库存全血凝血因子Ⅷ改变的研究
作者：胡丽华 曹奎杰 陈汉华 殷开华
单位：胡丽华(同济医科大学附属协和医院输血科(武汉，430022))；曹奎杰(同济医科大学附属协和医院输血科(武汉，430022))；陈汉华(同济医科大学附属协和医院输血科(武汉，430022))；殷开华(同济医科大学附属协和医院输血科(武汉，430022))
关键词：库血；凝血因子Ⅷ
临床血液学杂志000109 摘要：目的：探讨凝血因子Ⅷ活性(FⅧ：C)在库血存放过程中的改变，以保证高质量采血和输血。方法：采用一期法以进口标化FⅧ作为参照，对存放不同时间的库血进行FⅧ：C测定。结果：FⅧ：C于4℃存放24 h，FⅧ：C改变不明显，至36 h，FⅧ：C迅速下降至原水平的40%～60%。而在原水平的30%～40%持续较长时间。结论：从止血与凝血方面而言，输入最新鲜的血液最为理想，其次为存放<24 h的全血。因子Ⅷ活性改变的观察，为制备成分输血制剂的最佳时机提供了依据。
, http://www.100md.com
Study of the fuctor Ⅷ change in resevered blood
HU Li-hua CAO Kui-jie CHEN Han-hua YING Kai-hua
(Union Hospital,Tongji Medical University,Wuhan 430022)
Abstract：Objective：Exploring the FⅧ activity changes during blood storage to keep high quality blood collection and transfusion.Method：FⅧ：C in stored blood was detected at different time by one stage method with import standlied FⅧ as control.Result：No obvious change was found in 4℃ stored blood for 24 h. Up to 36h,FⅧ：C decreased dramatically to 40%～60% of primary level,than,susteined at 30%～40% of primary level for a long time.Conclusion：Fresh blood (stored in 24h) is reasonable for fractioned blood tranfusion. Observation of FⅧ activity may provide the prove for choice of reasonable stored blood for fractioned blood transfusion.
, 百拇医药
Key words：Storage blood Voagulation Factor-Ⅷ▲
近年来，人类对输血质量的要求越来越高，对血液各种制品的保存技术不断更新。血液成份在保存过程中改变的监测报道也日渐增多，但对凝血成份动态改变的研究尚少有报道。本文报道一组库血凝血因子Ⅷ活性(FⅧ：C)的改变。
1 材料与方法
1.1 试剂
缺因子FⅧ血浆、活化部分凝血活酶(福建太阳生物技术研究所提供No.990308)；25 mmol/L，氯化钙；FⅧ标准参考血浆(法国Stago公司，No.982082)。CPDA血袋：广州血液中心监制，pH 6.5，No.9901041。
1.2 试验方法
, 百拇医药 一期法凝血FⅧ：C测定是利用在缺因子Ⅷ血浆中加入适度稀释之标准参考血浆或受检血浆(1∶10稀释)，同条件下测定活化部分凝血活酶试验(APTT)，利用标准血浆APTT凝固时间与相应的FⅧ水平，绘制标准曲线或以回归方程计算受检血浆FⅧ：C水平。
1.3 仪器
ACL-200型全自动血液凝固检测仪。
1.4 研究对象
CPDA抗凝全血，计15份，其中“A”型血3份，“B”型血7份，“O”型血5份，男7份，女8份，年龄18～50岁。
1.5 采样方式
抽血即刻分别取15份全血，于4℃ 3 500 r/min，离心15 min，取上层血浆约0.5 ml，置-70℃深低温保存待测，CPDA库血4℃保存于12 h，24 h至第3天各取上存血浆同上保存，第4～10天每24 h取样保存，第12～24天，第48 h采上层血浆1次，保存待测。
, 百拇医药
2 结果
①结果分组情况：由于观察时间较长，而且FⅧ：C水平在降低至一定程度后趋于稳定，特将所得结果分段处理：0时(采血即刻)，12 h，24 h，36 h，48 h，60 h，72 h，第3，4，5，10，22，30，34天，13个时段，并加以分析比较。②15份CPDA全血4℃存放13个段FⅧ：C改变情况见表1。③各时段动态观察FⅧ：C下降百分率，见表1。
表1 CPDA全血4℃存放FⅧ∶C改变情况
检测时段/d
0
0.5
1
1.5
, http://www.100md.com 2
2.5
3
4
5
10
22
30
34
FⅧ∶C
80.2
81.1
72.9
43.7
, http://www.100md.com
38.7
34.7
38.6
36.4
29.4
28.6
30.3
28.1
23.1
下降率%
-1.1
9.1
45.5
, 百拇医药
51.7
56.7
51.9
54.6
63.3
64.3
62.2
65.0
71.2
④库血4℃存放，其中6例、12 h后FⅧ：C明显较0时增高(0时：70.7±8.04，12 h：94.5±16.9，n=6，P<0.05)，占总观察数40.0%。⑤所观察血样中有6例0时因子FⅧ：C水平<70% 6份，≥70% 7份，>90% 2份；分别占总份数40.0%，46.7%，13.3%。⑥A、B、O三型下降程度差异无显著性(P>0.05)，且有良好的相关性(r=0.9，P<0.001)。⑦结果经t检验和相关性分析处理。
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3 讨论
3.1 库血存放不同时段FⅧ：C改变的意义
本组资料显示，FⅧ：C在4℃存放12 h，24 h之FⅧ：C水平，与抽血即刻比较差异无显著意义(P>0.05)。这与文献报道〔1〕相符。但由动态改变曲线可以看出，在24 h时段已有明显下降。至36 h FⅧ：C水平迅速下降至原水平的40%～60%。随后在原水平的40%～30%持续数天，可测得最低点是20%～30%。据报道〔1〕，ACD全血4℃存放24 h FⅧ：C水平即可丧失50%。以上研究表明，FⅧ：C在体外半衰期为8～12 h，这是FⅧ：C活性丧失的主要原因，另一原因可能是血液离体后FⅧ在接触异物表面后不同程度被激活，转变为FⅧa由此血液内可形成微量凝血酶，后者可激活FⅧ并随即使其失活。另外，血液保存液的pH值对保持FⅧ的水平也有一定影响。Vermeer等〔2〕报道〔3〕用新鲜全血、存放24～48 h全血与冻干血浆等做体内输注，采用活化的部分凝血活酶时间、凝血酶原时间等凝血指标进行监测发现，新鲜全血与存放24～48 h全血明显优于冻干血浆。近年来国内日趋重视成分输血，国外成分输血已占输血量的90%以上。因此成份输血制品的制备质量至关重要，因子Ⅷ活性的改变为掌握制备工作的最佳时机提供了依据。
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库血存放至24 h后FⅧ：C迅速下降，此后在同一水平持续较长时间，直至第34天，也未见FⅧ：C水平降至10%以下。其原因有待进一步探讨。可能原因是与目前测定方法灵敏度有关。
3.2 0时全血FⅧ：C水平差异的意义
本组检测可见0时全血FⅧ：C>90%仅2份，而<70%有6份，占40.0%，其原因虽与献血者原FⅧ：C水平有关，但同时应该考虑到采血过程、采血后处理、室温高低、取血后在室温中放置时间，以及保存液的pH值的恒定等因素对FⅧ的影响。本组采用的CPDA保存液pH 6.5。
3.3 库存血FⅧ水平增高的原因
本组测定资料发现：15份血样中6份FⅧ水平在放存12 h后有明显升高(P<0.05)。其原因可能是在存放期间由于血液在体外的缓慢激活，有活性的FⅧ水平增多所致；这也是FⅧ：C水平徒然下降的原因之一。
, 百拇医药
3.4 其他因素
本资料提示，A、B、O血型0时和存放全时段相对应之FⅧ：C水平差异无显著意义(P>0.05)，而且其下降趋势有良好的相关性(r=0.90，P<0.01)，提示A、B、O血型凝血有关成份在存放中改变差异性无显著。但因本组样本量较小，尚难定论，有待进一步探讨。■
参考文献：
[1]柏乃实，主编.血液保存.上海：上海科学技术出版社，1981.253～253
[2]Vermeer C, Soute B A, Ater G, et al. Contributions to the optimal use of human blood,stablity of blood coagulation factor Ⅷ during collection and storage of whole blood and plasma. Vox sang,1976,31(1,Suppl)：55～57
[3]Manno C S,Hedlerg K W, Kim H C. Bunin G R, et al. Comparison of the hemostastic effects of frest whole blood. Stored whole blood. and components after open heart surgery in children. Blood,1991,Mar 1,77：930～936
收稿 1999-10-25, 百拇医药
单位：胡丽华(同济医科大学附属协和医院输血科(武汉，430022))；曹奎杰(同济医科大学附属协和医院输血科(武汉，430022))；陈汉华(同济医科大学附属协和医院输血科(武汉，430022))；殷开华(同济医科大学附属协和医院输血科(武汉，430022))
关键词：库血；凝血因子Ⅷ
临床血液学杂志000109 摘要：目的：探讨凝血因子Ⅷ活性(FⅧ：C)在库血存放过程中的改变，以保证高质量采血和输血。方法：采用一期法以进口标化FⅧ作为参照，对存放不同时间的库血进行FⅧ：C测定。结果：FⅧ：C于4℃存放24 h，FⅧ：C改变不明显，至36 h，FⅧ：C迅速下降至原水平的40%～60%。而在原水平的30%～40%持续较长时间。结论：从止血与凝血方面而言，输入最新鲜的血液最为理想，其次为存放<24 h的全血。因子Ⅷ活性改变的观察，为制备成分输血制剂的最佳时机提供了依据。
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Study of the fuctor Ⅷ change in resevered blood
HU Li-hua CAO Kui-jie CHEN Han-hua YING Kai-hua
(Union Hospital,Tongji Medical University,Wuhan 430022)
Abstract：Objective：Exploring the FⅧ activity changes during blood storage to keep high quality blood collection and transfusion.Method：FⅧ：C in stored blood was detected at different time by one stage method with import standlied FⅧ as control.Result：No obvious change was found in 4℃ stored blood for 24 h. Up to 36h,FⅧ：C decreased dramatically to 40%～60% of primary level,than,susteined at 30%～40% of primary level for a long time.Conclusion：Fresh blood (stored in 24h) is reasonable for fractioned blood tranfusion. Observation of FⅧ activity may provide the prove for choice of reasonable stored blood for fractioned blood transfusion.
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Key words：Storage blood Voagulation Factor-Ⅷ▲
近年来，人类对输血质量的要求越来越高，对血液各种制品的保存技术不断更新。血液成份在保存过程中改变的监测报道也日渐增多，但对凝血成份动态改变的研究尚少有报道。本文报道一组库血凝血因子Ⅷ活性(FⅧ：C)的改变。
1 材料与方法
1.1 试剂
缺因子FⅧ血浆、活化部分凝血活酶(福建太阳生物技术研究所提供No.990308)；25 mmol/L，氯化钙；FⅧ标准参考血浆(法国Stago公司，No.982082)。CPDA血袋：广州血液中心监制，pH 6.5，No.9901041。
1.2 试验方法
, 百拇医药 一期法凝血FⅧ：C测定是利用在缺因子Ⅷ血浆中加入适度稀释之标准参考血浆或受检血浆(1∶10稀释)，同条件下测定活化部分凝血活酶试验(APTT)，利用标准血浆APTT凝固时间与相应的FⅧ水平，绘制标准曲线或以回归方程计算受检血浆FⅧ：C水平。
1.3 仪器
ACL-200型全自动血液凝固检测仪。
1.4 研究对象
CPDA抗凝全血，计15份，其中“A”型血3份，“B”型血7份，“O”型血5份，男7份，女8份，年龄18～50岁。
1.5 采样方式
抽血即刻分别取15份全血，于4℃ 3 500 r/min，离心15 min，取上层血浆约0.5 ml，置-70℃深低温保存待测，CPDA库血4℃保存于12 h，24 h至第3天各取上存血浆同上保存，第4～10天每24 h取样保存，第12～24天，第48 h采上层血浆1次，保存待测。
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2 结果
①结果分组情况：由于观察时间较长，而且FⅧ：C水平在降低至一定程度后趋于稳定，特将所得结果分段处理：0时(采血即刻)，12 h，24 h，36 h，48 h，60 h，72 h，第3，4，5，10，22，30，34天，13个时段，并加以分析比较。②15份CPDA全血4℃存放13个段FⅧ：C改变情况见表1。③各时段动态观察FⅧ：C下降百分率，见表1。
表1 CPDA全血4℃存放FⅧ∶C改变情况
检测时段/d
0
0.5
1
1.5
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2.5
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FⅧ∶C
80.2
81.1
72.9
43.7
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34.7
38.6
36.4
29.4
28.6
30.3
28.1
23.1
下降率%
-1.1
9.1
45.5
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51.7
56.7
51.9
54.6
63.3
64.3
62.2
65.0
71.2
④库血4℃存放，其中6例、12 h后FⅧ：C明显较0时增高(0时：70.7±8.04，12 h：94.5±16.9，n=6，P<0.05)，占总观察数40.0%。⑤所观察血样中有6例0时因子FⅧ：C水平<70% 6份，≥70% 7份，>90% 2份；分别占总份数40.0%，46.7%，13.3%。⑥A、B、O三型下降程度差异无显著性(P>0.05)，且有良好的相关性(r=0.9，P<0.001)。⑦结果经t检验和相关性分析处理。
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3 讨论
3.1 库血存放不同时段FⅧ：C改变的意义
本组资料显示，FⅧ：C在4℃存放12 h，24 h之FⅧ：C水平，与抽血即刻比较差异无显著意义(P>0.05)。这与文献报道〔1〕相符。但由动态改变曲线可以看出，在24 h时段已有明显下降。至36 h FⅧ：C水平迅速下降至原水平的40%～60%。随后在原水平的40%～30%持续数天，可测得最低点是20%～30%。据报道〔1〕，ACD全血4℃存放24 h FⅧ：C水平即可丧失50%。以上研究表明，FⅧ：C在体外半衰期为8～12 h，这是FⅧ：C活性丧失的主要原因，另一原因可能是血液离体后FⅧ在接触异物表面后不同程度被激活，转变为FⅧa由此血液内可形成微量凝血酶，后者可激活FⅧ并随即使其失活。另外，血液保存液的pH值对保持FⅧ的水平也有一定影响。Vermeer等〔2〕报道
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库血存放至24 h后FⅧ：C迅速下降，此后在同一水平持续较长时间，直至第34天，也未见FⅧ：C水平降至10%以下。其原因有待进一步探讨。可能原因是与目前测定方法灵敏度有关。
3.2 0时全血FⅧ：C水平差异的意义
本组检测可见0时全血FⅧ：C>90%仅2份，而<70%有6份，占40.0%，其原因虽与献血者原FⅧ：C水平有关，但同时应该考虑到采血过程、采血后处理、室温高低、取血后在室温中放置时间，以及保存液的pH值的恒定等因素对FⅧ的影响。本组采用的CPDA保存液pH 6.5。
3.3 库存血FⅧ水平增高的原因
本组测定资料发现：15份血样中6份FⅧ水平在放存12 h后有明显升高(P<0.05)。其原因可能是在存放期间由于血液在体外的缓慢激活，有活性的FⅧ水平增多所致；这也是FⅧ：C水平徒然下降的原因之一。
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3.4 其他因素
本资料提示，A、B、O血型0时和存放全时段相对应之FⅧ：C水平差异无显著意义(P>0.05)，而且其下降趋势有良好的相关性(r=0.90，P<0.01)，提示A、B、O血型凝血有关成份在存放中改变差异性无显著。但因本组样本量较小，尚难定论，有待进一步探讨。■
参考文献：
[1]柏乃实，主编.血液保存.上海：上海科学技术出版社，1981.253～253
[2]Vermeer C, Soute B A, Ater G, et al. Contributions to the optimal use of human blood,stablity of blood coagulation factor Ⅷ during collection and storage of whole blood and plasma. Vox sang,1976,31(1,Suppl)：55～57
[3]Manno C S,Hedlerg K W, Kim H C. Bunin G R, et al. Comparison of the hemostastic effects of frest whole blood. Stored whole blood. and components after open heart surgery in children. Blood,1991,Mar 1,77：930～936
收稿 1999-10-25, 百拇医药