人绒毛膜促性腺激素对小鼠颌下腺颗粒曲管影响的体视学研究
作者：谢美容 何为民 陈奕权 周瑞祥
单位：福建医科大学组织胚胎学教研室,福州 350004
关键词：促性腺素类；绒毛膜；粒层细胞；颌下腺；小鼠
福建医科大学学报000204
摘要:目的 从体视学的角度探讨人绒毛膜促性腺激素(HCG)对小鼠颌下腺颗粒曲管的内分泌调节机制，为内分泌免疫调节网络提供实验依据。方法 用显微测微尺测出ICR雄性小鼠注射HCG或生理盐水后颌下腺颗粒曲管的各项体视学指标。结果 给药组与对照组相比,颌下腺颗粒曲管的截面积、周长明显降低(P<0.05)，比表面及面数密度明显升高(P<0.05)，细胞的核质比、细胞核的截面积、周长明显升高(P<0.05)，颌下腺颗粒曲管细胞的截面积、周长及胞质的截面积明显降低(P<0.01)。结论 HCG可促进颌下腺颗粒曲管合成和分泌生物活性物质，它对颗粒曲管分泌功能的促进作用大于对合成功能的促进作用。
, http://www.100md.com
中图分类号:R977.12;R329.24 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)02-0103-03
The Stereological Study of the Effects of Human Choriogonadotropin Treatment on Granular Convoluted Tubule in Submandibular Glands of Mice
XIE Mei-rong,HE Wei-min,CHEN Yi-quan,et al.
(Department of Histology and Embryology,Fujian Medical University,Fuzhou 350004,China)
, 百拇医药
ABSTRACT:Objective To investigate the mechanism of human choriogonadotropin(HCG) to modulate the endocrine function of granular convoluted tubules(GCT) in submandibular glands stereologically in order to offering experimental evidence in endocrine-immunity regulating network.Methods Several stereological targets of granular convoluted tubules in submandibular glands of ICR mice after HCG or physiological saline injection were measured by micromeasuring ruler.Rusults Compared with the sham group,in the group with HCG administration the stereological study showed as follows: the section area and circumference of GCT were significantly reduced (P<0.05),the specific surface and number density of GCT were apparently higher(P<0.05),the nucleus/cell ratio,section area and circumference of the nucleus of GCT were sharply increased(P<0.05),the section area of cell and cytoplasm of GCT and the circumference of the cell of GCT were cut down obviously(P<0.01).Conclusion HCG can increase active polypeptides synthesis and secretion in GCT of submandibular gland,and the secretion is more prominent than synthesis.
, http://www.100md.com
KEY WORDS:gonadotropin,chorion;granulosa cell;submandibular gland;mice
啮齿类动物颌下腺的颗粒曲管(GCT)能产生各种物质,如一些酶和多样的生物活性多肽(表皮生长因子、神经生长因子、促红细胞生成素、肾素、血管舒缓素等)，这些活性多肽具有广泛的生物学效应。特别是表皮生长因子(EGF)，可刺激多种组织细胞增殖，与肿瘤的发生有关，且对内分泌有调节作用。因此颌下腺是近来逐渐被人们所认识的神经-内分泌-免疫调节网络的重要组成部分。GCT的发育分化与性激素有关，已有研究报道GCT合成和分泌生物活性多肽具有雄性激素依赖性[1]。笔者从体视学的角度研究人绒毛膜促性腺激素(HCG)对GCT内分泌功能的调节，旨在探讨HCG对GCT合成和分泌生物活性物质的调节机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物分组及模型制作
, 百拇医药
选用12～13周龄清洁级ICR雄性成熟小鼠(购于中科院上海实验动物中心)，体重35～42 g。实验动物随机分成2组(对照组,给药组),每组8只。两组分别每日下午5时腹腔注射生理盐水或HCG(购于上海生物化学公司)10 U至35天，次日上午放血处死， 取颌下腺。
1.2 切片标本的制作
颌下腺经改良Bouin固定，石蜡包埋，制成60 μm厚连续切片，间隔60 μm贴片，切片经常规脱蜡入水，苏木精-伊红染色，中性树胶封片。
1.3 体视学分析[2]
1.3.1 测出物镜测微尺测试网格中单个正方小格的边长(L=0.133 mm)，并以其平方计算出每个正方小格的面积(a＝1.7689×10-4mm2)，测微尺上50×50个正方小格为一个测试面积(Pr＝50×50)，作为以下测定的参照系。
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1.3.2 GCT及GCT上皮细胞的定位 GCT位于闰管与分泌管之间，在苏木精-伊红染色下，GCT上皮细胞呈锥形，核大，位于细胞基底部，胞质染色嗜酸性，因此GCT在苏木精-伊红染色下呈红色(附图)。
1.3.3 GCT的截面积、周长、比表面、面数密度的测定 在×10目镜测微尺上进行，在×10物镜下分别测定GCT的截面落点数(Pxi)及GCT周长曲线与测试线的交叉点数(Ixi)，Nxi表示截面数。每组动物测试80个测试面积内所有的GCT。测得数据按以下公式计算：
(1)GCT的截面积
(2)GCT的周长
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(3)GCT的比表面
(4)GCT的面数密度
1.3.4 GCT细胞及其胞核的截面积、周长的测定 在×40和×100的物镜下分别测定GCT细胞及其胞核的截面落点数(Pxi)及细胞与胞核周长曲线与测试线的交点数(Ixi)，Nxi表示细胞数或细胞核数每组动物随机观察200个细胞，测得数据按以下公式计算：
(1)细胞与细胞核的截面积
(2)细胞与细胞核的
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(3)胞质的截面积 Cai＝Ca-Na
(Ca、Na分别为细胞及胞核的截面积)
(4)核质比Hzb＝∑Pn÷∑Pp
(Pn、Pp分别为GCT的胞核及细胞的截面落点数)
1.4 统计学处理
所有测定值均采用SPSS软件包计算，结果以均值±标准差表示，并对结果进行单因素方差分析处理，以P<0.05为差异有显著性。
2 结 果
2.1 GCT的体视学变化(表1) 给药组与对照组相比，颌下腺GCT的截面积及周长明显降低(P<0.05)，比表面及面数密度明显升高(P<0.05)。
, 百拇医药
2.2 GCT上皮细胞的体视学变化(表2) 给药组与对照组相比，颌下腺 GCT上皮细胞的截面积、周长及胞质的截面积明显降低(P<0.01)。GCT上皮细胞核的截面积、周长及核质比明显升高(P<0.05)。
表1 小鼠颌下腺GCT的体视学数据 分 组
颌下腺颗粒曲管
截面积(μm2)
周长(μm)
比表面(mm-1)
面数密度(mm-2)
对照组
3661.757±288.934
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109.905±6.136
3.837±0.124
0.027±0.001
给药组
2961.300±427.052*
95.127±9.852*
4.475±0.188*
0.035±0.005*
*:P<0.05(下表同).表2 小鼠颌下腺GCT上皮细胞的体视学数据 分 组
核质比
, 百拇医药
GCT细胞质
截面积(μm2)
GCT细胞
GCT细胞核
截面积(μm2)
周长(μm)
截面积(μm2)
周长(μm )
对照组
0.117±0.011
173.339±0.596
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196.053±17.168
24.801±0.401
22.714±0.603
7.873±0.092
给药组
0.167±0.006*
122.597±1.097*
147.696±18.484*
21.544±0.130*
25.099±1.416*
, 百拇医药
8.293±0.225*
3 讨 论
3月龄雄性小鼠的颗粒曲管数量最多，管径最大，上皮生长因子的免疫反应最强，合成与分泌的生物活性物质最多[3]。 成年雄性小鼠颌下腺EGF比雌性多10倍[4]。成年雄性小鼠EGF和EGF前体mRNA水平明显高于雌性小鼠， 雄性小鼠颌下腺内所含肾素也比雌性小鼠大20～30倍[1]。因此本实验选12周龄的雄性小鼠做为研究对象。
颌下腺的颗粒曲管具有内分泌功能，能合成和分泌多种生物活性物质，如表皮生长因子(EGF)、神经生长因子(NGF)、肾素等20多种生物活性物质[1]。这些生物活性物质的合成与释放受性激素的调控。另外，性激素还调控颗粒曲管的发育与分化。同龄的雄性、雌性小鼠相比，雄性小鼠颗粒曲管发育较雌性好，颗粒曲管上皮抗EGF免疫反应较雌性强[3]。雄鼠GCT发育成熟早于雌鼠。性激素对EGF的合成具有调节作用，雄激素促进颌下腺EGF的合成与释放，雌激素抑制颌下腺EGF的合成与释放[5]。雄性小鼠的NGF也远多于雌性小鼠，阉后的小鼠NGF减少，给予睾酮后NGF增加。新生小鼠颌下腺NGF的浓度极低，发情期开始浓度迅速增加，性别差异也变得明显，反应了NGF合成与释放的雄激素依赖性。肾素是一种内环境稳定因子，对血压起调节作用，它的分泌也受雄激素调控。另外，小鼠颌下腺GCT分泌的骨髓克隆刺激因子、致死因子和一些消化酶等也具有雄激素依赖性[1]。本实验结果显示，给予HCG后颗粒曲管上皮细胞的胞核的截面积、周长及核质比明显升高，说明给药后细胞核体积增大，提示GCT上皮细胞合成生物活性多肽的功能增强。给予HCG后，GCT上皮细胞的截面积、周长及胞质的截面积都明显降低，笔者认为HCG促进颗粒曲管上皮细胞分泌生物活性多肽，其分泌作用大于合成，促进细胞的排空，造成了GCT上皮细胞的截面积、 周长及胞质截面积都减少。给药组GCT的比表面升高，进一步说明了GCT分泌功能的增强。
, 百拇医药
关于给药组GCT的截面积、周长减少是由于GCT上皮细胞分泌功能增强，排空造成。其面数密度的增加是因为截面积减少，在参照系不变的情况下，一个测试面积所能测试的截面个数自然升高。笔者推测 HCG的作用机制如下，促进睾丸合成与释放睾酮，后者作用于颌下腺颗粒曲管上皮[5]，增强它合成与释放生物活性多肽。有研究表明给小鼠注射HCG后，其颌下腺和血清的EGF明显升高[6]。本研究为这一观点提供了有力的体视学依据。
附图 小鼠颗粒曲管及其上皮细胞
基金项目:福建省卫生厅青年基金资助项目(9624)
作者简介:谢美容(1970～),女,助理实验师.
参考文献:
, 百拇医药
[1]成令忠.组织学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，1981.1054～1059.
[2]郑富盛.电子显微镜技术在临床医学的应用[M].重庆:重庆出版社，1988.74.
[3]王文青，柳 川，杨静漪，等.不同性别和发育阶段的小鼠颌下腺颗粒曲管的上皮生长因子免疫组织化学和体视学研究[J].解剖学杂志，1996,19：338.
[4]Tsutsumi O,Kurachi H,Oka T,et al.A physiological role of epidermal growth factor in male reproductive function[J].Science,1986,233:975.
[5]Tuometa T,Miettinen P,Pesonen K,et al.Epidermal growth factor in mice:Effects of estradiol,testosterone and dexamethasone[J].Acta Endocrinologica,1990,123:211.
[6]何为民，陈奕权，高学勇，等.人绒毛膜促性腺激素对小鼠颌下腺、血清表皮生长因子的影响[J].福建医科大学学报， 1999,33(2)：152.
收稿日期:2000-01-12, 百拇医药
单位：福建医科大学组织胚胎学教研室,福州 350004
关键词：促性腺素类；绒毛膜；粒层细胞；颌下腺；小鼠
福建医科大学学报000204
摘要:目的 从体视学的角度探讨人绒毛膜促性腺激素(HCG)对小鼠颌下腺颗粒曲管的内分泌调节机制，为内分泌免疫调节网络提供实验依据。方法 用显微测微尺测出ICR雄性小鼠注射HCG或生理盐水后颌下腺颗粒曲管的各项体视学指标。结果 给药组与对照组相比,颌下腺颗粒曲管的截面积、周长明显降低(P<0.05)，比表面及面数密度明显升高(P<0.05)，细胞的核质比、细胞核的截面积、周长明显升高(P<0.05)，颌下腺颗粒曲管细胞的截面积、周长及胞质的截面积明显降低(P<0.01)。结论 HCG可促进颌下腺颗粒曲管合成和分泌生物活性物质，它对颗粒曲管分泌功能的促进作用大于对合成功能的促进作用。
, http://www.100md.com
中图分类号:R977.12;R329.24 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)02-0103-03
The Stereological Study of the Effects of Human Choriogonadotropin Treatment on Granular Convoluted Tubule in Submandibular Glands of Mice
XIE Mei-rong,HE Wei-min,CHEN Yi-quan,et al.
(Department of Histology and Embryology,Fujian Medical University,Fuzhou 350004,China)
, 百拇医药
ABSTRACT:Objective To investigate the mechanism of human choriogonadotropin(HCG) to modulate the endocrine function of granular convoluted tubules(GCT) in submandibular glands stereologically in order to offering experimental evidence in endocrine-immunity regulating network.Methods Several stereological targets of granular convoluted tubules in submandibular glands of ICR mice after HCG or physiological saline injection were measured by micromeasuring ruler.Rusults Compared with the sham group,in the group with HCG administration the stereological study showed as follows: the section area and circumference of GCT were significantly reduced (P<0.05),the specific surface and number density of GCT were apparently higher(P<0.05),the nucleus/cell ratio,section area and circumference of the nucleus of GCT were sharply increased(P<0.05),the section area of cell and cytoplasm of GCT and the circumference of the cell of GCT were cut down obviously(P<0.01).Conclusion HCG can increase active polypeptides synthesis and secretion in GCT of submandibular gland,and the secretion is more prominent than synthesis.
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KEY WORDS:gonadotropin,chorion;granulosa cell;submandibular gland;mice
啮齿类动物颌下腺的颗粒曲管(GCT)能产生各种物质,如一些酶和多样的生物活性多肽(表皮生长因子、神经生长因子、促红细胞生成素、肾素、血管舒缓素等)，这些活性多肽具有广泛的生物学效应。特别是表皮生长因子(EGF)，可刺激多种组织细胞增殖，与肿瘤的发生有关，且对内分泌有调节作用。因此颌下腺是近来逐渐被人们所认识的神经-内分泌-免疫调节网络的重要组成部分。GCT的发育分化与性激素有关，已有研究报道GCT合成和分泌生物活性多肽具有雄性激素依赖性[1]。笔者从体视学的角度研究人绒毛膜促性腺激素(HCG)对GCT内分泌功能的调节，旨在探讨HCG对GCT合成和分泌生物活性物质的调节机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物分组及模型制作
, 百拇医药
选用12～13周龄清洁级ICR雄性成熟小鼠(购于中科院上海实验动物中心)，体重35～42 g。实验动物随机分成2组(对照组,给药组),每组8只。两组分别每日下午5时腹腔注射生理盐水或HCG(购于上海生物化学公司)10 U至35天，次日上午放血处死， 取颌下腺。
1.2 切片标本的制作
颌下腺经改良Bouin固定，石蜡包埋，制成60 μm厚连续切片，间隔60 μm贴片，切片经常规脱蜡入水，苏木精-伊红染色，中性树胶封片。
1.3 体视学分析[2]
1.3.1 测出物镜测微尺测试网格中单个正方小格的边长(L=0.133 mm)，并以其平方计算出每个正方小格的面积(a＝1.7689×10-4mm2)，测微尺上50×50个正方小格为一个测试面积(Pr＝50×50)，作为以下测定的参照系。
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1.3.2 GCT及GCT上皮细胞的定位 GCT位于闰管与分泌管之间，在苏木精-伊红染色下，GCT上皮细胞呈锥形，核大，位于细胞基底部，胞质染色嗜酸性，因此GCT在苏木精-伊红染色下呈红色(附图)。
1.3.3 GCT的截面积、周长、比表面、面数密度的测定 在×10目镜测微尺上进行，在×10物镜下分别测定GCT的截面落点数(Pxi)及GCT周长曲线与测试线的交叉点数(Ixi)，Nxi表示截面数。每组动物测试80个测试面积内所有的GCT。测得数据按以下公式计算：
(1)GCT的截面积
(2)GCT的周长
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(3)GCT的比表面
(4)GCT的面数密度
1.3.4 GCT细胞及其胞核的截面积、周长的测定 在×40和×100的物镜下分别测定GCT细胞及其胞核的截面落点数(Pxi)及细胞与胞核周长曲线与测试线的交点数(Ixi)，Nxi表示细胞数或细胞核数每组动物随机观察200个细胞，测得数据按以下公式计算：
(1)细胞与细胞核的截面积
(2)细胞与细胞核的
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(3)胞质的截面积 Cai＝Ca-Na
(Ca、Na分别为细胞及胞核的截面积)
(4)核质比Hzb＝∑Pn÷∑Pp
(Pn、Pp分别为GCT的胞核及细胞的截面落点数)
1.4 统计学处理
所有测定值均采用SPSS软件包计算，结果以均值±标准差表示，并对结果进行单因素方差分析处理，以P<0.05为差异有显著性。
2 结 果
2.1 GCT的体视学变化(表1) 给药组与对照组相比，颌下腺GCT的截面积及周长明显降低(P<0.05)，比表面及面数密度明显升高(P<0.05)。
, 百拇医药
2.2 GCT上皮细胞的体视学变化(表2) 给药组与对照组相比，颌下腺 GCT上皮细胞的截面积、周长及胞质的截面积明显降低(P<0.01)。GCT上皮细胞核的截面积、周长及核质比明显升高(P<0.05)。
表1 小鼠颌下腺GCT的体视学数据 分 组
颌下腺颗粒曲管
截面积(μm2)
周长(μm)
比表面(mm-1)
面数密度(mm-2)
对照组
3661.757±288.934
, http://www.100md.com
109.905±6.136
3.837±0.124
0.027±0.001
给药组
2961.300±427.052*
95.127±9.852*
4.475±0.188*
0.035±0.005*
*:P<0.05(下表同).表2 小鼠颌下腺GCT上皮细胞的体视学数据 分 组
核质比
, 百拇医药
GCT细胞质
截面积(μm2)
GCT细胞
GCT细胞核
截面积(μm2)
周长(μm)
截面积(μm2)
周长(μm )
对照组
0.117±0.011
173.339±0.596
, http://www.100md.com
196.053±17.168
24.801±0.401
22.714±0.603
7.873±0.092
给药组
0.167±0.006*
122.597±1.097*
147.696±18.484*
21.544±0.130*
25.099±1.416*
, 百拇医药
8.293±0.225*
3 讨 论
3月龄雄性小鼠的颗粒曲管数量最多，管径最大，上皮生长因子的免疫反应最强，合成与分泌的生物活性物质最多[3]。 成年雄性小鼠颌下腺EGF比雌性多10倍[4]。成年雄性小鼠EGF和EGF前体mRNA水平明显高于雌性小鼠， 雄性小鼠颌下腺内所含肾素也比雌性小鼠大20～30倍[1]。因此本实验选12周龄的雄性小鼠做为研究对象。
颌下腺的颗粒曲管具有内分泌功能，能合成和分泌多种生物活性物质，如表皮生长因子(EGF)、神经生长因子(NGF)、肾素等20多种生物活性物质[1]。这些生物活性物质的合成与释放受性激素的调控。另外，性激素还调控颗粒曲管的发育与分化。同龄的雄性、雌性小鼠相比，雄性小鼠颗粒曲管发育较雌性好，颗粒曲管上皮抗EGF免疫反应较雌性强[3]。雄鼠GCT发育成熟早于雌鼠。性激素对EGF的合成具有调节作用，雄激素促进颌下腺EGF的合成与释放，雌激素抑制颌下腺EGF的合成与释放[5]。雄性小鼠的NGF也远多于雌性小鼠，阉后的小鼠NGF减少，给予睾酮后NGF增加。新生小鼠颌下腺NGF的浓度极低，发情期开始浓度迅速增加，性别差异也变得明显，反应了NGF合成与释放的雄激素依赖性。肾素是一种内环境稳定因子，对血压起调节作用，它的分泌也受雄激素调控。另外，小鼠颌下腺GCT分泌的骨髓克隆刺激因子、致死因子和一些消化酶等也具有雄激素依赖性[1]。本实验结果显示，给予HCG后颗粒曲管上皮细胞的胞核的截面积、周长及核质比明显升高，说明给药后细胞核体积增大，提示GCT上皮细胞合成生物活性多肽的功能增强。给予HCG后，GCT上皮细胞的截面积、周长及胞质的截面积都明显降低，笔者认为HCG促进颗粒曲管上皮细胞分泌生物活性多肽，其分泌作用大于合成，促进细胞的排空，造成了GCT上皮细胞的截面积、 周长及胞质截面积都减少。给药组GCT的比表面升高，进一步说明了GCT分泌功能的增强。
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关于给药组GCT的截面积、周长减少是由于GCT上皮细胞分泌功能增强，排空造成。其面数密度的增加是因为截面积减少，在参照系不变的情况下，一个测试面积所能测试的截面个数自然升高。笔者推测 HCG的作用机制如下，促进睾丸合成与释放睾酮，后者作用于颌下腺颗粒曲管上皮[5]，增强它合成与释放生物活性多肽。有研究表明给小鼠注射HCG后，其颌下腺和血清的EGF明显升高[6]。本研究为这一观点提供了有力的体视学依据。
附图 小鼠颗粒曲管及其上皮细胞
基金项目:福建省卫生厅青年基金资助项目(9624)
作者简介:谢美容(1970～),女,助理实验师.
参考文献:
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[1]成令忠.组织学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，1981.1054～1059.
[2]郑富盛.电子显微镜技术在临床医学的应用[M].重庆:重庆出版社，1988.74.
[3]王文青，柳 川，杨静漪，等.不同性别和发育阶段的小鼠颌下腺颗粒曲管的上皮生长因子免疫组织化学和体视学研究[J].解剖学杂志，1996,19：338.
[4]Tsutsumi O,Kurachi H,Oka T,et al.A physiological role of epidermal growth factor in male reproductive function[J].Science,1986,233:975.
[5]Tuometa T,Miettinen P,Pesonen K,et al.Epidermal growth factor in mice:Effects of estradiol,testosterone and dexamethasone[J].Acta Endocrinologica,1990,123:211.
[6]何为民，陈奕权，高学勇，等.人绒毛膜促性腺激素对小鼠颌下腺、血清表皮生长因子的影响[J].福建医科大学学报， 1999,33(2)：152.
收稿日期:2000-01-12, 百拇医药