肺腺癌及肺鳞癌MRP-mRNA的表达及临床意义
作者:杨俊兰 石廷章 魏秀芳
单位:解放军总医院肿瘤科,北京 100853
关键词:多药耐药相关蛋白;肺腺癌;肺鳞癌
军医进修学院学报000122 摘 要:目的:观察 30 例肺癌组织及癌旁肺组织MRP的表达。方法:RT-PCR方法。结果:43.33% 的肺癌组织表达MRP,且MRP的表达与细胞分化程度有关,低分化者MRP的表达明显高于中高分化者(P<0.05)。腺癌的表达(62.5%)高于鳞癌(21.43%,P=0.058)。MRP的表达与临床分期无关(P=0.511)。结论:43.33%的肺癌组织表达MRP,MRP的表达可能与肺癌的耐药有关。
中图号:R734.2 文献标识码:A
文章编号:1005-1139(2000)01-0065-66
, 百拇医药
Expression of multidrug resistance-associated protein in adenocarcinoma and squamous cell carcinoma of the lung
YANG Jun-lan, SHI Ting-zhang,WEI Xiou-fang
(Department of Medical Oncology,PLA General Hospital, Beijing 100853, China)
Abstract:Objective:To investigate the expression of multidrug resistance-associated protein (MRP) in 30 cases with adenocarcinoma and squamous cell carcinoma of the lung.Methods:RT-PCR method.Results:Expressed in MRP-mRNA was thirteen (43.33%) of the 30 cases examined by tumor biopsies, and its expression was associated with the degree of differentiation and histopathology of the tumor (P<0.05). but not related to the clinical staging (P<0.05).Conclusion:Our results suggest that MRP may be implicated drug resistance in adenocarcinoma and squamous cell carcnoma of the lung.
, 百拇医药
Key words:multidrug resistance-associated protein; adenocarcinoma of the lung; squamous cell carcinoma of the lung▲
多药耐药相关蛋白(MRP)是近年发现的一种与肿瘤多药耐药有关的糖蛋白,文献报道MRP表达与肿瘤的分化、分期及预后有关。目前国内尚未见有关肺癌组织MRP的研究。作者检测了30例肺癌组织及肺正常组织MRP的表达情况,报告如下。
1 材料和方法
1.1 临床资料 30例肺癌标本均为外科肺癌手术患者,每例患者均同时取距癌肿≥3cm的肺组织,手术后立即取材并储存于液氮罐中。30例患者中:男性24例、女性6例。年龄范围:35~68岁,平均年龄55.31岁;其中:鳞癌14例、腺癌16例。根据肿瘤的分级标准[1],14例鳞癌中:中~高分化者8例,低分化者6例;16例腺癌中:中~高分化者9例,低分化者7例。所有患者术前均未进行任何抗肿瘤治疗。
, 百拇医药
1.2 MRP引物序列
5′ACACTCCACAGATCACTC3′
5′CATGGTGCAGGGTCTACG3′
扩增片段为290bp
1.3 步骤
1.3.1 总RNA提取 取新鲜组织2~3mg,捣碎后,置样品管中,加入200μl裂解液,充分震荡,使沉淀完全溶解,加入40μl氯仿混匀,12000r/min离心5min,小心吸取上层水相,加3倍体积无水乙醇,-20℃放置20min,12000r/min离心5min,弃上清,室温晾干约20min,即可得到标本的总RNA。
1.3.2 RNA-cDNA反转录 向处理好的样品中加入15μl逆转录液、1μl酶混合液,离心数秒,42℃水浴30min。
, 百拇医药
1.3.3 PCR扩增 以MRP阳性模板作为阳性对照,以DEPC水代替cDNA作为阴性对照。取反转录产物、阳性对照及阴性对照各5μl,分别加入20μlPCR液、1μlTaq酶,一滴石蜡油,离心数秒,按下述条件扩增35个循环:
94℃45s 55℃45s 72℃45s
1.3.4 电泳鉴定 含EB的2%琼脂糖配制:100mlTBE(Tris-硼酸)+2g琼脂糖+5μlEB
用10μlPCR产物、2μl上样缓冲液混匀后点样,恒压5V/cm,电泳时间为溴酚蓝染料走至1/3~1/2胶长处。
1.4 结果记录及判断 阳性结果为两条带,分别为:MRP带(290bp),β2微球蛋白带(430bp)。阴性结果为一条带,为β2微球蛋白带(430bp)。
, 百拇医药
1.5 统计学处理采用校正卡方检验。
2 结 果
30例肺癌组织中,MRP-mRNA表达阳性者13例,其中:鳞癌3例、腺癌10例;癌旁肺组织中,MRP-mRNA表达阳性者8例,其中:鳞癌2例、腺癌6例(表1)。
表1 肺癌组织及相应癌旁肺组织MRP-mRNA表达(n=30)
MRP-mRNA阳性(%)
MRP-mRNA阴性(%)
肺癌组织
13(43.3)
17(56.7)
, 百拇医药 癌旁肺组织
8(26.7)
22(73.3)
MRP的表达与临床分期无明显关系(P=0.511),与癌细胞的分化程度有关(P=0.03)。病理类型显示:MRP在腺癌的表达(62.5%)高于鳞癌(21.43%),P值未见显著性差异可能与例数较少有关(表2)。表2 不同病理特征患者MRP-mRNA表达 病理特征
例数
MRP-mRNA
阳性率(%)
P
(+)
(-)
, 百拇医药
病理类型
鳞 癌
14
3
11
21.43
腺 癌
16
10
6
62.5
0.058
病理分期
, 百拇医药
Ⅰ
1
0
1
0.00
Ⅱ
20
8
12
40.00
Ⅲ
8
4
4
, 百拇医药
50.00
Ⅳ
1
1
0
100.00
0.511
组织分化
低分化
13
9
4
69.23
, http://www.100md.com 中高分化
17
4
13
23.53
0.03
3 讨 论
肺癌的耐药性有多种机制,MDR1是近10年来研究较多的一种耐药机制,随着研究的深入,人们发现MDR1的表达不足以解释非小细胞肺癌的多药耐药,而且在一些耐药的肺癌中也未发现P-gp的过度表达。自1992年Cole发现多药耐药相关蛋白(MRP)后,研究MRP与肺癌多药耐药的关系成为人们关注的热点,MRP基因位于16号染色体P13.1带上,由2.8kb碱基组成,该基因编码1531个氨基酸组成的蛋白质,其分子量为190ku碱基组成,该基因编码1531个氨基酸组成的蛋白质,其分子量为190ku,其多药耐药作用与P-gp的表达无关,而与细胞内MRP的药物泵作用及其引起细胞内药物浓度降低有关[2],MRP的耐药谱与MDR1相仿。国外研究表明:MRP基因的表达与肺癌的分期、分化及预后有关[3~5],也有研究认为:MRP在肺癌耐药中的作用有可能大于MDR1[6]。笔者检测了肺癌及肺正常组织MRP基因的表达情况结果表明:43.33%的肺癌组织有MRP-mRNA表达,从癌细胞分化程度可以看出:低分化者MRP-mRNA的表达(69.23%)明显高于中高分化者(23.53%,P<0.05),说明MRP的表达与细胞分化程度相关。本研究30例患者中,肺腺癌16例,有10例患者表达MRP,占62.5%,这与临床上肺腺癌对化疗不敏感是一致的。本研究的所有患者术前均未行任何化疗,说明MRP的表达为先天性。■
, 百拇医药
作者简介:杨俊兰,女,1964-01-06生,山西省临猗县人,1985年山西医学院毕业,1993年军医进修学院硕士毕业,解放军总医院肿瘤内科副主任医师;发表论文10篇。电话:(010)66937098
参考文献:
[1]俞孝庭.肿瘤病理学[M].上海:科学技术出版社,1986.
[2]Grant CE, valdimarson G, Hipfner DR et al. Overexpression of multidrug resistance-associated protein (MRP) increases resistance to natural product drugs [J]. Cancer Res, 1994,54:357-360.
[3]Higashiyama M, Doi O, Kodama K et al. Immunohistochemically detected expression of motitity-related protein-1 (MRP-1/CD9) in lung adenocarcinoma and it′s relation to prognosis[J]. Int J Cancer, 1997,74(2):205-210.
, http://www.100md.com
[4]Ota E, Abe Y, Oshika Y et al. Expression of the multidrug resistance-associated protein (MRP) gene in non-small-cell lung cancer [J]. Br J Cancer, 1995,72(3):550-554.
[5]Nooter K, Bosman F T, Burger H, et al. Expression of the multidrug resistance-associated protein (MRP) gene in primary non-small-cell lung cancer [J]. Ann Oncol, 1996,7(1):75-79.
[6]Narasaki F, Matsuo I, Ikuno N et al. Multidrug resistance-associated protein (MRP) gene expression in human lung cancer. Anticancer Res [J], 1996,16(4A):2079-2084.
收稿日期:1999-07-24
改回日期:1999-08-29, 百拇医药
单位:解放军总医院肿瘤科,北京 100853
关键词:多药耐药相关蛋白;肺腺癌;肺鳞癌
军医进修学院学报000122 摘 要:目的:观察 30 例肺癌组织及癌旁肺组织MRP的表达。方法:RT-PCR方法。结果:43.33% 的肺癌组织表达MRP,且MRP的表达与细胞分化程度有关,低分化者MRP的表达明显高于中高分化者(P<0.05)。腺癌的表达(62.5%)高于鳞癌(21.43%,P=0.058)。MRP的表达与临床分期无关(P=0.511)。结论:43.33%的肺癌组织表达MRP,MRP的表达可能与肺癌的耐药有关。
中图号:R734.2 文献标识码:A
文章编号:1005-1139(2000)01-0065-66
, 百拇医药
Expression of multidrug resistance-associated protein in adenocarcinoma and squamous cell carcinoma of the lung
YANG Jun-lan, SHI Ting-zhang,WEI Xiou-fang
(Department of Medical Oncology,PLA General Hospital, Beijing 100853, China)
Abstract:Objective:To investigate the expression of multidrug resistance-associated protein (MRP) in 30 cases with adenocarcinoma and squamous cell carcinoma of the lung.Methods:RT-PCR method.Results:Expressed in MRP-mRNA was thirteen (43.33%) of the 30 cases examined by tumor biopsies, and its expression was associated with the degree of differentiation and histopathology of the tumor (P<0.05). but not related to the clinical staging (P<0.05).Conclusion:Our results suggest that MRP may be implicated drug resistance in adenocarcinoma and squamous cell carcnoma of the lung.
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Key words:multidrug resistance-associated protein; adenocarcinoma of the lung; squamous cell carcinoma of the lung▲
多药耐药相关蛋白(MRP)是近年发现的一种与肿瘤多药耐药有关的糖蛋白,文献报道MRP表达与肿瘤的分化、分期及预后有关。目前国内尚未见有关肺癌组织MRP的研究。作者检测了30例肺癌组织及肺正常组织MRP的表达情况,报告如下。
1 材料和方法
1.1 临床资料 30例肺癌标本均为外科肺癌手术患者,每例患者均同时取距癌肿≥3cm的肺组织,手术后立即取材并储存于液氮罐中。30例患者中:男性24例、女性6例。年龄范围:35~68岁,平均年龄55.31岁;其中:鳞癌14例、腺癌16例。根据肿瘤的分级标准[1],14例鳞癌中:中~高分化者8例,低分化者6例;16例腺癌中:中~高分化者9例,低分化者7例。所有患者术前均未进行任何抗肿瘤治疗。
, 百拇医药
1.2 MRP引物序列
5′ACACTCCACAGATCACTC3′
5′CATGGTGCAGGGTCTACG3′
扩增片段为290bp
1.3 步骤
1.3.1 总RNA提取 取新鲜组织2~3mg,捣碎后,置样品管中,加入200μl裂解液,充分震荡,使沉淀完全溶解,加入40μl氯仿混匀,12000r/min离心5min,小心吸取上层水相,加3倍体积无水乙醇,-20℃放置20min,12000r/min离心5min,弃上清,室温晾干约20min,即可得到标本的总RNA。
1.3.2 RNA-cDNA反转录 向处理好的样品中加入15μl逆转录液、1μl酶混合液,离心数秒,42℃水浴30min。
, 百拇医药
1.3.3 PCR扩增 以MRP阳性模板作为阳性对照,以DEPC水代替cDNA作为阴性对照。取反转录产物、阳性对照及阴性对照各5μl,分别加入20μlPCR液、1μlTaq酶,一滴石蜡油,离心数秒,按下述条件扩增35个循环:
94℃45s 55℃45s 72℃45s
1.3.4 电泳鉴定 含EB的2%琼脂糖配制:100mlTBE(Tris-硼酸)+2g琼脂糖+5μlEB
用10μlPCR产物、2μl上样缓冲液混匀后点样,恒压5V/cm,电泳时间为溴酚蓝染料走至1/3~1/2胶长处。
1.4 结果记录及判断 阳性结果为两条带,分别为:MRP带(290bp),β2微球蛋白带(430bp)。阴性结果为一条带,为β2微球蛋白带(430bp)。
, 百拇医药
1.5 统计学处理采用校正卡方检验。
2 结 果
30例肺癌组织中,MRP-mRNA表达阳性者13例,其中:鳞癌3例、腺癌10例;癌旁肺组织中,MRP-mRNA表达阳性者8例,其中:鳞癌2例、腺癌6例(表1)。
表1 肺癌组织及相应癌旁肺组织MRP-mRNA表达(n=30)
MRP-mRNA阳性(%)
MRP-mRNA阴性(%)
肺癌组织
13(43.3)
17(56.7)
, 百拇医药 癌旁肺组织
8(26.7)
22(73.3)
MRP的表达与临床分期无明显关系(P=0.511),与癌细胞的分化程度有关(P=0.03)。病理类型显示:MRP在腺癌的表达(62.5%)高于鳞癌(21.43%),P值未见显著性差异可能与例数较少有关(表2)。表2 不同病理特征患者MRP-mRNA表达 病理特征
例数
MRP-mRNA
阳性率(%)
P
(+)
(-)
, 百拇医药
病理类型
鳞 癌
14
3
11
21.43
腺 癌
16
10
6
62.5
0.058
病理分期
, 百拇医药
Ⅰ
1
0
1
0.00
Ⅱ
20
8
12
40.00
Ⅲ
8
4
4
, 百拇医药
50.00
Ⅳ
1
1
0
100.00
0.511
组织分化
低分化
13
9
4
69.23
, http://www.100md.com 中高分化
17
4
13
23.53
0.03
3 讨 论
肺癌的耐药性有多种机制,MDR1是近10年来研究较多的一种耐药机制,随着研究的深入,人们发现MDR1的表达不足以解释非小细胞肺癌的多药耐药,而且在一些耐药的肺癌中也未发现P-gp的过度表达。自1992年Cole发现多药耐药相关蛋白(MRP)后,研究MRP与肺癌多药耐药的关系成为人们关注的热点,MRP基因位于16号染色体P13.1带上,由2.8kb碱基组成,该基因编码1531个氨基酸组成的蛋白质,其分子量为190ku碱基组成,该基因编码1531个氨基酸组成的蛋白质,其分子量为190ku,其多药耐药作用与P-gp的表达无关,而与细胞内MRP的药物泵作用及其引起细胞内药物浓度降低有关[2],MRP的耐药谱与MDR1相仿。国外研究表明:MRP基因的表达与肺癌的分期、分化及预后有关[3~5],也有研究认为:MRP在肺癌耐药中的作用有可能大于MDR1[6]。笔者检测了肺癌及肺正常组织MRP基因的表达情况结果表明:43.33%的肺癌组织有MRP-mRNA表达,从癌细胞分化程度可以看出:低分化者MRP-mRNA的表达(69.23%)明显高于中高分化者(23.53%,P<0.05),说明MRP的表达与细胞分化程度相关。本研究30例患者中,肺腺癌16例,有10例患者表达MRP,占62.5%,这与临床上肺腺癌对化疗不敏感是一致的。本研究的所有患者术前均未行任何化疗,说明MRP的表达为先天性。■
, 百拇医药
作者简介:杨俊兰,女,1964-01-06生,山西省临猗县人,1985年山西医学院毕业,1993年军医进修学院硕士毕业,解放军总医院肿瘤内科副主任医师;发表论文10篇。电话:(010)66937098
参考文献:
[1]俞孝庭.肿瘤病理学[M].上海:科学技术出版社,1986.
[2]Grant CE, valdimarson G, Hipfner DR et al. Overexpression of multidrug resistance-associated protein (MRP) increases resistance to natural product drugs [J]. Cancer Res, 1994,54:357-360.
[3]Higashiyama M, Doi O, Kodama K et al. Immunohistochemically detected expression of motitity-related protein-1 (MRP-1/CD9) in lung adenocarcinoma and it′s relation to prognosis[J]. Int J Cancer, 1997,74(2):205-210.
, http://www.100md.com
[4]Ota E, Abe Y, Oshika Y et al. Expression of the multidrug resistance-associated protein (MRP) gene in non-small-cell lung cancer [J]. Br J Cancer, 1995,72(3):550-554.
[5]Nooter K, Bosman F T, Burger H, et al. Expression of the multidrug resistance-associated protein (MRP) gene in primary non-small-cell lung cancer [J]. Ann Oncol, 1996,7(1):75-79.
[6]Narasaki F, Matsuo I, Ikuno N et al. Multidrug resistance-associated protein (MRP) gene expression in human lung cancer. Anticancer Res [J], 1996,16(4A):2079-2084.
收稿日期:1999-07-24
改回日期:1999-08-29, 百拇医药