HPLC法测定氧氟沙星注射液的含量
作者：赵建平
单位：广西民族医院 广西南宁市 530001
关键词：氧氟沙星注射液；氧氟沙星；HPLC法；含量测定
华夏医学000205 摘要 目的:采用HPLC法测定氧氟沙星注射液的含量。方法:采用HPLC法,以氧氟沙星为对照品,检测波长为293nm,甲醇:枸缘酸(0.05mol/L)∶乙腈∶醋酸铵溶液(0.5mol/L)∶10g/L磷酸(100∶75∶22∶1∶2)为流动相。结果:氧氟沙星的平均回收率为97.44%、RSD为1.83%。结论:本法结果准确，精密度、重现性均好,可作为该制剂的含量测定。
中图分类号 R917
Analysis of Ofloxacin in Injection Solution with HPLC
, 百拇医药
Zhao Jianpin
(Guangxi Nationality Hospital,Nanning 530001)
Abstract To determine Ofloxacin content in it's injection salution,a HPLC proccedure was developed using ofloxacin as the control standard and 293 nm as the wave lenghth.The mobile phase consists of methanol∶0.05mol.L-1citric acid∶acetonitrile∶0.5mol.L-1 ammonium acetete∶10g.L-1Rhosphoric acid (100∶75∶22∶1∶2)with the condition deseribed,a recovery rate of 97.44% for ofloxacin and a RSD of 1.83% were achieved and therefore the HPLC proccedure can be applied for determination of ofloxacin in injection solution.
, 百拇医药
Key words Ofloxacin injection,ofloxacin,HPLC,analysis
目前氧氟沙星的主要制剂有片剂、胶囊剂和注射剂等,但其含量测定方法却不尽相同。片剂采用液相内标法[1],胶囊剂采用液相外标法[2],而注射剂则采用紫外分光光度法[3，4]。为了探讨氧氟沙星制剂含量的统一测定方法,本文参考胶囊剂的方法采用液相外标法对注射剂进行含量测定,并与紫外分光光度法测定结果作比较。现报道如下。
1 材料
1.1 仪器 日本岛津LC-10A高效液相色谱仪;SPD-10A紫外检测仪;威玛通用多媒体色谱工作站。
1.2 试剂、药品 氧氟沙星对照品(广西南宁制药集团有限公司950908,含量99.0%);乙腈为色谱纯,枸橼酸、醋酸铵为化学纯,甲醇、磷酸等为分析纯;样品1:氧氟沙星注射液(中外合资广东彼迪药业有限公司0.2%100ml/瓶,98080802),样品2:氧氟沙星注射液(广西横县人民医院制剂室0.2%100ml/瓶,990226),样品3:氧氟沙星注射液(广西宾阳县人民医院制剂室0.2%100ml/瓶,990311)。
, 百拇医药
2 方法和结果
2.1 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇—枸橼酸(0.05mol/L)—乙腈—醋酸铵溶液(0.5mol/L)-10g/L磷酸(100∶75∶22∶1∶2)为流动相;检测波长λ=293nm;理论极数按氧氟沙星峰计应不低于1500,分离度大于1.5。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取氧氟沙星对照品(经五氧化二磷干燥24h)0.0250g,置100ml容量瓶中,加0.1mol/L盐酸至刻度,溶解并摇匀。精密吸取1ml置50ml容量瓶中,以0.1mol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,即得。
2.3 供试品溶液的制备 精密吸取样品溶液1、2和3各5ml,分别置100ml容量瓶中,以0.1mol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取各5ml,分别置100ml容量瓶中,加0.1mol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液1、2和3。
, 百拇医药
2.4 阴性溶液的制备 按处方量取不含氧氟沙星的其它成分配成的溶液5ml,同法制成阴性溶液。
2.5 测定条件的选择 吸收波长的选择：氧氟沙星对照品溶液和供试品溶液紫外光谱均在293nm波长处有一共同最大吸收,而阴性液、流动相和溶剂在293nm波长处无吸收。详见图1、2、3、4和5。
2.6 色谱柱 用十八烷基硅烷键合硅胶填充剂的C18柱(日本岛津公司),色谱柱的塔极数以氧氟沙星峰计不得少于1500。
2.7 流动相 甲醇:枸橼酸(0.05mol/L)∶乙腈∶醋酸铵溶液(0.5mol/L)∶10g/L磷酸(100∶75∶22∶1∶2)。
2.8 色谱分离 取氧氟沙星对照品溶液及供试品溶液进样得色谱图,分离度均大于1.5,分离结果满意。详见图6、7。
, 百拇医药
2.9 空白试验 阴性液在氧氟沙星出峰处不干扰。详见图8。
图1 氧氟沙星紫外吸收
图2 样品紫外吸收
图3 阴性液紫外吸收
图4 流动相紫外吸收
图5 溶剂紫外吸收
, 百拇医药
图6 氧氟沙星对照品图(保留时间6.13，批号950908)
图7 氧氟沙星注射液(保留时间6.13，批号98080802)
图8 阴性液图
2.10 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液4、7、10、13和16μl,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积为纵坐标,氧氟沙星含量为横坐标,绘图,得一不通过原点的直线。回归方程为:Y=6241134.68x-41367.27，r=0.9998，结果表明氧氟沙星在0.0198～0.0792μg之间有良好的线性关系。详见表1。
2.11 稳定性 取供试品溶液,每隔一定时间测定峰面积1次,结果0h94.47%(286641),3h93.89%(284886)、7h94.91%(287981),RSD为0.54%。可知供试品液在7h内稳定。
, 百拇医药
2.12 精密度试验 取同一供试品溶液,重复测定5次,结果为:93.53%(283803)、93.81%(284641)、95.97%(291190)、94.90%(287936)、97.69%(296413)、RSD为1.79%。
2.13 重复性试验 取同一批样品5份,按供试品溶液制备项下方法制备并测定,结果为99.01%(300432)、95.53%(289856)、96.86%(293880)、94.45%(286595)、95.74%(290496),RSD为1.80%。
表1 标准曲线表 序号
1
2
3
4
, 百拇医药
5
进样量(m/μg)
0.0198
0.03465
0.04950
0.06435
0.07920
峰面积
85106
173051
264911.5
359480.5
, 百拇医药
455295.5
回归方程
Y=6241134.68x-41367.27 r=0.9998
2.14 加样回收试验 精密吸取已知含量的样品(94.9%)5ml5份,分别置100ml容量瓶中,以0.1mol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,各精密吸取2ml,分别置100ml容量瓶中,加入氧氟沙星对照品液(0.25mg/ml)1ml,加0.1mol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,各精密吸取10μl,依法测定,计算回收率。见表2。
2.15 样品含量测定 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,依法测定,按外标法计算含量,并与紫外分光光度法测定结果比较,结果见表3,表4。表2 回收率测定结果 序号
样品中氧氟沙星量
, http://www.100md.com
(m/μg)
加入氧氟沙星量
(m/μg)
测得氧氟沙星总量
(m/μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
SD
RSD
(%)
1
, 百拇医药
0.043702
99.89
2
0.043303
98.28
3
0.01898
0.02475
0.042772
96.13
97.44
0.01786
1.83
, 百拇医药
4
0.043126
97.56
5
0.042583
95.36
表3 HPLC法:样品含量测定结果(n=5) 供样厂家
样品及批号
相当于标示量(%)
1
2
3
, 百拇医药 4
5
SD
RSD(%)
中外合资广东
彼迪药业有限
公司
氧氟沙星注射液
0.2%100ml/瓶
98080802
94.6
94.9
, http://www.100md.com
95.2
95.1
95.3
95.02
0.27748
0.29
广西横县人民
医院制剂室
氧氟沙星注射液
0.2%100ml/瓶
990226
103.7
, 百拇医药 104.7
104.2
104.3
104.5
104.28
0.37683
0.36
广西宾阳县人
民医院制剂室
氧氟沙星注射液
0.2%100ml/瓶
990311
, 百拇医药 103.3
104.1
103.7
103.8
103.4
103.66
0.32094
0.31
表4 紫外分光光度法∶样品含量测定结果(n=5) 供样厂家
样品及批号
相当于标示量(%)
1
, http://www.100md.com
2
3
4
5
SD
RSD(%)
中外合资广东
彼迪药业有限
公司
氧氟沙星注射液
0.2%100ml/瓶
98080802
, 百拇医药
95.7
96.0
96.9
95.4
96.4
96.08
0.58907
0.61
广西横县人民
医院制剂室
氧氟沙星注射液
0.2%100ml/瓶
990226
, 百拇医药
103.7
103.5
103.7
105.2
105.4
104.30
0.91924
0.88
广西宾阳县人
民医院制剂室
氧氟沙星注射液
0.2%100ml/瓶
, 百拇医药 990311
103.6
103.0
104.5
104.6
104.3
104.00
0.68191
0.66
3 讨论
3.1 氧氟沙星的片剂、胶囊剂和注射剂等三种不同制剂,其含量测定均不相同,片剂采用液相内标法[1],胶囊剂采用液相外标法[2],而注射剂则采用紫外分光光度法[3，4]。笔者采用液相外标法,对三个不同生产厂家的3批样品进行测定,并与紫外分光光度法测定结果进行比较,两法结果相近,并均符合有关规定。
, http://www.100md.com
3.2 本法测定结果准确，精密度、重现性均好,回收率为97.44%,RSD为1.83%,可作为该制剂的含量测定,并且建议对同一原料药氧氟沙星的片剂、胶囊剂和注射剂应采用统一的方法——液相外标法,以利控制其质量。
参考文献
1，部颁标准(试行)WS:19(X-16)-93
2，部颁标准(试行)WS:267(X-225)-93
3，部颁标准(试行)WS:236(X-194)-94
4，部颁标准(试行)WS:389(X-336)-95
(收稿 1999-11-02), http://www.100md.com
单位：广西民族医院 广西南宁市 530001
关键词：氧氟沙星注射液；氧氟沙星；HPLC法；含量测定
华夏医学000205 摘要 目的:采用HPLC法测定氧氟沙星注射液的含量。方法:采用HPLC法,以氧氟沙星为对照品,检测波长为293nm,甲醇:枸缘酸(0.05mol/L)∶乙腈∶醋酸铵溶液(0.5mol/L)∶10g/L磷酸(100∶75∶22∶1∶2)为流动相。结果:氧氟沙星的平均回收率为97.44%、RSD为1.83%。结论:本法结果准确，精密度、重现性均好,可作为该制剂的含量测定。
中图分类号 R917
Analysis of Ofloxacin in Injection Solution with HPLC
, 百拇医药
Zhao Jianpin
(Guangxi Nationality Hospital,Nanning 530001)
Abstract To determine Ofloxacin content in it's injection salution,a HPLC proccedure was developed using ofloxacin as the control standard and 293 nm as the wave lenghth.The mobile phase consists of methanol∶0.05mol.L-1citric acid∶acetonitrile∶0.5mol.L-1 ammonium acetete∶10g.L-1Rhosphoric acid (100∶75∶22∶1∶2)with the condition deseribed,a recovery rate of 97.44% for ofloxacin and a RSD of 1.83% were achieved and therefore the HPLC proccedure can be applied for determination of ofloxacin in injection solution.
, 百拇医药
Key words Ofloxacin injection,ofloxacin,HPLC,analysis
目前氧氟沙星的主要制剂有片剂、胶囊剂和注射剂等,但其含量测定方法却不尽相同。片剂采用液相内标法[1],胶囊剂采用液相外标法[2],而注射剂则采用紫外分光光度法[3，4]。为了探讨氧氟沙星制剂含量的统一测定方法,本文参考胶囊剂的方法采用液相外标法对注射剂进行含量测定,并与紫外分光光度法测定结果作比较。现报道如下。
1 材料
1.1 仪器 日本岛津LC-10A高效液相色谱仪;SPD-10A紫外检测仪;威玛通用多媒体色谱工作站。
1.2 试剂、药品 氧氟沙星对照品(广西南宁制药集团有限公司950908,含量99.0%);乙腈为色谱纯,枸橼酸、醋酸铵为化学纯,甲醇、磷酸等为分析纯;样品1:氧氟沙星注射液(中外合资广东彼迪药业有限公司0.2%100ml/瓶,98080802),样品2:氧氟沙星注射液(广西横县人民医院制剂室0.2%100ml/瓶,990226),样品3:氧氟沙星注射液(广西宾阳县人民医院制剂室0.2%100ml/瓶,990311)。
, 百拇医药
2 方法和结果
2.1 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇—枸橼酸(0.05mol/L)—乙腈—醋酸铵溶液(0.5mol/L)-10g/L磷酸(100∶75∶22∶1∶2)为流动相;检测波长λ=293nm;理论极数按氧氟沙星峰计应不低于1500,分离度大于1.5。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取氧氟沙星对照品(经五氧化二磷干燥24h)0.0250g,置100ml容量瓶中,加0.1mol/L盐酸至刻度,溶解并摇匀。精密吸取1ml置50ml容量瓶中,以0.1mol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,即得。
2.3 供试品溶液的制备 精密吸取样品溶液1、2和3各5ml,分别置100ml容量瓶中,以0.1mol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取各5ml,分别置100ml容量瓶中,加0.1mol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液1、2和3。
, 百拇医药
2.4 阴性溶液的制备 按处方量取不含氧氟沙星的其它成分配成的溶液5ml,同法制成阴性溶液。
2.5 测定条件的选择 吸收波长的选择：氧氟沙星对照品溶液和供试品溶液紫外光谱均在293nm波长处有一共同最大吸收,而阴性液、流动相和溶剂在293nm波长处无吸收。详见图1、2、3、4和5。
2.6 色谱柱 用十八烷基硅烷键合硅胶填充剂的C18柱(日本岛津公司),色谱柱的塔极数以氧氟沙星峰计不得少于1500。
2.7 流动相 甲醇:枸橼酸(0.05mol/L)∶乙腈∶醋酸铵溶液(0.5mol/L)∶10g/L磷酸(100∶75∶22∶1∶2)。
2.8 色谱分离 取氧氟沙星对照品溶液及供试品溶液进样得色谱图,分离度均大于1.5,分离结果满意。详见图6、7。
, 百拇医药
2.9 空白试验 阴性液在氧氟沙星出峰处不干扰。详见图8。
图1 氧氟沙星紫外吸收
图2 样品紫外吸收
图3 阴性液紫外吸收
图4 流动相紫外吸收
图5 溶剂紫外吸收
, 百拇医药
图6 氧氟沙星对照品图(保留时间6.13，批号950908)
图7 氧氟沙星注射液(保留时间6.13，批号98080802)
图8 阴性液图
2.10 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液4、7、10、13和16μl,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积为纵坐标,氧氟沙星含量为横坐标,绘图,得一不通过原点的直线。回归方程为:Y=6241134.68x-41367.27，r=0.9998，结果表明氧氟沙星在0.0198～0.0792μg之间有良好的线性关系。详见表1。
2.11 稳定性 取供试品溶液,每隔一定时间测定峰面积1次,结果0h94.47%(286641),3h93.89%(284886)、7h94.91%(287981),RSD为0.54%。可知供试品液在7h内稳定。
, 百拇医药
2.12 精密度试验 取同一供试品溶液,重复测定5次,结果为:93.53%(283803)、93.81%(284641)、95.97%(291190)、94.90%(287936)、97.69%(296413)、RSD为1.79%。
2.13 重复性试验 取同一批样品5份,按供试品溶液制备项下方法制备并测定,结果为99.01%(300432)、95.53%(289856)、96.86%(293880)、94.45%(286595)、95.74%(290496),RSD为1.80%。
表1 标准曲线表 序号
1
2
3
4
, 百拇医药
5
进样量(m/μg)
0.0198
0.03465
0.04950
0.06435
0.07920
峰面积
85106
173051
264911.5
359480.5
, 百拇医药
455295.5
回归方程
Y=6241134.68x-41367.27 r=0.9998
2.14 加样回收试验 精密吸取已知含量的样品(94.9%)5ml5份,分别置100ml容量瓶中,以0.1mol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,各精密吸取2ml,分别置100ml容量瓶中,加入氧氟沙星对照品液(0.25mg/ml)1ml,加0.1mol/L盐酸稀释至刻度,摇匀,各精密吸取10μl,依法测定,计算回收率。见表2。
2.15 样品含量测定 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,依法测定,按外标法计算含量,并与紫外分光光度法测定结果比较,结果见表3,表4。表2 回收率测定结果 序号
样品中氧氟沙星量
, http://www.100md.com
(m/μg)
加入氧氟沙星量
(m/μg)
测得氧氟沙星总量
(m/μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
SD
RSD
(%)
1
, 百拇医药
0.043702
99.89
2
0.043303
98.28
3
0.01898
0.02475
0.042772
96.13
97.44
0.01786
1.83
, 百拇医药
4
0.043126
97.56
5
0.042583
95.36
表3 HPLC法:样品含量测定结果(n=5) 供样厂家
样品及批号
相当于标示量(%)
1
2
3
, 百拇医药 4
5
SD
RSD(%)
中外合资广东
彼迪药业有限
公司
氧氟沙星注射液
0.2%100ml/瓶
98080802
94.6
94.9
, http://www.100md.com
95.2
95.1
95.3
95.02
0.27748
0.29
广西横县人民
医院制剂室
氧氟沙星注射液
0.2%100ml/瓶
990226
103.7
, 百拇医药 104.7
104.2
104.3
104.5
104.28
0.37683
0.36
广西宾阳县人
民医院制剂室
氧氟沙星注射液
0.2%100ml/瓶
990311
, 百拇医药 103.3
104.1
103.7
103.8
103.4
103.66
0.32094
0.31
表4 紫外分光光度法∶样品含量测定结果(n=5) 供样厂家
样品及批号
相当于标示量(%)
1
, http://www.100md.com
2
3
4
5
SD
RSD(%)
中外合资广东
彼迪药业有限
公司
氧氟沙星注射液
0.2%100ml/瓶
98080802
, 百拇医药
95.7
96.0
96.9
95.4
96.4
96.08
0.58907
0.61
广西横县人民
医院制剂室
氧氟沙星注射液
0.2%100ml/瓶
990226
, 百拇医药
103.7
103.5
103.7
105.2
105.4
104.30
0.91924
0.88
广西宾阳县人
民医院制剂室
氧氟沙星注射液
0.2%100ml/瓶
, 百拇医药 990311
103.6
103.0
104.5
104.6
104.3
104.00
0.68191
0.66
3 讨论
3.1 氧氟沙星的片剂、胶囊剂和注射剂等三种不同制剂,其含量测定均不相同,片剂采用液相内标法[1],胶囊剂采用液相外标法[2],而注射剂则采用紫外分光光度法[3，4]。笔者采用液相外标法,对三个不同生产厂家的3批样品进行测定,并与紫外分光光度法测定结果进行比较,两法结果相近,并均符合有关规定。
, http://www.100md.com
3.2 本法测定结果准确，精密度、重现性均好,回收率为97.44%,RSD为1.83%,可作为该制剂的含量测定,并且建议对同一原料药氧氟沙星的片剂、胶囊剂和注射剂应采用统一的方法——液相外标法,以利控制其质量。
参考文献
1，部颁标准(试行)WS:19(X-16)-93
2，部颁标准(试行)WS:267(X-225)-93
3，部颁标准(试行)WS:236(X-194)-94
4，部颁标准(试行)WS:389(X-336)-95
(收稿 1999-11-02), http://www.100md.com