芍药甘草配伍化学变化研究
作者：王静蓉 马琮瑜 严永清 朱丹妮
单位：王静蓉(中国药科大学，江苏 南京 210038)；马琮瑜(中国药科大学，江苏 南京 210038)；严永清(中国药科大学，江苏 南京 210038)；朱丹妮(中国药科大学，江苏 南京 210038)
关键词：芍药；甘草；芍药甙；甘草酸；配伍
时珍国医国药000204 摘 要：对白芍药与甘草配伍水煎液进行了TLC分析，检查了芍药甙、甘草酸、甘草黄酮类成分的变化。进一步用HPLC方法测定了不同比例白芍与生甘草、炙甘草配伍后水煎液中芍药甙、甘草酸的含量。结果发现：与单味白芍水煎液相比，白芍与甘草以3∶1，2∶1比例配伍，芍药甙含量基本无变化；比例为1∶1时，芍药甙含量略有下降。甘草与芍药配伍后，甘草酸含量较单味甘草水煎液略低。HPLC检测发现配伍组水煎液沉淀中仅含微量芍药甙，基本不含甘草酸。
, http://www.100md.com
分类号：R284.2 文献标识码：A
文章编号：1008-0805(2000)02-0102-03
Chemical Changes of Compatibility of White Peony Root and Liquorice
WANG Jing-rong, MA Cong-yu, YAN Yong-qing, ZHU Dan-ni
(Department of Complex Prescription of Traditional Medicine, China
Pharmaceutical University, Nanjing，Jiangsu 210038, China)
, 百拇医药
Abstract：Chemical changes due to compatibility of White Peony Root and Liquorice were studied preliminarily using TLC method. Paeoniflorin(PE), glycyrrhizie acid(GA) and flavonoids in Liquorice were examined respectively. HPLC method was further employed for determining content of PE and GA in different ratio compatibility groups. The results indicated that comparing with single Peony group PE content didn't change in group of ratio 3∶1 and 2∶1 while reduced slightly in group of ratio 1∶1. GA contents in different groups were found lower than that of single Liquorice. Deposit produced from decorate solution after filtering were also analyzed. HPLC detection indicated that there only little GA and trace PE contained in deposit.
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Key words：White Paeony root； Liquorice； Paeoniflorin； Glycyrrhizic； Compatibility▲
芍药、甘草为中医常用药对，常配对应用于方剂中，《伤寒论》112方中就有24方有芍药和甘草配伍[1]，其中最为著名的为芍药甘草汤。该方主治腹中虚痛、消渴引饮，尤以治腹痛如神，对小儿热腹痛、小便不通及痘疹等病证有奇效。现代广泛应用于临床各科血虚津伤和疼痛证的治疗。
本文首先以TLC为手段，观察了芍药与甘草合煎液中芍药甙、甘草酸、甘草黄酮类成分的变化。在此基础上，用HPLC方法测定了不同比例的芍药与生甘草、炙甘草配伍后水煎液中芍药甙、甘草酸的含量，并分析了水煎液沉淀中芍药甙、甘草酸的含量，以期为该药对的应用提供化学依据。
1 实验材料
, 百拇医药 1.1 材料：生甘草、炙甘草(均购自南京市本草药店)；芍药(购自江苏省药材公司)，经中国药科大学生药学教研室张勉博士鉴定。
1.2 药品与试剂：硅胶G(青岛海洋化工厂)；色谱用甲醇(江苏淮阴塑料厂精细化工研究所，测芍药甙；中国浙江黄岩三力化工厂，测甘草酸)；其余试剂均为分析纯。
1.3 仪器：HPLC色谱仪Shimadzu 10A(Japan)，检测器Shimadzu SPD-10A；超声波清洗器 CQ250(上海必能超声有限公司)；微量分析天平TG323A(上海天平仪器厂)。
1.4 标准品：芍药甙，甘草酸单铵盐(中国药品生物制品检定所)。
2 薄层层析分析合煎液中各主要成分的化学变化
2.1 样品液制备
, 百拇医药
2.1.1 样品分组：白芍；白芍+生甘草(1∶1)；白芍+生甘草(3∶1)；生甘草；白芍+炙甘草(1∶1)；白芍+炙甘草(3∶1)；炙甘草。以上各组，以甘草1 g为基准，按比例称取药材2份，浸泡1 h，15倍量水。10倍量水分别煎煮保持微沸45 min，30 min，过滤，合并滤液，真空干燥，残渣研成粉末。
2.1.2 制备方法
2.1.2.1 95%乙醇液：上述粉末，20 ml 95%乙醇超声提取，提取液回收乙醇至干，残渣以甲醇溶解并定容至1 ml。供芍药甙及黄酮类成分分析。
2.1.2.2 10%乙醇液：粉末以20 ml 10%乙醇溶液超声提取，提取液回收乙醇至干，残渣以甲醇溶解并定容至1 ml。供甘草酸分析。
2.2 TLC分析
2.2.1 薄层板：Merck高效硅胶板(芍药甙)，自制硅胶G薄层板(甘草酸)，聚酰胺薄膜(黄酮)。
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2.2.2 展开剂：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)(芍药甙)，醋醇乙酯-甲醇-水-冰醋酸(9∶1∶1∶0.5)[2](甘草酸)，甲苯-氯仿-丙酮-甲酸(4∶2∶4∶1)[2](黄酮)。
2.2.3 显色剂：5%香草醛硫酸溶液，电吹风加热显色(芍药甙)；25%三氯化锑氯仿溶液，电吹风加热显色，UV365观察(甘草酸)；1.5%三氯化铝乙醇溶液，电吹风加热显色，UV365观察(黄酮)。
2.3 TLC图谱：见图1，图2，图3。
1.白芍 2.芍+生草(1∶1)
3.芍+生草(3∶1)
4.芍+炙草(1∶1)
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5.芍+炙草(3∶1)
6.生甘草(阴性)
7.炙甘草(阴性)
图1 芍药甙的TLC分析
注：点样量0.5 μl(3∶1)；1.5 μl(单味及1∶1)；
1.甘草酸 2.生甘草
3.生草+芍(1∶3)
4.生草+(1∶1)
5.炙甘草
6.炙草+芍(1∶3)
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7.炙草+芍(1∶1)
8.白芍(阴性)
图2 甘草酸TLC分析
1.生甘草
2.生草+芍(1∶3)
3.生草+芍(1∶1)
4.白芍(阴性)
5.炙草+芍(1∶3)
6.炙草+芍(1∶1)
7.甘草
图3 黄酮的TLC分析
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根据图1，由于甘草阴性在与芍药甙对照品相对应的位置有黄色斑点，故配伍组与单味芍药之间芍药甙含量缺乏可比性。由配伍组间比较可看出，以3∶1比例配伍时，芍药甙斑点颜色较深，尤以配伍生甘草为深，示白芍与甘草3∶1配伍时芍药甙的含量较高；1∶1配伍时芍药甙的含量较低。甘草酸等皂甙类成分以及黄酮类成分无明显变化。
3 不同比例白芍与生甘草、炙甘草配伍水煎液中芍药甙的含量测定
3.1 色谱条件：色谱柱为CLS-ODS(4.5×15 cm)；流动相为甲醇-水(40∶60)；流速0.8 ml/min；λmax=230 nm。
图4 芍药甙的HPLC色谱图
3.2 标准曲线的绘制：称取芍药甙对照品约0.05 mg，精密称定，50%乙醇溶解并定容至1 ml，得浓度为0.054 μg/μl的对照品溶液。精密量取对照品溶液6，8，10，12，14 μl，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值(Ai)自然对数值为y，芍药甙进样量(mi，μg)自然对数值为x，计算回归方程，得回归方程lnAi=1.054 443 41 lnmi+10.371 339 33，γ=0.999 96，进样量在0.324～0.756 μg范围内线性良好。
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3.3 样品含量测定
3.3.1 样品液制备
3.3.1.1 配伍分组：白芍；白芍+生甘草(3∶1)；白芍+生甘草(2∶1)；白芍+生甘草(1∶1)；白芍+炙甘草(3∶1)；白芍+炙甘草(2∶1)；白芍+炙甘草(1∶1)；生甘草；炙甘草。
3.3.1.2 制备方法：以上各配伍组，以白芍1.0 g为基准，按比例称取药材，精密称定。以15，10，10倍量水回流煎煮60，45，45 min，过滤，合并滤液，放冷至室温后，有沉淀产生。离心(3 000 r/min,15 min),吸取上清液。少量水洗涤沉淀，离心，合并上清液，定容至100 ml，得溶液a。沉淀转移至蒸发皿中，真空干燥，另作分析。精密吸取溶液a 0.5 ml，减压回收溶剂至干，残渣以50%乙醇溶解并定容至5 ml，作为供试品溶液。精密吸取20 μl，进高效液相色谱仪，按回归方程计算芍药甙的含量(表1)。
, 百拇医药
表1 不同比例白芍与生甘草、炙甘草配伍水煎液中芍药甙的含量测定 样 品
白芍量
/g
峰面积A
芍药甙
/g.L-1
平均值
/g.L-1
相对平均偏差
(%)
白 芍
, 百拇医药
1.003 0
12 145.5
0.199 9
0.205 8
2.84
1.002 9
12 894.5
0.211 6
白芍+生甘草
1.002 3
12 176
0.200 4
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0.195 1
2.72
(3∶1)
1.002 6
11 497
0.189 8
白芍+生甘草
1.001 2
11 840
0.195 1
0.195 2
0.05
, 百拇医药
(2∶1)
1.001 0
11 851.5
0.195 3
白芍+生甘草
1.001 4
11 395.5
0.188 2
0.181 3
3.78
(1∶1)
1.001 3
, 百拇医药
10 523
0.174 5
白芍+炙甘草
1.002 1
12 841.5
0.210 8
0.208 1
1.32
(3∶1)
1.002 1
12 495
0.205 3
, 百拇医药
白芍+炙甘草
1.001 9
12 617
0.2 073
0.2 033
2.21
(2∶1)
1.002 4
12 106
0.199 3
白芍+炙甘草
1.002 9
, 百拇医药
10 616
0.176 0
0.171 8
2.24
(1∶1)
1.003 2
10 101
0.167 9
由表1可知，配伍比例为3∶1，2∶1时，芍药甙含量基本无变化，当比例为1∶1时，芍药甙含量较单味白芍略有下降，生、炙甘草组之间芍药甙含量无明显差异。
4 不同比例白芍与生甘草、炙甘草配伍水煎液中甘草酸的含量测定
, 百拇医药
4.1 色谱条件：色谱柱为CLS-ODS(4.5×15 cm)；流动相为甲醇-水-冰醋酸(68∶30∶3)；流速1.0 ml/min；λmax=248 nm；灵敏度0.04。
图5 甘草酸的HPLC色谱图
4.2 标准曲线的绘制：精密称取甘草酸单铵盐对照品1.16 mg，50%乙醇水溶液溶解并定容至1 ml，精密移取0.1 ml，稀释至1 ml，即得0.016 μg/μl浓度的对照品溶液。
在上述色谱条件下，分别进对照品溶液6，10，12，14，16 μl，以色谱峰面积(Ai)为y，进样量(mi，μg)为x，计算回归方程，得回归方程为Ai=11855.78819mi-593.15238，γ=0.999 6。进样量在0.696～1.856 μg范围内线性良好。
, 百拇医药
4.3 样品含量测定：精密移取溶液a(见3.3.1)0.10 ml，减压回收溶剂至干，50%乙醇溶解并定容至10 ml，精密吸取1.0 ml(白芍∶甘草1∶1)，2.0 ml(2∶1)，3.0 ml(3∶1)至5 ml容量瓶中，50%乙醇溶液稀释至刻度。按上述色谱条件，将各样品精密进样20 μl，按回归方程计算其中甘草酸的含量。结果见表3。
注：n=1(1∶1配伍组)；n=1/2(2∶1配伍组)； n=1/3(3∶1配伍组)
由表2可知，配伍后，甘草酸溶出率(相对于药材)较单味甘草下降，下降程度随与白芍比例无平行关系。炙甘草组甘草酸含量均高于生甘草组。
表2 不同比例白芍与生、炙甘草配伍水煎液中甘草酸的含量及溶出率 样 品
, 百拇医药 甘草量
/g
峰面积A
甘草酸
/g.L-1
相对于药材
溶出率(%)
平均值
(%)
相对平均
偏差(%)
生甘草
1.001 0
, 百拇医药
15 848
0.346 7
3.463
3.429
0.99
1.001 0
15 526
0.339 9
3.395
白芍+生甘草
0.332 1
12 972
, http://www.100md.com 0.095 4
2.871
2.897
0.90
(3∶1)
0.332 6
13 235
0.097 2
2.923
白芍+生甘草
0.500 5
13 113
0.144 5
, http://www.100md.com
2.888
2.912
0.82
(2∶1)
0.499 6
13 318
0.146 7
2.936
白芍+生甘草
1.000 2
13 730
0.302 0
, 百拇医药 3.020
2.922
3.35
(1∶1)
1.000 6
12 807
0.282 6
2.824
炙甘草
1.000 3
21 481
0.465 3
4.652
, http://www.100md.com
4.612
0.87
1.000 7
21 112
0.457 6
4.572
白芍+炙甘草
0.333 5
18 154
0.131 7
3.951
3.995
, 百拇医药 1.09
(3∶1)
0.333 7
18 580
0.134 7
4.038
白芍+炙甘草
0.500 1
18 431
0.200 5
4.010
4.016
0.14
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(2∶1)
0.500 3
18 465
0.200 9
4.016
白芍+炙甘草
1.000 3
16 877
0.368 3
3.682
3.632
1.39
, 百拇医药 (1∶1)
1.000 2
16 395
0.358 2
3.581
5 沉淀的分析
5.1 沉淀的重量：沉淀来源见3.3.1。测定沉淀重量，结果见表3。表3 白芍、甘草配伍水煎液中沉淀的重量 样 品
平均重量/g
白 芍
0.221 0
芍药+生甘草(3∶1)
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0.257 7
芍药+生甘草(2∶1)
0.372 7
芍药+生甘草(1∶1)
0.460 5
生甘草
0.180 5
芍药+炙甘草(3∶1)
0.306 5
芍药+炙甘草(2∶1)
0.308 2
芍药+炙甘草(1∶1)
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0.382 3
炙甘草
0.129 6
由上可见，配伍组水煎液中沉淀重量高于两单味药沉淀之和，即配伍后沉淀重量增加。
5.2 沉淀中芍药甙的HPLC检测。
5.2.1 样品液制备：沉淀以8 ml50%乙醇溶液超声提取20 min(分2次，10 min/次)，过滤，少量50%乙醇溶液洗涤残渣，残渣再以10 ml 50%乙醇超声，TLC检测无芍药甙及甘草酸斑点，取第1次超声提取液定容至10 ml，摇匀。得沉淀供试品。
5.2.2 色谱条件：同3.1。
5.2.3 样品检测：按上述色谱条件将白芍单味及白芍+生甘草(1∶1)沉淀供试品分别精密进样20 μl，结果发现其中均含有少量芍药甙。
, 百拇医药
5.3 沉淀中甘草酸的HPLC检测。
5.3.1 色谱条件：同4.1。
5.3.2 样品液制备：见5.2.1。
5.3.3 样品检测：按上述色谱条件，各配伍组沉淀供试品精密进样20 μl，从图谱可知，除甘草单味及炙甘草+白芍(1∶1)有明显的甘草酸色谱峰外，其余均无甘草酸色谱峰。
6 讨论
6.1 白芍、甘草配伍后，芍药甙及甘草酸含量略有变化；当配伍比例为1∶1时，芍药甙含量较单味白芍降低，配伍后的甘草酸含量较单味甘草略有降低，降低程度与配伍比例无平行关系。炙甘草配伍组中甘草酸含量均高于生甘草配伍组。
6.2 水煎液过滤放冷后有不同程度沉淀析出，配伍组中随着甘草比例增加，沉淀重量增加，且多数高于两单味药沉淀之和。用HPLC法对沉淀中芍药甙及甘草酸进行分析发现，各配伍组沉淀中均含少量芍药甙，可能为沉淀吸附所致。除单味及白芍+炙甘草(1∶1)配伍组沉淀外，其它均无甘草酸色谱峰。沉淀中基本不含二单味药的主要成分，这一现象提示在制剂制备工艺中，可考虑除去水煎液中的沉淀，降低制剂剂量。
, 百拇医药
6.3 白芍与甘草配伍，对二药中主要化学成分均呈弱的负面影响，当配伍比例为1∶1时影响较大，对药效影响如何有待于进一步研究。■
作者简介：王静蓉(1972-)，女(汉族)，宁夏人，现任中国药科大学中药复方研究室助教，硕士学位.
参考文献：
[1]王永谦，李文浦，张文如，等.芍药甘草汤的研究进展[J].辽宁中医杂志，1980，(9)∶36～38
[2]楼之岑，秦 波.常用中药材品种整理和质量研究(Ⅱ)[M].北京：北京医科大学.中国协和医科大学联合出版社，1995∶469
收稿日期：1999-09-28
修稿日期：1999-10-25, http://www.100md.com
单位：王静蓉(中国药科大学，江苏 南京 210038)；马琮瑜(中国药科大学，江苏 南京 210038)；严永清(中国药科大学，江苏 南京 210038)；朱丹妮(中国药科大学，江苏 南京 210038)
关键词：芍药；甘草；芍药甙；甘草酸；配伍
时珍国医国药000204 摘 要：对白芍药与甘草配伍水煎液进行了TLC分析，检查了芍药甙、甘草酸、甘草黄酮类成分的变化。进一步用HPLC方法测定了不同比例白芍与生甘草、炙甘草配伍后水煎液中芍药甙、甘草酸的含量。结果发现：与单味白芍水煎液相比，白芍与甘草以3∶1，2∶1比例配伍，芍药甙含量基本无变化；比例为1∶1时，芍药甙含量略有下降。甘草与芍药配伍后，甘草酸含量较单味甘草水煎液略低。HPLC检测发现配伍组水煎液沉淀中仅含微量芍药甙，基本不含甘草酸。
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分类号：R284.2 文献标识码：A
文章编号：1008-0805(2000)02-0102-03
Chemical Changes of Compatibility of White Peony Root and Liquorice
WANG Jing-rong, MA Cong-yu, YAN Yong-qing, ZHU Dan-ni
(Department of Complex Prescription of Traditional Medicine, China
Pharmaceutical University, Nanjing，Jiangsu 210038, China)
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Abstract：Chemical changes due to compatibility of White Peony Root and Liquorice were studied preliminarily using TLC method. Paeoniflorin(PE), glycyrrhizie acid(GA) and flavonoids in Liquorice were examined respectively. HPLC method was further employed for determining content of PE and GA in different ratio compatibility groups. The results indicated that comparing with single Peony group PE content didn't change in group of ratio 3∶1 and 2∶1 while reduced slightly in group of ratio 1∶1. GA contents in different groups were found lower than that of single Liquorice. Deposit produced from decorate solution after filtering were also analyzed. HPLC detection indicated that there only little GA and trace PE contained in deposit.
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Key words：White Paeony root； Liquorice； Paeoniflorin； Glycyrrhizic； Compatibility▲
芍药、甘草为中医常用药对，常配对应用于方剂中，《伤寒论》112方中就有24方有芍药和甘草配伍[1]，其中最为著名的为芍药甘草汤。该方主治腹中虚痛、消渴引饮，尤以治腹痛如神，对小儿热腹痛、小便不通及痘疹等病证有奇效。现代广泛应用于临床各科血虚津伤和疼痛证的治疗。
本文首先以TLC为手段，观察了芍药与甘草合煎液中芍药甙、甘草酸、甘草黄酮类成分的变化。在此基础上，用HPLC方法测定了不同比例的芍药与生甘草、炙甘草配伍后水煎液中芍药甙、甘草酸的含量，并分析了水煎液沉淀中芍药甙、甘草酸的含量，以期为该药对的应用提供化学依据。
1 实验材料
, 百拇医药 1.1 材料：生甘草、炙甘草(均购自南京市本草药店)；芍药(购自江苏省药材公司)，经中国药科大学生药学教研室张勉博士鉴定。
1.2 药品与试剂：硅胶G(青岛海洋化工厂)；色谱用甲醇(江苏淮阴塑料厂精细化工研究所，测芍药甙；中国浙江黄岩三力化工厂，测甘草酸)；其余试剂均为分析纯。
1.3 仪器：HPLC色谱仪Shimadzu 10A(Japan)，检测器Shimadzu SPD-10A；超声波清洗器 CQ250(上海必能超声有限公司)；微量分析天平TG323A(上海天平仪器厂)。
1.4 标准品：芍药甙，甘草酸单铵盐(中国药品生物制品检定所)。
2 薄层层析分析合煎液中各主要成分的化学变化
2.1 样品液制备
, 百拇医药
2.1.1 样品分组：白芍；白芍+生甘草(1∶1)；白芍+生甘草(3∶1)；生甘草；白芍+炙甘草(1∶1)；白芍+炙甘草(3∶1)；炙甘草。以上各组，以甘草1 g为基准，按比例称取药材2份，浸泡1 h，15倍量水。10倍量水分别煎煮保持微沸45 min，30 min，过滤，合并滤液，真空干燥，残渣研成粉末。
2.1.2 制备方法
2.1.2.1 95%乙醇液：上述粉末，20 ml 95%乙醇超声提取，提取液回收乙醇至干，残渣以甲醇溶解并定容至1 ml。供芍药甙及黄酮类成分分析。
2.1.2.2 10%乙醇液：粉末以20 ml 10%乙醇溶液超声提取，提取液回收乙醇至干，残渣以甲醇溶解并定容至1 ml。供甘草酸分析。
2.2 TLC分析
2.2.1 薄层板：Merck高效硅胶板(芍药甙)，自制硅胶G薄层板(甘草酸)，聚酰胺薄膜(黄酮)。
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2.2.2 展开剂：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)(芍药甙)，醋醇乙酯-甲醇-水-冰醋酸(9∶1∶1∶0.5)[2](甘草酸)，甲苯-氯仿-丙酮-甲酸(4∶2∶4∶1)[2](黄酮)。
2.2.3 显色剂：5%香草醛硫酸溶液，电吹风加热显色(芍药甙)；25%三氯化锑氯仿溶液，电吹风加热显色，UV365观察(甘草酸)；1.5%三氯化铝乙醇溶液，电吹风加热显色，UV365观察(黄酮)。
2.3 TLC图谱：见图1，图2，图3。
1.白芍 2.芍+生草(1∶1)
3.芍+生草(3∶1)
4.芍+炙草(1∶1)
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5.芍+炙草(3∶1)
6.生甘草(阴性)
7.炙甘草(阴性)
图1 芍药甙的TLC分析
注：点样量0.5 μl(3∶1)；1.5 μl(单味及1∶1)；
1.甘草酸 2.生甘草
3.生草+芍(1∶3)
4.生草+(1∶1)
5.炙甘草
6.炙草+芍(1∶3)
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7.炙草+芍(1∶1)
8.白芍(阴性)
图2 甘草酸TLC分析
1.生甘草
2.生草+芍(1∶3)
3.生草+芍(1∶1)
4.白芍(阴性)
5.炙草+芍(1∶3)
6.炙草+芍(1∶1)
7.甘草
图3 黄酮的TLC分析
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根据图1，由于甘草阴性在与芍药甙对照品相对应的位置有黄色斑点，故配伍组与单味芍药之间芍药甙含量缺乏可比性。由配伍组间比较可看出，以3∶1比例配伍时，芍药甙斑点颜色较深，尤以配伍生甘草为深，示白芍与甘草3∶1配伍时芍药甙的含量较高；1∶1配伍时芍药甙的含量较低。甘草酸等皂甙类成分以及黄酮类成分无明显变化。
3 不同比例白芍与生甘草、炙甘草配伍水煎液中芍药甙的含量测定
3.1 色谱条件：色谱柱为CLS-ODS(4.5×15 cm)；流动相为甲醇-水(40∶60)；流速0.8 ml/min；λmax=230 nm。
图4 芍药甙的HPLC色谱图
3.2 标准曲线的绘制：称取芍药甙对照品约0.05 mg，精密称定，50%乙醇溶解并定容至1 ml，得浓度为0.054 μg/μl的对照品溶液。精密量取对照品溶液6，8，10，12，14 μl，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值(Ai)自然对数值为y，芍药甙进样量(mi，μg)自然对数值为x，计算回归方程，得回归方程lnAi=1.054 443 41 lnmi+10.371 339 33，γ=0.999 96，进样量在0.324～0.756 μg范围内线性良好。
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3.3 样品含量测定
3.3.1 样品液制备
3.3.1.1 配伍分组：白芍；白芍+生甘草(3∶1)；白芍+生甘草(2∶1)；白芍+生甘草(1∶1)；白芍+炙甘草(3∶1)；白芍+炙甘草(2∶1)；白芍+炙甘草(1∶1)；生甘草；炙甘草。
3.3.1.2 制备方法：以上各配伍组，以白芍1.0 g为基准，按比例称取药材，精密称定。以15，10，10倍量水回流煎煮60，45，45 min，过滤，合并滤液，放冷至室温后，有沉淀产生。离心(3 000 r/min,15 min),吸取上清液。少量水洗涤沉淀，离心，合并上清液，定容至100 ml，得溶液a。沉淀转移至蒸发皿中，真空干燥，另作分析。精密吸取溶液a 0.5 ml，减压回收溶剂至干，残渣以50%乙醇溶解并定容至5 ml，作为供试品溶液。精密吸取20 μl，进高效液相色谱仪，按回归方程计算芍药甙的含量(表1)。
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表1 不同比例白芍与生甘草、炙甘草配伍水煎液中芍药甙的含量测定 样 品
白芍量
/g
峰面积A
芍药甙
/g.L-1
平均值
/g.L-1
相对平均偏差
(%)
白 芍
, 百拇医药
1.003 0
12 145.5
0.199 9
0.205 8
2.84
1.002 9
12 894.5
0.211 6
白芍+生甘草
1.002 3
12 176
0.200 4
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0.195 1
2.72
(3∶1)
1.002 6
11 497
0.189 8
白芍+生甘草
1.001 2
11 840
0.195 1
0.195 2
0.05
, 百拇医药
(2∶1)
1.001 0
11 851.5
0.195 3
白芍+生甘草
1.001 4
11 395.5
0.188 2
0.181 3
3.78
(1∶1)
1.001 3
, 百拇医药
10 523
0.174 5
白芍+炙甘草
1.002 1
12 841.5
0.210 8
0.208 1
1.32
(3∶1)
1.002 1
12 495
0.205 3
, 百拇医药
白芍+炙甘草
1.001 9
12 617
0.2 073
0.2 033
2.21
(2∶1)
1.002 4
12 106
0.199 3
白芍+炙甘草
1.002 9
, 百拇医药
10 616
0.176 0
0.171 8
2.24
(1∶1)
1.003 2
10 101
0.167 9
由表1可知，配伍比例为3∶1，2∶1时，芍药甙含量基本无变化，当比例为1∶1时，芍药甙含量较单味白芍略有下降，生、炙甘草组之间芍药甙含量无明显差异。
4 不同比例白芍与生甘草、炙甘草配伍水煎液中甘草酸的含量测定
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4.1 色谱条件：色谱柱为CLS-ODS(4.5×15 cm)；流动相为甲醇-水-冰醋酸(68∶30∶3)；流速1.0 ml/min；λmax=248 nm；灵敏度0.04。
图5 甘草酸的HPLC色谱图
4.2 标准曲线的绘制：精密称取甘草酸单铵盐对照品1.16 mg，50%乙醇水溶液溶解并定容至1 ml，精密移取0.1 ml，稀释至1 ml，即得0.016 μg/μl浓度的对照品溶液。
在上述色谱条件下，分别进对照品溶液6，10，12，14，16 μl，以色谱峰面积(Ai)为y，进样量(mi，μg)为x，计算回归方程，得回归方程为Ai=11855.78819mi-593.15238，γ=0.999 6。进样量在0.696～1.856 μg范围内线性良好。
, 百拇医药
4.3 样品含量测定：精密移取溶液a(见3.3.1)0.10 ml，减压回收溶剂至干，50%乙醇溶解并定容至10 ml，精密吸取1.0 ml(白芍∶甘草1∶1)，2.0 ml(2∶1)，3.0 ml(3∶1)至5 ml容量瓶中，50%乙醇溶液稀释至刻度。按上述色谱条件，将各样品精密进样20 μl，按回归方程计算其中甘草酸的含量。结果见表3。
注：n=1(1∶1配伍组)；n=1/2(2∶1配伍组)； n=1/3(3∶1配伍组)
由表2可知，配伍后，甘草酸溶出率(相对于药材)较单味甘草下降，下降程度随与白芍比例无平行关系。炙甘草组甘草酸含量均高于生甘草组。
表2 不同比例白芍与生、炙甘草配伍水煎液中甘草酸的含量及溶出率 样 品
, 百拇医药 甘草量
/g
峰面积A
甘草酸
/g.L-1
相对于药材
溶出率(%)
平均值
(%)
相对平均
偏差(%)
生甘草
1.001 0
, 百拇医药
15 848
0.346 7
3.463
3.429
0.99
1.001 0
15 526
0.339 9
3.395
白芍+生甘草
0.332 1
12 972
, http://www.100md.com 0.095 4
2.871
2.897
0.90
(3∶1)
0.332 6
13 235
0.097 2
2.923
白芍+生甘草
0.500 5
13 113
0.144 5
, http://www.100md.com
2.888
2.912
0.82
(2∶1)
0.499 6
13 318
0.146 7
2.936
白芍+生甘草
1.000 2
13 730
0.302 0
, 百拇医药 3.020
2.922
3.35
(1∶1)
1.000 6
12 807
0.282 6
2.824
炙甘草
1.000 3
21 481
0.465 3
4.652
, http://www.100md.com
4.612
0.87
1.000 7
21 112
0.457 6
4.572
白芍+炙甘草
0.333 5
18 154
0.131 7
3.951
3.995
, 百拇医药 1.09
(3∶1)
0.333 7
18 580
0.134 7
4.038
白芍+炙甘草
0.500 1
18 431
0.200 5
4.010
4.016
0.14
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(2∶1)
0.500 3
18 465
0.200 9
4.016
白芍+炙甘草
1.000 3
16 877
0.368 3
3.682
3.632
1.39
, 百拇医药 (1∶1)
1.000 2
16 395
0.358 2
3.581
5 沉淀的分析
5.1 沉淀的重量：沉淀来源见3.3.1。测定沉淀重量，结果见表3。表3 白芍、甘草配伍水煎液中沉淀的重量 样 品
平均重量/g
白 芍
0.221 0
芍药+生甘草(3∶1)
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0.257 7
芍药+生甘草(2∶1)
0.372 7
芍药+生甘草(1∶1)
0.460 5
生甘草
0.180 5
芍药+炙甘草(3∶1)
0.306 5
芍药+炙甘草(2∶1)
0.308 2
芍药+炙甘草(1∶1)
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0.382 3
炙甘草
0.129 6
由上可见，配伍组水煎液中沉淀重量高于两单味药沉淀之和，即配伍后沉淀重量增加。
5.2 沉淀中芍药甙的HPLC检测。
5.2.1 样品液制备：沉淀以8 ml50%乙醇溶液超声提取20 min(分2次，10 min/次)，过滤，少量50%乙醇溶液洗涤残渣，残渣再以10 ml 50%乙醇超声，TLC检测无芍药甙及甘草酸斑点，取第1次超声提取液定容至10 ml，摇匀。得沉淀供试品。
5.2.2 色谱条件：同3.1。
5.2.3 样品检测：按上述色谱条件将白芍单味及白芍+生甘草(1∶1)沉淀供试品分别精密进样20 μl，结果发现其中均含有少量芍药甙。
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5.3 沉淀中甘草酸的HPLC检测。
5.3.1 色谱条件：同4.1。
5.3.2 样品液制备：见5.2.1。
5.3.3 样品检测：按上述色谱条件，各配伍组沉淀供试品精密进样20 μl，从图谱可知，除甘草单味及炙甘草+白芍(1∶1)有明显的甘草酸色谱峰外，其余均无甘草酸色谱峰。
6 讨论
6.1 白芍、甘草配伍后，芍药甙及甘草酸含量略有变化；当配伍比例为1∶1时，芍药甙含量较单味白芍降低，配伍后的甘草酸含量较单味甘草略有降低，降低程度与配伍比例无平行关系。炙甘草配伍组中甘草酸含量均高于生甘草配伍组。
6.2 水煎液过滤放冷后有不同程度沉淀析出，配伍组中随着甘草比例增加，沉淀重量增加，且多数高于两单味药沉淀之和。用HPLC法对沉淀中芍药甙及甘草酸进行分析发现，各配伍组沉淀中均含少量芍药甙，可能为沉淀吸附所致。除单味及白芍+炙甘草(1∶1)配伍组沉淀外，其它均无甘草酸色谱峰。沉淀中基本不含二单味药的主要成分，这一现象提示在制剂制备工艺中，可考虑除去水煎液中的沉淀，降低制剂剂量。
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6.3 白芍与甘草配伍，对二药中主要化学成分均呈弱的负面影响，当配伍比例为1∶1时影响较大，对药效影响如何有待于进一步研究。■
作者简介：王静蓉(1972-)，女(汉族)，宁夏人，现任中国药科大学中药复方研究室助教，硕士学位.
参考文献：
[1]王永谦，李文浦，张文如，等.芍药甘草汤的研究进展[J].辽宁中医杂志，1980，(9)∶36～38
[2]楼之岑，秦 波.常用中药材品种整理和质量研究(Ⅱ)[M].北京：北京医科大学.中国协和医科大学联合出版社，1995∶469
收稿日期：1999-09-28
修稿日期：1999-10-25, http://www.100md.com