刺蒺藜果实中两种甾体皂苷的分离与鉴定
作者：金京玲 金哲洙 任东鲜 朴惠善 金永日 徐雅娟 蔡利锋 徐东铭
单位：金京玲 金哲洙 任东鲜 朴惠善 金永日(延边大学医学院附属医院)；徐雅娟 蔡利锋 徐东铭(吉林省中医中药研究院)
关键词：刺蒺藜果实；甾体皂苷；海柯皂苷元
中草药000205摘 要 采用层析分离技术，从刺蒺藜Tribuls terrestris果实中分离出2种甾体皂苷，利用各种光谱分析，鉴定为海柯皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(Ⅰ)和海柯皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-[β-D-吡喃木糖(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(Ⅱ)。化合物Ⅰ为首次从刺蒺藜果实中分得，化合物Ⅱ为首次从蒺藜原植物中分得。
刺蒺藜Tribuls terrestris L.为蒺藜科蒺藜属植物，其果实为传统中药，具散风、明目、下气行血、补肾益精之功效。为中国药典1985年版所收载，历代医书多列为上品。为了进一步探讨刺蒺藜果实部分的化学成分，我们对刺蒺藜果实的化学成分进行了研究，从中分离并鉴定了两种甾体皂苷。
, 百拇医药
化合物Ⅰ：白色粉末(甲醇-水)，mp 262 ℃～264 ℃, Libermann-Burchard应及Molish反应阳性，酸水解检出D-吡喃葡萄糖和D-吡喃半乳糖。由红外光谱可知，该化合物的结构中含有3 434 (OH)， 1 708 (C=O)， 1 632 (C=C)， 1 456 (环 C-H)， 898 (β-D糖苷键)。又根据990 (A)、919 (B)、898 (C)、860 (D)4个特征峰，可知该化合物为螺甾皂苷[2],结合质谱显示分子量754，可知一分子的该化合物只含两分子的糖。在完全去偶13CNMR (C5D5N)结合DEPT谱(C5D5N)中，在 δ 61.0～80.0处可看到与靠近苷元的β-D-吡喃葡萄糖和处于靠外的β-D-吡喃半乳糖相一致的碳信号。归属C-3的信号较配基出现在低场，证实糖结合在C-3位上。经与文献[3]相对照，鉴定化合物Ⅰ为海柯皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷。13CNMR数据见表1。
, 百拇医药
化合物Ⅱ：白色粉末(甲醇-水)，mp 277 ℃～279 ℃,Liebermann-Burchard反应及Molish反应阳性，酸水解检出D-吡喃葡萄糖、D-吡喃木糖和D-吡喃半乳糖。由完全去偶13CNMR(C5D5N)和DEPT谱(C5D5N)可以看出苷元部分与化合物Ⅰ相同，又因为激光解吸飞行时间质谱m/z中出现1071[M+Na]+, 1087[M+K]+,分子量为1 048，可知一分子皂苷元与四分子的糖结合。碳谱中，归属C-3的信号较配基出现在低场，说明糖结合在C-3位上。经与文献[4]中已知化合物相对照13CNMR谱中的化学位移值，发现其皂苷元部分和糖部分所有碳的化学位移皆相吻合，确定化合物Ⅱ的结构为海柯皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-[β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷。13CNMR数据见表1。化合物Ⅰ和Ⅱ的化学结构式见图1。
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图1 化合物Ⅰ和Ⅱ的化学结构式
表1 化合物Ⅰ和Ⅱ的13CNMR数据(C5D5N) 苷元
糖部分
Carbon
Ⅰ
Ⅱ
Carbon
Ⅰ
Ⅱ
1
36.6
36.5
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C-3
2
29.7
29.7
Gla(inner)
3
4
5
6
7
76.8
34.3
44.3
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28.5
31.6
77.0
34.6
44.4
28.6
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1
2
3
4
5
6
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73.2
75.2
80.0
75.4
61.0
102.4
73.2
75.6
80.0
75.4
60.7
8
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34.6
34.3
Glc(terminal)
9
10
11
12
13
55.4
36.2
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55.2
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55.4
36.3
38.0
212.6
55.4
1
2
3
4
5
6
107.1
75.9
, http://www.100md.com 78.6
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14
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Glc(inner)
15
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17
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19
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20
42.6
42.7
Xyl(terminal)
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21
22
23
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109.4
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1
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2
3
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5
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75.0
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70.7
67.3
25
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Glc(terminal)
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26
27
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17.2
67.0
17.4
1
2
3
4
5
6
104.8
76.2
, 百拇医药
78.6
70.9
77.6
62.9
1 仪器与材料
熔点用Kofler显微熔点仪测定(温度未经校正)；质谱用LTD-1700仪测定；红外光谱用Win-IR仪测定；核磁共振光谱用Varian-unity-400仪测定。层析用硅胶为青岛海洋化工厂产品。D101大孔吸附树脂为天津制胶厂产品。试剂均为分析纯。
刺蒺藜果实购自安徽亳州药材市场，由吉林省中医中药研究院严仲凯研究员鉴定为蒺藜科蒺藜属植物刺蒺藜Tribuls terrestris L. 干燥成熟果实。
2 提取与分离
, 百拇医药
刺蒺藜果实粗粉10 kg，水煎提，滤液浓缩后用Ca(OH)2饱和水溶液调pH值至12，滤除所产生的沉淀，先通过脱盐和脱色树脂柱，再通过D101大孔吸附树脂柱，用水和不同浓度的乙醇依次洗脱，回收乙醇洗脱液，得乙醇洗脱物80 g。反复进行硅胶柱层析，用不同比例的氯仿-乙醇梯度洗脱，再进行制备性薄层层析，用氯仿-甲醇-水(65∶35∶10下层)展开，经处理，得化合物Ⅰ和化合物Ⅱ。
3 鉴定
化合物Ⅰ：白色粉末(甲醇-水)，mp 262 ℃～264 ℃,Libermann-Burchard反应及Molish反应阳性，[α]D 150.72° (c,pyridine,0.4);MALDI-TOF MS m/z:793[M+K]+,777[M+Na]+; IRνKBrmaxcm-1， 3 423 (OH)， 2 932 (νCH2), 1 708 (C=O), 1 632 (C=C), 1 456 (环 C-H), 1 374 (δCH3)， 1 067 (νC-O)， 898 (β-D糖苷键)。13CNMR数据见附表1。
, 百拇医药
化合物Ⅱ：白色粉末(甲醇-水)，mp 277 ℃～279 ℃，Liebermann-Burchard反应及Molish反应阳性，MALDI-TOF MS m/z:1 071 [M+Na]+, 1 087 [M+K]+， IRνKBrmaxcm-1：3 423 (OH)， 1 649 (C=C)， 1 456 (环 C-H)， 1 374 (δCH3)，1 078 (νC-O)和898 (β-D 糖苷键)。13CNMR数据据见附表1。■
参考文献
1，彭军鹏.中草药，1992，23(8)：437
2，Bahuguna S, et al. Phytochemistry, 1990, 29(1):2741
3，Gong W, et al. Phytochemistry, 1996, 42(6):1677
4，Yushihiro Mimaki, et al. Chem Pharm Bull, 1995, 43(7):1190
(1999-01-22 收稿), 百拇医药
单位：金京玲 金哲洙 任东鲜 朴惠善 金永日(延边大学医学院附属医院)；徐雅娟 蔡利锋 徐东铭(吉林省中医中药研究院)
关键词：刺蒺藜果实；甾体皂苷；海柯皂苷元
中草药000205摘 要 采用层析分离技术，从刺蒺藜Tribuls terrestris果实中分离出2种甾体皂苷，利用各种光谱分析，鉴定为海柯皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(Ⅰ)和海柯皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-[β-D-吡喃木糖(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(Ⅱ)。化合物Ⅰ为首次从刺蒺藜果实中分得，化合物Ⅱ为首次从蒺藜原植物中分得。
刺蒺藜Tribuls terrestris L.为蒺藜科蒺藜属植物，其果实为传统中药，具散风、明目、下气行血、补肾益精之功效。为中国药典1985年版所收载，历代医书多列为上品。为了进一步探讨刺蒺藜果实部分的化学成分，我们对刺蒺藜果实的化学成分进行了研究，从中分离并鉴定了两种甾体皂苷。
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化合物Ⅰ：白色粉末(甲醇-水)，mp 262 ℃～264 ℃, Libermann-Burchard应及Molish反应阳性，酸水解检出D-吡喃葡萄糖和D-吡喃半乳糖。由红外光谱可知，该化合物的结构中含有3 434 (OH)， 1 708 (C=O)， 1 632 (C=C)， 1 456 (环 C-H)， 898 (β-D糖苷键)。又根据990 (A)、919 (B)、898 (C)、860 (D)4个特征峰，可知该化合物为螺甾皂苷[2],结合质谱显示分子量754，可知一分子的该化合物只含两分子的糖。在完全去偶13CNMR (C5D5N)结合DEPT谱(C5D5N)中，在 δ 61.0～80.0处可看到与靠近苷元的β-D-吡喃葡萄糖和处于靠外的β-D-吡喃半乳糖相一致的碳信号。归属C-3的信号较配基出现在低场，证实糖结合在C-3位上。经与文献[3]相对照，鉴定化合物Ⅰ为海柯皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷。13CNMR数据见表1。
, 百拇医药
化合物Ⅱ：白色粉末(甲醇-水)，mp 277 ℃～279 ℃,Liebermann-Burchard反应及Molish反应阳性，酸水解检出D-吡喃葡萄糖、D-吡喃木糖和D-吡喃半乳糖。由完全去偶13CNMR(C5D5N)和DEPT谱(C5D5N)可以看出苷元部分与化合物Ⅰ相同，又因为激光解吸飞行时间质谱m/z中出现1071[M+Na]+, 1087[M+K]+,分子量为1 048，可知一分子皂苷元与四分子的糖结合。碳谱中，归属C-3的信号较配基出现在低场，说明糖结合在C-3位上。经与文献[4]中已知化合物相对照13CNMR谱中的化学位移值，发现其皂苷元部分和糖部分所有碳的化学位移皆相吻合，确定化合物Ⅱ的结构为海柯皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-[β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷。13CNMR数据见表1。化合物Ⅰ和Ⅱ的化学结构式见图1。
, 百拇医药
图1 化合物Ⅰ和Ⅱ的化学结构式
表1 化合物Ⅰ和Ⅱ的13CNMR数据(C5D5N) 苷元
糖部分
Carbon
Ⅰ
Ⅱ
Carbon
Ⅰ
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1 仪器与材料
熔点用Kofler显微熔点仪测定(温度未经校正)；质谱用LTD-1700仪测定；红外光谱用Win-IR仪测定；核磁共振光谱用Varian-unity-400仪测定。层析用硅胶为青岛海洋化工厂产品。D101大孔吸附树脂为天津制胶厂产品。试剂均为分析纯。
刺蒺藜果实购自安徽亳州药材市场，由吉林省中医中药研究院严仲凯研究员鉴定为蒺藜科蒺藜属植物刺蒺藜Tribuls terrestris L. 干燥成熟果实。
2 提取与分离
, 百拇医药
刺蒺藜果实粗粉10 kg，水煎提，滤液浓缩后用Ca(OH)2饱和水溶液调pH值至12，滤除所产生的沉淀，先通过脱盐和脱色树脂柱，再通过D101大孔吸附树脂柱，用水和不同浓度的乙醇依次洗脱，回收乙醇洗脱液，得乙醇洗脱物80 g。反复进行硅胶柱层析，用不同比例的氯仿-乙醇梯度洗脱，再进行制备性薄层层析，用氯仿-甲醇-水(65∶35∶10下层)展开，经处理，得化合物Ⅰ和化合物Ⅱ。
3 鉴定
化合物Ⅰ：白色粉末(甲醇-水)，mp 262 ℃～264 ℃,Libermann-Burchard反应及Molish反应阳性，[α]D 150.72° (c,pyridine,0.4);MALDI-TOF MS m/z:793[M+K]+,777[M+Na]+; IRνKBrmaxcm-1， 3 423 (OH)， 2 932 (νCH2), 1 708 (C=O), 1 632 (C=C), 1 456 (环 C-H), 1 374 (δCH3)， 1 067 (νC-O)， 898 (β-D糖苷键)。13CNMR数据见附表1。
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化合物Ⅱ：白色粉末(甲醇-水)，mp 277 ℃～279 ℃，Liebermann-Burchard反应及Molish反应阳性，MALDI-TOF MS m/z:1 071 [M+Na]+, 1 087 [M+K]+， IRνKBrmaxcm-1：3 423 (OH)， 1 649 (C=C)， 1 456 (环 C-H)， 1 374 (δCH3)，1 078 (νC-O)和898 (β-D 糖苷键)。13CNMR数据据见附表1。■
参考文献
1，彭军鹏.中草药，1992，23(8)：437
2，Bahuguna S, et al. Phytochemistry, 1990, 29(1):2741
3，Gong W, et al. Phytochemistry, 1996, 42(6):1677
4，Yushihiro Mimaki, et al. Chem Pharm Bull, 1995, 43(7):1190
(1999-01-22 收稿), 百拇医药
参见：首页 > 中医药 > 中药专业 > 中草药汇编 > 中药大典 > 果实类 > 疾藜(蒺藜)