿瘤，细胞癌变后其受体的产生和作用受到损害。文献报道HSP70与性激素受体结合形成分子复合体并且影响受体的转录活性[7]。Takanashi[8]在乳腺癌中发现HSP70表达与ER表达有明显相关性，HSP70的过度表达导致雌激素受体水平的显著降低。Nanbu[9]等在内膜癌中发现HSP70与性激素受体(ER、PR)呈负相关(p<0.001)。本研究内膜癌HSP70与PR表达呈负相关，而HSP70与ER的表达有负相关趋势。性激素受体表达与否与内膜癌细胞的分化状态，细胞恶性程度及预后有关，这提示HSP70可能与PR联合成为内膜癌预后指标之一。
, 百拇医药
参考文献
[1]Zhang W,Drach J,Dreeff M,et al. Proliferation of Heamatopoietic cells is accompanied by suppressed expression of heat shock protein 70.Biochem Biophy Res Communi,1992,183(2):733
[2]Bankfalvi A,Navabi H,Bier B,et al.Wet autoclave pretreatment for antigen retrieval in diagnostic immunohistochemistry.J Pathol,1994,74:223
[3]Femandes BJ,Yao XY,Hao Y,et al.DNA content and estrogen receptors in primary carcinomas of the breast.CJS,1991,3414:349
, 百拇医药
[4]Ferrarini MS,Heltais,Zucchi MR,et al.Unusual exprssion and localization of heat shock proteins in human tumor cell.Int J Cancer,1993,51:613
[5]Wei YQ,Zhao X,Yoshitaka K,et al.Induction of apoptosis by quercetin;involvement of heat shock protein.Cancer Res,1994,54:4952
[6]Wang DP,Konishi I,Koshiyama M,et al.Expression of C-erB2 protein and epidermal growth factor receptor in endometrial carcinomas.Cancer,1993,72:2628
, 百拇医药
[7]Schowalter DB,Sullivan WP,Maihle NJ,et al.Characterization of progesterone receptor binding to the 90 and 70-KDa heat shock proteins.J Biol Chem,1991,266:21165
[8]Takanashi S,Nikami T,Watanabe Y,et al.Correlation of heat shock protein 70 exprssion with estrogen receptor levels in invasive human breast cancer.Am J Clin Pathol,1994,101:519
[9]Nanbu K,Kanishi I,Komatsu T,et al.Exprssion of heat shock proteins HSP70 and HSP 90 in endometrial carcinomas.Cancer,1996,77:330, 百拇医药
单位：李春梅 彭芝兰 王和(华西医科大学附属第二医院妇产科 成都 610041)； 姚先莹(华西医科大学附属第一医院病理科)
关键词：子宫内膜癌 HSP70 ER PR 免疫组织化学
重庆医学000103
摘 要：目的：为探讨HSP70与子宫内膜癌预后的关系，肿瘤细胞有HSP70的高度表达。方法：用免疫组化ABC法分别检测44例子宫内膜癌组织HSP70、ER和PR的表达。结果示内膜癌HSP70表达阳性率为56.82%，HSP70随肿瘤细胞分化程度降低HSP70表达升高。结果：内膜癌HSP70表达与PR呈明显负相关。结论：HSP70与PR联合有可能成为内膜癌预后判断的有效指标之一。
Expression of Heat Shock Protein(HSP70) in Endometrial Carcinomas and the Correlation between HSP70 and Sex Steroid Receptor Status
, 百拇医药
Li Chunmei,Pen Zhilan,Wang Huo,et al.
(The Second Hospital,West China University of Medical Sciences,Chengdu,610041)
Abstract：Aim:To determine the HSP70 expression in Endometrial carcinomas and the relationship between HSP70 pathology and sex steroid receptor.Methods:The immunohistochemical reactivities of monoclonal antibody against HSP70,ER and PR were examined in 44 endometrial cacinomas.Results:Expression of HSP70 was found in 56.82% of endometrial carcinomas and was correlated with histological grade.Expression of HSP70 was signficantly inverse correlated with the expression of PR in endometrial carcinomas.Conclusions:The expression of HSP70 combined with the expression of PR might beauseful prognostic factor of endometrial carcinomas .
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Key Words：Endometrial carcinoma HSP70 ER PR Immunohistochemistry(IHC)
热休克蛋白(HSP)是Ritossa在1962年发现在热刺激下生物合成的一组特殊蛋白。近来研究表明除热以外的各种刺激(包括恶性变)可诱导产生HSP。在肿瘤细胞中有HSP70的过度表达，HSP70表达高低与细胞分化程度有关〔1〕，本文检测内膜癌中HSP70的表达，并对HSP70表达与预后关系进行探讨。
1 材料与方法
1.1 实验标本均取自1989年1月～1996年6月我院经手术治疗，病理诊断内膜癌者44例，病理分级为G1、G2、G3。临床分期按1989年FIGO标准。
1.2 免疫组化ABC法检测：切片经二甲苯脱蜡，酒精水化，抗原暴露，用单抗作用过夜，ABC复合物作用后经DAB显色封片观察。每批试验均以PBS液代替一抗设置阴性对照。阳性对照表现为胞浆、胞核均为深棕色颗粒沉着(抗原暴露：HSP70用微波炉暴露法；ER、PR用高压锅抗原修复参照Bankfalvl[2]等的方法，切片置柠檬酸液中，放入高压锅预热5～7分钟，升压7分钟，1.2kPa122℃维持10分钟，缓慢放气降压。)
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1.3 为方便统计分析和阳性率的分析，采用两种计算方法：(1)根据Femandes等文献报道标准[3]，组织化学计分(Histochemistry Score H)H=(i+1)×Pi，其中i是着色的分级(0、1、2)，Pi则是相应的阳性细胞百分数。(2)H值<70为阴性表达，H值≥70为阳性表达。统计分析采用x2检验，直线相关分析。
2 结 果
2.1 子宫内膜癌HSP70表达及其与组织学类型及分级等的关系。
HSP70在内膜癌细胞的胞浆、胞核中均有表达。44例内膜癌HSP70表达阳性例数为25例(56.8%)。
2.1.1 HSP70阳性与内膜癌组织学分级的关系：HSP70阳性在不同细胞分级中出现不同阳性率，由分级性率分别为36.36%、50.00%、90.91%，(G1→G3)HSP70阳采用双向有序等级资料的x2检验，p=0.021，p<0.05，有统计学差异，说明低分化肿瘤细胞的HSP70阳性率最高。
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表1 HSP70表达与癌细胞分级的关系 分级
检查例数
HSP70阳性
阳性率%
p
G1
11
4
36.36
G2
22
11
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50.00
p<0.05
G3
11
10
90.91
合计
44
25
56.82
2.1.2 HSP70阳性与内膜癌组织学类型的关系：研究比较三组的H值，其中用腺鳞癌的腺癌成份H值进行分析，统计学处理无差异，但可看出浆液性乳头状腺癌表达最高77.78%。表2 HSP70表达与组织学类型的关系 分类
, 百拇医药
例数
HSP70阳性
阳性率%
p值
内膜样癌
21
11
52.35
腺鳞癌
12
6
50.00
p=0.1468
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浆液乳头状腺癌
9
7
77.78
腺棘癌
2
1
1/2(未统计)
2.1.3 内膜癌病例的HSP70阳性表达与临床分期、肌层浸润、淋巴结转移等预后相关因素的比较，统计学处理p>0.05，说明HSP70阳性表达与临床分期，肌层浸润及淋巴结转移无关。
2.2 内膜癌组织中ER、PR的表达主要在胞核。44例内膜癌中ER阳性者27例(61.36%)，PR阳性者31例(70.50%)。
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2.3 内膜癌中HSP70与ER、PR表达相关性分析。
2.3.1 44例内膜癌HSP70的H值与PR的H值进行直线相关分析(见表3)。经统计学处理，其相关系数r=-0.3261，得出HSP70与PR的直线回归方程y=111.7492-0.3378x。回归方程经假设检验p=0.0308(p<0.05)，表明内膜癌中HSP70与PR呈负相关。表3 内膜癌HSP70与ER、PR表达相关分析 变量
均数
标准差
x1(PR)
96.8636
40.1379
x2(ER)
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110.2955
54.9662
x(HSP70)
82.0227
41.5801
2.3.2 44例内膜癌HSP70的H值与ER的H值进行相关分析(见表3)。统计学处理作直线相关分析，相关系数的r=-0.0348，相关系数的t检验p>0.05，表明HSP70与ER表达虽呈负相关趋势，但尚不具备统计学差异。
3 讨 论
3.1 HSP70为目前肿癌防治的研究热点之一，在恶性肿癌常出现HSP70的高度表达，HSP70参与肿瘤识别和排斥，在肿瘤的免疫反应中起重要作用，并且有研究发现阻断HSP70的基因表达可抑制肿瘤细胞增生，并诱导凋亡[4，5]。
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3.2 本研究显示在内膜癌中细胞分化程度越低，HSP70的表达越高，表明HSP70的表达随细胞分化程度低而增强，临床上肿瘤细胞分化程度高低与预后有密切关系，故推测HSP70表达与预后有关，即HSP70表达越强患者预后越差。
3.3 HSP70与内膜癌不同组织学类型的关系，尽管本研究中两者无关，但浆液性乳头状腺癌仅9例，本研究中其阳性率最高77.78%，临床上其5年生存率低，恶性程度高，故HSP70与组织学关系有待今后进一步加大样本确定。
大多数内膜癌是一种激素依赖性肿瘤，细胞癌变后其受体的产生和作用受到损害。文献报道HSP70与性激素受体结合形成分子复合体并且影响受体的转录活性[7]。Takanashi[8]在乳腺癌中发现HSP70表达与ER表达有明显相关性，HSP70的过度表达导致雌激素受体水平的显著降低。Nanbu[9]等在内膜癌中发现HSP70与性激素受体(ER、PR)呈负相关(p<0.001)。本研究内膜癌HSP70与PR表达呈负相关，而HSP70与ER的表达有负相关趋势。性激素受体表达与否与内膜癌细胞的分化状态，细胞恶性程度及预后有关，这提示HSP70可能与PR联合成为内膜癌预后指标之一。
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参考文献
[1]Zhang W,Drach J,Dreeff M,et al. Proliferation of Heamatopoietic cells is accompanied by suppressed expression of heat shock protein 70.Biochem Biophy Res Communi,1992,183(2):733
[2]Bankfalvi A,Navabi H,Bier B,et al.Wet autoclave pretreatment for antigen retrieval in diagnostic immunohistochemistry.J Pathol,1994,74:223
[3]Femandes BJ,Yao XY,Hao Y,et al.DNA content and estrogen receptors in primary carcinomas of the breast.CJS,1991,3414:349
, 百拇医药
[4]Ferrarini MS,Heltais,Zucchi MR,et al.Unusual exprssion and localization of heat shock proteins in human tumor cell.Int J Cancer,1993,51:613
[5]Wei YQ,Zhao X,Yoshitaka K,et al.Induction of apoptosis by quercetin;involvement of heat shock protein.Cancer Res,1994,54:4952
[6]Wang DP,Konishi I,Koshiyama M,et al.Expression of C-erB2 protein and epidermal growth factor receptor in endometrial carcinomas.Cancer,1993,72:2628
, 百拇医药
[7]Schowalter DB,Sullivan WP,Maihle NJ,et al.Characterization of progesterone receptor binding to the 90 and 70-KDa heat shock proteins.J Biol Chem,1991,266:21165
[8]Takanashi S,Nikami T,Watanabe Y,et al.Correlation of heat shock protein 70 exprssion with estrogen receptor levels in invasive human breast cancer.Am J Clin Pathol,1994,101:519
[9]Nanbu K,Kanishi I,Komatsu T,et al.Exprssion of heat shock proteins HSP70 and HSP 90 in endometrial carcinomas.Cancer,1996,77:330, 百拇医药