异种去细胞真皮支架与自体皮片复合移植的临床应用
作者：杨敏杰 潘银根 谢卫 顾在秋 朱宇刚
单位：杨敏杰(无锡市第三人民医院烧伤科 214041)； 谢卫(无锡市第三人民医院烧伤科 214041)； 顾在秋(无锡市第三人民医院烧伤科 214041)； 朱宇刚(无锡市第三人民医院烧伤科 214041)； 潘银根(启东市人民医院)
关键词：异种去细胞真皮支架；复合移植；烧伤
江苏医药000208 摘 要：目的 研制一种去细胞的异种真皮支架用于修复深度烧伤的切(削)痂创面。方法 选用健康小白猪全层皮,经特殊处理去除表皮及真皮中各种细胞成分,制备成保留基底膜的网状真皮支架。采用两步法将异种去细胞真皮支架与自体薄皮片复合移植于预实验动物(犬),并进而应用于临床深度烧伤的切(削)痂创面,共32例。结果 28例复合移植成功,术后早期无自体皮片坏死、炎症或排异反应,中、后期观察,外观及功能明显改善。4例失败。预实验动物术后8周异种真皮支架仍以原形存在。结论 异种去细胞真皮支架作为一种无抗原性的生物敷料,具有广泛的临床应用前景。
, http://www.100md.com
The clinical application of the composite transplantation of acellular xenodermal frame with autograft
YANG Minjie,PAN Yingen,XIE Wei,et al
(Wuxi No.3 People′s Hospital,Wuxi 214041)
Abstract：Objective To develop an acellular xenodermal frame and to apply it in the repair of burning wounds after eschar excision.Methods An acellular xenodermal frame was made of pigskin and simultaneously grafted together with an overlying thin-split autograft in the burning wound of the experimental animal,then grafted to the burning wounds of 32 patients after eschar excision.Results The composite tranplantation of 28 patients was successful.There were no necrosis,shedding,inflammation and rejection of autographs in the earlier period after operation.No special desquamatin of autograft was observed in the middle and the last periods after operation.This method failed in four cases.On the animal experiment,xenodermal frame existing with their former pattern was observed eight weeks after operation.Conclusion The results showed that the study of the acellular xenodermal frame was valuable and its clinical application has a good prospect.
, 百拇医药
Key words：Acellular xenodermal frame Composite transplantation Burns▲
深度烧伤创面的修复,始终是烧伤专科领域的一个中心课题。单纯的自体薄皮片覆盖,无论是大张异体皮开窗嵌皮,或自体网状皮移植,或自体微粒皮移植,虽然都能有效地封闭创面,但由于缺乏足够的真皮基质,去支持移植皮片的分化成熟,因此,都有不同程度的瘢痕形成和功能障碍。目前,研究开发各种新型的生物材料,进行复合移植,已成为国内外学者新的关注热点。本文报道自制异种去细胞真皮支架与自体皮片复合移植,修复深度烧伤创面32例,取得较好疗效,现报告如下。
材料与方法
一、异种去细胞真皮支架的制备
1.活杀健康小白猪,取全层皮肤。去毛清洗消毒后用制皮机制备成0.4 mm厚的断层皮片。
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2.用0.05%洗必泰溶液浸泡三次,用高渗盐溶液浸泡24h后去除表皮,将真皮放入交联剂中固定。
3.用胰蛋白酶及一系列去污剂溶液处理脱去真皮中各种细胞成分(经病理切片证实,见封二图1)。
4.通过专用制网机将真皮支架轧成细网状大张皮片后,消毒灭菌。
5.在净化的环境下,用清洁PVE袋将真皮支架连同保养液一起置于常温下保存备用。
二、动物预实验
1.成年家犬一只,由江苏省原子医学研究所动物房提供。
2.经乙醚麻醉后,背部剃毛,常规消毒铺巾,在中线左、右侧分别切除3 cm×3 cm全层皮两组共6处,创面充分止血,庆大霉素纱布湿敷。
, 百拇医药
3.以左侧3处创面为实验组,均预置异种去细胞真皮支架,略小于创面,四角缝合固定,外用生物敷料,油纱布覆盖包扎。右侧3处创面为对照组,单纯覆盖油纱布包扎。
4.术后5天行第二次手术,取后肢腿部大张薄皮片,裁剪后,分别覆盖背部6处创面,完成左侧实验组的复合移植,右侧对照组的单纯移植,凡士林纱布加敷料包扎。
5.分别于第二次术后2、4、8周检查植皮区,并切取实验组、对照组各1处标本作大体解剖(肉眼观察)和病理切片镜检。
6.结果：6处创面均获痊愈,复合移植组和单纯移植组,愈后外观无明显差异,实验组在术后2、4、8周的标本大体解剖,见异种真皮支架均清晰可辨,并与上、下层自体组织紧密接合,但制作成病理切片经HE染色后,在普通光镜下检查,则难以区分。
临床资料
, 百拇医药 一、一般资料
本组32例,男20例,女12例,年龄8～62岁,烧伤面积1%～64%；复合移植部位为四肢,其中上肢24例,下肢8例；移植最大面积为10 cm×8 cm；移植时间：伤后3～26天,结果28例成功,4例失败。
二、方法
选择四肢Ⅲ度创面25例,深Ⅱ度创面6例,肉芽创面1例,分别予以切痂、削痂、肉芽创面清创术,充分止血后用庆大霉素纱布湿敷。裁剪适当大小的异种去细胞真皮支架,预置于创面上,四角缝合固定,外被人工胶原膜,用多层纱布敷料加压包扎,第一次手术完毕(术中注意无菌操作,创面止血充分)。第二次手术于术后4～10天进行,取自体大张薄皮片移植于异种真皮支架上,间断缝合,外用凡士林抗生素纱布覆盖,厚敷料加压包扎,术后5天常规换药观察。
三、结果
28例在第二次手术自体皮移植时见,真皮支架与创面紧密粘贴,有光泽,无炎性分泌物存在,即取大张自体皮覆盖完成创面封闭。术后换药观察无皮片坏死、炎症及排斥反应出现。其中19例出院后经4个月随访,效果满意(见表1)。
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表1 19例复合移植后4个月随访结果 评估指标
优
中
差
外观
15
4
柔软性
8
9
2
疤痕程度
5
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11
3
注：28例中,9例为外地患者,未获随访
4例在第二次手术时见真皮支架与创面分离,呈灰白色,有不同程度的炎性分泌物存在,作支架预置失败处理。去除真皮支架后,创面再行扩创,取自体皮移植修复,术后换药均痊愈。
四、典型病例
例1,男,19岁。因汽油火焰烧伤全身50%,Ⅲ度27%入院。伤后9天,行双下肢Ⅲ度创面切痂,左小腿外侧预置异种真皮支架5 cm×10 cm,四角缝合固定,外用异体皮连同其余创面一起覆盖。术后10天,第二次手术时见真皮支架与创底粘附良好,取大张自体薄皮片移植,其余创面移植小游离皮片(见封二图1),常规包扎。术后5天换药见皮片转色成活,术后2周,左小腿创面基本封闭。术后3个月,患者可下床活动,自觉复合移植区皮肤较柔软(见封二图2),其余手术区疤痕增生,弹性差,活动后易出水泡。
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图1 经特殊处理后的异种真皮支架病理切片证实已无细胞成份
图2 例1左下肢切痂创面预置的真皮支架粘附良好
例2,女,31岁。因火焰烧伤左手背,腕部Ⅲ度2%入院。伤后3天,行焦痂切除,腕部预置异种真皮支架5 cm×8 cm,四角缝合固定,外用异体皮创面覆盖。术后4天,第二次手术时见真皮支架粘附良好,取大张自体薄皮片,连同手背部创面一起移植修复,常规包扎。术后5天换药,见自体皮与基底紧密粘合,转色成活。术后3个月复查,左手腕部复合移植区无疤痕,活动良好,皮肤有弹性,皮纹清晰,而手背单纯移植区,活动度差,无弹性(见封二图3)。
图3 例1左下肢复合移植术后四个月随访疤痕明显减少
, 百拇医药
图4 例2左手腕部复合移植术后四个朋随访无疤痕,皮纹清晰
讨 论
一、异种去细胞真皮支架用于烧伤创面的复合移植,国内仅见1例报道[1]。去除细胞成分后的真皮基质,由于其完整地保留了真皮乳头层表面的基底膜,因此,可为移植皮肤细胞的新生和扩展提供有力的支持,同时可明显改善单纯薄皮片移植时,因真皮基质的缺乏,而导致成纤维细胞的异常增生所形成的疤痕。且由于其去除了引发宿主细胞识别反应的异种细胞成分,故几乎无免疫排斥性[2]。本文以动物预实验结果和临床应用资料,证实了异种去细胞真皮支架用于复合移植的可行性；而异种真皮支架由于其取材便捷、规范,制作成本相对较低,因此,其临床应用的前景,将比脱细胞异体真皮[2],或国外同类产品(AlloDerm)[3]更为科学和广泛。
二、本组临床资料的手术方法,均采取两次步骤。即真皮支架预置和自体皮片移植。我们充分考虑了以下两点因素：
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1.自体皮移植的成活,早期依赖于创面血浆渗出来营养。3～5天后则依靠新生毛细血管的建立。分次移植,有利于提高自体皮成活率。
2.创面有潜在因素(如感染,坏死组织,瘀血等),影响真皮支架粘附时,有可能导致自体皮移植失败。分次移植可对受皮区条件进行再评估,有感染或坏死组织存在时,可及时采取措施,减少病员再次取皮的痛苦。
本组28例复合移植成功者。早期观察及最长随访半年均未出现自体皮片坏死、炎症或排斥反应。愈合过程与贾生贤等[1]报道的“特殊脱屑”、“湿性脱落”不同。
三、4例预置真皮支架失败者,其中1例为肉芽创面,2例为深Ⅱ度创面削痂后的脂肪断层,1例为Ⅲ度焦痂伤后7天切痂。初步推测真皮支架未与创面粘附的原因,可能与创面感染、坏死组织清除不全、脂肪组织不易粘附等因素有关。关于异种去细胞真皮支架的临床适应证以及远期疗效观察,有待进一步的临床研究。■
, 百拇医药
参考文献：
[1]贾生贤,徐惠贞,廖镇江,等.无细胞真皮基质与自体皮复合移植的应用.上海第二医科大学学报,1998,18：25-28.
[2]孙永华,李迟,王春元,等.脱细胞异体真皮与自体薄皮片移植的研究与应用.中华整形烧伤外科杂志,1998,14：370-373.
[3]Wainwright DJ.Use of an acellular allograft dermal matrix(AlloDerm) in the management of full-thick-ness burns.Burns,1995,21：243-244.
收稿日期：1999-03-08
修稿日期：1999-08-24, 百拇医药
单位：杨敏杰(无锡市第三人民医院烧伤科 214041)； 谢卫(无锡市第三人民医院烧伤科 214041)； 顾在秋(无锡市第三人民医院烧伤科 214041)； 朱宇刚(无锡市第三人民医院烧伤科 214041)； 潘银根(启东市人民医院)
关键词：异种去细胞真皮支架；复合移植；烧伤
江苏医药000208 摘 要：目的 研制一种去细胞的异种真皮支架用于修复深度烧伤的切(削)痂创面。方法 选用健康小白猪全层皮,经特殊处理去除表皮及真皮中各种细胞成分,制备成保留基底膜的网状真皮支架。采用两步法将异种去细胞真皮支架与自体薄皮片复合移植于预实验动物(犬),并进而应用于临床深度烧伤的切(削)痂创面,共32例。结果 28例复合移植成功,术后早期无自体皮片坏死、炎症或排异反应,中、后期观察,外观及功能明显改善。4例失败。预实验动物术后8周异种真皮支架仍以原形存在。结论 异种去细胞真皮支架作为一种无抗原性的生物敷料,具有广泛的临床应用前景。
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The clinical application of the composite transplantation of acellular xenodermal frame with autograft
YANG Minjie,PAN Yingen,XIE Wei,et al
(Wuxi No.3 People′s Hospital,Wuxi 214041)
Abstract：Objective To develop an acellular xenodermal frame and to apply it in the repair of burning wounds after eschar excision.Methods An acellular xenodermal frame was made of pigskin and simultaneously grafted together with an overlying thin-split autograft in the burning wound of the experimental animal,then grafted to the burning wounds of 32 patients after eschar excision.Results The composite tranplantation of 28 patients was successful.There were no necrosis,shedding,inflammation and rejection of autographs in the earlier period after operation.No special desquamatin of autograft was observed in the middle and the last periods after operation.This method failed in four cases.On the animal experiment,xenodermal frame existing with their former pattern was observed eight weeks after operation.Conclusion The results showed that the study of the acellular xenodermal frame was valuable and its clinical application has a good prospect.
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Key words：Acellular xenodermal frame Composite transplantation Burns▲
深度烧伤创面的修复,始终是烧伤专科领域的一个中心课题。单纯的自体薄皮片覆盖,无论是大张异体皮开窗嵌皮,或自体网状皮移植,或自体微粒皮移植,虽然都能有效地封闭创面,但由于缺乏足够的真皮基质,去支持移植皮片的分化成熟,因此,都有不同程度的瘢痕形成和功能障碍。目前,研究开发各种新型的生物材料,进行复合移植,已成为国内外学者新的关注热点。本文报道自制异种去细胞真皮支架与自体皮片复合移植,修复深度烧伤创面32例,取得较好疗效,现报告如下。
材料与方法
一、异种去细胞真皮支架的制备
1.活杀健康小白猪,取全层皮肤。去毛清洗消毒后用制皮机制备成0.4 mm厚的断层皮片。
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2.用0.05%洗必泰溶液浸泡三次,用高渗盐溶液浸泡24h后去除表皮,将真皮放入交联剂中固定。
3.用胰蛋白酶及一系列去污剂溶液处理脱去真皮中各种细胞成分(经病理切片证实,见封二图1)。
4.通过专用制网机将真皮支架轧成细网状大张皮片后,消毒灭菌。
5.在净化的环境下,用清洁PVE袋将真皮支架连同保养液一起置于常温下保存备用。
二、动物预实验
1.成年家犬一只,由江苏省原子医学研究所动物房提供。
2.经乙醚麻醉后,背部剃毛,常规消毒铺巾,在中线左、右侧分别切除3 cm×3 cm全层皮两组共6处,创面充分止血,庆大霉素纱布湿敷。
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3.以左侧3处创面为实验组,均预置异种去细胞真皮支架,略小于创面,四角缝合固定,外用生物敷料,油纱布覆盖包扎。右侧3处创面为对照组,单纯覆盖油纱布包扎。
4.术后5天行第二次手术,取后肢腿部大张薄皮片,裁剪后,分别覆盖背部6处创面,完成左侧实验组的复合移植,右侧对照组的单纯移植,凡士林纱布加敷料包扎。
5.分别于第二次术后2、4、8周检查植皮区,并切取实验组、对照组各1处标本作大体解剖(肉眼观察)和病理切片镜检。
6.结果：6处创面均获痊愈,复合移植组和单纯移植组,愈后外观无明显差异,实验组在术后2、4、8周的标本大体解剖,见异种真皮支架均清晰可辨,并与上、下层自体组织紧密接合,但制作成病理切片经HE染色后,在普通光镜下检查,则难以区分。
临床资料
, 百拇医药 一、一般资料
本组32例,男20例,女12例,年龄8～62岁,烧伤面积1%～64%；复合移植部位为四肢,其中上肢24例,下肢8例；移植最大面积为10 cm×8 cm；移植时间：伤后3～26天,结果28例成功,4例失败。
二、方法
选择四肢Ⅲ度创面25例,深Ⅱ度创面6例,肉芽创面1例,分别予以切痂、削痂、肉芽创面清创术,充分止血后用庆大霉素纱布湿敷。裁剪适当大小的异种去细胞真皮支架,预置于创面上,四角缝合固定,外被人工胶原膜,用多层纱布敷料加压包扎,第一次手术完毕(术中注意无菌操作,创面止血充分)。第二次手术于术后4～10天进行,取自体大张薄皮片移植于异种真皮支架上,间断缝合,外用凡士林抗生素纱布覆盖,厚敷料加压包扎,术后5天常规换药观察。
三、结果
28例在第二次手术自体皮移植时见,真皮支架与创面紧密粘贴,有光泽,无炎性分泌物存在,即取大张自体皮覆盖完成创面封闭。术后换药观察无皮片坏死、炎症及排斥反应出现。其中19例出院后经4个月随访,效果满意(见表1)。
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表1 19例复合移植后4个月随访结果 评估指标
优
中
差
外观
15
4
柔软性
8
9
2
疤痕程度
5
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11
3
注：28例中,9例为外地患者,未获随访
4例在第二次手术时见真皮支架与创面分离,呈灰白色,有不同程度的炎性分泌物存在,作支架预置失败处理。去除真皮支架后,创面再行扩创,取自体皮移植修复,术后换药均痊愈。
四、典型病例
例1,男,19岁。因汽油火焰烧伤全身50%,Ⅲ度27%入院。伤后9天,行双下肢Ⅲ度创面切痂,左小腿外侧预置异种真皮支架5 cm×10 cm,四角缝合固定,外用异体皮连同其余创面一起覆盖。术后10天,第二次手术时见真皮支架与创底粘附良好,取大张自体薄皮片移植,其余创面移植小游离皮片(见封二图1),常规包扎。术后5天换药见皮片转色成活,术后2周,左小腿创面基本封闭。术后3个月,患者可下床活动,自觉复合移植区皮肤较柔软(见封二图2),其余手术区疤痕增生,弹性差,活动后易出水泡。
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图1 经特殊处理后的异种真皮支架病理切片证实已无细胞成份
图2 例1左下肢切痂创面预置的真皮支架粘附良好
例2,女,31岁。因火焰烧伤左手背,腕部Ⅲ度2%入院。伤后3天,行焦痂切除,腕部预置异种真皮支架5 cm×8 cm,四角缝合固定,外用异体皮创面覆盖。术后4天,第二次手术时见真皮支架粘附良好,取大张自体薄皮片,连同手背部创面一起移植修复,常规包扎。术后5天换药,见自体皮与基底紧密粘合,转色成活。术后3个月复查,左手腕部复合移植区无疤痕,活动良好,皮肤有弹性,皮纹清晰,而手背单纯移植区,活动度差,无弹性(见封二图3)。
图3 例1左下肢复合移植术后四个月随访疤痕明显减少
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图4 例2左手腕部复合移植术后四个朋随访无疤痕,皮纹清晰
讨 论
一、异种去细胞真皮支架用于烧伤创面的复合移植,国内仅见1例报道[1]。去除细胞成分后的真皮基质,由于其完整地保留了真皮乳头层表面的基底膜,因此,可为移植皮肤细胞的新生和扩展提供有力的支持,同时可明显改善单纯薄皮片移植时,因真皮基质的缺乏,而导致成纤维细胞的异常增生所形成的疤痕。且由于其去除了引发宿主细胞识别反应的异种细胞成分,故几乎无免疫排斥性[2]。本文以动物预实验结果和临床应用资料,证实了异种去细胞真皮支架用于复合移植的可行性；而异种真皮支架由于其取材便捷、规范,制作成本相对较低,因此,其临床应用的前景,将比脱细胞异体真皮[2],或国外同类产品(AlloDerm)[3]更为科学和广泛。
二、本组临床资料的手术方法,均采取两次步骤。即真皮支架预置和自体皮片移植。我们充分考虑了以下两点因素：
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1.自体皮移植的成活,早期依赖于创面血浆渗出来营养。3～5天后则依靠新生毛细血管的建立。分次移植,有利于提高自体皮成活率。
2.创面有潜在因素(如感染,坏死组织,瘀血等),影响真皮支架粘附时,有可能导致自体皮移植失败。分次移植可对受皮区条件进行再评估,有感染或坏死组织存在时,可及时采取措施,减少病员再次取皮的痛苦。
本组28例复合移植成功者。早期观察及最长随访半年均未出现自体皮片坏死、炎症或排斥反应。愈合过程与贾生贤等[1]报道的“特殊脱屑”、“湿性脱落”不同。
三、4例预置真皮支架失败者,其中1例为肉芽创面,2例为深Ⅱ度创面削痂后的脂肪断层,1例为Ⅲ度焦痂伤后7天切痂。初步推测真皮支架未与创面粘附的原因,可能与创面感染、坏死组织清除不全、脂肪组织不易粘附等因素有关。关于异种去细胞真皮支架的临床适应证以及远期疗效观察,有待进一步的临床研究。■
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参考文献：
[1]贾生贤,徐惠贞,廖镇江,等.无细胞真皮基质与自体皮复合移植的应用.上海第二医科大学学报,1998,18：25-28.
[2]孙永华,李迟,王春元,等.脱细胞异体真皮与自体薄皮片移植的研究与应用.中华整形烧伤外科杂志,1998,14：370-373.
[3]Wainwright DJ.Use of an acellular allograft dermal matrix(AlloDerm) in the management of full-thick-ness burns.Burns,1995,21：243-244.
收稿日期：1999-03-08
修稿日期：1999-08-24, 百拇医药