大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的电子顺磁共振观察
作者：杨国华 杨春珠 李志海 孟庆刚 孙琪
单位：哈尔滨医科大学第一临床医学院急创外科 150001
关键词：
中华创伤杂志000120 采用超氧化物岐化酶(SOD)等氧自由基清除剂，对皮瓣缺血再灌注损伤的保护性作用研究，已有文献[1]报道，从而间接证明皮瓣缺血再灌注损伤是由氧自由基介导的[2]。笔者应用电子顺磁共振技术对大鼠腹壁岛状皮瓣在缺血再灌注后所产生的氧自由基进行了直接检测[3]。报告如下。
材料与方法
1.动物模型：体重240～270 g的雄性SD大鼠11只，随机分为两组，其中再灌注组6只，对照组5只。用质量浓度为20 g/L的戊巴比妥钠40 mg/kg大鼠腹腔注射麻醉。在大鼠下腹壁设计3 cm×3 cm的含腹壁浅动、静脉的岛状皮瓣。再灌注组用15 g重的血管夹同时阻断动、静脉4 h，再灌注2 min。对照组则不阻断血管。1 min内迅速取皮瓣组织填充于样本管中，置入液氮冷冻待测。
, 百拇医药
2.仪器及参数：ER200D-SRC电子顺磁共振仪(ERR, 德国)，微波频率9.65 CHZ，微波功率SP为10 mW，调制频率100 KHZ，调制幅度0.5 mT，放大倍数GN 为2.5ES(mm)。将ERR仪的谐振腔温调至-100℃，放入样本管，待温度平稳后测试氧自由基波谱(ERS)。
结 果
结果见图1。再灌注组于样本制作好后5 min及45 min测定O峰值(G因子值分别为2.02 4和2.00 4)分别为26，18 mm，是氧自由基的信号波峰。S峰(G因子值为2.001 4)是半醌自由基信号波峰。与其他文献[4]报道相近。对照组无自由基波峰显示。
图1 大鼠浅筋膜皮瓣缺血、再灌注ERS波谱(O为氧自由基波谱峰，S为半醌基波谱峰，a为再灌注5 min ERS波谱，b为再灌注45 min ERS 波谱)
, 百拇医药
讨 论
实验结果显示：皮瓣缺血再灌注后产生大量的氧自由基。一般认为再灌注后产生的氧自由基，主要来自黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统。也有人认为主要来源于线粒体呼吸链反应[5]。
再灌注2 min样本取材后，在5 min检测的a曲线与45 min重测的b曲线显示：氧自由基十分活跃，-100℃ 的液氮温度也终止不了其衰减。因此，取材后应尽快检测，不能储存较多样本一并检测。样本管制备需要操作十分熟练外，还需要有合适的皮瓣组织来源。笔者选择大鼠浅筋膜岛状皮瓣。该皮瓣质地柔软饱满，组织构成相对单一，取材操作方便易行。此皮瓣不仅是典型的再灌注皮瓣，也是非常理想的ERS检测模型。
参考文献：
[1]Noguchi N, Niki E. Dynamics of free radical formation free the reaction of peroxides with hemaproteins as studied by stopped flow chemiluminescence. Free Radic Res,1995,23:329-338.
, http://www.100md.com
[2]毛运春，吴念，孙伯华.氧自由基对肌皮瓣缺血再灌注的损伤及维生素C对损伤的防护.中华整形与烧伤外科杂志，1998，14:118-121.
[3]宋雷风，李宝春，宁茂华.自由基踪迹检测在急性脑血管病中的应用.中国急救医学，1995，15:24-25.
[4]程时，赵保路，唐朝枢.离体大鼠心肌缺血后再灌注损伤及保护.中国循环杂志，1990，5:322-323.
[5]Suziki S, Yoshioka N, Isshilki N, et al. Involvement of reactive oxygen. Species in postischemic flap necrosis and its prevention antioxidants. J Plast Surg(Br), 1991，44:130-131.
收稿日期：1999-03-06, http://www.100md.com
单位：哈尔滨医科大学第一临床医学院急创外科 150001
关键词：
中华创伤杂志000120 采用超氧化物岐化酶(SOD)等氧自由基清除剂，对皮瓣缺血再灌注损伤的保护性作用研究，已有文献[1]报道，从而间接证明皮瓣缺血再灌注损伤是由氧自由基介导的[2]。笔者应用电子顺磁共振技术对大鼠腹壁岛状皮瓣在缺血再灌注后所产生的氧自由基进行了直接检测[3]。报告如下。
材料与方法
1.动物模型：体重240～270 g的雄性SD大鼠11只，随机分为两组，其中再灌注组6只，对照组5只。用质量浓度为20 g/L的戊巴比妥钠40 mg/kg大鼠腹腔注射麻醉。在大鼠下腹壁设计3 cm×3 cm的含腹壁浅动、静脉的岛状皮瓣。再灌注组用15 g重的血管夹同时阻断动、静脉4 h，再灌注2 min。对照组则不阻断血管。1 min内迅速取皮瓣组织填充于样本管中，置入液氮冷冻待测。
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2.仪器及参数：ER200D-SRC电子顺磁共振仪(ERR, 德国)，微波频率9.65 CHZ，微波功率SP为10 mW，调制频率100 KHZ，调制幅度0.5 mT，放大倍数GN 为2.5ES(mm)。将ERR仪的谐振腔温调至-100℃，放入样本管，待温度平稳后测试氧自由基波谱(ERS)。
结 果
结果见图1。再灌注组于样本制作好后5 min及45 min测定O峰值(G因子值分别为2.02 4和2.00 4)分别为26，18 mm，是氧自由基的信号波峰。S峰(G因子值为2.001 4)是半醌自由基信号波峰。与其他文献[4]报道相近。对照组无自由基波峰显示。
图1 大鼠浅筋膜皮瓣缺血、再灌注ERS波谱(O为氧自由基波谱峰，S为半醌基波谱峰，a为再灌注5 min ERS波谱，b为再灌注45 min ERS 波谱)
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讨 论
实验结果显示：皮瓣缺血再灌注后产生大量的氧自由基。一般认为再灌注后产生的氧自由基，主要来自黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统。也有人认为主要来源于线粒体呼吸链反应[5]。
再灌注2 min样本取材后，在5 min检测的a曲线与45 min重测的b曲线显示：氧自由基十分活跃，-100℃ 的液氮温度也终止不了其衰减。因此，取材后应尽快检测，不能储存较多样本一并检测。样本管制备需要操作十分熟练外，还需要有合适的皮瓣组织来源。笔者选择大鼠浅筋膜岛状皮瓣。该皮瓣质地柔软饱满，组织构成相对单一，取材操作方便易行。此皮瓣不仅是典型的再灌注皮瓣，也是非常理想的ERS检测模型。
参考文献：
[1]Noguchi N, Niki E. Dynamics of free radical formation free the reaction of peroxides with hemaproteins as studied by stopped flow chemiluminescence. Free Radic Res,1995,23:329-338.
, http://www.100md.com
[2]毛运春，吴念，孙伯华.氧自由基对肌皮瓣缺血再灌注的损伤及维生素C对损伤的防护.中华整形与烧伤外科杂志，1998，14:118-121.
[3]宋雷风，李宝春，宁茂华.自由基踪迹检测在急性脑血管病中的应用.中国急救医学，1995，15:24-25.
[4]程时，赵保路，唐朝枢.离体大鼠心肌缺血后再灌注损伤及保护.中国循环杂志，1990，5:322-323.
[5]Suziki S, Yoshioka N, Isshilki N, et al. Involvement of reactive oxygen. Species in postischemic flap necrosis and its prevention antioxidants. J Plast Surg(Br), 1991，44:130-131.
收稿日期：1999-03-06, http://www.100md.com