TGFα对胃癌细胞周期的作用及tyrphostin 51对TGFα作用的抑制
作者：梁卫江 肖冰 赖卓胜 张万岱
单位：梁卫江(第一军医大学南方医院全军消化内科研究所，广东 广州 510515)；肖冰(第一军医大学南方医院全军消化内科研究所，广东 广州 510515)；赖卓胜(第一军医大学南方医院全军消化内科研究所，广东 广州 510515)；张万岱(第一军医大学南方医院全军消化内科研究所，广东 广州 510515)
关键词：TGFα；Tyrphostin 51；胃癌；细胞周期
第一军医大学学报000212 摘要：目的 探索TGFα对胃癌细胞周期的促进作用，以及PTK抑制剂对这种作用的抑制效应。方法 利用细胞体外培养技术，观察TGFα对胃癌SGC7901细胞的促增殖作用；细胞经G1期同步化后，用流式细胞仪检测TGFα作用不同时间的细胞周期变化，用3H-TdR掺入法检测TGFα对细胞DNA合成的影响；加PTK抑制剂tyrphostin 51 处理后用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 TGFα对SGC7901具有明显的促增殖作用，细胞生长曲线上移；TGFα作用4、6 h后S期细胞和作用8、10 h后G2+M 期细胞均明显增加，作用5 h 后DNA合成也显著高于对照组。tyrphostin 51作用48 h后出现了细胞凋亡。结论 TGFα能够刺激胃癌SGC7901细胞生长，促进其细胞周期进程，而tyrphostin 51通过抑制TGFα受体的PTK活性，使细胞发生凋亡。
, http://www.100md.com
中图分类号：R392.12; R735.2 文献标识码：A
文章编号：1000-2588(2000)02-0170-03
The effect of TGFα on cell cycle of gastric carcinoma cells and the inhibition effect of tyrphostin 51 on TGFαactivity
LIANG Wei-jiang，XIAO Bing，LAI Zhuo-sheng，ZHANG Wan-dai
(Institute of PLA for Digestive Diseases, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
, 百拇医药
Abstract: Objective To explore the effect of transforming growth factor alpha (TGFα) on cell cycle of gastric carcinoma cells, and investigate the role of tyrphostin 51 in inhibiting TGFαactivity. Methods Human gastric adenocarcinoma cell line SGC7901 were cultured in vitro and treated with TGFα, to observe the cell proliferation. The cells were counted daily for 8 d. Synchronization of cell cycle at G1-phase was achieved before the administration of TGFαtreatment, and the analysis of the changes in cell cycle using flow cytometry (FCM) and the assay of the intracellular DNA synthesis by 3H-TdR incorporation were performed. The changes in cellular apoptosis was observed using FCM after the cells were treated with tyrphostin 51. Results TGFα accelerated the cell proliferation and upregulated the growth of SGC7901. The S-phase cell percentage and the G2+M-phase cell percentage were obviously increased after the treatment with TGFα, resulting also in the obvious enhancement of DNA synthesis. The cellular apoptosis was obvious after the cells were treated with tyrphostin 51 for 48 h. Conclusions TGFα can promote cell proliferation and obviously accelerate the cell cycle of human gastric adenocarcinoma cell line SGC7901. Tyrphostin 51 can induce cellular apoptosis by inhibiting the PTK activity of TGFα recepter.
, http://www.100md.com
Key words: transforming growth factor; tyrphostin 51; gastric neoplasm; cell cycle
生长因子与肿瘤发生发展的关系已受到重视，研究正不断深入。转化生长因子α(Transforming growth factor alpha, TGFα)与胃肠道肿瘤的关系尤为密切[1～2],它在炎症和损伤修复中具有促多种上皮组织增殖和使细胞发生转化的作用，因而具有潜在的致癌危险。在胃的癌前病变和胃癌患者正常胃粘膜中，TGFα均有较高表达。据认为，许多肿瘤细胞的增殖与TGFα自分泌、旁分泌环路等有关。TGFα通过与其受体结合，激活受体胞内区的蛋白酪氨酸激酶(PTK)，把信号传入胞内。本研究旨在探索TGFα对胃癌细胞周期的促进作用，以及PTK抑制剂对TGFα作用的抑制效应，为进一步从多个环节阻断TGFα的作用提供依据。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 细胞培养胃癌SGC7901细胞(本研究所存)用含10%小牛血清的RPMI-1640(美国GIBCO BRL)培养液、置5% CO2培养箱37℃培养。该细胞株贴壁生长，取生长状态良好的细胞传代。
1.2 细胞生长曲线的描记
细胞以5×104/孔接种于24孔培养板传代，培养液1 ml/孔，共57孔。24 h后取3孔进行细胞计数并取均值，其余分作A、B两组处理 (每组27孔)，A组在RPMI-1640培养液中加2.5%小牛血清作为对照；B组在A组的基础上加30μg/L TGFα。每2天换培养液1次，每天每组各收集3孔进行细胞计数并取均值，持续 9 d。以培养时间为横轴，细胞数为纵轴，描绘生长曲线。
1.3 细胞周期的检测
细胞以5×105/孔接种于12孔培养板传代，培养液2 ml/孔，共18孔。进入对数生长期时，先收集1孔细胞用作对照。其余用胸苷嘧啶(Thymidine)两次阻断法[3]进行G1期同步化，先加胸苷嘧啶2 mmol/L 阻断12 h，换新鲜培养液16 h，再加胸苷嘧啶2 mmol/L 14 h。此时收集1孔以检测细胞周期阻断情况。其余分两种处理同上，于2、4、6、8、10 h各收集1孔，70%酒精固定，PBS洗1次，PI染色液(含碘化丙啶 100 mg/L，RNase A 100 mg/L，NaCl 9g/L)避光染色30 min，400目尼龙网过滤后，用流式细胞仪(FCM，美国Coulter公司)检测(每样品5000个细胞)，分析和记录细胞周期分布，比较S期和G2+M期细胞百分率的差异。
, 百拇医药
1.4 DNA合成的测定
采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法[4]。细胞以3×105/孔接种于24孔培养板传代，培养液1 ml/孔，共6孔，每种处理设3个复孔。24 h后用上述方法对细胞进行G1期同步化。在进行A、B两处理使其进入DNA合成期的同时，加3H-TdR 3.7×1010 Bq/L。5 h后弃培养液，10%三氯乙酸固定5 min，每孔加入0.5 ml 0.3 mol/L NaOH(含1% 十二烷基硫酸钠(SDS))裂解细胞并加闪烁液2 ml，同位素多功能检测仪(BECKMAN公司)检测绝对衰变数(dpm)，每3个复孔取均值。
1.5 PTK抑制剂的抑制效应
另以细胞5×105/孔接种于12孔培养板传代，培养液2 ml/孔，共5孔，并给予a、b、c、d和e 5种处理。a 处理用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液常规培养，用作对照；b、c、d和e 处理均在a处理的基础上加用PTK抑制剂tyrphostin 51，终浓度分别为20、30、40和50 mmol/L。作用48 h。镜下观察细胞形态改变，收集贴壁细胞，经酒精固定、PI染色后，用流式细胞术检测细胞凋亡(apoptosis)。
, http://www.100md.com
1.6 统计学处理
用SPSS统计软件进行分析，计数资料用χ2检验，计量资料用t检验。
2 结果
2.1 细胞生长曲线
SGC7901细胞经A、B两种处理，生长曲线如图1。A处理的细胞倍增时间约为48 h，而加TGFα处理的细胞倍增时间缩短，约为36～40 h，细胞生长曲线上移。
图1 SGC7901细胞生长曲线
Fig.1 The cell growth curve of SGC7901
, http://www.100md.com -◆-: Control; -□-:Cells treated with TGFα30μg/L.
2.2 细胞周期分析
细胞经胸苷嘧啶两次阻断后，细胞周期同步化如表1。同步化较理想，G1期细胞由常规培养的61.7%升高到85.6%。TGFα30μg/L作用后细胞周期变化如表2。TGFα30μg/L处理4、6 h后，S期细胞明显增加，由11%分别增加到30.1%和38.5%；8、10 h后G2+M 期细胞也由3.4%分别增加到13.5%和19.9%。与对照组比均有显著差异。
表1 细胞周期同步化率(%)
Tab.1 The cell percentages synchronized(%) Treatment
G0/G1
, http://www.100md.com
S
G2/M
Control
61.7
14.9
23.4
Thymidine
85.6
11.0
3.4
表2 SGC7901的细胞周期分析(%)
Tab.2 The analysis of cell cycle of SGC7901(%) Time (h)
, http://www.100md.com
Control
TGFα30μg/L
G0/G1
S
G2/M
G1
S
G2/M
2
80.9
14.7
4.4
, http://www.100md.com
77.8
17.6
4.7
4
74.0
23.6
2.4
67.7
30.1*
2.2
6
65.6
32.1
, 百拇医药
2.3
57.4
38.5*
4.2
8
58.1
35.0
6.9
52.9
33.6
13.5**
10
56.8
, 百拇医药
30.5
12.7
49.3
30.8
19.9**
* and **P<0.01 vs the control.
2.3DNA合成测定
胸苷嘧啶两次阻断后，经A、B两种处理5 h，SGC7901细胞的3H-TdR掺入量如图2。两组相比有显著差异。
图2 3H-TdR掺入法DNA合成实验
, http://www.100md.com
Fig.2 The DNA synthesis experiment by 3H-TdR incorporation
Control; 2.Cells treated with TGFα30μg/L(P<0.01 vs control)
2.4 PTK抑制剂的抑制作用
与常规培养的细胞比，加用Tyrphostin 51处理48 h的细胞生长状态较差，部分细胞中颗粒增多，少数细胞浮于液面。这些变化随Tyrphostin 51浓度的增加而明显。流式细胞仪检测发现，在DNA直方图上出现明显的凋亡峰(亚G1峰)。凋亡百分率见表3。
表3 Tyrphostin 51对SGC7901的凋亡效应
Tab.3 Cellular apoptosis of SGC7901 induced by Tyrphostin 51 Treatment
, 百拇医药
Number of cells
Number of Apo
Percentage of Apo(%)*
Control
5 000
370
7.4%
20 mmol/L Tyrphostin 51
5 000
1 580
31.6%
, 百拇医药
30 mmol/L Tyrphostin 51
5 000
2 230
44.6%
40 mmol/L Tyrphostin 51
5 000
3 325
66.5%
50 mmol/L Tyrphostin 51
5 000
4 085
, 百拇医药
81.7%
Apo: apoptosis，*P<0.01 vs control
3 讨论
细胞周期由严格有序的4个时期组成，即G1→S→G2→M。它们受细胞内信号传导和多种基因活化或关闭的精细调节。G1期细胞对环境因素敏感并能接受细胞因子的刺激，从而加快或减缓细胞增殖。肿瘤的恶性增生与细胞增殖失控、程序紊乱密切相关，致使增殖速度异常加快。许多研究显示，TGFα在胃癌的发生发展中可能起着重要作用 [1-2]：⑴TGFα与胃癌病理形态改变相关；⑵胃癌患者癌旁正常组织中TGFα含量高于健康对照组；⑶胃癌患者肠化生组织中的TGFα高于非癌对照组；⑷体外培养的胃癌细胞能自分泌TGFα以促进自身的增殖。研究也已显示，TGFα受体的胞内区具有PTK活性。TGFα通过与受体结合后激活此酶，进一步激活下游蛋白，使促增殖信号向胞内传导。
, http://www.100md.com
我们在研究中发现，加用TGFα30 μg/L与单用含低血清的RPMI-1640对照组比，SGC7901细胞生长曲线上移。在对细胞周期和DNA合成的分析中，我们先使细胞同步于G1期，以便观察TGFα的作用，使结论更可靠。经G1期同步化的细胞，在TGFα处理4、6 h后的S期和处理8、10 h后的G2/M期细胞百分率均比对照组明显增高。在TGFα处理5 h后(此时较多的细胞处于S期，即DNA合成期)，其3H-TdR掺入量也显著高于对照组。Tyrphostin 51是TGFα受体PTK较为特异的抑制剂，处理细胞48 h后，在DNA直方图上出现明显的凋亡峰。以上结果表明，TGFα能够刺激胃癌细胞的增殖和DNA合成，明显促进其细胞周期进程。Tyrphostin 51通过抑制TGFα受体胞内区的PTK活性，诱导了细胞凋亡，提示其抑制了血清中含有的以及细胞自分泌的TGFα的作用(我们用免疫荧光染色、FCM检测法发现SGC7901能够合成TGFα)。
, 百拇医药 我们的研究为探索TGFα的促肿瘤细胞增殖机理及阻断方法提供了必要信息，以期通过阻断TGFα的作用，寻找治疗肿瘤的新方法。
作者简介：梁卫江(1963-)，女，广东连洲人，1984毕业于第一军医大学，硕士，主治医师，在读博士研究生, 电话：85141544
参考文献
1，Filipe MI, Osborn J, L inehan J et al. Expression of transforming growth factor alpha, epidermal growth factor receptor and epidermal growth factor in precursor lesions to gastric carcinoma[J]. Br J Cancer,1995,71:30～6.
, 百拇医药 2，Sharp R, Babyatsky MW, Takagi H et al. Transforming growth factor alpha disrupts the normal program of cellular differentiation in the gastric mucosa of transgenic mice[J]. Development.1995, 121(1): 149～61.
3，Shimizu T, O’Connor PM, Kohn KW et al. Unscheduled activation of cyclin B1/Cdc2 kinase in human promyelocytic leukemia cell line HL60 cells undergoing apoptosis induced by DNA damage[J]. Cancer Res.1995, 55:228～31.
4，司徒镇强, 吴军正. 细胞培养[M]. 北京: 世界图书出版公司, 1996. 193～4.
收稿日期：1999-07-23, http://www.100md.com
单位：梁卫江(第一军医大学南方医院全军消化内科研究所，广东 广州 510515)；肖冰(第一军医大学南方医院全军消化内科研究所，广东 广州 510515)；赖卓胜(第一军医大学南方医院全军消化内科研究所，广东 广州 510515)；张万岱(第一军医大学南方医院全军消化内科研究所，广东 广州 510515)
关键词：TGFα；Tyrphostin 51；胃癌；细胞周期
第一军医大学学报000212 摘要：目的 探索TGFα对胃癌细胞周期的促进作用，以及PTK抑制剂对这种作用的抑制效应。方法 利用细胞体外培养技术，观察TGFα对胃癌SGC7901细胞的促增殖作用；细胞经G1期同步化后，用流式细胞仪检测TGFα作用不同时间的细胞周期变化，用3H-TdR掺入法检测TGFα对细胞DNA合成的影响；加PTK抑制剂tyrphostin 51 处理后用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 TGFα对SGC7901具有明显的促增殖作用，细胞生长曲线上移；TGFα作用4、6 h后S期细胞和作用8、10 h后G2+M 期细胞均明显增加，作用5 h 后DNA合成也显著高于对照组。tyrphostin 51作用48 h后出现了细胞凋亡。结论 TGFα能够刺激胃癌SGC7901细胞生长，促进其细胞周期进程，而tyrphostin 51通过抑制TGFα受体的PTK活性，使细胞发生凋亡。
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中图分类号：R392.12; R735.2 文献标识码：A
文章编号：1000-2588(2000)02-0170-03
The effect of TGFα on cell cycle of gastric carcinoma cells and the inhibition effect of tyrphostin 51 on TGFαactivity
LIANG Wei-jiang，XIAO Bing，LAI Zhuo-sheng，ZHANG Wan-dai
(Institute of PLA for Digestive Diseases, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
, 百拇医药
Abstract: Objective To explore the effect of transforming growth factor alpha (TGFα) on cell cycle of gastric carcinoma cells, and investigate the role of tyrphostin 51 in inhibiting TGFαactivity. Methods Human gastric adenocarcinoma cell line SGC7901 were cultured in vitro and treated with TGFα, to observe the cell proliferation. The cells were counted daily for 8 d. Synchronization of cell cycle at G1-phase was achieved before the administration of TGFαtreatment, and the analysis of the changes in cell cycle using flow cytometry (FCM) and the assay of the intracellular DNA synthesis by 3H-TdR incorporation were performed. The changes in cellular apoptosis was observed using FCM after the cells were treated with tyrphostin 51. Results TGFα accelerated the cell proliferation and upregulated the growth of SGC7901. The S-phase cell percentage and the G2+M-phase cell percentage were obviously increased after the treatment with TGFα, resulting also in the obvious enhancement of DNA synthesis. The cellular apoptosis was obvious after the cells were treated with tyrphostin 51 for 48 h. Conclusions TGFα can promote cell proliferation and obviously accelerate the cell cycle of human gastric adenocarcinoma cell line SGC7901. Tyrphostin 51 can induce cellular apoptosis by inhibiting the PTK activity of TGFα recepter.
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Key words: transforming growth factor; tyrphostin 51; gastric neoplasm; cell cycle
生长因子与肿瘤发生发展的关系已受到重视，研究正不断深入。转化生长因子α(Transforming growth factor alpha, TGFα)与胃肠道肿瘤的关系尤为密切[1～2],它在炎症和损伤修复中具有促多种上皮组织增殖和使细胞发生转化的作用，因而具有潜在的致癌危险。在胃的癌前病变和胃癌患者正常胃粘膜中，TGFα均有较高表达。据认为，许多肿瘤细胞的增殖与TGFα自分泌、旁分泌环路等有关。TGFα通过与其受体结合，激活受体胞内区的蛋白酪氨酸激酶(PTK)，把信号传入胞内。本研究旨在探索TGFα对胃癌细胞周期的促进作用，以及PTK抑制剂对TGFα作用的抑制效应，为进一步从多个环节阻断TGFα的作用提供依据。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 细胞培养胃癌SGC7901细胞(本研究所存)用含10%小牛血清的RPMI-1640(美国GIBCO BRL)培养液、置5% CO2培养箱37℃培养。该细胞株贴壁生长，取生长状态良好的细胞传代。
1.2 细胞生长曲线的描记
细胞以5×104/孔接种于24孔培养板传代，培养液1 ml/孔，共57孔。24 h后取3孔进行细胞计数并取均值，其余分作A、B两组处理 (每组27孔)，A组在RPMI-1640培养液中加2.5%小牛血清作为对照；B组在A组的基础上加30μg/L TGFα。每2天换培养液1次，每天每组各收集3孔进行细胞计数并取均值，持续 9 d。以培养时间为横轴，细胞数为纵轴，描绘生长曲线。
1.3 细胞周期的检测
细胞以5×105/孔接种于12孔培养板传代，培养液2 ml/孔，共18孔。进入对数生长期时，先收集1孔细胞用作对照。其余用胸苷嘧啶(Thymidine)两次阻断法[3]进行G1期同步化，先加胸苷嘧啶2 mmol/L 阻断12 h，换新鲜培养液16 h，再加胸苷嘧啶2 mmol/L 14 h。此时收集1孔以检测细胞周期阻断情况。其余分两种处理同上，于2、4、6、8、10 h各收集1孔，70%酒精固定，PBS洗1次，PI染色液(含碘化丙啶 100 mg/L，RNase A 100 mg/L，NaCl 9g/L)避光染色30 min，400目尼龙网过滤后，用流式细胞仪(FCM，美国Coulter公司)检测(每样品5000个细胞)，分析和记录细胞周期分布，比较S期和G2+M期细胞百分率的差异。
, 百拇医药
1.4 DNA合成的测定
采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法[4]。细胞以3×105/孔接种于24孔培养板传代，培养液1 ml/孔，共6孔，每种处理设3个复孔。24 h后用上述方法对细胞进行G1期同步化。在进行A、B两处理使其进入DNA合成期的同时，加3H-TdR 3.7×1010 Bq/L。5 h后弃培养液，10%三氯乙酸固定5 min，每孔加入0.5 ml 0.3 mol/L NaOH(含1% 十二烷基硫酸钠(SDS))裂解细胞并加闪烁液2 ml，同位素多功能检测仪(BECKMAN公司)检测绝对衰变数(dpm)，每3个复孔取均值。
1.5 PTK抑制剂的抑制效应
另以细胞5×105/孔接种于12孔培养板传代，培养液2 ml/孔，共5孔，并给予a、b、c、d和e 5种处理。a 处理用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液常规培养，用作对照；b、c、d和e 处理均在a处理的基础上加用PTK抑制剂tyrphostin 51，终浓度分别为20、30、40和50 mmol/L。作用48 h。镜下观察细胞形态改变，收集贴壁细胞，经酒精固定、PI染色后，用流式细胞术检测细胞凋亡(apoptosis)。
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1.6 统计学处理
用SPSS统计软件进行分析，计数资料用χ2检验，计量资料用t检验。
2 结果
2.1 细胞生长曲线
SGC7901细胞经A、B两种处理，生长曲线如图1。A处理的细胞倍增时间约为48 h，而加TGFα处理的细胞倍增时间缩短，约为36～40 h，细胞生长曲线上移。
图1 SGC7901细胞生长曲线
Fig.1 The cell growth curve of SGC7901
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2.2 细胞周期分析
细胞经胸苷嘧啶两次阻断后，细胞周期同步化如表1。同步化较理想，G1期细胞由常规培养的61.7%升高到85.6%。TGFα30μg/L作用后细胞周期变化如表2。TGFα30μg/L处理4、6 h后，S期细胞明显增加，由11%分别增加到30.1%和38.5%；8、10 h后G2+M 期细胞也由3.4%分别增加到13.5%和19.9%。与对照组比均有显著差异。
表1 细胞周期同步化率(%)
Tab.1 The cell percentages synchronized(%) Treatment
G0/G1
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S
G2/M
Control
61.7
14.9
23.4
Thymidine
85.6
11.0
3.4
表2 SGC7901的细胞周期分析(%)
Tab.2 The analysis of cell cycle of SGC7901(%) Time (h)
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Control
TGFα30μg/L
G0/G1
S
G2/M
G1
S
G2/M
2
80.9
14.7
4.4
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77.8
17.6
4.7
4
74.0
23.6
2.4
67.7
30.1*
2.2
6
65.6
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57.4
38.5*
4.2
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58.1
35.0
6.9
52.9
33.6
13.5**
10
56.8
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30.5
12.7
49.3
30.8
19.9**
* and **P<0.01 vs the control.
2.3DNA合成测定
胸苷嘧啶两次阻断后，经A、B两种处理5 h，SGC7901细胞的3H-TdR掺入量如图2。两组相比有显著差异。
图2 3H-TdR掺入法DNA合成实验
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Fig.2 The DNA synthesis experiment by 3H-TdR incorporation
Control; 2.Cells treated with TGFα30μg/L(P<0.01 vs control)
2.4 PTK抑制剂的抑制作用
与常规培养的细胞比，加用Tyrphostin 51处理48 h的细胞生长状态较差，部分细胞中颗粒增多，少数细胞浮于液面。这些变化随Tyrphostin 51浓度的增加而明显。流式细胞仪检测发现，在DNA直方图上出现明显的凋亡峰(亚G1峰)。凋亡百分率见表3。
表3 Tyrphostin 51对SGC7901的凋亡效应
Tab.3 Cellular apoptosis of SGC7901 induced by Tyrphostin 51 Treatment
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Number of cells
Number of Apo
Percentage of Apo(%)*
Control
5 000
370
7.4%
20 mmol/L Tyrphostin 51
5 000
1 580
31.6%
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30 mmol/L Tyrphostin 51
5 000
2 230
44.6%
40 mmol/L Tyrphostin 51
5 000
3 325
66.5%
50 mmol/L Tyrphostin 51
5 000
4 085
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81.7%
Apo: apoptosis，*P<0.01 vs control
3 讨论
细胞周期由严格有序的4个时期组成，即G1→S→G2→M。它们受细胞内信号传导和多种基因活化或关闭的精细调节。G1期细胞对环境因素敏感并能接受细胞因子的刺激，从而加快或减缓细胞增殖。肿瘤的恶性增生与细胞增殖失控、程序紊乱密切相关，致使增殖速度异常加快。许多研究显示，TGFα在胃癌的发生发展中可能起着重要作用 [1-2]：⑴TGFα与胃癌病理形态改变相关；⑵胃癌患者癌旁正常组织中TGFα含量高于健康对照组；⑶胃癌患者肠化生组织中的TGFα高于非癌对照组；⑷体外培养的胃癌细胞能自分泌TGFα以促进自身的增殖。研究也已显示，TGFα受体的胞内区具有PTK活性。TGFα通过与受体结合后激活此酶，进一步激活下游蛋白，使促增殖信号向胞内传导。
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我们在研究中发现，加用TGFα30 μg/L与单用含低血清的RPMI-1640对照组比，SGC7901细胞生长曲线上移。在对细胞周期和DNA合成的分析中，我们先使细胞同步于G1期，以便观察TGFα的作用，使结论更可靠。经G1期同步化的细胞，在TGFα处理4、6 h后的S期和处理8、10 h后的G2/M期细胞百分率均比对照组明显增高。在TGFα处理5 h后(此时较多的细胞处于S期，即DNA合成期)，其3H-TdR掺入量也显著高于对照组。Tyrphostin 51是TGFα受体PTK较为特异的抑制剂，处理细胞48 h后，在DNA直方图上出现明显的凋亡峰。以上结果表明，TGFα能够刺激胃癌细胞的增殖和DNA合成，明显促进其细胞周期进程。Tyrphostin 51通过抑制TGFα受体胞内区的PTK活性，诱导了细胞凋亡，提示其抑制了血清中含有的以及细胞自分泌的TGFα的作用(我们用免疫荧光染色、FCM检测法发现SGC7901能够合成TGFα)。
, 百拇医药 我们的研究为探索TGFα的促肿瘤细胞增殖机理及阻断方法提供了必要信息，以期通过阻断TGFα的作用，寻找治疗肿瘤的新方法。
作者简介：梁卫江(1963-)，女，广东连洲人，1984毕业于第一军医大学，硕士，主治医师，在读博士研究生, 电话：85141544
参考文献
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收稿日期：1999-07-23, http://www.100md.com