用葡聚糖离心膜滤法快速诊断败血症
作者：金嵘 李向阳 李方去
单位：金嵘(温州医学院附属第一医院神经药物流行病学研究中心， 浙江 温州 325000)；李向阳(温州医学院附属第二医院检验科， 浙江 温州 325000)；李方去(温州医学院附属第二医院检验科， 浙江 温州 325000)
关键词：败血症；离心膜滤法；葡聚糖
疾病控制杂志000119
【摘 要】 目的 快速分离血液中的细菌。方法 葡聚糖凝聚红细胞后，等密度离心，上清液用0.22 μm微孔滤膜过滤截留细菌、培养。结果 110例血标本采用离心膜滤法和常规血培养法细菌检出率无显著性差异(χ2=0.25,P>0.05)；该两法检验结果有相关关系(χ2=61.64,P<0.05)， r=0.8288；离心膜滤法的细菌检出时间平均为(24.55±9.08) h，明显快于常规血培养法(75.27±12.11) h(t=16.54，P<0.001)。其阳性似然比为75.43，阴性似然比为0.22。结论 离心膜滤法能快速诊断败血症，有较高的灵敏度和特异性。
, http://www.100md.com
【分类号】 R515.3； R446.1 【文献标识码】 A
【文章编号】 1008-6013(2000)01-0052-02
Rapid diagnosis of septicemia with dextran centrifugation and filtration
JIN Rong
(Department of Epidemiology, First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical college, Wenzhou 325000, China)
LI Xiang-yang LI Fang-qu
(Department of Laboratory， Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College, Wenzhou 325000, China)
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective To rapidly isolate bacteria from blood. Methods Blood samples were coagulated with dextran and were centrifuged according to equal density. The supernatant was filtered through 0.22 μm millipore membrane. The filters were then placed on blood agar plates and cultured. Results There was no significant statistical difference between positive rate of dextran-centrifugation and filtration and conventional blood culture method in 110 blood samples(χ2=0.25,P>0.05). r=0.8288. The time of isolating bacteria in blood with dextran-centrifugation and filtration was (24.55±9.08) h, shorter than that isolated with conventional blood culture method (75.27 h±12.11 h) (t=16.54,P<0.001). The positive likelihood ratio and the negative were 75.43 and 0.22 respectively. Conclusions Septicemia can be quickly diagnosed with dextran-centrifugation and filtration. The method has high sensitivity and specificity.
, http://www.100md.com
【Key words】 septicemia; centrifugation and filtration; dextran
血液细菌培养是诊断败血症或菌血症的最可靠指标。然而传统的血液细菌培养方法历时长(需5～7天)且阳性率不高而不能满足现代临床的需要。目前，已有不少快速的血液细菌学检验方法报告[1，2]，但由于不能获得菌落或技术操作复杂繁琐，极易污染，且阳性率不高而不能在临床上推广使用，Lamberg[3]、Mathis[4]等用Ficoll-Hypaque建立了离心膜滤法分离细菌，简化了步骤，提高了速度，但由于Ficoll粘度大，过滤困难，操作起来仍然不容易。分离血液中细菌的葡聚糖离心膜滤法已被建立[5]，在模拟条件下取得了较满意的效果。为了考察其在临床中的实用性，对110例拟诊为败血症患者的血标本进行了临床验证。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 血液标本 来源于温州医学院附属二院110例拟诊为败血症的患者。
1.2 方法 用生理盐水配制4%(W/V)葡聚糖(由浙江省黄岩曙光化工厂提供，MW>7万)溶液，再用76%泛影葡胺调节溶液密度至1.185 g*ml-1，将配制好的葡聚糖——泛影葡胺分离液用无菌滤器过滤分装10 ml至无菌试管中，加入5 ml拟诊为败血症患者的血液，混匀后置于LXJ-Ⅱ型离心机(上海医用分析仪器厂出品)中1 600 rpm离心30 min，取上清液用0.22 μm孔径无菌微孔滤膜(上海医药工业研究所制)过滤，取出滤膜贴于血平板上35℃ 18～24 h，观察滤膜上菌落生长情况；同时以常规血细菌培养作对照。
2 结果
2.1 检出率比较 离心膜滤法和常规血培养法均检出的阳性数为11例，离心膜滤法共检出12例，常规血培养法共检出14例，两种方法的细菌检出率无显著性差异(χ2=0.25，P>0.05)，见表1。
, 百拇医药
表1 离心膜滤法和常规血培养法细菌检出率的比较
Table 1 Comparison of positive rate between dextran-
centrifugation and filtration and conventional blood culture method Dextran-centrifugation
and filtration
Conventional blood culture method
Total
Positive
Negative
, http://www.100md.com
Positive
11
1
12
Negative
3
95
98
Total
14
96
110
χ2=0.25，P>0.05
, http://www.100md.com
离心膜滤法和常规血培养法的细菌检出率有相关关系(χ2=61.64,P<0.05)，相关系数r=0.8288，离心膜滤法的阳性似然比=75.43，阴性似然比=0.22。显示有较好的灵敏度和特异度。
2.2 检出时间比较 离心膜滤法和常规血培养法均阳性的11例标本的细菌检出时间比较，前者(24.55±9.08) h，后者(75.27±12.11) h(
±s)，见表2。
表2 离心膜滤法和常规血培养法细菌检出时间(小时)
Table 2 Comparison of detectable time between dextran-centrifugation
and filtration and conventional blood culture method (hour) No.
, 百拇医药
Dextran-centrifugation
and filtration(h)
Conventional blood
culture method(h)
1
18
60
2
36
84
3
18
, 百拇医药
84
4
18
60
5
36
84
6
18
84
7
18
60
8
, 百拇医药
18
84
9
36
84
10
18
60
11
36
84
t=16.54，P<0.001
3 讨论
, http://www.100md.com
实验显示离心膜滤法和常规血培养法的检测结果有相关关系(P<0.05)，相关系数r=0.8288，其阳性似然比=75.43，阴性似然比=0.22，显示有较好的灵敏度和特异性。该两种方法的细菌检出率无显著性差异(P>0.05)，有1例常规培养法未能检出的标本，用离心膜滤法检出了细菌，这与离心膜滤过除去血浆后，血清中的杀菌物质及抗生素均被清除，细菌的被抑止状态得到了纠正有关[4，6]。
离心膜滤法平均24.55 h内可检出细菌，而常规血培养法平均需75.27 h，检出时间上有显著性差异(P<0.001)。采用离心膜滤法，细菌生长时菌落孤立，一般不需再进行细菌分纯，可直接进行细菌鉴定和体外药敏试验；由于直接在平板上培养，故可对生长的细菌进行计数，用以估计患者感染的程度及治疗效果。可及时给临床提供阳性报告，特别是危重病人抢救时，有利于临床医生早期作出准确的诊断和选择敏感的抗生素；也可以对疾病的严重程度和预后判断提供科学依据。
离心膜滤法的细菌检出时间快，污染机会少，要求的设备条件不高，操作简便易行，尤其适用于中、小型医院血培养工作。
, http://www.100md.com
【基金项目】 温州市科委基金资助项目(KW960002)
【作者简介】 金嵘(1962-)，女，浙江东阳人，副教授，学士，流行病学教研室主任兼中心副主任，主要研究方向：临床流行病学。
【参考文献】
[1]Farmer SG, Komorowski RA. Evaluation of the sterifil lysis-filtration blood culture system [J]. Appl microbiol, 1972,23:500.
[2]Henry NK, Mclimans CA, Wright AJ, et al. Microbiological and clinical evaluation of the isolator lysiscentrifugation blood culture tube [J]. J Clin Microbiol, 1983,17:864.
, 百拇医药
[3]Lemberg RE, Schell RF, Lefrock JL, et al. Detection and quantitation of simulated anaerobic bacteremia by centrifugation and filtration [J]. J Clin Microbiol, 1983,17:856.
[4]Mathis B, Daniel RP, Laurel SA, et al. Detection of bacteria in blood by centrifugation and filtration [J]. J Clin Microbiol, 1991,29:422.
[5]李向阳，杜季梅，金 嵘. 用葡聚糖离心膜滤法快速分离血液中细菌 [J]. 温州医学院学报，1998，28(2)：140～141.
[6]曹月升，冯志山，李素晓，等. 采用离心-过滤法进行快速血培养的实验观察 [J]. 上海医学检验杂志，1995，10(1)：44～45.
(收稿日期 1999-07-05), 百拇医药
单位：金嵘(温州医学院附属第一医院神经药物流行病学研究中心， 浙江 温州 325000)；李向阳(温州医学院附属第二医院检验科， 浙江 温州 325000)；李方去(温州医学院附属第二医院检验科， 浙江 温州 325000)
关键词：败血症；离心膜滤法；葡聚糖
疾病控制杂志000119
【摘 要】 目的 快速分离血液中的细菌。方法 葡聚糖凝聚红细胞后，等密度离心，上清液用0.22 μm微孔滤膜过滤截留细菌、培养。结果 110例血标本采用离心膜滤法和常规血培养法细菌检出率无显著性差异(χ2=0.25,P>0.05)；该两法检验结果有相关关系(χ2=61.64,P<0.05)， r=0.8288；离心膜滤法的细菌检出时间平均为(24.55±9.08) h，明显快于常规血培养法(75.27±12.11) h(t=16.54，P<0.001)。其阳性似然比为75.43，阴性似然比为0.22。结论 离心膜滤法能快速诊断败血症，有较高的灵敏度和特异性。
, http://www.100md.com
【分类号】 R515.3； R446.1 【文献标识码】 A
【文章编号】 1008-6013(2000)01-0052-02
Rapid diagnosis of septicemia with dextran centrifugation and filtration
JIN Rong
(Department of Epidemiology, First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical college, Wenzhou 325000, China)
LI Xiang-yang LI Fang-qu
(Department of Laboratory， Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College, Wenzhou 325000, China)
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective To rapidly isolate bacteria from blood. Methods Blood samples were coagulated with dextran and were centrifuged according to equal density. The supernatant was filtered through 0.22 μm millipore membrane. The filters were then placed on blood agar plates and cultured. Results There was no significant statistical difference between positive rate of dextran-centrifugation and filtration and conventional blood culture method in 110 blood samples(χ2=0.25,P>0.05). r=0.8288. The time of isolating bacteria in blood with dextran-centrifugation and filtration was (24.55±9.08) h, shorter than that isolated with conventional blood culture method (75.27 h±12.11 h) (t=16.54,P<0.001). The positive likelihood ratio and the negative were 75.43 and 0.22 respectively. Conclusions Septicemia can be quickly diagnosed with dextran-centrifugation and filtration. The method has high sensitivity and specificity.
, http://www.100md.com
【Key words】 septicemia; centrifugation and filtration; dextran
血液细菌培养是诊断败血症或菌血症的最可靠指标。然而传统的血液细菌培养方法历时长(需5～7天)且阳性率不高而不能满足现代临床的需要。目前，已有不少快速的血液细菌学检验方法报告[1，2]，但由于不能获得菌落或技术操作复杂繁琐，极易污染，且阳性率不高而不能在临床上推广使用，Lamberg[3]、Mathis[4]等用Ficoll-Hypaque建立了离心膜滤法分离细菌，简化了步骤，提高了速度，但由于Ficoll粘度大，过滤困难，操作起来仍然不容易。分离血液中细菌的葡聚糖离心膜滤法已被建立[5]，在模拟条件下取得了较满意的效果。为了考察其在临床中的实用性，对110例拟诊为败血症患者的血标本进行了临床验证。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 血液标本 来源于温州医学院附属二院110例拟诊为败血症的患者。
1.2 方法 用生理盐水配制4%(W/V)葡聚糖(由浙江省黄岩曙光化工厂提供，MW>7万)溶液，再用76%泛影葡胺调节溶液密度至1.185 g*ml-1，将配制好的葡聚糖——泛影葡胺分离液用无菌滤器过滤分装10 ml至无菌试管中，加入5 ml拟诊为败血症患者的血液，混匀后置于LXJ-Ⅱ型离心机(上海医用分析仪器厂出品)中1 600 rpm离心30 min，取上清液用0.22 μm孔径无菌微孔滤膜(上海医药工业研究所制)过滤，取出滤膜贴于血平板上35℃ 18～24 h，观察滤膜上菌落生长情况；同时以常规血细菌培养作对照。
2 结果
2.1 检出率比较 离心膜滤法和常规血培养法均检出的阳性数为11例，离心膜滤法共检出12例，常规血培养法共检出14例，两种方法的细菌检出率无显著性差异(χ2=0.25，P>0.05)，见表1。
, 百拇医药
表1 离心膜滤法和常规血培养法细菌检出率的比较
Table 1 Comparison of positive rate between dextran-
centrifugation and filtration and conventional blood culture method Dextran-centrifugation
and filtration
Conventional blood culture method
Total
Positive
Negative
, http://www.100md.com
Positive
11
1
12
Negative
3
95
98
Total
14
96
110
χ2=0.25，P>0.05
, http://www.100md.com
离心膜滤法和常规血培养法的细菌检出率有相关关系(χ2=61.64,P<0.05)，相关系数r=0.8288，离心膜滤法的阳性似然比=75.43，阴性似然比=0.22。显示有较好的灵敏度和特异度。
2.2 检出时间比较 离心膜滤法和常规血培养法均阳性的11例标本的细菌检出时间比较，前者(24.55±9.08) h，后者(75.27±12.11) h(
±s)，见表2。表2 离心膜滤法和常规血培养法细菌检出时间(小时)
Table 2 Comparison of detectable time between dextran-centrifugation
and filtration and conventional blood culture method (hour) No.
, 百拇医药
Dextran-centrifugation
and filtration(h)
Conventional blood
culture method(h)
1
18
60
2
36
84
3
18
, 百拇医药
84
4
18
60
5
36
84
6
18
84
7
18
60
8
, 百拇医药
18
84
9
36
84
10
18
60
11
36
84
t=16.54，P<0.001
3 讨论
, http://www.100md.com
实验显示离心膜滤法和常规血培养法的检测结果有相关关系(P<0.05)，相关系数r=0.8288，其阳性似然比=75.43，阴性似然比=0.22，显示有较好的灵敏度和特异性。该两种方法的细菌检出率无显著性差异(P>0.05)，有1例常规培养法未能检出的标本，用离心膜滤法检出了细菌，这与离心膜滤过除去血浆后，血清中的杀菌物质及抗生素均被清除，细菌的被抑止状态得到了纠正有关[4，6]。
离心膜滤法平均24.55 h内可检出细菌，而常规血培养法平均需75.27 h，检出时间上有显著性差异(P<0.001)。采用离心膜滤法，细菌生长时菌落孤立，一般不需再进行细菌分纯，可直接进行细菌鉴定和体外药敏试验；由于直接在平板上培养，故可对生长的细菌进行计数，用以估计患者感染的程度及治疗效果。可及时给临床提供阳性报告，特别是危重病人抢救时，有利于临床医生早期作出准确的诊断和选择敏感的抗生素；也可以对疾病的严重程度和预后判断提供科学依据。
离心膜滤法的细菌检出时间快，污染机会少，要求的设备条件不高，操作简便易行，尤其适用于中、小型医院血培养工作。
, http://www.100md.com
【基金项目】 温州市科委基金资助项目(KW960002)
【作者简介】 金嵘(1962-)，女，浙江东阳人，副教授，学士，流行病学教研室主任兼中心副主任，主要研究方向：临床流行病学。
【参考文献】
[1]Farmer SG, Komorowski RA. Evaluation of the sterifil lysis-filtration blood culture system [J]. Appl microbiol, 1972,23:500.
[2]Henry NK, Mclimans CA, Wright AJ, et al. Microbiological and clinical evaluation of the isolator lysiscentrifugation blood culture tube [J]. J Clin Microbiol, 1983,17:864.
, 百拇医药
[3]Lemberg RE, Schell RF, Lefrock JL, et al. Detection and quantitation of simulated anaerobic bacteremia by centrifugation and filtration [J]. J Clin Microbiol, 1983,17:856.
[4]Mathis B, Daniel RP, Laurel SA, et al. Detection of bacteria in blood by centrifugation and filtration [J]. J Clin Microbiol, 1991,29:422.
[5]李向阳，杜季梅，金 嵘. 用葡聚糖离心膜滤法快速分离血液中细菌 [J]. 温州医学院学报，1998，28(2)：140～141.
[6]曹月升，冯志山，李素晓，等. 采用离心-过滤法进行快速血培养的实验观察 [J]. 上海医学检验杂志，1995，10(1)：44～45.
(收稿日期 1999-07-05), 百拇医药