急性白血病患者P-糖蛋白和CD34的表达及其临床意义
作者：林秀梅 谢兆霞 祝平安
单位：林秀梅(湖南医科大学附属湘雅医院血液科 长沙 410008)；谢兆霞(湖南医科大学附属湘雅医院血液科 长沙 410008)；祝平安(衡阳1415医院血液科 衡阳 421002)
关键词：白血病；药物抗药性；糖蛋白；CD34
湖南医科大学学报000227[摘要] 用免疫细胞化学ABC法检测30例急性白血 病患者骨髓单个核细胞P-糖蛋白(P-170)和CD34的表达。结果示：P-170或CD34表达在急 性非淋巴细胞白血病组和急性淋巴细胞白血病组之间的差异不明显(P>0.05)；P-170或 CD34阳性表达组临床疗效差，与阴性表达组相比差异明显(P<0.05)。提示，同时检测两 者可提高对急性白血病的疗效判断。
[中图分类号] R733.71 [文献标识码] A [文章编号] 1000-5625(2000)02-0171-02
, 百拇医药
Clinical significance of P-glycoprotein and CD34 expressi on of acute leukemia
LIN Xiu-mei, XIE Zhao-xia
(Department of Hematology, Xiangya Hospital, Hunan Medical Univers ity Changsha 410008)
ZHU Ping-an
(Department of Hematology, 415 Hospital Hengyang 421002)
[Abstract] The expression of P-glycoprotein(P-170) and CD34 was detected in t he bone marrow mononuclear cells of 30 patients with acute leukemia by immunocyt ochemical technique using JSB-1 and Tük 3 monoclonal antibody. The resu lt s were that expression of P-170 and CD34 had no signficant difference between a cute nonlymphoblastic leukemia and acute lymphoblastic leukemia(P>0.05). The clinical therapeutic effect was poor in P-170 or CD34 positive patients and ha d significant difference compared with those negative patients(P<0.05). Jud gments of therapeutic effect for acute leukemia can be improved by detecting th e expression of P-170 and CD34 simultaneously.
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[Key words] leukemia; drug-resistance; glycoprotein; CD34
多药耐药(MDR)乃急性白血病(AL)患者化疗失败的主要原 因之一，其 机制研究最多的是P-糖蛋白(P-9P，P-170)的过度表达。本研究检测了30例急性白血病患 者P-170和CD34，并分析两者的表达与临床疗效的关系。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 研究对象 30例AL患者均系湘雅医院住院或门诊病人， 经临床及骨髓细胞形态与细胞化学染色确诊。男18例，女12例，平均年龄32.8(8～65)岁。 根据FAB分型，急性非淋巴细胞白血病(ANLL)19(M29，M46，M54)例，急性淋巴细胞白 血病(ALL)11(L16，L25)例；疗效判断标准按1987年苏州全国白血病化学治疗讨论会标 准[1]。ANLL患者接受HOAP，DA，VM26+Ara-c方案，ALL患者接受COMP，VAP方案 化疗。
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1.2 试剂 JSB-1单抗为美国Signet Lab产品；Tük 3单抗为中 国医学科学院血液学研究所免疫室产品；生物素-亲和素过氧化物酶复合物(ABC)试剂为美 国Vector Lab.产品。
1.3 检测方法及结果判定 采用免疫细胞化学ABC法。抽取骨髓液2ml， 肝素抗凝，经Ficoll-Hypaque分离出单个核细胞，调整细胞浓度为(1～2)×106.ml -1，1%多聚甲醛固定，3% H2O2处理后，2% Tris小牛血清白蛋白和马血清分别孵育， 依次加入第一、二、三抗体，AEC染色，封片后专人读片。每次实验均设阳性和阴性对照， 细胞膜染成棕黄色者即为阳性细胞。计数200个细胞，计算细胞阳性率，P-170以≥10%作为 阳性分界[2]，CD34以≥20%作为阳性分界[3]。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 样本组间比较采用χ2检验成四格表确切概率法； 两指标间的关系采用Kappa检验。
2 结 果
2.1 AL患者P-170或CD34表达与临床疗效关系 分别检测P-170 和CD34，其表达与临床疗效的关系在ANLL组和ALL组之间差异无统计学意义(P>0.05)。P -170或CD34阳性组疗效显著差于其阴性组(分别为P<0.05和P<0.01)。P-170和CD3 4的检测结果与临床疗效的符合率均为80.0%(24/30)，两者对耐药患者的灵敏度分别为86. 4%(19/22)和81.8%(18/22)(表1)。
表1 两类AL患者P-170或CD34的表达与临床 疗效关系 组别
ANLL
ALL
, http://www.100md.com
p
例数
疗效差
缓解
例数
疗效差
缓解
P-170+
15
12
3
7
7
, 百拇医药
0
>0.05
P-170-
4
1
3
4
2
2
>0.05
CD34+
11
10
, 百拇医药
1
9
8
1
>0.05
CD34-
8
3
5
2
1
1
>0.05
, 百拇医药 2.2 AL患者P-170/CD34表达与临床疗效关系 同时检测P-170 及CD34，阳性组疗效显著差于阴性组(P<0.01)。两者同时检测的结果与临床疗效的符合 率为86.7%(26/30)，对耐药患者的灵敏度为100%(22/22)，特异度为50%(4/8)(表2)。表2 同时检测AL患者P-170/CD34的表达与 临床疗效关系 组别
P-170/CD34表达
疗效 差
缓解
阳性组
P-170+/CD34+
15
1
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P-170+/CD34-
4
2
P-170-/CD34+
3
1
阴性组
P-170-/CD34-
0
4
两组比较：P<0.01
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3 讨 论
P-170作为一种能量依赖的药 物外排泵，能将多种结构和功能不同的亲脂化合物泵出细胞外，从而产生MDR。研究发现， AL患者P-170表达水平与预后呈负相关，ANLL患者P-170和CD34抗原同时表达者预 后更差[4]。
追踪观察30例AL患者P-170表达与临床疗效的关系，发现其在ANLL和ALL组之间差异无统计 学意义(P>0.05)。P-170阳性组疗效显著差于P-170阴性组(P<0.05)。Campos等[5]报道，AL患者化疗前P-170的过度表达，提示白血病本身存在一定程度 的内在抗药性，化疗后表现为难治复发者P-170表达进一步增加，提示P-170阳性的细胞在 诱导化疗时生存下来，在体内形成耐药的白血病细胞并逐渐积蓄。30例AL患者化疗后，P-1 70阳性组中有3例达到缓解，P-170阴性组中有3例疗效差，说明P-170过度表达虽然是AL 患者MDR的主要机制，但并非唯一机制。
, 百拇医药
CD34是一种阶段特异性而非系特异性的细胞分化抗原，选择性地表达于造血干细胞、祖细胞 、 血管内皮细胞和胚胎成纤维细胞膜上。正常骨髓CD34阳性细胞包括各系集落形成细胞及其前 体细胞。CD34在最早期的造血细胞有高水平表达，但随着细胞的成熟其表达水平下降；当 细胞成熟至失去克隆能力的阶段时即不能检出CD34[6]。本组患者CD34表 达与临床疗效的关系在ANLL组和ALL组之间差异无统计学意义(P>0.05)，CD34阳性组疗 效显著差于CD34阴性组(P<0.01)，提示检测AL患者的CD34表达有助于判断疗效。
正常多能干细胞处于G0期以及表达Pgp(P-170)具有外排功能。这是正常CD34阳性细胞的 生理防御机制[7]。正常造血 细胞和恶性造血细胞均存在由Pgp介导的药物外排现象。白血病CD34阳性的细胞具有高度的M DR活性，与Pgp表达显著相关，形成CD34/MDR1表型[8]。
, 百拇医药
本文AL患者的P-170和/或CD34阳性表达组疗效显著低于两者阴性表达组(P<0.01) ；两者同时检测对耐药患者的灵敏度(100%)高于分别检测时的灵敏度(分别为86.4%和81.8 %)。说明两者同时检测可提高对急性白血病的疗效判断。
参考文献：
[1] 杨仁池，杨纯正，郝玉书，等.白血病患者多药耐药相关蛋白基 因和多药耐药基因mdr1的表达及其临床意义[J].中华血液学杂志，1996，17(2)：67-69.
[2] 谢兆霞.抗MDR抗体检测白血病细胞P-糖蛋白表达[J].湖南医科大学学报，1992 ，17(1)：63-64.
[3] 邹萍，向建平，陈智超.急性髓系白血病CD34抗原表达的研究：1表达特点和临床意 义[J].中华血液学杂志，1994，15(7)：339-341.
, 百拇医药
[4] Guerci A, Merlin JL, Missoum N, et al. Predictive value for treatment outcome in acute myeloid leukemia of cellular daunorubicin accumulation and P- glycoprotein expression simultaneously determined by flow cytometry[J]. Blood , 1995,85(8):2147-2153.
[5] Campos L, Guyotat D, Archimbaud E, et al. Clinical significance of mu ltidrug resistance P-glycoprotein expression of acute nonlymphoblastic leukemia cells at diagnosis[J]. Blood, 1992,79:473-476.
, 百拇医药
[6] Strauss LC, Rowely SD, La Russa VF, et al. Antigenic analysis of hema topoiesis V, characterization of My-10 antigen expression by normal lymphohemat opoietic progenitor cells[J]. Exp Hematol, 1986,14:878.
[7] Smeets M, Raymakers R, Vierwinden G, et al. A low but functionally si gnificant MDR1 expression protects primitive haemopoietic progenitor cells from anthracycline toxicity[J]. Br J Haematol, 1997,96:346-355.
[8] Licht T, Pastan I, Gottesman M, et al. P-glycoprotein mediated multi drug resistance in normal and neoplastic hematopoietic cells[J]. Ann Hematol, 1994,69:159-171., http://www.100md.com
单位：林秀梅(湖南医科大学附属湘雅医院血液科 长沙 410008)；谢兆霞(湖南医科大学附属湘雅医院血液科 长沙 410008)；祝平安(衡阳1415医院血液科 衡阳 421002)
关键词：白血病；药物抗药性；糖蛋白；CD34
湖南医科大学学报000227[摘要] 用免疫细胞化学ABC法检测30例急性白血 病患者骨髓单个核细胞P-糖蛋白(P-170)和CD34的表达。结果示：P-170或CD34表达在急 性非淋巴细胞白血病组和急性淋巴细胞白血病组之间的差异不明显(P>0.05)；P-170或 CD34阳性表达组临床疗效差，与阴性表达组相比差异明显(P<0.05)。提示，同时检测两 者可提高对急性白血病的疗效判断。
[中图分类号] R733.71 [文献标识码] A [文章编号] 1000-5625(2000)02-0171-02
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Clinical significance of P-glycoprotein and CD34 expressi on of acute leukemia
LIN Xiu-mei, XIE Zhao-xia
(Department of Hematology, Xiangya Hospital, Hunan Medical Univers ity Changsha 410008)
ZHU Ping-an
(Department of Hematology, 415 Hospital Hengyang 421002)
[Abstract] The expression of P-glycoprotein(P-170) and CD34 was detected in t he bone marrow mononuclear cells of 30 patients with acute leukemia by immunocyt ochemical technique using JSB-1 and Tük 3 monoclonal antibody. The resu lt s were that expression of P-170 and CD34 had no signficant difference between a cute nonlymphoblastic leukemia and acute lymphoblastic leukemia(P>0.05). The clinical therapeutic effect was poor in P-170 or CD34 positive patients and ha d significant difference compared with those negative patients(P<0.05). Jud gments of therapeutic effect for acute leukemia can be improved by detecting th e expression of P-170 and CD34 simultaneously.
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[Key words] leukemia; drug-resistance; glycoprotein; CD34
多药耐药(MDR)乃急性白血病(AL)患者化疗失败的主要原 因之一，其 机制研究最多的是P-糖蛋白(P-9P，P-170)的过度表达。本研究检测了30例急性白血病患 者P-170和CD34，并分析两者的表达与临床疗效的关系。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 研究对象 30例AL患者均系湘雅医院住院或门诊病人， 经临床及骨髓细胞形态与细胞化学染色确诊。男18例，女12例，平均年龄32.8(8～65)岁。 根据FAB分型，急性非淋巴细胞白血病(ANLL)19(M29，M46，M54)例，急性淋巴细胞白 血病(ALL)11(L16，L25)例；疗效判断标准按1987年苏州全国白血病化学治疗讨论会标 准[1]。ANLL患者接受HOAP，DA，VM26+Ara-c方案，ALL患者接受COMP，VAP方案 化疗。
, http://www.100md.com
1.2 试剂 JSB-1单抗为美国Signet Lab产品；Tük 3单抗为中 国医学科学院血液学研究所免疫室产品；生物素-亲和素过氧化物酶复合物(ABC)试剂为美 国Vector Lab.产品。
1.3 检测方法及结果判定 采用免疫细胞化学ABC法。抽取骨髓液2ml， 肝素抗凝，经Ficoll-Hypaque分离出单个核细胞，调整细胞浓度为(1～2)×106.ml -1，1%多聚甲醛固定，3% H2O2处理后，2% Tris小牛血清白蛋白和马血清分别孵育， 依次加入第一、二、三抗体，AEC染色，封片后专人读片。每次实验均设阳性和阴性对照， 细胞膜染成棕黄色者即为阳性细胞。计数200个细胞，计算细胞阳性率，P-170以≥10%作为 阳性分界[2]，CD34以≥20%作为阳性分界[3]。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 样本组间比较采用χ2检验成四格表确切概率法； 两指标间的关系采用Kappa检验。
2 结 果
2.1 AL患者P-170或CD34表达与临床疗效关系 分别检测P-170 和CD34，其表达与临床疗效的关系在ANLL组和ALL组之间差异无统计学意义(P>0.05)。P -170或CD34阳性组疗效显著差于其阴性组(分别为P<0.05和P<0.01)。P-170和CD3 4的检测结果与临床疗效的符合率均为80.0%(24/30)，两者对耐药患者的灵敏度分别为86. 4%(19/22)和81.8%(18/22)(表1)。
表1 两类AL患者P-170或CD34的表达与临床 疗效关系 组别
ANLL
ALL
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p
例数
疗效差
缓解
例数
疗效差
缓解
P-170+
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CD34+
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, 百拇医药 2.2 AL患者P-170/CD34表达与临床疗效关系 同时检测P-170 及CD34，阳性组疗效显著差于阴性组(P<0.01)。两者同时检测的结果与临床疗效的符合 率为86.7%(26/30)，对耐药患者的灵敏度为100%(22/22)，特异度为50%(4/8)(表2)。表2 同时检测AL患者P-170/CD34的表达与 临床疗效关系 组别
P-170/CD34表达
疗效 差
缓解
阳性组
P-170+/CD34+
15
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P-170+/CD34-
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P-170-/CD34+
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阴性组
P-170-/CD34-
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两组比较：P<0.01
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3 讨 论
P-170作为一种能量依赖的药 物外排泵，能将多种结构和功能不同的亲脂化合物泵出细胞外，从而产生MDR。研究发现， AL患者P-170表达水平与预后呈负相关，ANLL患者P-170和CD34抗原同时表达者预 后更差[4]。
追踪观察30例AL患者P-170表达与临床疗效的关系，发现其在ANLL和ALL组之间差异无统计 学意义(P>0.05)。P-170阳性组疗效显著差于P-170阴性组(P<0.05)。Campos等[5]报道，AL患者化疗前P-170的过度表达，提示白血病本身存在一定程度 的内在抗药性，化疗后表现为难治复发者P-170表达进一步增加，提示P-170阳性的细胞在 诱导化疗时生存下来，在体内形成耐药的白血病细胞并逐渐积蓄。30例AL患者化疗后，P-1 70阳性组中有3例达到缓解，P-170阴性组中有3例疗效差，说明P-170过度表达虽然是AL 患者MDR的主要机制，但并非唯一机制。
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CD34是一种阶段特异性而非系特异性的细胞分化抗原，选择性地表达于造血干细胞、祖细胞 、 血管内皮细胞和胚胎成纤维细胞膜上。正常骨髓CD34阳性细胞包括各系集落形成细胞及其前 体细胞。CD34在最早期的造血细胞有高水平表达，但随着细胞的成熟其表达水平下降；当 细胞成熟至失去克隆能力的阶段时即不能检出CD34[6]。本组患者CD34表 达与临床疗效的关系在ANLL组和ALL组之间差异无统计学意义(P>0.05)，CD34阳性组疗 效显著差于CD34阴性组(P<0.01)，提示检测AL患者的CD34表达有助于判断疗效。
正常多能干细胞处于G0期以及表达Pgp(P-170)具有外排功能。这是正常CD34阳性细胞的 生理防御机制[7]。正常造血 细胞和恶性造血细胞均存在由Pgp介导的药物外排现象。白血病CD34阳性的细胞具有高度的M DR活性，与Pgp表达显著相关，形成CD34/MDR1表型[8]。
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本文AL患者的P-170和/或CD34阳性表达组疗效显著低于两者阴性表达组(P<0.01) ；两者同时检测对耐药患者的灵敏度(100%)高于分别检测时的灵敏度(分别为86.4%和81.8 %)。说明两者同时检测可提高对急性白血病的疗效判断。
参考文献：
[1] 杨仁池，杨纯正，郝玉书，等.白血病患者多药耐药相关蛋白基 因和多药耐药基因mdr1的表达及其临床意义[J].中华血液学杂志，1996，17(2)：67-69.
[2] 谢兆霞.抗MDR抗体检测白血病细胞P-糖蛋白表达[J].湖南医科大学学报，1992 ，17(1)：63-64.
[3] 邹萍，向建平，陈智超.急性髓系白血病CD34抗原表达的研究：1表达特点和临床意 义[J].中华血液学杂志，1994，15(7)：339-341.
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[4] Guerci A, Merlin JL, Missoum N, et al. Predictive value for treatment outcome in acute myeloid leukemia of cellular daunorubicin accumulation and P- glycoprotein expression simultaneously determined by flow cytometry[J]. Blood , 1995,85(8):2147-2153.
[5] Campos L, Guyotat D, Archimbaud E, et al. Clinical significance of mu ltidrug resistance P-glycoprotein expression of acute nonlymphoblastic leukemia cells at diagnosis[J]. Blood, 1992,79:473-476.
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[6] Strauss LC, Rowely SD, La Russa VF, et al. Antigenic analysis of hema topoiesis V, characterization of My-10 antigen expression by normal lymphohemat opoietic progenitor cells[J]. Exp Hematol, 1986,14:878.
[7] Smeets M, Raymakers R, Vierwinden G, et al. A low but functionally si gnificant MDR1 expression protects primitive haemopoietic progenitor cells from anthracycline toxicity[J]. Br J Haematol, 1997,96:346-355.
[8] Licht T, Pastan I, Gottesman M, et al. P-glycoprotein mediated multi drug resistance in normal and neoplastic hematopoietic cells[J]. Ann Hematol, 1994,69:159-171., http://www.100md.com