脐血临床应用前的实验研究
作者：李保罗 陆德琴 杨勤 孙长学 戎笛声 姚窕 陈风军 杜德锋 邹广庆
单位：李保罗(贵阳医学院病理生理学教研室 贵阳 550004)；陆德琴(贵阳医学院病理生理学教研室 贵阳 550004)；杨勤(贵阳医学院病理生理学教研室 贵阳 550004)；孙长学(贵阳医学院附院妇产科)；戎笛声(贵阳医学院学生)；姚窕(贵阳医学院学生)；陈风军(贵阳医学院学生)；杜德锋(贵阳医学院学生)；邹广庆(贵阳医学院学生)
关键词：胎血；血液代用品；贫血
贵阳医学院学报000108 摘 要 对58例脐血红细胞进行了计数和血红蛋白含量测定，并测定乙肝两对半、丙肝抗体、人类免疫缺陷病毒抗体、肝功能及T细胞亚群分类和细菌培养。结果表明无传染病的正常孕妇分娩时的脐血，可作血源供临床使用并能用于治疗多种原因引起的贫血。
中国图书馆分类法分类号 R977.8
, 百拇医药
Experimental Study of Umbilical Cord Blood
Before Clinical Application
Li Baoluo, Lu Deqin, Yang Qin, Xun Changxue, Rong Disheng,Yao Tiao， Chen Fengjun, Du Defeng, Zou Guangqing
Department of Pathophysiology, Guiyang Medical College
The routine HbsAg,anti-HBs,anti-HBc,anti-HbeAg,anti-Hbe，C-hepatitis antibody, HIV antibody and GPT of 58 samples of umbilical cord blood were tested, and the class of T-cell sub-clot and the germiculture were also processed on these bloods. The results showed that the umbilical cord blood of pregnant woman who did not suffer from infectious diseases was not only used by clinic as blood fountain but also used to treat various-anemia.
, 百拇医药
Key word:fetal blood；blood substitates; anemia
脐血是孕妇分娩后残留在脐带和胎盘中的血液，也是胎儿娩出后的废弃物。但是，脐血中除了具有和正常成人静脉血相同的成份外，还含有丰富的造血刺激因子和造血干细胞。因此，将脐血用于临床上需要补充血液的病人和用于治疗造血功能障碍的病人具有重要的价值。1989年美国学者Broxmeyer提出、在法国Sanit Louis医院首次用脐血治疗Fanconi贫血(造血功能障碍)获得成功。以后美、法、澳等国又进行了脐血的临床应用，大部分取得成功。进入90年代，国内也开始对脐血的临床应用进行了研究。我们从1996年6月至1997年8月对贵阳医学院附属医院产科采集的脐血进行了临床应用前的实验研究。
1 材料和方法
1.1 材料 采集脐血58份。产妇均在贵医附院产科住院，足月分娩。产前对产妇进行了乙肝两对半、丙肝、人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)以及肝功能检查，上述检查结 果各项指标正常者为采集对象。
, 百拇医药
1.2 方法 胎儿娩出结扎、剪断脐带后，距脐带断端3厘米处消毒，用自制采血针(连接有10～15 cm长的输液胶管)立即插入脐静脉，脐血流入事先加有肝素溶液的采血瓶(摇匀)，用纱布、玻璃纸封闭采血瓶口。
1.3 检测指标 乙肝两对半、丙肝抗体：采用ELISA法，上海实业科华生物技术有限公司提供试剂盒，贵阳医学院附属医院传染科实验室协助完成；HIV抗体：采用ELISA法，上海实业科华生物技术有限公司提供试剂盒，本室自行完成测定工作；谷-丙转氨酶(GPT)：采用常规肝功能检测方法；T细胞亚群分类测定：采用ELISA法，北京邦定生物医学公司提供试剂盒。操作按说明书；血常规及血涂片：按常规方法进行；细菌培养：每一份脐血标本先经肉汤培养基培养，培养基发生混浊的脐血再进行血平板培养，观察有无菌落生长。贵阳医学院微生物学教研室协助完成。
2 结果
2.1 采血量：58例脐血的采集量为50～120 ml。平均为80 ml。
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2.2 乙肝两对半、丙肝抗体、HIV抗体及GPT检测结果：58例脐血中检测了31例(1个试剂盒的试剂除去对照外，只能检测31例标本)，其中1例抗-HBs弱阳性，其余均为阴性；GPT为0.84卡门单位。
2.3 血常规测定结果：31例脐血红细胞和白细胞计数分别为4.52×1012/L和12.87×1012/L；血红蛋白为161.71 g/L。
2.4 细菌培养：58例脐血经肉汤培养基培养后有10例发生混浊，再经血平板琼脂培养基培养，该10例均有菌落生长。
3 讨论
远在16世纪我国《本草纲目》中就有用脐带血作药的记载，直到本世纪国外才有脐血应用的记载。但是，由于单个脐血采集量少、采集过程易污染等原因，使脐血的临床应用未能进一步深入。1989年在法国巴黎Saint Louis医院，Gluckman等进行了世界上首例脐血移植，用HLA相合的同胞脐血，成功地治愈了1例Fanconi贫血[1]，到1991年共报告了5例治疗结果，其中4例获得成功[2]。1991年国内沈柏均等用无血缘关系的混合脐血移植，成功地治疗了1例4岁晚期脂肪瘤患儿[3]。
, 百拇医药
我们对58例脐血的研究结果表明：(1)脐血中红细胞数和血红蛋白量均高于成人外周静脉血，可用于临床治疗多种原因引起的贫血。由于单个脐血采血量为50～120 ml，平均为80 ml，更适合儿科病人使用。(2)脐血中丙肝抗体、HIV抗体检测结果全部阴性，GPT检测结果在正常范围，HBsAg、HBe全部阴性，仅有抗-HBs、抗-HBc、抗-Hbe阳性各1例。这些结果提示将脐血作为血源用于临床是安全的。(3)采集的58例脐血中，经细菌培养有10例出现污染。污染的脐血是绝不允许用于临床。经分析发现，采集的前10例脐血中有5例出现污染，污染率高达50%，这一现象提示，最初对采集脐血的方法生疏、采集脐血不顺利、准备工作不充分等是造成污染的主要原因，以后随采集脐血技术的熟练，污染率明显下降。另外，因受经费的限制，使用自制的采血针、采血瓶、开放式采血等是脐血污染的又一重要原因。解决采集脐血污染的可靠方法是使用采血袋进行密闭式采血，同时规范采血技术和操作。
从我们对58例脐血的检测结果表明，解决采集脐血的污染问题后，将脐血作为血源使用(使用前同常规用血一样作ABO血型交叉配合试验)以及用于治疗多种原因引起的贫血是可行的并能取得良好的治疗效果。
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参考文献
1，Gluckman E. Hematopoietic reconsitation in a patient with fanconi's anemiz by meaus of umbilical cord blood from an HLA identical sibling. N Engl J， 1989, 321:1174
2，Broxmeyer HE. Umbilical cord blood hematopoietic stem and repopalating cells in human clinical transplantation.Blood Cells， 1991, 17(2):313
3，沈柏均,张洪泉，候怀水，等. 脐血造血干细胞移植一例报告.中华器官移植杂志， 1991，3：138
(1998—12—30收稿，1999—11—01修回, 百拇医药
单位：李保罗(贵阳医学院病理生理学教研室 贵阳 550004)；陆德琴(贵阳医学院病理生理学教研室 贵阳 550004)；杨勤(贵阳医学院病理生理学教研室 贵阳 550004)；孙长学(贵阳医学院附院妇产科)；戎笛声(贵阳医学院学生)；姚窕(贵阳医学院学生)；陈风军(贵阳医学院学生)；杜德锋(贵阳医学院学生)；邹广庆(贵阳医学院学生)
关键词：胎血；血液代用品；贫血
贵阳医学院学报000108 摘 要 对58例脐血红细胞进行了计数和血红蛋白含量测定，并测定乙肝两对半、丙肝抗体、人类免疫缺陷病毒抗体、肝功能及T细胞亚群分类和细菌培养。结果表明无传染病的正常孕妇分娩时的脐血，可作血源供临床使用并能用于治疗多种原因引起的贫血。
中国图书馆分类法分类号 R977.8
, 百拇医药
Experimental Study of Umbilical Cord Blood
Before Clinical Application
Li Baoluo, Lu Deqin, Yang Qin, Xun Changxue, Rong Disheng,Yao Tiao， Chen Fengjun, Du Defeng, Zou Guangqing
Department of Pathophysiology, Guiyang Medical College
The routine HbsAg,anti-HBs,anti-HBc,anti-HbeAg,anti-Hbe，C-hepatitis antibody, HIV antibody and GPT of 58 samples of umbilical cord blood were tested, and the class of T-cell sub-clot and the germiculture were also processed on these bloods. The results showed that the umbilical cord blood of pregnant woman who did not suffer from infectious diseases was not only used by clinic as blood fountain but also used to treat various-anemia.
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Key word:fetal blood；blood substitates; anemia
脐血是孕妇分娩后残留在脐带和胎盘中的血液，也是胎儿娩出后的废弃物。但是，脐血中除了具有和正常成人静脉血相同的成份外，还含有丰富的造血刺激因子和造血干细胞。因此，将脐血用于临床上需要补充血液的病人和用于治疗造血功能障碍的病人具有重要的价值。1989年美国学者Broxmeyer提出、在法国Sanit Louis医院首次用脐血治疗Fanconi贫血(造血功能障碍)获得成功。以后美、法、澳等国又进行了脐血的临床应用，大部分取得成功。进入90年代，国内也开始对脐血的临床应用进行了研究。我们从1996年6月至1997年8月对贵阳医学院附属医院产科采集的脐血进行了临床应用前的实验研究。
1 材料和方法
1.1 材料 采集脐血58份。产妇均在贵医附院产科住院，足月分娩。产前对产妇进行了乙肝两对半、丙肝、人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)以及肝功能检查，上述检查结 果各项指标正常者为采集对象。
, 百拇医药
1.2 方法 胎儿娩出结扎、剪断脐带后，距脐带断端3厘米处消毒，用自制采血针(连接有10～15 cm长的输液胶管)立即插入脐静脉，脐血流入事先加有肝素溶液的采血瓶(摇匀)，用纱布、玻璃纸封闭采血瓶口。
1.3 检测指标 乙肝两对半、丙肝抗体：采用ELISA法，上海实业科华生物技术有限公司提供试剂盒，贵阳医学院附属医院传染科实验室协助完成；HIV抗体：采用ELISA法，上海实业科华生物技术有限公司提供试剂盒，本室自行完成测定工作；谷-丙转氨酶(GPT)：采用常规肝功能检测方法；T细胞亚群分类测定：采用ELISA法，北京邦定生物医学公司提供试剂盒。操作按说明书；血常规及血涂片：按常规方法进行；细菌培养：每一份脐血标本先经肉汤培养基培养，培养基发生混浊的脐血再进行血平板培养，观察有无菌落生长。贵阳医学院微生物学教研室协助完成。
2 结果
2.1 采血量：58例脐血的采集量为50～120 ml。平均为80 ml。
, 百拇医药
2.2 乙肝两对半、丙肝抗体、HIV抗体及GPT检测结果：58例脐血中检测了31例(1个试剂盒的试剂除去对照外，只能检测31例标本)，其中1例抗-HBs弱阳性，其余均为阴性；GPT为0.84卡门单位。
2.3 血常规测定结果：31例脐血红细胞和白细胞计数分别为4.52×1012/L和12.87×1012/L；血红蛋白为161.71 g/L。
2.4 细菌培养：58例脐血经肉汤培养基培养后有10例发生混浊，再经血平板琼脂培养基培养，该10例均有菌落生长。
3 讨论
远在16世纪我国《本草纲目》中就有用脐带血作药的记载，直到本世纪国外才有脐血应用的记载。但是，由于单个脐血采集量少、采集过程易污染等原因，使脐血的临床应用未能进一步深入。1989年在法国巴黎Saint Louis医院，Gluckman等进行了世界上首例脐血移植，用HLA相合的同胞脐血，成功地治愈了1例Fanconi贫血[1]，到1991年共报告了5例治疗结果，其中4例获得成功[2]。1991年国内沈柏均等用无血缘关系的混合脐血移植，成功地治疗了1例4岁晚期脂肪瘤患儿[3]。
, 百拇医药
我们对58例脐血的研究结果表明：(1)脐血中红细胞数和血红蛋白量均高于成人外周静脉血，可用于临床治疗多种原因引起的贫血。由于单个脐血采血量为50～120 ml，平均为80 ml，更适合儿科病人使用。(2)脐血中丙肝抗体、HIV抗体检测结果全部阴性，GPT检测结果在正常范围，HBsAg、HBe全部阴性，仅有抗-HBs、抗-HBc、抗-Hbe阳性各1例。这些结果提示将脐血作为血源用于临床是安全的。(3)采集的58例脐血中，经细菌培养有10例出现污染。污染的脐血是绝不允许用于临床。经分析发现，采集的前10例脐血中有5例出现污染，污染率高达50%，这一现象提示，最初对采集脐血的方法生疏、采集脐血不顺利、准备工作不充分等是造成污染的主要原因，以后随采集脐血技术的熟练，污染率明显下降。另外，因受经费的限制，使用自制的采血针、采血瓶、开放式采血等是脐血污染的又一重要原因。解决采集脐血污染的可靠方法是使用采血袋进行密闭式采血，同时规范采血技术和操作。
从我们对58例脐血的检测结果表明，解决采集脐血的污染问题后，将脐血作为血源使用(使用前同常规用血一样作ABO血型交叉配合试验)以及用于治疗多种原因引起的贫血是可行的并能取得良好的治疗效果。
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参考文献
1，Gluckman E. Hematopoietic reconsitation in a patient with fanconi's anemiz by meaus of umbilical cord blood from an HLA identical sibling. N Engl J， 1989, 321:1174
2，Broxmeyer HE. Umbilical cord blood hematopoietic stem and repopalating cells in human clinical transplantation.Blood Cells， 1991, 17(2):313
3，沈柏均,张洪泉，候怀水，等. 脐血造血干细胞移植一例报告.中华器官移植杂志， 1991，3：138
(1998—12—30收稿，1999—11—01修回, 百拇医药