风湿病的实验室诊断技术进展
作者：李莉
单位：广西南宁铁路医院检验科 南宁 530001
关键词：风湿病；免疫学检查；诊断
广西中医学院学报000144 中图分类号 R593.2
风湿病是一组病因涉及感染、免疫、遗传、代谢、内分泌等诸多因素，病变以侵犯皮肤、肌肉、骨、关节、结缔组织、血管为主并有全身多器官系统受累的慢性病。根据美国风湿病协会命名和分类委员会的分类，列入风湿病的共有弥漫性结缔组织病、脊柱炎、关节炎，退化性关节炎、感染性病原体关节炎等共十大类，其中弥漫性结缔组织病就包括有类风湿关节炎(RA)、全身性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征(SS)、全身性硬化症、多肌炎/皮肌炎等。这些早期或不典型病例的诊断在很大程度上依靠实验室检查来完成，因此，免疫实验技术的发展促进了风湿病学的发展。
, 百拇医药
1 一般实验室检查
1.1 红细胞沉降率(ESR) 这是一项较古老的试验，在风湿病的诊断中虽无特异性，但目前仍认为它是鉴别炎性及非炎性疾病的最简单、廉价的实验室指标。
1.2 C反应蛋白(CRP) 是一种急性时向反应蛋白，风湿病(RA、SLE等)活动期、感染、炎症、高烧、恶性肿瘤、手术、放射病等时CRP水平迅速升高，48～72小时可达峰值，病情好转时迅速降至正常。关节液CRP含量对区别化脓性、结核性、类风湿性关节炎具有一定意义[1]。
1.3 关节液检查 关节滑膜液检查是有关节病变的风湿病的一项重要诊断指标，它对感染性及晶体诱发性关节炎有诊断意义，对鉴别炎性及非炎 性渗出也有很大意义。有关内容见表1。
2 免疫学检查
2.1 抗核抗体(ANA) 是针对细胞核任何成份所产生的抗体，由于细胞核包括很多成份，因此抗核抗体的种类较多。可用间接免疫荧光法[1]，即用人喉癌上皮细胞株(HEP-2细胞株)为抗原基质，根据荧光染色形态可分均质型、周边型、斑点型、核仁型。其与疾病的关系见表2。
, 百拇医药
表1 关节炎 性质与关节滑液状况 关节炎性质
滑液性状
粘性
白细胞数
(×109/L)
有核细胞
结晶
正常
清亮透明
高
<0.2
<0.25
, 百拇医药
0
非炎症性
黄色透明
高
<0.2
<0.25
0
SLE
黄色透明
略差
0～0.9
<0.25
0
, 百拇医药
痛风
黄色略混浊
差
0.01～160
0.9
+
RA
黄或脓性透明
或混浊
差
0.3～50
0.5～0.75
0
, 百拇医药
感染性
黄绿混浊
不定
>50
>0.75
0
表2 间接荧光免疫法测定抗核抗体\+* 疾病
均质型
周边型
斑点型
核仁型
ANA阳性率%
SLE
, 百拇医药
3+
3+
2+
1+
≥90
RA
2+
1+
不定
1+
30～50
SS
1+
1+
, 百拇医药
2+
2+
50～70
硬皮病
1+
1+
2+
2+
≥70
注：表中1+代表少见，2+代表常见，3+代表最常见。
2.2 抗双链DNA抗体(抗-dsDNA) 抗-dsDNA是系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的重要抗体，它与疾病的活动性相关，活动期SLE特别是肾性活动期病人及部分狼疮肾病人抗-dsDNA80%～90%为阳性，抗体滴度与病情活动及预后有重要关系，非活动期SLE病人抗-dsDNA阳性60%左右。检测方法：一是间接免疫荧光法(马疫锥虫法)[2]。虫体结构中核和动基体是纯双股DNA，用马疫锥虫做抗原底物，荧光素标记的二抗来测定血清中的抗-dsDNA，阳性时可见核和动基体发出亮绿色荧光。此法必须用荧光显微镜观察结果，不太适用于中小型实验室。国内学者用酶标二抗代替荧光抗体，用二甲基联苯胺显色，可用普通光学显微镜观察结果[3]。二是放射免疫法即Farr氏法[4]。此法较为敏感，但假阳性较多，且涉及放射性[5]。三是酶联免疫吸附法(ELISA)，ELISA法检测的敏感性较高，但由于DNA难以包被到聚苯乙烯固相载体上，而双链DNA制品中常混有单链DNA，因此ELISA法的敏感性常依赖于抗原制品的纯度，抗原的纯化程度影响其检测的特异性[6～8]。
, 百拇医药
近年来，国内学者建立了斑点免疫结合试验(DIBA)[9]测抗-dsDNA。DIBA是在硝酸纤维素膜上预包被SA后加生物素化的dsDNA。此法缩短了反应时间并可用于单份标本测定。在DIBA基础上的进一步改进产物，用金标SPA代替梅标二抗，就是目前国内市场上的一种抗-dsDNA金标渗滤试剂盒[10]，它使测定时间进一步缩短至2分钟左右，此法敏感性与Farr氏法相近，SLE阳性率较高，且特异性也较高[11]。
2.3 抗可溶性核蛋白抗体(ENA)的检测 ENA是一种盐水可提取性抗原的对应抗体，正常人无此抗体，在自身免疫性结缔组织病人中抗ENA抗体阳性率可达60%～80%，滴度很高，其中抗RNP和抗Sm抗体被公认为非常重要的ENA抗体。
Sm抗体对SLE诊断高度特异是SLE的标记抗体。
SSB抗体在原发性SS中阳性率为40%～90%，敏感性及特异性均较高。
, http://www.100md.com
Scl-70抗体是细胞核拓扑异构酶的抗体，在弥漫型硬皮病中阳性率40%，是目前公认的硬皮病的血清标记抗体。
Jo-1抗体是多发性肌炎和皮肌炎(PM/DM)的血清标记抗体，此抗体在PM中的阳性率可达25%，由于可抑制靶抗原的功能，患者会出现肌炎、肺间质性病变及关节症状，称Jo-1综合症。
2.4 ENA抗体的检测方法 经典的方法有对流免疫电泳法(CIE)和双扩散法。近年来引进先进的免疫印迹技术即免疫印迹法，将具有七种不同抗原性的蛋白多肽印迹在硝酸纤维素薄膜上，它可检出抗Sm、抗RNP、抗核糖体、抗SSA、抗SSB、抗Scl-70、抗Jo-1等七种抗体，被视为检测ENA抗体最为简便、敏感、高效、特异的方法[12]。
目前还采用一种新的方法斑点酶免疫结合试验(DIBA)。此法在风湿病人的Sm抗体、SSA和SSB抗体的检出率较免疫印迹法明显高[13]，从而可提高SLE和SS的诊断水平。DIBA法应用的抗原试剂是用人多克隆抗体亲合纯化的，这种高度纯化的抗原是保证试验高敏感性的重要因素。最近建立了一种更为敏感、准确的放射免疫沉淀技术，是用\+\{35\}S-蛋氨酸和\+\{32\}P-正磷酸盐标记组织培养细胞中的蛋白质和RNAS，将待测血清与放射性同位素标记物混合，抗体与标记抗原形成免疫复合物，用葡萄球菌A蛋白使其沉淀，溶解后作SDS-PAGE，自身抗体与相应标记抗原在凝胶上形成的条带通过放射自显影技术很清晰的显示出来[14]，此法目前还只用于研究。
, 百拇医药
除抗核抗体外，其它如抗中性粒细胞胸浆抗体，抗核糖体抗体、抗心磷脂抗体在风湿病实验室检查中也比较重要。
参考文献
[1] 余晓萍，李荷华.检测关节积液内CRP含量临床意义.实用医学检验杂志.1995，2(2)：64
[2] 方福德，周 吕，丁濂，张德昌.自身抗体检测.现代医学实验技术全书.北京医科大学中国协和医科大学联合出版，1995.809
[3] 董静懿，李培成，瞿靖琦，韩 松.短膜虫片酶标SPA法检测ds-DNA抗体.上海医学检验杂志.1994，9(1)：17
[4] 罗学忠，张佩宣.\+\{125\}I标记脱氧核糖核酸.中华核医学杂志.1982，2(4)：241
[5] 陈兆鹏，刘倩予.抗-dsDNA测定方法及存在问题.国外医学临床生物化学与检验学分册 1997，18(5)：213
, 百拇医药
[6] Brinkman K,Termaat R,van den Brink H,et al.The specificity of the anti-dsDNA ELISA:a closer look,J immunol Methods.1991,139:91
[7] Kroubouzos G,Tosca A,Konstadoulakis MM,et al.Poly-lysine anti-dsDNA antibodies. J immunol Methods.1992，(148):261
[8] 蒋 明，陈永铭.风湿病学.北京科学出版社，1995，356
[9] 兰小鹏，朱忠勇.一种新的检测抗-dsDNA的斑点免疫结合试验.中华医学检验杂志.1994.17(3)：132
[10] 兰小鹏，黄俏佳，叶小芬，等.快速斑点免疫金渗法测抗-dsDNA.中华医学检验杂志.1996，19(2)：92
[11] 王 杰，朱世钧，段文金，等.四种抗双链DNA抗体检测方法的评价.临床检验杂志.1996，14(3)：132
[12] 唐福林.慎重看待ENA多肽抗体的临床意义.中华风湿病学杂志.1999，3(4)：201
[13] 陈 敏，候军琳.中国实用医学现代临床医学与实验室诊断.四川科技出版社，1999.326
[14] 武建国.风湿病的实验室检查.临床检验杂志.1996，14(6)：327
收稿日期：1999-11-30, 百拇医药
单位：广西南宁铁路医院检验科 南宁 530001
关键词：风湿病；免疫学检查；诊断
广西中医学院学报000144 中图分类号 R593.2
风湿病是一组病因涉及感染、免疫、遗传、代谢、内分泌等诸多因素，病变以侵犯皮肤、肌肉、骨、关节、结缔组织、血管为主并有全身多器官系统受累的慢性病。根据美国风湿病协会命名和分类委员会的分类，列入风湿病的共有弥漫性结缔组织病、脊柱炎、关节炎，退化性关节炎、感染性病原体关节炎等共十大类，其中弥漫性结缔组织病就包括有类风湿关节炎(RA)、全身性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征(SS)、全身性硬化症、多肌炎/皮肌炎等。这些早期或不典型病例的诊断在很大程度上依靠实验室检查来完成，因此，免疫实验技术的发展促进了风湿病学的发展。
, 百拇医药
1 一般实验室检查
1.1 红细胞沉降率(ESR) 这是一项较古老的试验，在风湿病的诊断中虽无特异性，但目前仍认为它是鉴别炎性及非炎性疾病的最简单、廉价的实验室指标。
1.2 C反应蛋白(CRP) 是一种急性时向反应蛋白，风湿病(RA、SLE等)活动期、感染、炎症、高烧、恶性肿瘤、手术、放射病等时CRP水平迅速升高，48～72小时可达峰值，病情好转时迅速降至正常。关节液CRP含量对区别化脓性、结核性、类风湿性关节炎具有一定意义[1]。
1.3 关节液检查 关节滑膜液检查是有关节病变的风湿病的一项重要诊断指标，它对感染性及晶体诱发性关节炎有诊断意义，对鉴别炎性及非炎 性渗出也有很大意义。有关内容见表1。
2 免疫学检查
2.1 抗核抗体(ANA) 是针对细胞核任何成份所产生的抗体，由于细胞核包括很多成份，因此抗核抗体的种类较多。可用间接免疫荧光法[1]，即用人喉癌上皮细胞株(HEP-2细胞株)为抗原基质，根据荧光染色形态可分均质型、周边型、斑点型、核仁型。其与疾病的关系见表2。
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表1 关节炎 性质与关节滑液状况 关节炎性质
滑液性状
粘性
白细胞数
(×109/L)
有核细胞
结晶
正常
清亮透明
高
<0.2
<0.25
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0
非炎症性
黄色透明
高
<0.2
<0.25
0
SLE
黄色透明
略差
0～0.9
<0.25
0
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痛风
黄色略混浊
差
0.01～160
0.9
+
RA
黄或脓性透明
或混浊
差
0.3～50
0.5～0.75
0
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感染性
黄绿混浊
不定
>50
>0.75
0
表2 间接荧光免疫法测定抗核抗体\+* 疾病
均质型
周边型
斑点型
核仁型
ANA阳性率%
SLE
, 百拇医药
3+
3+
2+
1+
≥90
RA
2+
1+
不定
1+
30～50
SS
1+
1+
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2+
2+
50～70
硬皮病
1+
1+
2+
2+
≥70
注：表中1+代表少见，2+代表常见，3+代表最常见。
2.2 抗双链DNA抗体(抗-dsDNA) 抗-dsDNA是系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的重要抗体，它与疾病的活动性相关，活动期SLE特别是肾性活动期病人及部分狼疮肾病人抗-dsDNA80%～90%为阳性，抗体滴度与病情活动及预后有重要关系，非活动期SLE病人抗-dsDNA阳性60%左右。检测方法：一是间接免疫荧光法(马疫锥虫法)[2]。虫体结构中核和动基体是纯双股DNA，用马疫锥虫做抗原底物，荧光素标记的二抗来测定血清中的抗-dsDNA，阳性时可见核和动基体发出亮绿色荧光。此法必须用荧光显微镜观察结果，不太适用于中小型实验室。国内学者用酶标二抗代替荧光抗体，用二甲基联苯胺显色，可用普通光学显微镜观察结果[3]。二是放射免疫法即Farr氏法[4]。此法较为敏感，但假阳性较多，且涉及放射性[5]。三是酶联免疫吸附法(ELISA)，ELISA法检测的敏感性较高，但由于DNA难以包被到聚苯乙烯固相载体上，而双链DNA制品中常混有单链DNA，因此ELISA法的敏感性常依赖于抗原制品的纯度，抗原的纯化程度影响其检测的特异性[6～8]。
, 百拇医药
近年来，国内学者建立了斑点免疫结合试验(DIBA)[9]测抗-dsDNA。DIBA是在硝酸纤维素膜上预包被SA后加生物素化的dsDNA。此法缩短了反应时间并可用于单份标本测定。在DIBA基础上的进一步改进产物，用金标SPA代替梅标二抗，就是目前国内市场上的一种抗-dsDNA金标渗滤试剂盒[10]，它使测定时间进一步缩短至2分钟左右，此法敏感性与Farr氏法相近，SLE阳性率较高，且特异性也较高[11]。
2.3 抗可溶性核蛋白抗体(ENA)的检测 ENA是一种盐水可提取性抗原的对应抗体，正常人无此抗体，在自身免疫性结缔组织病人中抗ENA抗体阳性率可达60%～80%，滴度很高，其中抗RNP和抗Sm抗体被公认为非常重要的ENA抗体。
Sm抗体对SLE诊断高度特异是SLE的标记抗体。
SSB抗体在原发性SS中阳性率为40%～90%，敏感性及特异性均较高。
, http://www.100md.com
Scl-70抗体是细胞核拓扑异构酶的抗体，在弥漫型硬皮病中阳性率40%，是目前公认的硬皮病的血清标记抗体。
Jo-1抗体是多发性肌炎和皮肌炎(PM/DM)的血清标记抗体，此抗体在PM中的阳性率可达25%，由于可抑制靶抗原的功能，患者会出现肌炎、肺间质性病变及关节症状，称Jo-1综合症。
2.4 ENA抗体的检测方法 经典的方法有对流免疫电泳法(CIE)和双扩散法。近年来引进先进的免疫印迹技术即免疫印迹法，将具有七种不同抗原性的蛋白多肽印迹在硝酸纤维素薄膜上，它可检出抗Sm、抗RNP、抗核糖体、抗SSA、抗SSB、抗Scl-70、抗Jo-1等七种抗体，被视为检测ENA抗体最为简便、敏感、高效、特异的方法[12]。
目前还采用一种新的方法斑点酶免疫结合试验(DIBA)。此法在风湿病人的Sm抗体、SSA和SSB抗体的检出率较免疫印迹法明显高[13]，从而可提高SLE和SS的诊断水平。DIBA法应用的抗原试剂是用人多克隆抗体亲合纯化的，这种高度纯化的抗原是保证试验高敏感性的重要因素。最近建立了一种更为敏感、准确的放射免疫沉淀技术，是用\+\{35\}S-蛋氨酸和\+\{32\}P-正磷酸盐标记组织培养细胞中的蛋白质和RNAS，将待测血清与放射性同位素标记物混合，抗体与标记抗原形成免疫复合物，用葡萄球菌A蛋白使其沉淀，溶解后作SDS-PAGE，自身抗体与相应标记抗原在凝胶上形成的条带通过放射自显影技术很清晰的显示出来[14]，此法目前还只用于研究。
, 百拇医药
除抗核抗体外，其它如抗中性粒细胞胸浆抗体，抗核糖体抗体、抗心磷脂抗体在风湿病实验室检查中也比较重要。
参考文献
[1] 余晓萍，李荷华.检测关节积液内CRP含量临床意义.实用医学检验杂志.1995，2(2)：64
[2] 方福德，周 吕，丁濂，张德昌.自身抗体检测.现代医学实验技术全书.北京医科大学中国协和医科大学联合出版，1995.809
[3] 董静懿，李培成，瞿靖琦，韩 松.短膜虫片酶标SPA法检测ds-DNA抗体.上海医学检验杂志.1994，9(1)：17
[4] 罗学忠，张佩宣.\+\{125\}I标记脱氧核糖核酸.中华核医学杂志.1982，2(4)：241
[5] 陈兆鹏，刘倩予.抗-dsDNA测定方法及存在问题.国外医学临床生物化学与检验学分册 1997，18(5)：213
, 百拇医药
[6] Brinkman K,Termaat R,van den Brink H,et al.The specificity of the anti-dsDNA ELISA:a closer look,J immunol Methods.1991,139:91
[7] Kroubouzos G,Tosca A,Konstadoulakis MM,et al.Poly-lysine anti-dsDNA antibodies. J immunol Methods.1992，(148):261
[8] 蒋 明，陈永铭.风湿病学.北京科学出版社，1995，356
[9] 兰小鹏，朱忠勇.一种新的检测抗-dsDNA的斑点免疫结合试验.中华医学检验杂志.1994.17(3)：132
[10] 兰小鹏，黄俏佳，叶小芬，等.快速斑点免疫金渗法测抗-dsDNA.中华医学检验杂志.1996，19(2)：92
[11] 王 杰，朱世钧，段文金，等.四种抗双链DNA抗体检测方法的评价.临床检验杂志.1996，14(3)：132
[12] 唐福林.慎重看待ENA多肽抗体的临床意义.中华风湿病学杂志.1999，3(4)：201
[13] 陈 敏，候军琳.中国实用医学现代临床医学与实验室诊断.四川科技出版社，1999.326
[14] 武建国.风湿病的实验室检查.临床检验杂志.1996，14(6)：327
收稿日期：1999-11-30, 百拇医药