HPLC-ELSD分析测定贝母类药材中生物碱成分
作者：朱丹妮 谭丰萍 高山林
单位：朱丹妮 谭丰萍 高山林(中国药科大学 南京 210038)
关键词：贝母；贝母甲素；高效液相-蒸发光散射
药物分析杂志000205 摘要 目的：利用高效液相色谱法测定贝母类药材中生物碱成分。方法：采用Silica 5 μm (4.6 mm×250 mm) 色谱柱，流动相：A.环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(6∶4∶1), B.环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(6∶4∶0.12),流速1.0 mL.min-1,以ELSD-500为检测器,外标法定量。结果：贝母甲素在 0.75～3.00 μg范围内呈线性，回收率为 97.21% (n=5)，RSD为1.58%。结论：5种不同贝母药材的HPLC图谱有明显差异,本法为良好的测定贝母甲素的方法,可用于贝母药材的质量监控。
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Determination of Alkaloids in Fritillaria spp.by HPLC-ELSD Method
Zhu Danni, Tan Fengping and Gao Shanlin
(China Pharmaceutical University, Nanjing 210038)
Abstract Objective：To determine the content of alkaloid compound in Fritillaria by using a new HPLC-ELSD methods.Method:Alltech Silica column (5 μm,4.6 mm× 250 mm) was used, mobile phase A consisted of cyclohexane-acetic ester-ethylamine(6∶4∶1), mobile phase B consisted of cyclohexane-acetic ester-ethylamine(6∶4∶0.12), at 1 mL.min-1 flow rate. ELSD-500 detector was used for qualitative and quantitative analysis by external standard method.Results:Within 0.75～3.00 μg peimine had a good linearity. The average recovery was 97.21%(n=5) with RSD 1.58%.Conclusion:There are significant differences in HPLC trace among five species of Fritillaria, the method is sensitive and reproducible and it could be used for quantitative determination of Fritillaria drug.
, 百拇医药
Key words Fritillaria, peimine, HPLC-ELSD
贝母为百合科(Liliaceae)贝母属Fritillaria多种植物的鳞茎,在我国有悠久的使用历史,贝母清热化痰,润肺止咳,贝母生物碱为贝母的有效成分,对贝母中生物碱的含量测定有薄层扫描法[1]、反相离子对高效液相色谱法[2]、柱前衍生化HPLC法[3]、气相色谱法[4]；采用HPLC-ELSD法测定贝母中贝母甲素含量，国内外未见报道。本文运用HPLC-ELSD法分析几种商品贝母中生物碱，建立了贝母甲素的含量测定方法；实验结果表明,几种贝母药材HPLC-ELSD图谱有明显差异,平贝母、浙贝母中含贝母甲素、贝母乙素,但平贝母中贝母甲、乙素的含量明显较浙贝母低,伊贝母、梭砂贝母含西贝素,但2者含量差异较大,暗紫贝母不含贝母甲素、贝母乙素,也不含西贝素,但有其独自的特征峰。
1 仪器、试剂与样品材料
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Shimadzu-10A高效液相色谱仪； Shimadzu C-R6A数据处理机，Alltech ELSD-500型蒸发光散射检测器。
环己烷、乙酸乙酯、二乙胺(分析纯)经重蒸馏处理，其他试剂均为分析纯。
贝母甲素、贝母乙素、西贝素对照品购自中国药品生物制品检定所。
暗紫贝母(Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia)购自四川阿坝州红原县，浙贝母(Fritillaria thunbergii Miq.)购自江苏省南京市药材公司。梭砂贝母(Fritillaria delavayi Franch)、伊贝母(Fritillaria pallidiflora Schrank)、平贝母(Fritillaria ussuriensis Maxim)购自安徽亳州药材公司，以上贝母药材均经本校生药教研室鉴定，符合1995年版中国药典规定。
, 百拇医药
2 色谱分析条件
色谱柱:Alltech Silica 5 μm柱(4.6 mm×250 mm)；流动相：A.环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(6∶4∶1)，B.环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(6∶4∶0.12)，流速:1.0mL.min-1，进样量:20 μL；ELSD参数:漂移管温度90 ℃,氮气流速1.87 L.min-1。
3 样品提取条件试验
样品提取条件的优选按正交试验进行,选择溶剂种类、溶剂用量、浸提时间、氨水用量4个因素为考察内容, 每个因素安排3个水平,以贝母甲素的量为筛选标准，正交试验表头设计如下：
表1 提取条件优选因素水平表因子水平表 因素水平
, 百拇医药 溶剂种类
溶剂用量/mL
浸提时间/h
氨水用量/mL
1
乙醚
30(5 × W)
16
1.2(0.2×W)
2
氯仿
45(7.5×W)
24
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1.8(0.3×W)
3
混合溶剂
60(10×W)
32
2.4(0.4×W)
注：混合溶剂为乙醚-氯仿-95%乙醇(25∶8∶2.5);W:样品量(g)
根据表1,选用L9(34)正交表按各试验号进行试验, 每次取同一批浙贝母药材,粉碎过40目筛，干燥至恒重，精密称取约6 g，精密加入氨水适量使润湿，精密加入溶剂适量，密塞,放置一定时间(h)后过滤，精密量取续滤液(1/2溶剂加入量)，挥干溶剂，残渣加氯仿定容至5 mL，以0.45 μm的微孔滤膜过滤后备用。以HPLC-ELSD法(用流动相A)测定不同提取条件下样品中贝母甲素的含量，结果见表2。
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表2 不同提取条件的正交实验结果 试验号
溶剂
溶剂用量/mL
浸提时间/h
氨水用量/mL
贝母甲素含量/μg.g-1
1
乙醚
30
16
1.2
73.67
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2
乙醚
45
24
1.8
133.93
3
乙醚
60
32
2.4
207.18
4
, http://www.100md.com 氯仿
30
24
2.4
227.42
5
氯仿
45
32
1.2
108.05
6
氯仿
60
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16
1.8
181.09
7
混合溶剂
30
32
1.8
213.93
8
混合溶剂
45
16
, 百拇医药
2.4
236.09
9
混合溶剂
60
24
1.2
80.83
K1
414.78
515.02
490.84
262.54
, 百拇医药
G=1462.18
K2
516.55
478.07
442.17
528.95
CT=237550.64
K3
530.85
469.10
529.16
670.69
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Q
240221.35
237945.23
2388179.28
2661798.20
S
2670.71
394.91
1267.22
28628.64
由上述正交试验和方差结果分析可知,9种提取条件所测得的样品中贝母甲素含量差异很大,最低73.67 μg.g-1,最高236.09 μg.g-1,说明不同提取条件对贝母甲素提取的影响是明显的。其中以混合溶剂、溶剂用量30 mL、浸提时间32 h、氨水用量2.4 mL最优。加入的氨水量为有显著意义的因素,其次为溶剂种类、浸提时间，溶剂用量影响较小。综合以上分析结果, 因混合溶剂提取杂质较多；氯仿与混合溶剂提取的贝母甲素的含量无明显差异，且浸提时间、溶剂用量对提取贝母甲素的影响很小，选用最低水平可以节省溶剂和时间。本文设计最佳提取方法为加入氨水2.4 mL使湿润,加入氯仿30 mL,密塞,放置16 h后,将溶液过滤,精密量取续滤液15 mL,挥干溶剂,残渣加氯仿定容至5 mL,以0.45 μm的微孔滤膜过滤,备用。
, 百拇医药
4 线性关系的考察
精密称取贝母甲素对照品适量，加氯仿制成0.75 mg.mL-1的溶液，作为对照品贮备液。吸取贮备液250 μL至1 mL的容量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，取上述溶液4,8,10,12,16 μL依次进样，按上述色谱条件测定, 以对照品峰面积的自然对数值为纵坐标，以进样量(μg)的自然对数值为横坐标进行线性回归，贝母甲素的进样量在0.75～3.00 μg范围内与峰面积值呈线性关系，回归方程为:
Y=12.587 9+1.251 6X r=0.999 9
对照品的色谱图见图1-A。
图1 色谱图(流动相A)
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A.贝母甲素 B.浙贝母
1.贝母甲素(17.74 min)
5 回收率的测定
准确称取已测知贝母甲素含量为0.268 mg.g-1的浙贝干粉3 g,加入1 mg.mL-1贝母甲素对照品贮备液1 mL,按“浙贝母药材测定”项下方法提取，测定计算回收率，结果平均回收率为97.21%, RSD为1.58%，n=5。
6 精密度试验
取对照品溶液，重复进样5次，每次20 μL, 贝母甲素的峰面积积分值的RSD为1.01%。
7 重现性试验
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精密称取同批浙贝母药材粉约6 g,共取5份，按“3”项下方法提取，测定，结果该批浙贝母中贝母甲素的含量为0.027%，RSD为1.63%。实验表明，本法有较好的重现性。
8 浙贝母药材的测定
按“3”项下所选方法提取，测定，色谱图见图1-B。根据峰面积和随行对照品标准曲线计算样品中贝母甲素含量。3批浙贝母药材的分析结果(n＝3)分别为0.027%, 0.026%, 0.028%。
9 5种商品贝母中生物碱成分的HPLC分析
取平贝母、伊贝母、梭砂贝母、暗紫贝母、浙贝母几种药材,按“3”项下所选方法提取制成供试品溶液，各溶液以流动相A进行分析，结果见图2-A;各溶液以流动相B进行分析,结果见图2-B。
定性结果分析表明：不同贝母药材HPLC-ELSD图谱有明显的差别，其中只有平贝母、浙贝母含贝母甲、乙素，但平贝母中贝母甲、乙素含量明显较浙贝母中低；只有伊贝母、梭砂贝母含西贝素，但2者含量差异较大；暗紫贝母不含有贝母甲、乙素和西贝素，图2-B显示暗紫贝母有其自身的特征峰；伊贝母、梭砂贝母、暗紫贝母均有一特征峰(出峰时间11.2 min)，但含量差异较大。
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图2 5种贝母药材HPLC-ELSD色谱图
A. 流动相A B.流动相B
1.贝母甲素(17.74 min) 2. 贝母乙素(12.66 min) 3. 西贝素(13.32 min) 4. 未知成分(11.74 min)
10 讨论
10.1 正交试验结果表明：氨水用量显著影响贝母甲素提取效果，用量为2.4 mL(0.4倍样品量)最佳；这是因为提取药材中生物碱时，氨水用量直接影响药材中生物碱成分的游离，用量不足不利于生物碱成分的游离，用量超过0.4倍样品量，样品成团也不利于提取。用本文设计的提取条件,待测样品中的生物碱可提取完全。
10.2 目前贝母中单体生物碱含量测定的方法有不少报道，多采用薄层扫描法,也有用高效液相色谱法者，但或是需要衍生化，或是采用末端吸收检测，存在前处理步骤多，排除干扰较困难等不足之处，本文采用的HPLC-ELSD法对浙贝母中贝母甲素进行含量测定, 分离度好,样品制备简便，重现性佳，是一种良好的贝母甲素的测定方法，可用于贝母药材的质量监控。
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10.3 5种商品贝母中生物碱成分的HPLC-ELSD图谱显示：生物碱成分在平贝母、浙贝母中与伊贝母、梭砂贝母、暗紫贝母中的存在状态有一定规律可寻，前者药材中不含西贝素，后者药材中不含贝母甲、乙素。这一结果与余世春通过对贝母属植物化学与系统学的研究发现[5～7], 已分离并确定结构的贝母生物碱有100余种，其中的异甾体生物碱占75%，贝母属植物中较富含的异甾体生物碱中5α-cevanine类是其特征性成分；并认为该特征性成分在中国分布区内该属植物类群中的存在状态有一定规律可寻，在高海拔地区如四川、甘肃等本属植物种(川贝母、梭砂贝母、伊贝母等)中未检出C13、C17双氢反式构型的5α-cevanine异甾类生物碱，只存在西贝素、川贝酮等C13、C17双氢顺式构型者；而低海拔地区如浙江、安徽、湖北等本属植物种(浙贝母、安徽贝母、鄂北贝母、平贝母等)均存在C13、C17双氢反式构型的5α-cevanine者如贝母甲素、贝母乙素，但未检出C13、C17双氢顺式构型类成分的报道一致。说明如对HPLC-ELSD定性分析方法加以系统研究和完善，可以成为一种新的贝母类药材定性鉴别及品质评价的方法。
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10.4 本文测定贝母甲素和贝母乙素,选用了2种不同的流动相,实验表明二乙胺的比例对贝母甲素和贝母乙素的出峰时间有很大影响,流动相B中二乙胺的比例较小,贝母乙素的出峰时间为12.66 min,而贝母甲素的出峰时间在30 min以后,且峰形变宽；调整二乙胺的比例,当二乙胺的比例增大到1时,贝母甲素的出峰时间提前到17.74 min,而贝母乙素的出峰时间大大提前,与贝母中其它成分混在一起，因缺少梯度洗脱的条件，本实验只能选用2种不同的流动相分别分析贝母甲、乙素。
参考文献
1，李萍,刘理南,徐国钧. 12种贝母的西贝素含量测定. 中草药,1991, 22(5):205
2，晁若冰,胡玲. 高效液相色谱法测定贝母中贝母辛的含量. 药学学报,1993, 28(9):705
3，李文彦,毕开顺,乔延江等. 柱前衍生化高效液相色谱法测定伊贝母中西贝素含量.中国药学杂志, 1997, 32(6):363
4，覃宁,杨昌全.伊犁素的裂解气相色谱测定. 药物分析杂志,1989,9(2):107
5，余世春,肖培根.中国贝母属植物种质资源及其利用. 中药材,1991,14(1):18
6，余世春,肖培根.中药贝母的药用历史及发展方向. 中国中药杂志,1990,15(8):454
7，余世春,肖培根.贝母属植物异甾体生物碱的存在及其分类学意义. 植物分类学报,1992,30(5):450
(本文于1999年7月8日收到), http://www.100md.com
单位：朱丹妮 谭丰萍 高山林(中国药科大学 南京 210038)
关键词：贝母；贝母甲素；高效液相-蒸发光散射
药物分析杂志000205 摘要 目的：利用高效液相色谱法测定贝母类药材中生物碱成分。方法：采用Silica 5 μm (4.6 mm×250 mm) 色谱柱，流动相：A.环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(6∶4∶1), B.环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(6∶4∶0.12),流速1.0 mL.min-1,以ELSD-500为检测器,外标法定量。结果：贝母甲素在 0.75～3.00 μg范围内呈线性，回收率为 97.21% (n=5)，RSD为1.58%。结论：5种不同贝母药材的HPLC图谱有明显差异,本法为良好的测定贝母甲素的方法,可用于贝母药材的质量监控。
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Determination of Alkaloids in Fritillaria spp.by HPLC-ELSD Method
Zhu Danni, Tan Fengping and Gao Shanlin
(China Pharmaceutical University, Nanjing 210038)
Abstract Objective：To determine the content of alkaloid compound in Fritillaria by using a new HPLC-ELSD methods.Method:Alltech Silica column (5 μm,4.6 mm× 250 mm) was used, mobile phase A consisted of cyclohexane-acetic ester-ethylamine(6∶4∶1), mobile phase B consisted of cyclohexane-acetic ester-ethylamine(6∶4∶0.12), at 1 mL.min-1 flow rate. ELSD-500 detector was used for qualitative and quantitative analysis by external standard method.Results:Within 0.75～3.00 μg peimine had a good linearity. The average recovery was 97.21%(n=5) with RSD 1.58%.Conclusion:There are significant differences in HPLC trace among five species of Fritillaria, the method is sensitive and reproducible and it could be used for quantitative determination of Fritillaria drug.
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Key words Fritillaria, peimine, HPLC-ELSD
贝母为百合科(Liliaceae)贝母属Fritillaria多种植物的鳞茎,在我国有悠久的使用历史,贝母清热化痰,润肺止咳,贝母生物碱为贝母的有效成分,对贝母中生物碱的含量测定有薄层扫描法[1]、反相离子对高效液相色谱法[2]、柱前衍生化HPLC法[3]、气相色谱法[4]；采用HPLC-ELSD法测定贝母中贝母甲素含量，国内外未见报道。本文运用HPLC-ELSD法分析几种商品贝母中生物碱，建立了贝母甲素的含量测定方法；实验结果表明,几种贝母药材HPLC-ELSD图谱有明显差异,平贝母、浙贝母中含贝母甲素、贝母乙素,但平贝母中贝母甲、乙素的含量明显较浙贝母低,伊贝母、梭砂贝母含西贝素,但2者含量差异较大,暗紫贝母不含贝母甲素、贝母乙素,也不含西贝素,但有其独自的特征峰。
1 仪器、试剂与样品材料
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Shimadzu-10A高效液相色谱仪； Shimadzu C-R6A数据处理机，Alltech ELSD-500型蒸发光散射检测器。
环己烷、乙酸乙酯、二乙胺(分析纯)经重蒸馏处理，其他试剂均为分析纯。
贝母甲素、贝母乙素、西贝素对照品购自中国药品生物制品检定所。
暗紫贝母(Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia)购自四川阿坝州红原县，浙贝母(Fritillaria thunbergii Miq.)购自江苏省南京市药材公司。梭砂贝母(Fritillaria delavayi Franch)、伊贝母(Fritillaria pallidiflora Schrank)、平贝母(Fritillaria ussuriensis Maxim)购自安徽亳州药材公司，以上贝母药材均经本校生药教研室鉴定，符合1995年版中国药典规定。
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2 色谱分析条件
色谱柱:Alltech Silica 5 μm柱(4.6 mm×250 mm)；流动相：A.环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(6∶4∶1)，B.环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(6∶4∶0.12)，流速:1.0mL.min-1，进样量:20 μL；ELSD参数:漂移管温度90 ℃,氮气流速1.87 L.min-1。
3 样品提取条件试验
样品提取条件的优选按正交试验进行,选择溶剂种类、溶剂用量、浸提时间、氨水用量4个因素为考察内容, 每个因素安排3个水平,以贝母甲素的量为筛选标准，正交试验表头设计如下：
表1 提取条件优选因素水平表因子水平表 因素水平
, 百拇医药 溶剂种类
溶剂用量/mL
浸提时间/h
氨水用量/mL
1
乙醚
30(5 × W)
16
1.2(0.2×W)
2
氯仿
45(7.5×W)
24
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1.8(0.3×W)
3
混合溶剂
60(10×W)
32
2.4(0.4×W)
注：混合溶剂为乙醚-氯仿-95%乙醇(25∶8∶2.5);W:样品量(g)
根据表1,选用L9(34)正交表按各试验号进行试验, 每次取同一批浙贝母药材,粉碎过40目筛，干燥至恒重，精密称取约6 g，精密加入氨水适量使润湿，精密加入溶剂适量，密塞,放置一定时间(h)后过滤，精密量取续滤液(1/2溶剂加入量)，挥干溶剂，残渣加氯仿定容至5 mL，以0.45 μm的微孔滤膜过滤后备用。以HPLC-ELSD法(用流动相A)测定不同提取条件下样品中贝母甲素的含量，结果见表2。
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表2 不同提取条件的正交实验结果 试验号
溶剂
溶剂用量/mL
浸提时间/h
氨水用量/mL
贝母甲素含量/μg.g-1
1
乙醚
30
16
1.2
73.67
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2
乙醚
45
24
1.8
133.93
3
乙醚
60
32
2.4
207.18
4
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30
24
2.4
227.42
5
氯仿
45
32
1.2
108.05
6
氯仿
60
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16
1.8
181.09
7
混合溶剂
30
32
1.8
213.93
8
混合溶剂
45
16
, 百拇医药
2.4
236.09
9
混合溶剂
60
24
1.2
80.83
K1
414.78
515.02
490.84
262.54
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G=1462.18
K2
516.55
478.07
442.17
528.95
CT=237550.64
K3
530.85
469.10
529.16
670.69
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Q
240221.35
237945.23
2388179.28
2661798.20
S
2670.71
394.91
1267.22
28628.64
由上述正交试验和方差结果分析可知,9种提取条件所测得的样品中贝母甲素含量差异很大,最低73.67 μg.g-1,最高236.09 μg.g-1,说明不同提取条件对贝母甲素提取的影响是明显的。其中以混合溶剂、溶剂用量30 mL、浸提时间32 h、氨水用量2.4 mL最优。加入的氨水量为有显著意义的因素,其次为溶剂种类、浸提时间，溶剂用量影响较小。综合以上分析结果, 因混合溶剂提取杂质较多；氯仿与混合溶剂提取的贝母甲素的含量无明显差异，且浸提时间、溶剂用量对提取贝母甲素的影响很小，选用最低水平可以节省溶剂和时间。本文设计最佳提取方法为加入氨水2.4 mL使湿润,加入氯仿30 mL,密塞,放置16 h后,将溶液过滤,精密量取续滤液15 mL,挥干溶剂,残渣加氯仿定容至5 mL,以0.45 μm的微孔滤膜过滤,备用。
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4 线性关系的考察
精密称取贝母甲素对照品适量，加氯仿制成0.75 mg.mL-1的溶液，作为对照品贮备液。吸取贮备液250 μL至1 mL的容量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，取上述溶液4,8,10,12,16 μL依次进样，按上述色谱条件测定, 以对照品峰面积的自然对数值为纵坐标，以进样量(μg)的自然对数值为横坐标进行线性回归，贝母甲素的进样量在0.75～3.00 μg范围内与峰面积值呈线性关系，回归方程为:
Y=12.587 9+1.251 6X r=0.999 9
对照品的色谱图见图1-A。
图1 色谱图(流动相A)
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A.贝母甲素 B.浙贝母
1.贝母甲素(17.74 min)
5 回收率的测定
准确称取已测知贝母甲素含量为0.268 mg.g-1的浙贝干粉3 g,加入1 mg.mL-1贝母甲素对照品贮备液1 mL,按“浙贝母药材测定”项下方法提取，测定计算回收率，结果平均回收率为97.21%, RSD为1.58%，n=5。
6 精密度试验
取对照品溶液，重复进样5次，每次20 μL, 贝母甲素的峰面积积分值的RSD为1.01%。
7 重现性试验
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精密称取同批浙贝母药材粉约6 g,共取5份，按“3”项下方法提取，测定，结果该批浙贝母中贝母甲素的含量为0.027%，RSD为1.63%。实验表明，本法有较好的重现性。
8 浙贝母药材的测定
按“3”项下所选方法提取，测定，色谱图见图1-B。根据峰面积和随行对照品标准曲线计算样品中贝母甲素含量。3批浙贝母药材的分析结果(n＝3)分别为0.027%, 0.026%, 0.028%。
9 5种商品贝母中生物碱成分的HPLC分析
取平贝母、伊贝母、梭砂贝母、暗紫贝母、浙贝母几种药材,按“3”项下所选方法提取制成供试品溶液，各溶液以流动相A进行分析，结果见图2-A;各溶液以流动相B进行分析,结果见图2-B。
定性结果分析表明：不同贝母药材HPLC-ELSD图谱有明显的差别，其中只有平贝母、浙贝母含贝母甲、乙素，但平贝母中贝母甲、乙素含量明显较浙贝母中低；只有伊贝母、梭砂贝母含西贝素，但2者含量差异较大；暗紫贝母不含有贝母甲、乙素和西贝素，图2-B显示暗紫贝母有其自身的特征峰；伊贝母、梭砂贝母、暗紫贝母均有一特征峰(出峰时间11.2 min)，但含量差异较大。
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图2 5种贝母药材HPLC-ELSD色谱图
A. 流动相A B.流动相B
1.贝母甲素(17.74 min) 2. 贝母乙素(12.66 min) 3. 西贝素(13.32 min) 4. 未知成分(11.74 min)
10 讨论
10.1 正交试验结果表明：氨水用量显著影响贝母甲素提取效果，用量为2.4 mL(0.4倍样品量)最佳；这是因为提取药材中生物碱时，氨水用量直接影响药材中生物碱成分的游离，用量不足不利于生物碱成分的游离，用量超过0.4倍样品量，样品成团也不利于提取。用本文设计的提取条件,待测样品中的生物碱可提取完全。
10.2 目前贝母中单体生物碱含量测定的方法有不少报道，多采用薄层扫描法,也有用高效液相色谱法者，但或是需要衍生化，或是采用末端吸收检测，存在前处理步骤多，排除干扰较困难等不足之处，本文采用的HPLC-ELSD法对浙贝母中贝母甲素进行含量测定, 分离度好,样品制备简便，重现性佳，是一种良好的贝母甲素的测定方法，可用于贝母药材的质量监控。
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10.3 5种商品贝母中生物碱成分的HPLC-ELSD图谱显示：生物碱成分在平贝母、浙贝母中与伊贝母、梭砂贝母、暗紫贝母中的存在状态有一定规律可寻，前者药材中不含西贝素，后者药材中不含贝母甲、乙素。这一结果与余世春通过对贝母属植物化学与系统学的研究发现[5～7], 已分离并确定结构的贝母生物碱有100余种，其中的异甾体生物碱占75%，贝母属植物中较富含的异甾体生物碱中5α-cevanine类是其特征性成分；并认为该特征性成分在中国分布区内该属植物类群中的存在状态有一定规律可寻，在高海拔地区如四川、甘肃等本属植物种(川贝母、梭砂贝母、伊贝母等)中未检出C13、C17双氢反式构型的5α-cevanine异甾类生物碱，只存在西贝素、川贝酮等C13、C17双氢顺式构型者；而低海拔地区如浙江、安徽、湖北等本属植物种(浙贝母、安徽贝母、鄂北贝母、平贝母等)均存在C13、C17双氢反式构型的5α-cevanine者如贝母甲素、贝母乙素，但未检出C13、C17双氢顺式构型类成分的报道一致。说明如对HPLC-ELSD定性分析方法加以系统研究和完善，可以成为一种新的贝母类药材定性鉴别及品质评价的方法。
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10.4 本文测定贝母甲素和贝母乙素,选用了2种不同的流动相,实验表明二乙胺的比例对贝母甲素和贝母乙素的出峰时间有很大影响,流动相B中二乙胺的比例较小,贝母乙素的出峰时间为12.66 min,而贝母甲素的出峰时间在30 min以后,且峰形变宽；调整二乙胺的比例,当二乙胺的比例增大到1时,贝母甲素的出峰时间提前到17.74 min,而贝母乙素的出峰时间大大提前,与贝母中其它成分混在一起，因缺少梯度洗脱的条件，本实验只能选用2种不同的流动相分别分析贝母甲、乙素。
参考文献
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3，李文彦,毕开顺,乔延江等. 柱前衍生化高效液相色谱法测定伊贝母中西贝素含量.中国药学杂志, 1997, 32(6):363
4，覃宁,杨昌全.伊犁素的裂解气相色谱测定. 药物分析杂志,1989,9(2):107
5，余世春,肖培根.中国贝母属植物种质资源及其利用. 中药材,1991,14(1):18
6，余世春,肖培根.中药贝母的药用历史及发展方向. 中国中药杂志,1990,15(8):454
7，余世春,肖培根.贝母属植物异甾体生物碱的存在及其分类学意义. 植物分类学报,1992,30(5):450
(本文于1999年7月8日收到), http://www.100md.com