精子表面纤维连接蛋白定位与男性不育的关系探讨
作者：林江 费霞 江云伟
单位：林江(镇江市第一人民医院内科实验室 212007)；费霞(镇江市第一人民医院内科实验室 212007)；江云伟(镇江市第一人民医院内科实验室 212007)
关键词：精子；Fn；男性不育
黑龙江医药科学000209 提要 我们用酶标法对34例生育男性，28例妻流产男性，84例不育男性精子表面Fn作了定位研究，精子表面Fn+(%)定位结果：生能男性为75.9±9.9，妻流产男性为64.8±16.4，不育男性为66.2±12.7。妻流产组、不育组与生育组比较有显著性差异(P<0.01)。同时我们结合精子爬高试验，精子低渗膨胀试验将h>50mm与h<50mm的精子表面Fn+(%)以及总膨胀率>65%与<65%的精子表面Fn+(%)作了比较，结果均有显著性差异(P<0.01)。本实验结果表明，精子表面Fn与精子授精能力有着密切关系。
, 百拇医药
纤维连接蛋白(fibronectin Fn)是一种广泛存在于脊椎动物的血、结缔组织及多种细胞表面的分子量约为44万的a2糖蛋白。体内有两种存在形式，即血浆中可溶性的Fn(PFn)和细胞表面不溶性的Fn(C Fn)[1]。精子表面Fn是早在精子发生时期就存在的一种表面抗原[2]。细胞表面Fn在细胞的形成，成熟，分质以及细胞与细胞，细胞与基底物质的吸附方面发挥着重要作用。业已证明，精子表面的Fn与精子授精能力有密切关系[3]。我们用酶免疫法对生育，妻流产及不育男性精子表面的Fn作了定位研究，并与精子爬高试验和精子膨胀试验作了比较。
1 对象和方法
1.1 检测对象
生育组为妻已妊娠的健康男性34例，中位年龄27.9岁；妻流产男性28例，中位年龄30.7岁；不育组为结婚>2年，妻未孕的男性84例，中位年龄32.1岁，均于禁欲3～5d后手淫法采集精液。
, 百拇医药
1.2 辣根过氧化物酶标记的抗人Fn抗体(HRP-A Fn)：抗人Fn血清购自上海生物制品研究所，HRP结合物本科自制。
1.3 低渗膨胀液
果糖13.51g，枸橼酸钠7.35g，充分溶解后补足蒸馏水至1000ml。
1.4 精子表面Fn定位
将新鲜液质精液用0.01mol/L，pH7.4 PBS洗3次，配成10～30条/Hp精子悬液，与适宜浓度的HRP-AFn等体积混匀，37℃温育30min，PBS洗3次，均匀涂片，晾干；滴加底物(DAB-H2O2)溶液，37℃温育15min，流水冲洗，PBS浸洗3次，每次5min，晾干后油镜检查200条精子中有Fn定位的精子(Fn+)，计算Fn+精子百分率。
1.5 精子爬高试验
, http://www.100md.com
加新鲜液质精液0.3ml于精液池中，用直径1.0mm，长100.0mm的毛细玻管吸满鸡蛋清，其中一头用橡皮泥封口，另一头垂直插入精液池内，37℃温育1h，在倒置显微镜下观察精子在毛细管中的爬高高度。
1.6 低渗膨胀试验
取液质精液0.1ml加至0.9ml，37℃预温的膨胀液中温育30min后，滴一滴伊红Y(20g/L)，2min后，用计数板计数200条精子中尾部膨胀的精子数，算出精子总膨胀率。
2 结果与讨论
2.1 精子表面Fn定位
Fn分布于精子的颈部和赤道部，阳性时呈深褐色。不育男性精子Fn定位百分率明显低于生育男性(表1)。
表1 生育、妻流产、不育男性精子表面Fn定位
, http://www.100md.com
组别
例数
Fn+精子(%)
±s
生育
34
75.9±9.9
妻流产
28
64.8±16.4*
不育
84
66.2±12.7
, http://www.100md.com
*与生育组比P<0.01
2.2 精子爬高试验
按WHO分级法，将精子的爬高高度h(mm)分为0，0～19，20～50，>50几个等级。精子爬高试验结果和精子表面Fn定位关系见表2，表明h>50mm的精子Fn+定位百分率明显高于h<50mm的精子。同时我们以34例生育男性精子表面Fn+(%)<56%为降低，h>50mm与h<50mm的精子Fn+(%)有显著差异。
表2 精子爬高试验与精子表面Fn定位
爬高高度h(mm)
例数
Fn+精子(%)±s
, 百拇医药
下降例数(%)
0～19
1
18.5
20～50
15
60.1±15.4
10.0(67)
>50
37
72.1±8.8*
8.0(67)
*爬高h>50mm与h<50mm的精子比较P<0.01
, 百拇医药
2.3 精子总的膨胀百分率
将总膨胀率>65%及<65%的精子表面Fn+定位百分率结果见表3，两组间有显著差异(P<0.01)。
表3 精子的低渗膨胀试验与精子表面Fn定位
总膨胀率(%)
例数
Fn+精子(%)±s
下降例数
<65
48
59.1±13.9
, http://www.100md.com
35(73)
>65
60
69.8±13.0
22(37)
2.4 文献报道，精子表面Fn与精子授精能力有密切关系，在用抗Fn抗体封闭Fn后，精子对仓鼠卵的穿透率显著降低[3]。我们的结果表明，生育，妻流产，不育男性精子表面Fn定位有显著差异，且Fn定位与精子爬高试验[4]，低渗膨胀试验[5]，均呈正相关。后两项试验是近年来检测精子授精能力的专用筛选方法，可以认为，精子表面Fn的不足，可能会影响精子的授精能力，并可能导致男性不育。至于精子表面Fn的不足所以会与妻子发生流产相关，尚难以解释，有待进一步研究。
, 百拇医药 参考文献
1.武建国主编.实用临床免疫学检验.江苏科技出版社,第1版,1989;145
2.黄平治主编.男性不育.北京科技出版社,第1版,1990
3.佐佐木宏子.日本产科妇人科学会杂志,1991;43(SUP):151
4.黄宇烽主编.男性病实验室诊断.第1版,东南大学出版社,1989;43
5.吉野和男.日本不妊学会杂志,1989;34(1):101
(1999-05-13收稿), 百拇医药
单位：林江(镇江市第一人民医院内科实验室 212007)；费霞(镇江市第一人民医院内科实验室 212007)；江云伟(镇江市第一人民医院内科实验室 212007)
关键词：精子；Fn；男性不育
黑龙江医药科学000209 提要 我们用酶标法对34例生育男性，28例妻流产男性，84例不育男性精子表面Fn作了定位研究，精子表面Fn+(%)定位结果：生能男性为75.9±9.9，妻流产男性为64.8±16.4，不育男性为66.2±12.7。妻流产组、不育组与生育组比较有显著性差异(P<0.01)。同时我们结合精子爬高试验，精子低渗膨胀试验将h>50mm与h<50mm的精子表面Fn+(%)以及总膨胀率>65%与<65%的精子表面Fn+(%)作了比较，结果均有显著性差异(P<0.01)。本实验结果表明，精子表面Fn与精子授精能力有着密切关系。
, 百拇医药
纤维连接蛋白(fibronectin Fn)是一种广泛存在于脊椎动物的血、结缔组织及多种细胞表面的分子量约为44万的a2糖蛋白。体内有两种存在形式，即血浆中可溶性的Fn(PFn)和细胞表面不溶性的Fn(C Fn)[1]。精子表面Fn是早在精子发生时期就存在的一种表面抗原[2]。细胞表面Fn在细胞的形成，成熟，分质以及细胞与细胞，细胞与基底物质的吸附方面发挥着重要作用。业已证明，精子表面的Fn与精子授精能力有密切关系[3]。我们用酶免疫法对生育，妻流产及不育男性精子表面的Fn作了定位研究，并与精子爬高试验和精子膨胀试验作了比较。
1 对象和方法
1.1 检测对象
生育组为妻已妊娠的健康男性34例，中位年龄27.9岁；妻流产男性28例，中位年龄30.7岁；不育组为结婚>2年，妻未孕的男性84例，中位年龄32.1岁，均于禁欲3～5d后手淫法采集精液。
, 百拇医药
1.2 辣根过氧化物酶标记的抗人Fn抗体(HRP-A Fn)：抗人Fn血清购自上海生物制品研究所，HRP结合物本科自制。
1.3 低渗膨胀液
果糖13.51g，枸橼酸钠7.35g，充分溶解后补足蒸馏水至1000ml。
1.4 精子表面Fn定位
将新鲜液质精液用0.01mol/L，pH7.4 PBS洗3次，配成10～30条/Hp精子悬液，与适宜浓度的HRP-AFn等体积混匀，37℃温育30min，PBS洗3次，均匀涂片，晾干；滴加底物(DAB-H2O2)溶液，37℃温育15min，流水冲洗，PBS浸洗3次，每次5min，晾干后油镜检查200条精子中有Fn定位的精子(Fn+)，计算Fn+精子百分率。
1.5 精子爬高试验
, http://www.100md.com
加新鲜液质精液0.3ml于精液池中，用直径1.0mm，长100.0mm的毛细玻管吸满鸡蛋清，其中一头用橡皮泥封口，另一头垂直插入精液池内，37℃温育1h，在倒置显微镜下观察精子在毛细管中的爬高高度。
1.6 低渗膨胀试验
取液质精液0.1ml加至0.9ml，37℃预温的膨胀液中温育30min后，滴一滴伊红Y(20g/L)，2min后，用计数板计数200条精子中尾部膨胀的精子数，算出精子总膨胀率。
2 结果与讨论
2.1 精子表面Fn定位
Fn分布于精子的颈部和赤道部，阳性时呈深褐色。不育男性精子Fn定位百分率明显低于生育男性(表1)。
表1 生育、妻流产、不育男性精子表面Fn定位
, http://www.100md.com
组别
例数
Fn+精子(%)
±s生育
34
75.9±9.9
妻流产
28
64.8±16.4*
不育
84
66.2±12.7
, http://www.100md.com
*与生育组比P<0.01
2.2 精子爬高试验
按WHO分级法，将精子的爬高高度h(mm)分为0，0～19，20～50，>50几个等级。精子爬高试验结果和精子表面Fn定位关系见表2，表明h>50mm的精子Fn+定位百分率明显高于h<50mm的精子。同时我们以34例生育男性精子表面Fn+(%)<56%为降低，h>50mm与h<50mm的精子Fn+(%)有显著差异。
表2 精子爬高试验与精子表面Fn定位
爬高高度h(mm)
例数
Fn+精子(%)
±s, 百拇医药
下降例数(%)
0～19
1
18.5
20～50
15
60.1±15.4
10.0(67)
>50
37
72.1±8.8*
8.0(67)
*爬高h>50mm与h<50mm的精子比较P<0.01
, 百拇医药
2.3 精子总的膨胀百分率
将总膨胀率>65%及<65%的精子表面Fn+定位百分率结果见表3，两组间有显著差异(P<0.01)。
表3 精子的低渗膨胀试验与精子表面Fn定位
总膨胀率(%)
例数
Fn+精子(%)
±s下降例数
<65
48
59.1±13.9
, http://www.100md.com
35(73)
>65
60
69.8±13.0
22(37)
2.4 文献报道，精子表面Fn与精子授精能力有密切关系，在用抗Fn抗体封闭Fn后，精子对仓鼠卵的穿透率显著降低[3]。我们的结果表明，生育，妻流产，不育男性精子表面Fn定位有显著差异，且Fn定位与精子爬高试验[4]，低渗膨胀试验[5]，均呈正相关。后两项试验是近年来检测精子授精能力的专用筛选方法，可以认为，精子表面Fn的不足，可能会影响精子的授精能力，并可能导致男性不育。至于精子表面Fn的不足所以会与妻子发生流产相关，尚难以解释，有待进一步研究。
, 百拇医药 参考文献
1.武建国主编.实用临床免疫学检验.江苏科技出版社,第1版,1989;145
2.黄平治主编.男性不育.北京科技出版社,第1版,1990
3.佐佐木宏子.日本产科妇人科学会杂志,1991;43(SUP):151
4.黄宇烽主编.男性病实验室诊断.第1版,东南大学出版社,1989;43
5.吉野和男.日本不妊学会杂志,1989;34(1):101
(1999-05-13收稿), 百拇医药