慢性乙肝患者Th1/Th2应答与乙肝病毒感染单个核细胞的关系
作者：邢同京 章廉 侯金林 张明霞 杨洁 骆抗先
单位：邢同京(第一军医大学南方医院感染内科，广东 广州 510515)；章廉(第一军医大学南方医院感染内科，广东 广州 510515)；侯金林(第一军医大学南方医院感染内科，广东 广州 510515)；张明霞(第一军医大学南方医院感染内科，广东 广州 510515)；杨洁(第一军医大学南方医院感染内科，广东 广州 510515)；骆抗先(第一军医大学南方医院感染内科，广东 广州 510515)
关键词：乙型肝炎；T淋巴细胞；Th2细胞；单核细胞
第一军医大学学报000219 摘要：目的 探讨乙肝病毒侵犯淋巴细胞对慢性乙肝患者免疫功能状态的影响。方法 采用双抗体夹心法检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中细胞因子的水平， PCR方法扩增乙肝病毒DNA片段。血清中HBV DNA检测采用斑点杂交法。结果 与正常对照组比较，慢性乙型肝炎患者的IFN-γ水平降低，但无显著差异性；而IL-4水平明显增高(F=17.4，P<0.01)。血清中HBV DNA 水平与PBMC培养上清液中的IFN-γ水平呈负相关(rs= 0.53, P<0.01)。62.9%(35/56)的慢性乙肝患者外周血PBMC中检出HBV DNA，HBV DNA 阳性组和阴性组的IFN-γ水平具有显著差异(F=15.2，P<0.01)。结论 (1)慢性乙肝患者的外周血以Th2类细胞因子占优势。(2)乙肝病毒侵犯淋巴细胞可能影响其免疫功能的发挥。
, http://www.100md.com
中图分类号：R329.24; R512.62 文献标识码：A
文章编号：1000-2588(2000)02-0117-03
Influence of HBV invasion into peripheral blood mononuclear cells on immune response of the patients with chronic hepatitis B
XING Tong-jing，ZHANG Lian，HOU Jin-ling，ZHANG Ming-xia，YANG Jie，LUO Kang-xian
(Department of Infectious Diseases, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515,China)
, 百拇医药
Abstract: Objective To explore the influence of HBV invasion into peripheral blood mononuclear cells (PBMC) on the immune response of patients with chronic hepatitis B. Methods The cytokine levels in the culture supernatant of PBMC from 56 patients with chronic hepatitis B were determined by ELISA, and plymerase chain reaction (PCR) method was employed to amplify the HBV DNA fragment. Results The level of IFN-γin patients with hepatitis B was lower than that of the control, but the difference was not statistically significant. In contrast, the level of IL-4 were significantly higher than that of the control (P<0.01). The serum level of HBV DNA were negatively correlated with that of IFN-γin culture supernatants of PBMC. Thirty-five patients with HBV DNA positive in PBMC were identified from 56 patients with hepatitis B, and their IFN-γlevel proved to be significantly different. Conclusions (1) Th2 cell-mediated immune response is predominant in chronic hepatitis B, which is associated with the chronicity of HBV infection. (2) HBV invasion into PBMC may affect Th1 and Th2 cell-mediated immune response of the patients with chronic hepatitis B.
, 百拇医药
Key words: hepatitis B; T lymphocytes; Th2 lymphocytes; monocytes
目前研究认为，乙型肝炎病毒侵犯淋巴细胞，可能影响慢性乙肝患者的免疫功能，并与HBV在体内的持续感染有关，但具体机制尚不清楚。为此，我们应用双抗体夹心法和PCR方法，对56例慢性乙肝患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells ，PBMC)培养上清液中Th1/Th2类细胞因子的水平及其与乙肝病毒在PBMC中的存在状况进行研究，旨在探讨乙肝病毒侵犯淋巴细胞对慢性乙肝患者免疫功能状态的影响，以期进一步阐明乙肝慢性化的机制。
1 材料与方法
1.1病例来源
收集我院1998～1999年住院的慢性乙型肝炎患者56例，其中男41例，女15例。年龄17～61岁，平均36±9岁。诊断按1995年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎标准诊断[1]。排除因应用抗病毒药物等而影响HBV DNA水平的患者，本组患者均行肝穿组织活检术，肝组织炎症活动分级按Scheuer标准[2]。正常对照28例取自献血员。
, 百拇医药
1.2标本的采集与处理
无菌采集肝素抗凝静脉血5 ml (保留血清，采用斑点杂交法检测血清HBV DNA)，常规分离PBMC，用PBS洗5次，以尽可能去除残留的血浆HBV DNA，收集第5次洗液和细胞。将细胞分为两份，一份用RPMI1640培养液稀释至1×106个/ml，台盼蓝染色，细胞活力>95%，接种入24孔细胞培养板，加入植物血凝素(PHA，终浓度为100 μg/ ml)，置37℃、5% CO2培养箱培养72 h，离心后收集上清，于 20℃保存，待测。另一份于 70℃保存，用于抽提DNA。同时收集正常献血员抗凝血作为对照。
1.3细胞因子检测
采用双抗体夹心法，IFN-γ和IL-4试剂盒购自美国Genzyme 公司 (深圳晶美公司代理)，按试剂盒说明书操作。
1.4引物设计及基因扩增 淋巴细胞、洗液和血清中的HBV DNA提取方法参照文献[3]。引物序列：正义链(1 730～1 754)，CTGGGAGGAGTTGGGGGAGGAGATT；反义链(2 394～2 370)，GGCGAGGGAGTTCTTCTTCTAGGGG，均由上海生工生物工程公司合成。50 μ l PCR反应体系加入：10×dNTP 5 μ l，10×PCR buffer 5 μ l，DNA 模板5 μ l，正、负链引物各1 μ l，TaqDNA 聚合酶2 U，加去离子水补至50 μ l。94℃变性3 min，进入PCR 循环：94℃ 50 s、56℃ 50 s、72℃ 60 s，35个周期，72℃ 5 min结束反应。 取PCR反应产物5～10 μ l 加适量溴酚蓝，2%琼脂糖电泳，紫外线灯下观察，见一664 bp条带者为阳性。
, 百拇医药
1.5 统计学处理
结果以均值±标准差 (
±s)表示，组间比较采用双样本均数F检验，相关性分析采用等级相关。
2 结果
56例慢性乙型肝炎患者和正常对照组外周血淋巴细胞培养上清液中IFN-γ和IL-4的水平见表1。结果显示：与正常对照组比较，慢性乙型肝炎患者的IFN-γ水平降低，但无显著差异性(F=3.6，P>0.05)，而IL-4水平明显增高(F=17.4，P<0.01)应用斑点杂交法检测56例慢性乙型肝炎患者血清中HBV DNA的含量，其与PBMC培养上清液中细胞因子水平的关系见表2。结果显示：血清中HBV DNA 水平与IFN-γ水平呈负相关(rs= 0.53，P<0.01)，而与IL-4无明显相关(rs= 0.17，P>0.05)。
, 百拇医药
表1 慢性乙型肝炎和正常对照PBMC培养上清液中细胞因子的含量(±SD)
Tab.1 Comparison of the cytokine levels of cultural supernatant of PBMCbetween the patients with CHB and normal controls(Mean±SD) Groups
n
IFN-γ(pg/ml)
IL-4(pg/ml)
Control
28
, 百拇医药
2 134.7±486.9
75.3±19.6
Test
56
1 792.3±344.1
168.2±34.5*
*P<0.01, F=17.4 vs control group
表2 慢性乙肝患者血清中HBV DNA与PBMC培养上清液中细胞因子水平的关系(±s)
Tab.2 Relationship of HBV DNA in serum with the cytokine levels of
, 百拇医药
cultural supernatant of PBMC in the patients with CHB (Mean±SD) HBV DNA
n
ξIFN-γ(pg/ml)
IL-4(pg/ml)
0 pg/ml
25
1947.3±276.8
137.4±49.2
≤200 pg/ml
12
1831.9±305.7
, http://www.100md.com
121.6±33.4
≤500 pg/ml
9
1623.7±346.2
194.5±77.5
>500 pg/ml
10
1472.5±278.9
169.4±47.6
ξP<0.01，rs= 0.53
提取56例慢性乙肝患者外周血单个核细胞的HBV DNA，PCR扩增后发现HBV DNA阳性35例，阳性率为62.9%，而洗液均为阴性。可排除血浆吸附的影响。HBV DNA 阳性和阴性患者IFN-γ和IL-4的水平见表3。两组比较，前者的IFN-γ水平明显降低，具有显著差异(F=15.2， P=0.01)。而IL-4水平无明显差异(F=3.9，P>0.05)。
, 百拇医药
表3 慢性乙肝PBMC 中HBV DNA阳性和阴性患者IFN-γ和IL-4的水平(±s)
Tab.3 Comparison of the cytokine levels of cultural supernatant of PBMC between HBV DNA positive and negative groups (Mean±SD) Groups
n
IFN-γ(pg/ml)
IL-4(pg/ml)
HBV DNA positive
35
, 百拇医药
1 657.4±237.8
195.7±67.5
HBV DNA negative
21
2 012.3±396.4*
147.8±41.2
* P<0.01, F=15.2 vs HBV DNA positive group
图1 慢性乙肝患者PBMC中HBV DNA扩增片段电泳结果
Fig.1 Electrophoresis picture of HBV DNA amplifier fragment of PBMC in the patients with CHBL1: molecular marker; L2, 4: positive samples; L3: negative samples; L5: negative control
, http://www.100md.com
3 讨论
目前研究认为，HBV抗原特异的Th1/Th2细胞亚群之间的平衡关系，可能影响慢性化的发生和持续。HBV抗原特异的Th1细胞占据优势，倾向于发生急性或自限性感染，而Th2细胞占据优势，倾向于发生持续性的HBV感染[4]。表1结果显示：与正常对照组比较，慢性乙肝患者PBMC培养上清液含量中的IFN-γ的水平均较低，但差异无显著性，而IL-4水平明显升高，差异有显著性(F=17.4，P<0.01)，提示慢性乙肝患者的外周血以Th2类细胞因子占优势。Th2类细胞因子抑制宿主的细胞免疫应答，可能与乙型肝炎的慢性化有关。
那么，为什么慢性乙肝患者会产生Th1/Th2失衡呢？推测可能与HBV 侵犯慢性乙肝患者PBMC有关。已有研究表明：HBV感染PBMC后，可能影响其免疫功能的发挥。Oquendo等[5]研究发现，HBV感染单核细胞系THP-1能够抑制前炎症因子IL-1和IL-6 的mRNA的表达和蛋白质的分泌。Chen 等[6]发现HBV SPⅡ启动子和X基因的反义寡核苷酸能增强T和B 细胞的增生，而且表达CD40的T、B 细胞百分率也增加。本研究结果显示：慢性乙肝患者PBMC中HBV DNA阳性和阴性组的IFN-γ的水平存在明显差异。与正常对照组比较，HBV DNA阳性患者的IFN-γ水平降低，阴性组则无明显变化；而IL-4水平均较正常组为高，提示导致PBMC 产生细胞因子的变化可能与乙肝病毒侵犯有关。推测乙肝病毒感染PBMC，可能通过产生一些转录调节蛋白，影响上述细胞因子产生的信号转导途径，使细胞因子谱发生改变，值得进一步研究。
, http://www.100md.com
最近Schlaak等[7]研究发现血清中高HBV DNA含量能抑制IL-12对IFN-γ生成的诱导作用，鉴于IL-12是激发有效细胞免疫的重要因子之一，IL-12功能的封闭可能是慢性HBV 感染患者对HBV抗原的细胞免疫反应受抑制的关键因素之一。在血清高HBV DNA水平状态下，HBV抗原诱导产生大量的介导免疫抑制的因子IL-10的产生，而HBV抗原诱导产生IFN-γ的反应则缺乏或很弱。表2显示血清中HBV DNA 水平与IFN-γ水平呈负相关(rs= 0.53，P<0.01)，而与IL-4无明显相关(rs= 0.17，P>0.05)，提示血清中HBV DNA 水平可能影响PBMC产生细胞因子的能力。
致谢：本研究承深圳科兴公司和先灵葆雅(中国)有限公司提供赞助。
作者简介：邢同京(1970-)，男，山东潍坊人，1993年毕业于泰山医学院，硕士，主治医师，电话：85141944
, 百拇医药
参考文献
1，病毒性肝炎防治方案. 中华传染病杂志[J], 1995, 13: 241.
2，Fukuda R, Ishimura N, Nguyen TX et al. The expression of IL-2, IL-4 and IFN- γmRNA using liver biopsies at different phases of acute exacerbation of chronic hepatiti B[J]. Clin Exp Immunol, 1995, 100:446～51.
3，Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular Cloning[M]. 2 nd ed. New York: CSH Laboratory, 1989. 466.
, 百拇医药
4，Milich DR. Influence of T-helper cell subsets and crossgulation in hepatitis B virus infection [J]. J Virol Hepatol, 1997, 4 (Suppl.2):48～59.
5，Oquendo J, Dubanchet S, Capel F et al. Suppressive effect of hepatitis B virus on the induction of interleukin-1 beta and interleukin-6 gene expression in the THP-1 human monocytic cell line[J]. Eur Cytokine Netw, 1996, 7(4):793～800.
6，Chen C, Zhou Y, Yao Z et al. Stimulation of human lymphocyte proliferation and CD40 antigen expression by phosphorothioate oligonucleotides complementary to hepatitis B virus genome[J]. J Virol hepatol, 1996, 3:167～72.
7，Schlaak JF, Tully G, Hanns F et al. The presence of high amounts of HBV DNA in serum is associated with suppressed costimulatory effects of interukin 12 on HBV-induced immune response[J]. J Hepatol, 1999, 30:353～8.
收稿日期：1999-12-12, 百拇医药
单位：邢同京(第一军医大学南方医院感染内科，广东 广州 510515)；章廉(第一军医大学南方医院感染内科，广东 广州 510515)；侯金林(第一军医大学南方医院感染内科，广东 广州 510515)；张明霞(第一军医大学南方医院感染内科，广东 广州 510515)；杨洁(第一军医大学南方医院感染内科，广东 广州 510515)；骆抗先(第一军医大学南方医院感染内科，广东 广州 510515)
关键词：乙型肝炎；T淋巴细胞；Th2细胞；单核细胞
第一军医大学学报000219 摘要：目的 探讨乙肝病毒侵犯淋巴细胞对慢性乙肝患者免疫功能状态的影响。方法 采用双抗体夹心法检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中细胞因子的水平， PCR方法扩增乙肝病毒DNA片段。血清中HBV DNA检测采用斑点杂交法。结果 与正常对照组比较，慢性乙型肝炎患者的IFN-γ水平降低，但无显著差异性；而IL-4水平明显增高(F=17.4，P<0.01)。血清中HBV DNA 水平与PBMC培养上清液中的IFN-γ水平呈负相关(rs= 0.53, P<0.01)。62.9%(35/56)的慢性乙肝患者外周血PBMC中检出HBV DNA，HBV DNA 阳性组和阴性组的IFN-γ水平具有显著差异(F=15.2，P<0.01)。结论 (1)慢性乙肝患者的外周血以Th2类细胞因子占优势。(2)乙肝病毒侵犯淋巴细胞可能影响其免疫功能的发挥。
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中图分类号：R329.24; R512.62 文献标识码：A
文章编号：1000-2588(2000)02-0117-03
Influence of HBV invasion into peripheral blood mononuclear cells on immune response of the patients with chronic hepatitis B
XING Tong-jing，ZHANG Lian，HOU Jin-ling，ZHANG Ming-xia，YANG Jie，LUO Kang-xian
(Department of Infectious Diseases, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515,China)
, 百拇医药
Abstract: Objective To explore the influence of HBV invasion into peripheral blood mononuclear cells (PBMC) on the immune response of patients with chronic hepatitis B. Methods The cytokine levels in the culture supernatant of PBMC from 56 patients with chronic hepatitis B were determined by ELISA, and plymerase chain reaction (PCR) method was employed to amplify the HBV DNA fragment. Results The level of IFN-γin patients with hepatitis B was lower than that of the control, but the difference was not statistically significant. In contrast, the level of IL-4 were significantly higher than that of the control (P<0.01). The serum level of HBV DNA were negatively correlated with that of IFN-γin culture supernatants of PBMC. Thirty-five patients with HBV DNA positive in PBMC were identified from 56 patients with hepatitis B, and their IFN-γlevel proved to be significantly different. Conclusions (1) Th2 cell-mediated immune response is predominant in chronic hepatitis B, which is associated with the chronicity of HBV infection. (2) HBV invasion into PBMC may affect Th1 and Th2 cell-mediated immune response of the patients with chronic hepatitis B.
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Key words: hepatitis B; T lymphocytes; Th2 lymphocytes; monocytes
目前研究认为，乙型肝炎病毒侵犯淋巴细胞，可能影响慢性乙肝患者的免疫功能，并与HBV在体内的持续感染有关，但具体机制尚不清楚。为此，我们应用双抗体夹心法和PCR方法，对56例慢性乙肝患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells ，PBMC)培养上清液中Th1/Th2类细胞因子的水平及其与乙肝病毒在PBMC中的存在状况进行研究，旨在探讨乙肝病毒侵犯淋巴细胞对慢性乙肝患者免疫功能状态的影响，以期进一步阐明乙肝慢性化的机制。
1 材料与方法
1.1病例来源
收集我院1998～1999年住院的慢性乙型肝炎患者56例，其中男41例，女15例。年龄17～61岁，平均36±9岁。诊断按1995年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎标准诊断[1]。排除因应用抗病毒药物等而影响HBV DNA水平的患者，本组患者均行肝穿组织活检术，肝组织炎症活动分级按Scheuer标准[2]。正常对照28例取自献血员。
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1.2标本的采集与处理
无菌采集肝素抗凝静脉血5 ml (保留血清，采用斑点杂交法检测血清HBV DNA)，常规分离PBMC，用PBS洗5次，以尽可能去除残留的血浆HBV DNA，收集第5次洗液和细胞。将细胞分为两份，一份用RPMI1640培养液稀释至1×106个/ml，台盼蓝染色，细胞活力>95%，接种入24孔细胞培养板，加入植物血凝素(PHA，终浓度为100 μg/ ml)，置37℃、5% CO2培养箱培养72 h，离心后收集上清，于 20℃保存，待测。另一份于 70℃保存，用于抽提DNA。同时收集正常献血员抗凝血作为对照。
1.3细胞因子检测
采用双抗体夹心法，IFN-γ和IL-4试剂盒购自美国Genzyme 公司 (深圳晶美公司代理)，按试剂盒说明书操作。
1.4引物设计及基因扩增 淋巴细胞、洗液和血清中的HBV DNA提取方法参照文献[3]。引物序列：正义链(1 730～1 754)，CTGGGAGGAGTTGGGGGAGGAGATT；反义链(2 394～2 370)，GGCGAGGGAGTTCTTCTTCTAGGGG，均由上海生工生物工程公司合成。50 μ l PCR反应体系加入：10×dNTP 5 μ l，10×PCR buffer 5 μ l，DNA 模板5 μ l，正、负链引物各1 μ l，TaqDNA 聚合酶2 U，加去离子水补至50 μ l。94℃变性3 min，进入PCR 循环：94℃ 50 s、56℃ 50 s、72℃ 60 s，35个周期，72℃ 5 min结束反应。 取PCR反应产物5～10 μ l 加适量溴酚蓝，2%琼脂糖电泳，紫外线灯下观察，见一664 bp条带者为阳性。
, 百拇医药
1.5 统计学处理
结果以均值±标准差 (
±s)表示，组间比较采用双样本均数F检验，相关性分析采用等级相关。2 结果
56例慢性乙型肝炎患者和正常对照组外周血淋巴细胞培养上清液中IFN-γ和IL-4的水平见表1。结果显示：与正常对照组比较，慢性乙型肝炎患者的IFN-γ水平降低，但无显著差异性(F=3.6，P>0.05)，而IL-4水平明显增高(F=17.4，P<0.01)应用斑点杂交法检测56例慢性乙型肝炎患者血清中HBV DNA的含量，其与PBMC培养上清液中细胞因子水平的关系见表2。结果显示：血清中HBV DNA 水平与IFN-γ水平呈负相关(rs= 0.53，P<0.01)，而与IL-4无明显相关(rs= 0.17，P>0.05)。
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表1 慢性乙型肝炎和正常对照PBMC培养上清液中细胞因子的含量(
±SD)Tab.1 Comparison of the cytokine levels of cultural supernatant of PBMCbetween the patients with CHB and normal controls(Mean±SD) Groups
n
IFN-γ(pg/ml)
IL-4(pg/ml)
Control
28
, 百拇医药
2 134.7±486.9
75.3±19.6
Test
56
1 792.3±344.1
168.2±34.5*
*P<0.01, F=17.4 vs control group
表2 慢性乙肝患者血清中HBV DNA与PBMC培养上清液中细胞因子水平的关系(
±s)Tab.2 Relationship of HBV DNA in serum with the cytokine levels of
, 百拇医药
cultural supernatant of PBMC in the patients with CHB (Mean±SD) HBV DNA
n
ξIFN-γ(pg/ml)
IL-4(pg/ml)
0 pg/ml
25
1947.3±276.8
137.4±49.2
≤200 pg/ml
12
1831.9±305.7
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121.6±33.4
≤500 pg/ml
9
1623.7±346.2
194.5±77.5
>500 pg/ml
10
1472.5±278.9
169.4±47.6
ξP<0.01，rs= 0.53
提取56例慢性乙肝患者外周血单个核细胞的HBV DNA，PCR扩增后发现HBV DNA阳性35例，阳性率为62.9%，而洗液均为阴性。可排除血浆吸附的影响。HBV DNA 阳性和阴性患者IFN-γ和IL-4的水平见表3。两组比较，前者的IFN-γ水平明显降低，具有显著差异(F=15.2， P=0.01)。而IL-4水平无明显差异(F=3.9，P>0.05)。
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表3 慢性乙肝PBMC 中HBV DNA阳性和阴性患者IFN-γ和IL-4的水平(
±s)Tab.3 Comparison of the cytokine levels of cultural supernatant of PBMC between HBV DNA positive and negative groups (Mean±SD) Groups
n
IFN-γ(pg/ml)
IL-4(pg/ml)
HBV DNA positive
35
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1 657.4±237.8
195.7±67.5
HBV DNA negative
21
2 012.3±396.4*
147.8±41.2
* P<0.01, F=15.2 vs HBV DNA positive group
图1 慢性乙肝患者PBMC中HBV DNA扩增片段电泳结果
Fig.1 Electrophoresis picture of HBV DNA amplifier fragment of PBMC in the patients with CHBL1: molecular marker; L2, 4: positive samples; L3: negative samples; L5: negative control
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3 讨论
目前研究认为，HBV抗原特异的Th1/Th2细胞亚群之间的平衡关系，可能影响慢性化的发生和持续。HBV抗原特异的Th1细胞占据优势，倾向于发生急性或自限性感染，而Th2细胞占据优势，倾向于发生持续性的HBV感染[4]。表1结果显示：与正常对照组比较，慢性乙肝患者PBMC培养上清液含量中的IFN-γ的水平均较低，但差异无显著性，而IL-4水平明显升高，差异有显著性(F=17.4，P<0.01)，提示慢性乙肝患者的外周血以Th2类细胞因子占优势。Th2类细胞因子抑制宿主的细胞免疫应答，可能与乙型肝炎的慢性化有关。
那么，为什么慢性乙肝患者会产生Th1/Th2失衡呢？推测可能与HBV 侵犯慢性乙肝患者PBMC有关。已有研究表明：HBV感染PBMC后，可能影响其免疫功能的发挥。Oquendo等[5]研究发现，HBV感染单核细胞系THP-1能够抑制前炎症因子IL-1和IL-6 的mRNA的表达和蛋白质的分泌。Chen 等[6]发现HBV SPⅡ启动子和X基因的反义寡核苷酸能增强T和B 细胞的增生，而且表达CD40的T、B 细胞百分率也增加。本研究结果显示：慢性乙肝患者PBMC中HBV DNA阳性和阴性组的IFN-γ的水平存在明显差异。与正常对照组比较，HBV DNA阳性患者的IFN-γ水平降低，阴性组则无明显变化；而IL-4水平均较正常组为高，提示导致PBMC 产生细胞因子的变化可能与乙肝病毒侵犯有关。推测乙肝病毒感染PBMC，可能通过产生一些转录调节蛋白，影响上述细胞因子产生的信号转导途径，使细胞因子谱发生改变，值得进一步研究。
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最近Schlaak等[7]研究发现血清中高HBV DNA含量能抑制IL-12对IFN-γ生成的诱导作用，鉴于IL-12是激发有效细胞免疫的重要因子之一，IL-12功能的封闭可能是慢性HBV 感染患者对HBV抗原的细胞免疫反应受抑制的关键因素之一。在血清高HBV DNA水平状态下，HBV抗原诱导产生大量的介导免疫抑制的因子IL-10的产生，而HBV抗原诱导产生IFN-γ的反应则缺乏或很弱。表2显示血清中HBV DNA 水平与IFN-γ水平呈负相关(rs= 0.53，P<0.01)，而与IL-4无明显相关(rs= 0.17，P>0.05)，提示血清中HBV DNA 水平可能影响PBMC产生细胞因子的能力。
致谢：本研究承深圳科兴公司和先灵葆雅(中国)有限公司提供赞助。
作者简介：邢同京(1970-)，男，山东潍坊人，1993年毕业于泰山医学院，硕士，主治医师，电话：85141944
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参考文献
1，病毒性肝炎防治方案. 中华传染病杂志[J], 1995, 13: 241.
2，Fukuda R, Ishimura N, Nguyen TX et al. The expression of IL-2, IL-4 and IFN- γmRNA using liver biopsies at different phases of acute exacerbation of chronic hepatiti B[J]. Clin Exp Immunol, 1995, 100:446～51.
3，Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular Cloning[M]. 2 nd ed. New York: CSH Laboratory, 1989. 466.
, 百拇医药
4，Milich DR. Influence of T-helper cell subsets and crossgulation in hepatitis B virus infection [J]. J Virol Hepatol, 1997, 4 (Suppl.2):48～59.
5，Oquendo J, Dubanchet S, Capel F et al. Suppressive effect of hepatitis B virus on the induction of interleukin-1 beta and interleukin-6 gene expression in the THP-1 human monocytic cell line[J]. Eur Cytokine Netw, 1996, 7(4):793～800.
6，Chen C, Zhou Y, Yao Z et al. Stimulation of human lymphocyte proliferation and CD40 antigen expression by phosphorothioate oligonucleotides complementary to hepatitis B virus genome[J]. J Virol hepatol, 1996, 3:167～72.
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收稿日期：1999-12-12, 百拇医药