多肌炎和皮肌炎患者病理切片浸润淋巴细胞分型及其意义
作者：张学武 蔡永明 宋秋静 贾军
单位：张学武(100044 北京医科大学第二临床学院风湿免疫科)；蔡永明(100044 北京医科大学第二临床学院风湿免疫科)；宋秋静(100044 北京医科大学第二临床学院风湿免疫科)；贾军(100044 北京医科大学第二临床学院风湿免疫科)
关键词：多肌炎；皮肌炎；免疫组织化学；淋巴细胞
临床内科杂志000222
摘 要：目的：观察确诊的多肌炎和皮肌炎(PM/DM)患者皮肤、肌肉病理切片中浸润淋巴细胞的分型情况，研究分型与PM/DM临床表现的关系。方法：采用免疫组化法测定40例确诊的PM/DM患者皮肤、肌肉病理切片中淋巴细胞的具体百分比。结果：DM患者皮下及肌膜间浸润淋巴细胞以T细胞为主，血管周围以B细胞多见。PM患者浸润淋巴细胞在皮肤、肌膜间及血管周围均以T细胞为主。结论：细胞免疫反应参与PM发病，而在DM，细胞免疫及体液免疫反应均参与发病。
, http://www.100md.com
分类号：R593.26 文献标识码：A
文章编号：1001-9057(2000)02-0117-02
The significance of subtypes of lymphocyte infiltration in patients with polymyositis and dermatomyositis
ZHANG Xuewu, CAI Yongming, SONG Qiujing, et al.
Department of Rheumatology, the people's Hosital, Beijing Medical university, Beijing 100044, Chona
Abstract：Objective：To study the relationship between polymyositis and cell-mediated immunoreaction.Methods：Immunohistochemical technique was used to calculate the percentage of subtypes of lymphocyte infiltration in pathological sections of srin and music from 40 patients with poly myo sitis dermatomy sitis.Results：Most of the lymphocyte infiltration locating on subcutanous and perimysial position in the patients with PM were T cells. A few of B cells could be found on perivascular position.Conclusion：There are close relations between PM and cell-mediated immunoreaction.
, http://www.100md.com
Key words：Polymyosits; Dermatomyositis； Immunohistochemistry; Lymphocyte
多肌炎和皮肌炎(PM/DM)是较少见的自身免疫性结缔组织病。目前，病因和发病机制尚未明了，其临床特征为肢体近端和颈部无力，有时伴四肢肌肉疼痛，PM/DM主要是骨骼肌病变，但也常常累及心脏、胃肠道和肺脏。实验室特征为血清肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶及各种转氨酶活性增高。病理特征为不规则的肌肉坏死、再生和炎症。大量证据表明DM的发病与免疫反应有关[1]。PM/DM患者皮肤肌肉活检中有大量淋巴细胞浸润，研究浸润淋巴细胞分型情况对提高本病的认识具有重要意义。
对象与方法
一、对象：选择1989年至1997年我院风湿免疫科住院的病人40例，其中多肌炎(PM)27例，皮肌炎(DM)13例，患者均有典型的PM/DM临床表现，且全部存在不同程度肌酶谱增高。40例患者均经皮肤、肌肉活检确诊为PM/DM，年龄24～73岁，其中男性14例，女性26例，平均年龄45.12岁，病程2周至7年，平均病程9.93个月，无其他自身免疫病史。40例患者肌肉标本均选择有自觉疼痛、压痛、乏力和萎缩的肌群，其中包括三角肌13例，肌四头肌27例。
, 百拇医药
二、方法：采用免疫组化法(SP法)。免疫组化抗体CD4和CD8购自丹麦DAKO公司，CD20、CD45RO购自美国Zymed公司，SPKit购自DAKO公司。
具体步骤：(1)石蜡切片脱蜡至水；(2)3%H2O2室温孵育10分钟，CD4、CD8入0.01M枸椽酸缓冲液于微波灶内96℃～98℃修复10 min，再置室温20 min，DW洗3遍，入PBS1遍；(3)CD45RO、CD20、CD4、CD8室温湿盒内加10%羊血清孵育20 min；(4)倾去血清，滴加适当比例稀释的抗工作液，4℃冰箱内孵育过夜；(5)PBS冲洗，5 min×3次；(6)滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1%BSA-PBS稀释)37℃孵育30分钟；(7)PBS冲洗，5 min×3次；(8)滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37℃孵育30分钟；(9)PBS冲洗，5 min×3次；(10)显色剂显色；(11)自来水充分冲洗，复染，封片。本实验同时设置正常淋巴结作为阳性对照，检测上述抗体及方法。并设阴性对照组。
, 百拇医药
40例PM/DM患者皮肤、肌肉病理连续切片免疫组织化学染色显示，40例中均有大量淋巴细胞浸润(浸润部位包括皮下、血管周围及肌膜间)，在400倍光镜下对40例患者每张病理切片10个不同视野进行观察，分别计算出每位患者总T细胞、CD4、CD8占总浸润炎性细胞的百分比，再进行统计学处理。
结 果
PM患者总T淋巴细胞占浸润炎性细胞(65.52±15.86)%，CD8占(45.44±19.18)%，CD4占(16.25±11.42)%，B淋巴细胞未统计(数量太少)，DM患者总T淋巴细胞占浸润炎性细胞(54.21±16.08)%。CD8占(34.22±8.61)%，CD4占(22.71±11.49)%，血管周围可见较多B淋巴细胞。
讨 论
, 百拇医药
有证据表明，细胞免疫参与PM/DM的发病。国外有文献表明PM/DM患者病理切片中炎性细胞以T细胞为主，B细胞较少[2，3]。我们通过对40例确诊的PM/DM患者病理切片进行免疫组化分析，结果显示浸润细胞以T细胞为主，而T细胞中又以CD8较多。
对40例PM/DM患者临床资料进行分析表明，40例患者血清肌酶LDH、CK、AST均有不同程度升高，说明40例PM/DM患者肌肉存在不同程度受损。
通过对40例PM/DM患者体液免疫指标进行分析得出下列结论：(1)27例PM患者血清补体C3、C4水平均在正常范围；(2)27例患者中仅有3例IgG水平增高，2例IgM水平增高；(3)27例患者中4例蛋白电泳中r-G水平增高；(4)27例患者中CIC升高仅有2例。13例DM患者体液免疫指标分析显示，6例患者血清补体C3、C4轻度升高，5例r-G水平增高，7例IgG升高。
, 百拇医药
本组患者病理切片浸润细胞以T淋巴细胞为主，血管周围有大量B淋巴细胞，故认为DM患者肌肉受损、肌酶谱升高与细胞免疫及体液免疫功能异常有关。另外通过对27例患者临床症状、肌酶升高程度与病理切片中浸润淋巴细胞数量多少进行比较认为，浸润淋巴细胞数与症状轻重及LDH、AST、CK升高程度似有正相关性。这提示我们，在临床上应对患者病理切片中淋巴细胞及其它炎性细胞仔细观察。
参考文献：
[1] Engel AG,Arahata K. Mononuclear cells in myopathies:quantitation of functionally distinct subsets recognition of antigen-spectific cell-mediated cytotoxicity in some diseases and implications for the pathogenesis of the different inflammatory myopathies. Hum Pathol 1986,17∶704-721.
, 百拇医药
[2] Giorno R,Barden MT,Kohler PF,et al. Immunochemical characterization of the mononuclear cells infiltration muscle of patients with inflammatory and noninflammatory myopathies. Clin Immunol Immunopathol, 1984,30∶405-408.
[3] Arahata K,Engel AG. Identification and quantitation of T8+cytotoxic and T8+suppressor cells in muscle in polymyositis and inclusion body myositis. Neurology, 1986,36∶237-239.
收稿日期：1999-05-21
修回日期：1999-08-30, 百拇医药
单位：张学武(100044 北京医科大学第二临床学院风湿免疫科)；蔡永明(100044 北京医科大学第二临床学院风湿免疫科)；宋秋静(100044 北京医科大学第二临床学院风湿免疫科)；贾军(100044 北京医科大学第二临床学院风湿免疫科)
关键词：多肌炎；皮肌炎；免疫组织化学；淋巴细胞
临床内科杂志000222
摘 要：目的：观察确诊的多肌炎和皮肌炎(PM/DM)患者皮肤、肌肉病理切片中浸润淋巴细胞的分型情况，研究分型与PM/DM临床表现的关系。方法：采用免疫组化法测定40例确诊的PM/DM患者皮肤、肌肉病理切片中淋巴细胞的具体百分比。结果：DM患者皮下及肌膜间浸润淋巴细胞以T细胞为主，血管周围以B细胞多见。PM患者浸润淋巴细胞在皮肤、肌膜间及血管周围均以T细胞为主。结论：细胞免疫反应参与PM发病，而在DM，细胞免疫及体液免疫反应均参与发病。
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分类号：R593.26 文献标识码：A
文章编号：1001-9057(2000)02-0117-02
The significance of subtypes of lymphocyte infiltration in patients with polymyositis and dermatomyositis
ZHANG Xuewu, CAI Yongming, SONG Qiujing, et al.
Department of Rheumatology, the people's Hosital, Beijing Medical university, Beijing 100044, Chona
Abstract：Objective：To study the relationship between polymyositis and cell-mediated immunoreaction.Methods：Immunohistochemical technique was used to calculate the percentage of subtypes of lymphocyte infiltration in pathological sections of srin and music from 40 patients with poly myo sitis dermatomy sitis.Results：Most of the lymphocyte infiltration locating on subcutanous and perimysial position in the patients with PM were T cells. A few of B cells could be found on perivascular position.Conclusion：There are close relations between PM and cell-mediated immunoreaction.
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Key words：Polymyosits; Dermatomyositis； Immunohistochemistry; Lymphocyte
多肌炎和皮肌炎(PM/DM)是较少见的自身免疫性结缔组织病。目前，病因和发病机制尚未明了，其临床特征为肢体近端和颈部无力，有时伴四肢肌肉疼痛，PM/DM主要是骨骼肌病变，但也常常累及心脏、胃肠道和肺脏。实验室特征为血清肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶及各种转氨酶活性增高。病理特征为不规则的肌肉坏死、再生和炎症。大量证据表明DM的发病与免疫反应有关[1]。PM/DM患者皮肤肌肉活检中有大量淋巴细胞浸润，研究浸润淋巴细胞分型情况对提高本病的认识具有重要意义。
对象与方法
一、对象：选择1989年至1997年我院风湿免疫科住院的病人40例，其中多肌炎(PM)27例，皮肌炎(DM)13例，患者均有典型的PM/DM临床表现，且全部存在不同程度肌酶谱增高。40例患者均经皮肤、肌肉活检确诊为PM/DM，年龄24～73岁，其中男性14例，女性26例，平均年龄45.12岁，病程2周至7年，平均病程9.93个月，无其他自身免疫病史。40例患者肌肉标本均选择有自觉疼痛、压痛、乏力和萎缩的肌群，其中包括三角肌13例，肌四头肌27例。
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二、方法：采用免疫组化法(SP法)。免疫组化抗体CD4和CD8购自丹麦DAKO公司，CD20、CD45RO购自美国Zymed公司，SPKit购自DAKO公司。
具体步骤：(1)石蜡切片脱蜡至水；(2)3%H2O2室温孵育10分钟，CD4、CD8入0.01M枸椽酸缓冲液于微波灶内96℃～98℃修复10 min，再置室温20 min，DW洗3遍，入PBS1遍；(3)CD45RO、CD20、CD4、CD8室温湿盒内加10%羊血清孵育20 min；(4)倾去血清，滴加适当比例稀释的抗工作液，4℃冰箱内孵育过夜；(5)PBS冲洗，5 min×3次；(6)滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1%BSA-PBS稀释)37℃孵育30分钟；(7)PBS冲洗，5 min×3次；(8)滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37℃孵育30分钟；(9)PBS冲洗，5 min×3次；(10)显色剂显色；(11)自来水充分冲洗，复染，封片。本实验同时设置正常淋巴结作为阳性对照，检测上述抗体及方法。并设阴性对照组。
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40例PM/DM患者皮肤、肌肉病理连续切片免疫组织化学染色显示，40例中均有大量淋巴细胞浸润(浸润部位包括皮下、血管周围及肌膜间)，在400倍光镜下对40例患者每张病理切片10个不同视野进行观察，分别计算出每位患者总T细胞、CD4、CD8占总浸润炎性细胞的百分比，再进行统计学处理。
结 果
PM患者总T淋巴细胞占浸润炎性细胞(65.52±15.86)%，CD8占(45.44±19.18)%，CD4占(16.25±11.42)%，B淋巴细胞未统计(数量太少)，DM患者总T淋巴细胞占浸润炎性细胞(54.21±16.08)%。CD8占(34.22±8.61)%，CD4占(22.71±11.49)%，血管周围可见较多B淋巴细胞。
讨 论
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有证据表明，细胞免疫参与PM/DM的发病。国外有文献表明PM/DM患者病理切片中炎性细胞以T细胞为主，B细胞较少[2，3]。我们通过对40例确诊的PM/DM患者病理切片进行免疫组化分析，结果显示浸润细胞以T细胞为主，而T细胞中又以CD8较多。
对40例PM/DM患者临床资料进行分析表明，40例患者血清肌酶LDH、CK、AST均有不同程度升高，说明40例PM/DM患者肌肉存在不同程度受损。
通过对40例PM/DM患者体液免疫指标进行分析得出下列结论：(1)27例PM患者血清补体C3、C4水平均在正常范围；(2)27例患者中仅有3例IgG水平增高，2例IgM水平增高；(3)27例患者中4例蛋白电泳中r-G水平增高；(4)27例患者中CIC升高仅有2例。13例DM患者体液免疫指标分析显示，6例患者血清补体C3、C4轻度升高，5例r-G水平增高，7例IgG升高。
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本组患者病理切片浸润细胞以T淋巴细胞为主，血管周围有大量B淋巴细胞，故认为DM患者肌肉受损、肌酶谱升高与细胞免疫及体液免疫功能异常有关。另外通过对27例患者临床症状、肌酶升高程度与病理切片中浸润淋巴细胞数量多少进行比较认为，浸润淋巴细胞数与症状轻重及LDH、AST、CK升高程度似有正相关性。这提示我们，在临床上应对患者病理切片中淋巴细胞及其它炎性细胞仔细观察。
参考文献：
[1] Engel AG,Arahata K. Mononuclear cells in myopathies:quantitation of functionally distinct subsets recognition of antigen-spectific cell-mediated cytotoxicity in some diseases and implications for the pathogenesis of the different inflammatory myopathies. Hum Pathol 1986,17∶704-721.
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[2] Giorno R,Barden MT,Kohler PF,et al. Immunochemical characterization of the mononuclear cells infiltration muscle of patients with inflammatory and noninflammatory myopathies. Clin Immunol Immunopathol, 1984,30∶405-408.
[3] Arahata K,Engel AG. Identification and quantitation of T8+cytotoxic and T8+suppressor cells in muscle in polymyositis and inclusion body myositis. Neurology, 1986,36∶237-239.
收稿日期：1999-05-21
修回日期：1999-08-30, 百拇医药