肿节风片中异皮定含量的高效液相色谱法研究
作者：周国平 刘红宇 王汉章 徐天华 吴丽萍
单位：周国平 刘红宇(江西省药品检验所 南昌 330046)；王汉章 徐天华 吴丽萍(江西贵溪制药厂 贵溪 335400)
关键词：肿节风片；异岑皮定；高效液相色谱法
药物分析杂志000105 摘 要：目的：建立肿节风片含量测定方法。方法：采用μ-BondapakTMC18柱，乙腈-0.1%磷酸(20∶80)为流动相，检测波长344 nm。结果：该法平均回收率为97.9%，RSD为1.6%(n=5)。结论：该法操作简便易行，可供本品质量控制用。
A Study on the Determination of Isofraxidin
in Zhongjiefeng Tablet by HPLC
, 百拇医药
Zhou Guoping Liu Hongyu Wang Hanzhang
(Jiangxi Province Institute for Drug Control,Nanchang 330046)
Xu Tianhua Wu Liping
(Jiangxi Guixi Pharmaceutical Factory,Guixi 335400)
Abstract：Objective：The method of the determination of isofraxidin in Zhongjiefeng tablet is developed.Method:This method used μ-BondapakTM C18 column,acetonitrile -0.1% phosphoric acid solution (20∶80) as mobile phase and 344 nm as detection wavelength.Result:The mean recovery was 97.9% and RSD=1.6%(n=5).Conclusion:This method is simple and easy to do.It may be adopted for quality control of this drug.
, 百拇医药
Key words：Zhongjiefeng tablet,isofraxidin,HPLC▲
肿节风片是由肿节风[Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai]提取加工制成的片剂。具有消肿散结，清热解毒之功效。用于治疗肺炎、阑尾炎、蜂窝组织炎，大剂量用于肿瘤。为了提高2000年版中国药典该片剂的质量标准，选其抗菌消炎[1]、抗肿瘤[2]有效成分异
皮定(Isofraxidin)为含量测定指标，建立了含量测定方法。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪：510泵，486多功能紫外检测器，740数据处理机。
试剂：乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为去离子水。
, http://www.100md.com
样品：肿节风片(每片0.25 g)、去肿节风阴性样品及肿节风浸膏均由江西贵溪制药厂提供。
对照品的制备和鉴定：取肿节风浸膏加醋酸乙酯萃取，回收溶剂，所得提取物经反复硅胶柱层析和无水乙醇重结晶，得异皮定结晶。经鉴定为黄色柱状结晶，紫外光灯下呈兰色荧光，加碱使荧光增强并转变为绿色。熔点148～149 ℃。UVλ甲醇max344，277。IR γKBrmaxcm-13 340，1 710，1 615，1 580，1 500。1HNMR(CDCl3)δppm3.93，4.02，6.25，6.73，7.70，6.25～6.26。13CNMRδppm161.4，144.3，103.3，112.0，143.4，145.3，142.9，134.4，110.6，60.9，56.0。以上数据与文献报道基本一致[2]，并经HPLC面积归一法标化，其纯度为99.2%。
, 百拇医药
2 色谱条件
色谱柱：μ-BondapakTMC18分析柱(300 mm×4.6 mm，10 μm)，流动相：乙腈-0.1%磷酸(20∶80)，流速：0.8 mL.min-1，检测波长344 nm，进样量：20 μL。在本色谱条件下，色谱图见图1，结果表明，对照品峰与阴性溶液峰没有重叠。
图1 高效液相色谱图
A.异皮定对照品 B.样品 C.阴性对照 1.异皮定
, 百拇医药
3 方法学考察
3.1 线性关系 精密称取异皮定对照品17.5 mg，置500 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再分别精密吸取1，2，3，5，10，15 mL，分别置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取各溶液20 μL，注入液相色谱仪，测定其峰面积积分值。以进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：
Y=3 873 745.9X-4 637.3 r=0.999 9
异皮定在0.028～0.42 μg之间呈良好的线性。
3.2 精密度试验 精密吸取4.2 μg.mL-1异皮定对照品溶液20 μL注入液相色谱仪，重复进样5次，测定峰面积，计算RSD为1.1%(n=5)。
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3.3 重现性试验 称取样品粉末约25 mg，精密称定，共取5份，按“样品测定”项下方法提取、测定，测得平均含量为2.265 mg.g-1，RSD为0.6%(n=5)。
3.4 加样回收率试验 取已测含量的样品(批号 980728)粉末约12 mg，精密称定，精密添加异皮定对照品27.8 μg，按“样品测定”项下方法提取、测定，计算平均回收率为97.9%，RSD为1.6%(n=5)。
3.5 样品测定 取肿节风片10片，除去糖衣，研细，称取25 mg，精密称定，加水10 mL，超声处理(功率300 W，25 kHz)10 min，转移至分液漏斗中，加醋酸乙酯提取5次，每次10 mL，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.5 μm微孔滤膜滤过，作为样品溶液。精密吸取样品溶液和4.2 μg.mL-1对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定，按外标一点法计算样品中异皮定的含量，结果见表1。
, 百拇医药
表1 样品测定结果(每片毫克数，n=3) 批号
含量
RSD/%
980728
0.683
0.3
980729
0.714
0.8
980730
0.675
1.0
, 百拇医药 4 小结与讨论
关于样品提取方法，进行了下列实验摸索：
(1)取样品粉末25 mg，加氯仿20 mL加热回流，由于样品悬浮在液面上，提取效率不一致，重现性很差。
(2)取样品粉末25 mg，加氯仿进行索氏提取试验，提取5 h，测出的异皮定的含量较低，如果加长时间提取，则不利于快速检验的原则。
(3)取样品粉末25 mg，加醋酸乙酯25 mL，超声提取1.5 h，进行测定，结果异皮定含量较低，且提取溶液颜色较深。
(4)根据异皮定易溶于热水的原理，采用加水超声溶解后，加醋酸乙酯振摇提取，并以醋酸乙酯提取次数为考察指标，测定结果依次为1.362，1.773，1.988，2.183，2.276，2.276 mg.g-1(n=3)，试验结果表明，提取5次后，异皮定提取完全。■
参考文献：
[1]江西省贵溪县卫生局肿节风科研领导小组.草药肿节风的研究.中草药通讯，1972，(6)：41
[2]王爱琴，谢平，易扬华.肿节风中香豆精类成分的研究.中草药，1983，14(6)：37
收稿日期：1999-01-29, http://www.100md.com
单位：周国平 刘红宇(江西省药品检验所 南昌 330046)；王汉章 徐天华 吴丽萍(江西贵溪制药厂 贵溪 335400)
关键词：肿节风片；异岑皮定；高效液相色谱法
药物分析杂志000105 摘 要：目的：建立肿节风片含量测定方法。方法：采用μ-BondapakTMC18柱，乙腈-0.1%磷酸(20∶80)为流动相，检测波长344 nm。结果：该法平均回收率为97.9%，RSD为1.6%(n=5)。结论：该法操作简便易行，可供本品质量控制用。
A Study on the Determination of Isofraxidin
in Zhongjiefeng Tablet by HPLC
, 百拇医药
Zhou Guoping Liu Hongyu Wang Hanzhang
(Jiangxi Province Institute for Drug Control,Nanchang 330046)
Xu Tianhua Wu Liping
(Jiangxi Guixi Pharmaceutical Factory,Guixi 335400)
Abstract：Objective：The method of the determination of isofraxidin in Zhongjiefeng tablet is developed.Method:This method used μ-BondapakTM C18 column,acetonitrile -0.1% phosphoric acid solution (20∶80) as mobile phase and 344 nm as detection wavelength.Result:The mean recovery was 97.9% and RSD=1.6%(n=5).Conclusion:This method is simple and easy to do.It may be adopted for quality control of this drug.
, 百拇医药
Key words：Zhongjiefeng tablet,isofraxidin,HPLC▲
肿节风片是由肿节风[Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai]提取加工制成的片剂。具有消肿散结，清热解毒之功效。用于治疗肺炎、阑尾炎、蜂窝组织炎，大剂量用于肿瘤。为了提高2000年版中国药典该片剂的质量标准，选其抗菌消炎[1]、抗肿瘤[2]有效成分异
皮定(Isofraxidin)为含量测定指标，建立了含量测定方法。1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪：510泵，486多功能紫外检测器，740数据处理机。
试剂：乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为去离子水。
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样品：肿节风片(每片0.25 g)、去肿节风阴性样品及肿节风浸膏均由江西贵溪制药厂提供。
对照品的制备和鉴定：取肿节风浸膏加醋酸乙酯萃取，回收溶剂，所得提取物经反复硅胶柱层析和无水乙醇重结晶，得异
皮定结晶。经鉴定为黄色柱状结晶，紫外光灯下呈兰色荧光，加碱使荧光增强并转变为绿色。熔点148～149 ℃。UVλ甲醇max344，277。IR γKBrmaxcm-13 340，1 710，1 615，1 580，1 500。1HNMR(CDCl3)δppm3.93，4.02，6.25，6.73，7.70，6.25～6.26。13CNMRδppm161.4，144.3，103.3，112.0，143.4，145.3，142.9，134.4，110.6，60.9，56.0。以上数据与文献报道基本一致[2]，并经HPLC面积归一法标化，其纯度为99.2%。, 百拇医药
2 色谱条件
色谱柱：μ-BondapakTMC18分析柱(300 mm×4.6 mm，10 μm)，流动相：乙腈-0.1%磷酸(20∶80)，流速：0.8 mL.min-1，检测波长344 nm，进样量：20 μL。在本色谱条件下，色谱图见图1，结果表明，对照品峰与阴性溶液峰没有重叠。
图1 高效液相色谱图
A.异
皮定对照品 B.样品 C.阴性对照 1.异皮定, 百拇医药
3 方法学考察
3.1 线性关系 精密称取异
皮定对照品17.5 mg，置500 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再分别精密吸取1，2，3，5，10，15 mL，分别置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取各溶液20 μL，注入液相色谱仪，测定其峰面积积分值。以进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=3 873 745.9X-4 637.3 r=0.999 9
异
皮定在0.028～0.42 μg之间呈良好的线性。3.2 精密度试验 精密吸取4.2 μg.mL-1异
皮定对照品溶液20 μL注入液相色谱仪，重复进样5次，测定峰面积，计算RSD为1.1%(n=5)。, http://www.100md.com
3.3 重现性试验 称取样品粉末约25 mg，精密称定，共取5份，按“样品测定”项下方法提取、测定，测得平均含量为2.265 mg.g-1，RSD为0.6%(n=5)。
3.4 加样回收率试验 取已测含量的样品(批号 980728)粉末约12 mg，精密称定，精密添加异
皮定对照品27.8 μg，按“样品测定”项下方法提取、测定，计算平均回收率为97.9%，RSD为1.6%(n=5)。3.5 样品测定 取肿节风片10片，除去糖衣，研细，称取25 mg，精密称定，加水10 mL，超声处理(功率300 W，25 kHz)10 min，转移至分液漏斗中，加醋酸乙酯提取5次，每次10 mL，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.5 μm微孔滤膜滤过，作为样品溶液。精密吸取样品溶液和4.2 μg.mL-1对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定，按外标一点法计算样品中异
皮定的含量，结果见表1。, 百拇医药
表1 样品测定结果(每片毫克数，n=3) 批号
含量
RSD/%
980728
0.683
0.3
980729
0.714
0.8
980730
0.675
1.0
, 百拇医药 4 小结与讨论
关于样品提取方法，进行了下列实验摸索：
(1)取样品粉末25 mg，加氯仿20 mL加热回流，由于样品悬浮在液面上，提取效率不一致，重现性很差。
(2)取样品粉末25 mg，加氯仿进行索氏提取试验，提取5 h，测出的异
皮定的含量较低，如果加长时间提取，则不利于快速检验的原则。(3)取样品粉末25 mg，加醋酸乙酯25 mL，超声提取1.5 h，进行测定，结果异
皮定含量较低，且提取溶液颜色较深。(4)根据异
皮定易溶于热水的原理，采用加水超声溶解后，加醋酸乙酯振摇提取，并以醋酸乙酯提取次数为考察指标，测定结果依次为1.362，1.773，1.988，2.183，2.276，2.276 mg.g-1(n=3)，试验结果表明，提取5次后，异皮定提取完全。■参考文献：
[1]江西省贵溪县卫生局肿节风科研领导小组.草药肿节风的研究.中草药通讯，1972，(6)：41
[2]王爱琴，谢平，易扬华.肿节风中香豆精类成分的研究.中草药，1983，14(6)：37
收稿日期：1999-01-29, http://www.100md.com