60例血液系统恶性肿瘤CMV-DNA检测
作者：李红玲 任守义
单位：李红玲(甘肃省人民医院普内科 兰州，730000)；任守义(甘肃省人民医院普内科 兰州，730000)
关键词：
临床血液学杂志000213 血液系统恶性肿瘤患者常有免疫功能低下或缺陷，且因在治疗期间输入多人次血液等原因而成为细菌、病毒感染的高危人群。应用基因扩增方法直接检测巨细胞病毒(CMV)DNA具有早期、灵敏、特异等优点。本文应用聚合酶链反应(PCR)对部分血液系统恶性肿瘤患者CMV感染率，输血与CMV感染的关系等进行研究。
1 材料与方法
1.1 研究对象
实验组60例，男41例，女19例，其中ANLL 20例中8例为初治者，ALL 12例中2例为初治者，CML 16例中6例为初治者，MM 7例中3例为初治者，NHD 5例中1例为初治者。健康献血员20例(男12例，女8例)为正常对照。
1.2 方法
①白细胞分离与DNA提取：采外周血2～4 ml，5%EDTA抗凝，12 h内分离白细胞，按常规方法提取DNA，制备扩增模板。②PCR扩增：CMV-DNA PCR诊断试剂盒由厦门长城生物有限公司提供，可检测待测样本中CMV保守区片断，扩增产物为400 bp。反应条件为：94℃30 s，65℃30 s，72℃60 s，共35循环。③电泳及结果判断：取PCR反应终产物10 μl，直接点样，电泳100 V，10 min，应用紫外透射检测仪观察结果。
2 结果与讨论
实验组60例CMV-DNA阳性率63.33%(38/60)，正常人组15.0%(3/20)，二者差异非常显著(P<0.01)；初治组阳性率30.0%(6/20)，经多次输血的复治组阳性率80.0%(32/40)，二者之间差异具有显著性(P<0.01)。说明血液系统恶性肿瘤患者，尤经多次输血者，具有较高的CMV感染率。
传统检测致病性病原体，常用培养方法来分离病原体以确诊，但有些病原体培养费时长，有些病原体不易体外培养成功。血清学或免疫学方法，应用多克隆或单克隆抗体，由于与宿主半抗原与相关病原体的交叉反应，常给诊断带来不便。国内诊断CMV感染以检测血清抗-CMV为主要手段，而PCR诊断CMV-DNA既灵敏又特异。CMV感染可出现发热、肝功能损害、肺炎、胃肠炎等。临床上常因出现上述症状而限制了化疗剂量、治疗的连续性或延迟骨髓移植的时机，影响治疗效果及生存质量。应用PCR检测CMV-DNA可为临床诊断CMV感染提供依据。本实验血液系统恶性肿瘤患者，尤经多次输血者，CMV感染率明显高于对照组。提示：应用PCR检测供血人群中CMV感染，可降低输血传播CMV感染的危险性，减少白血病患者CMV感染率，还可用于评价抗病毒疗法治疗巨细胞病毒病的疗效。■
(收稿日期：1999-09-01), 百拇医药
单位：李红玲(甘肃省人民医院普内科 兰州，730000)；任守义(甘肃省人民医院普内科 兰州，730000)
关键词：
临床血液学杂志000213 血液系统恶性肿瘤患者常有免疫功能低下或缺陷，且因在治疗期间输入多人次血液等原因而成为细菌、病毒感染的高危人群。应用基因扩增方法直接检测巨细胞病毒(CMV)DNA具有早期、灵敏、特异等优点。本文应用聚合酶链反应(PCR)对部分血液系统恶性肿瘤患者CMV感染率，输血与CMV感染的关系等进行研究。
1 材料与方法
1.1 研究对象
实验组60例，男41例，女19例，其中ANLL 20例中8例为初治者，ALL 12例中2例为初治者，CML 16例中6例为初治者，MM 7例中3例为初治者，NHD 5例中1例为初治者。健康献血员20例(男12例，女8例)为正常对照。
1.2 方法
①白细胞分离与DNA提取：采外周血2～4 ml，5%EDTA抗凝，12 h内分离白细胞，按常规方法提取DNA，制备扩增模板。②PCR扩增：CMV-DNA PCR诊断试剂盒由厦门长城生物有限公司提供，可检测待测样本中CMV保守区片断，扩增产物为400 bp。反应条件为：94℃30 s，65℃30 s，72℃60 s，共35循环。③电泳及结果判断：取PCR反应终产物10 μl，直接点样，电泳100 V，10 min，应用紫外透射检测仪观察结果。
2 结果与讨论
实验组60例CMV-DNA阳性率63.33%(38/60)，正常人组15.0%(3/20)，二者差异非常显著(P<0.01)；初治组阳性率30.0%(6/20)，经多次输血的复治组阳性率80.0%(32/40)，二者之间差异具有显著性(P<0.01)。说明血液系统恶性肿瘤患者，尤经多次输血者，具有较高的CMV感染率。
传统检测致病性病原体，常用培养方法来分离病原体以确诊，但有些病原体培养费时长，有些病原体不易体外培养成功。血清学或免疫学方法，应用多克隆或单克隆抗体，由于与宿主半抗原与相关病原体的交叉反应，常给诊断带来不便。国内诊断CMV感染以检测血清抗-CMV为主要手段，而PCR诊断CMV-DNA既灵敏又特异。CMV感染可出现发热、肝功能损害、肺炎、胃肠炎等。临床上常因出现上述症状而限制了化疗剂量、治疗的连续性或延迟骨髓移植的时机，影响治疗效果及生存质量。应用PCR检测CMV-DNA可为临床诊断CMV感染提供依据。本实验血液系统恶性肿瘤患者，尤经多次输血者，CMV感染率明显高于对照组。提示：应用PCR检测供血人群中CMV感染，可降低输血传播CMV感染的危险性，减少白血病患者CMV感染率，还可用于评价抗病毒疗法治疗巨细胞病毒病的疗效。■
(收稿日期：1999-09-01), 百拇医药