艾纳香二氢黄酮对脂质过氧化损伤大鼠原代培养肝细胞的保护作用
作者：蒲含林 赵金华 许实波 胡群
单位：蒲含林 赵金华 许实波(中山大学生命科学学院药学系，广州 510275)；胡群(云南烟草公司工业研究所)
关键词：艾纳香二氢黄酮；损伤；大鼠肝细胞；保护
中草药000219摘 要 研究5种艾纳香二氢黄酮类化合物对过氧化损伤的原代培养肝细胞的保护作用。胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞。以CCl4或FeSO4+Cys损伤原代培养肝细胞，1×10-4和1×10-5 mol/L的5种艾纳香二氢黄酮均能明显抑制受损伤细胞的转氨酶逸出、MDA产生及GSH耗竭。其中以2，5-二羟基艾纳香二氢黄酮的作用最强，在CCl4所致肝细胞损伤实验中，其抑制MDA产生的ED50约为2.6×10-6 mol/L，保护GSH的ED50约为1.08×10-5 mol/L，抑制ALT逸出细胞的ED50约为9.39×10-6 mol/L。
, http://www.100md.com
Protective Actions of Blumea Flavanones on Primary Cultured
Hepatocytes against Lipid Peroxidation
Pu Hanlin, Zhao Jinhua and Xu Shibo Hu Qun
(Department of Pharmacy, College of Life Sciences, Sun Yat-sen University Guangzhou 510275)
(Research Institute of Industry, Yunnan Tobacco Co.)
Abstract To search for the protective actions of blumea flavanones (BFs) on hepatocytes against lipid peroxidation, rats' hepatocytes were isolated and cultured with or without blumea flavanones, then demaged by FeSO4 +cysteine or CCl4. The lipid peroxidation criteria (malondialdehyde production and GSH depletion) and alteration in hepatocyte membrane (leakage of GPT and GOT) were estimated. It was found that BFs at 10 and 100 μmol/L inhibited the MDA generation, GSH depletion and GPT leakage of hepatocytes induced by CCl4 or FeSO4+cysteine. Among BFs, BF-Ⅱ possessed the strongest activity.
, 百拇医药
Key words blumea flavanones intoxicate rat hepatocytes protective action▲
产于中国海南的菊科植物艾纳香Blumea blasminfera DC，中医主要用作芳香开窍药，具镇痛、发汗、驱风、祛痰等功效[1]，中山大学化学系从艾纳香中分离获得艾纳香素[2]，并发现该化合物具有一定的心血管活性和抗氧化、抗实验性肝损伤作用[3]。香港理工大学应用生物化学技术系对艾纳香素进行结构改造，获得4个同系物，本文称之为艾纳香二氢黄酮类化合物(blumeafla-vanoids, BFs)，现报道其肝细胞保护作用。
1 材料
三氯乙酸(TCA,Sigma Co.)；维生素E(Vit E，山东淄博化工厂)；胶原酶(Collagenase Ⅱ, Sigma Co.)；胰岛素(Insulin,上海第一生化药业公司)；牛血清白蛋白(BSA，北京红星生化试剂厂)；硫代巴比妥酸(TBA，Feinbiochem GmbH Co.)；1640培养基(Sigma Co.)；ALT、AST试剂盒(重庆东方试剂厂)；0.20 μm微孔滤膜(上海医药工业研究院)；艾纳香二氢黄酮(BF-Ⅰ～V光谱纯，结构见图1，香港理工大学应用生物化学技术系陈荣礼教授提供)。
, 百拇医药
图1 艾纳香二氢黄酮的化学结构
2 方法
2.1 肝细胞分离：采用胶原酶灌流法[4]分离大鼠肝细胞，所得肝细胞以台盼蓝法检测活性(约88%)，计数后以1640培养液(含1% BSA，10 μg/mL链霉素及1 mmol/L胰岛素)，37 ℃振荡培养。
2.2 CCl4致肝细胞损伤：将细胞以1×106细胞/mL的密度接种于培养试管中(1 mL/管)，加入CCl4 7.5 mmol/L(终浓度)[5]；给药组在加入CCl4前10 min加入不同浓度的BFs或VitE(浓度见表1)。加药后37 ℃振荡孵育3 h，1 000 r/min离心5 min，取上清液以赖氏法测转氨酶(ALT，AST)活性；细胞沉淀以4 ℃磷酸缓冲液(PBS，0.015 mol/L，pH 7.4，含2%磺基水杨酸)悬浮后，TBA显色法测丙二醛(MDA)生成量，DTNB法测还原型谷胱甘肽(GSH)含量[6]。
, 百拇医药
2.3 FeSO4-Cys致肝细胞损伤：孵育及检测方法同2.2，FeSO4-Cys致细胞损伤的浓度为FeSO4 50 μmol/L；Cys 200 μmol/L(均为终浓度)。检测时间为加入FeSO4-Cys后90 min。
3 结果
BFs对CCl4及FeSO4-Cys损伤的肝细胞有保护作用，结果见表1，2及图2。
表1 BFs对CCl4损伤的原代培养大鼠肝细胞的保护作用(n=8，
±s) 组别
剂量
, 百拇医药 (mol/L)
CCl4 7.5 mmol
MDA
GSH
ALT
AST
(nmol/106 cells)
(karman's U/mL medium)
损伤组
-
2.43±0.27
13.4±0.6
, 百拇医药
57.8±6.8
92.3±7.7
BF-Ⅰ
1×10-5
1.58±0.09*
18.3±0.8*
31.1±4.1*
53.0±7.2*
1×10-4
1.00±0.05*
, http://www.100md.com
21.2±1.3*
16.4±2.1*
33.7±5.3*
BF-Ⅱ
1×10-7
2.06±0.14*
14.5±0.7*
40.4±5.2*
80.2±12.2*
1×10-6
, http://www.100md.com
1.55±0.13*
17.4±0.6*
25.4±2.5*
62.9±3.9*
1×10-5
1.10±0.08*
19.3±0.9*
18.5±3.9*
38.6±7.6*
, 百拇医药 1×10-4
0.57±0.19*
22.3±1.1*
10.6±4.9*
13.7±6.5*
BF-Ⅲ
1×10-5
1.73±0.15*
15.6±0.6*
43.3±3.3*
, http://www.100md.com
56.8±10.5*
1×10-4
1.56±0.10*
18.0±1.0*
32.2±3.2*
47.3±3.5*
BF-Ⅳ
1×10-5
1.70±0.13*
16.6±1.2*
, 百拇医药
36.3±5.0*
63.4±4.7*
1×10-4
1.38±0.11*
17.9±1.0*
25.9±3.6*
48.1±7.8*
BF-Ⅴ
1×10-5
2.12±0.13*
, 百拇医药
16.2±0.7*
40.1±7.0*
72.9±6.5*
1×10-4
1.86±0.22*
16.9±0.9*
28.3±3.5*
51.9±8.4*
VitE
1×10-5
, 百拇医药
1.43±0.16*
20.8±1.1*
35.1±4.1*
52.3±8.3*
对照组
-
0.38±0.08*
25.4±0.9*
2.3±0.5*
7.5±0.5*
, 百拇医药
与损伤组比较：*P<0.05表2 BFs对FeSO4-Cys损伤的原代培养大鼠肝细胞的保护作用(n=8，±s) 组别
剂量
(mol/L)
FeSO4 50 μmol/L+Cys 200 μmol/L
MDA
GSH
ALT
AST
(nmol/106 cells)
, 百拇医药
(karman's U/mL medium)
损伤组
-
3.08±0.27
11.0±0.8
29.0±2.2
52.8±4.2
BF-Ⅰ
1×10-5
1.70±0.17*
16.2±1.3*
, 百拇医药
12.3±1.0*
32.5±2.3*
1×10-4
1.25±0.13*
21.2±0.8*
9.9±0.9*
18.4±3.5*
BF-Ⅱ
1×10-7
2.56±0.28*
, 百拇医药
13.7±0.9*
14.9±1.3*
43.4±3.5*
1×10-6
1.95±0.21*
16.5±1.0*
11.2±0.6*
33.9±3.9*
1×10-5
1.27±0.10*
, 百拇医药
18.9±1.3*
8.9±0.8*
21.5±4.0*
1×10-4
0.85±0.20*
22.3±1.0*
6.7±0.9*
9.6±2.7*
BF-Ⅲ
1×10-5
, http://www.100md.com
2.18±0.24*
13.2±0.8*
21.8±2.8*
38.4±3.3*
1×10-4
1.60±0.27*
17.2±0.8*
14.5±0.8*
31.9±3.5*
, 百拇医药 BF-Ⅳ
1×10-5
2.13±0.21*
12.6±1.3*
16.6±1.0*
40.3±4.5*
1×10-4
1.70±0.20*
16.0±0.8*
13.6±2.8*
, 百拇医药
32.6±3.0*
BF-Ⅴ
1×10-5
2.52±0.13*
12.9±0.8*
26.1±1.6*
46.8±5.3*
1×10-4
2.15±0.30*
15.6±0.5*
, 百拇医药
15.9±1.8*
37.6±2.2*
VitE
1×10-5
1.76±0.37*
21.0±0.8*
8.9±1.6*
14.9±2.4*
对照组
-
, 百拇医药
0.68±0.15*
25.5±1.4*
2.1±1.6*
4.3±0.8*
与损伤组比较： *P<0.05
结果表明，原代培养肝细胞经CCl4或FeSO4-Cys损伤后，其培养液中转氨酶含量分别上升24倍和14倍，肝细胞中MDA含量增加7倍和6倍，CSH耗竭58%和40%。艾纳香二氢黄酮可明显对抗CCl4或FeSO4-Cys的肝细胞损伤作用，1×10-4和1×10-5 mol/L的5种艾纳香二氢黄酮均能明显抑制受损伤细胞的转氨酶逸出、MDA产生及GSH耗竭。其中以BF-Ⅱ的作用最强，在CCl4所致肝细胞损伤实验中，其抑制MDA产生的ED50约为2.6×10-6 mol/L，保护GSH的ED50约为1.08×10-5 mol/L，抑制ALT逸出细胞的ED50约为9.39×10-6 mol/L。
, 百拇医药
A-CCl4致损伤 B-FeSO4-Cys致损伤
1-损伤组 2-BF-Ⅱ 10-7 mol/L 3-BF-Ⅱ 10-6 mol/L 4-BF-Ⅱ 10-5 mol/L 5-BF-Ⅱ 10-4 mol/L 6-对照组
图2 BF-Ⅱ对原代培养大鼠肝细胞的保护作用(n=8，±s)
4 讨论
研究表明，BFs对多种化学物质所致急性肝损伤具有保护作用[7]，对多种自由基发生系统所致的组织脂质过氧化也有较强的抑制作用[8]。考虑到CCl4、扑热息痛等所致急性肝损伤均与脂质过氧化密切相关[9]，笔者研究BFs对CCl4和FeSO4-Cys损伤的原代培养肝细胞损伤的保护作用，以进一步探讨BFs肝保护与抗氧化的关系。结果表明BFⅠ～Ⅴ均能抑制CCl4和FeSO4-Cys所致的肝细胞脂质过氧化：MDA产生减少，GSH耗竭降低，同时保护了肝细胞膜的稳定性。转氨酶渗出减少，并呈现出一定的相关性。提示BFs的抗氧化作用可能是其肝保护作用的机制。此外，在BFs中，BF-Ⅰ的作用强于BF-Ⅲ-Ⅴ，此与“黄酮类化合物中3，4-OH是抗氧化活性基团”的理论[10]相符。而活性最强的BF-Ⅱ是具有2，5-OH的黄酮类化合物，这一结果可能对进一步研究黄酮类化合物的抗氧化作用的构效关系有一定的提示作用。■
, 百拇医药
蒲含林 男，有机化学专业硕士，讲师，97级生理学专业博士研究生，研究方向是天然产物的药学研究，参与导师主持的多项国家基金课题及“九.五”攻关课题的工作，完成部分横向科研项目工作，在国内刊物发表论文数篇。
参考文献
1，全国中草药汇编编写组，全国中草药汇编(上).北京：人民卫生出版社，1986：49
2，林永成，等.中山大学学报，1988，27(2)：77
3，许实波，等.中国药理学报，1993，14(4)：376
4，Diane J B， et al. Biochemical Toxicology: A Pratical Approach. Oxford: ILK Press Let, 1987:56
, http://www.100md.com
5，樊爱平，等.生理科学，1987，7(6)：357
6，许实波，等.中国药理学通报，1988，14(2)：191
7，徐叔云，等.药理实验方法学(第二版).北京：人民卫生出版社，1994：488
8，赵金华，等.中国药理学通报，1997，13(5)：438
9，Plaa G L, et al. Annv Rev Pharmacol Toxical, 1976, 16:125
10，Younes M, et al. Planta Medica, 1981, 43:240
(1999-07-16 收稿), http://www.100md.com
单位：蒲含林 赵金华 许实波(中山大学生命科学学院药学系，广州 510275)；胡群(云南烟草公司工业研究所)
关键词：艾纳香二氢黄酮；损伤；大鼠肝细胞；保护
中草药000219摘 要 研究5种艾纳香二氢黄酮类化合物对过氧化损伤的原代培养肝细胞的保护作用。胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞。以CCl4或FeSO4+Cys损伤原代培养肝细胞，1×10-4和1×10-5 mol/L的5种艾纳香二氢黄酮均能明显抑制受损伤细胞的转氨酶逸出、MDA产生及GSH耗竭。其中以2，5-二羟基艾纳香二氢黄酮的作用最强，在CCl4所致肝细胞损伤实验中，其抑制MDA产生的ED50约为2.6×10-6 mol/L，保护GSH的ED50约为1.08×10-5 mol/L，抑制ALT逸出细胞的ED50约为9.39×10-6 mol/L。
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Protective Actions of Blumea Flavanones on Primary Cultured
Hepatocytes against Lipid Peroxidation
Pu Hanlin, Zhao Jinhua and Xu Shibo Hu Qun
(Department of Pharmacy, College of Life Sciences, Sun Yat-sen University Guangzhou 510275)
(Research Institute of Industry, Yunnan Tobacco Co.)
Abstract To search for the protective actions of blumea flavanones (BFs) on hepatocytes against lipid peroxidation, rats' hepatocytes were isolated and cultured with or without blumea flavanones, then demaged by FeSO4 +cysteine or CCl4. The lipid peroxidation criteria (malondialdehyde production and GSH depletion) and alteration in hepatocyte membrane (leakage of GPT and GOT) were estimated. It was found that BFs at 10 and 100 μmol/L inhibited the MDA generation, GSH depletion and GPT leakage of hepatocytes induced by CCl4 or FeSO4+cysteine. Among BFs, BF-Ⅱ possessed the strongest activity.
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Key words blumea flavanones intoxicate rat hepatocytes protective action▲
产于中国海南的菊科植物艾纳香Blumea blasminfera DC，中医主要用作芳香开窍药，具镇痛、发汗、驱风、祛痰等功效[1]，中山大学化学系从艾纳香中分离获得艾纳香素[2]，并发现该化合物具有一定的心血管活性和抗氧化、抗实验性肝损伤作用[3]。香港理工大学应用生物化学技术系对艾纳香素进行结构改造，获得4个同系物，本文称之为艾纳香二氢黄酮类化合物(blumeafla-vanoids, BFs)，现报道其肝细胞保护作用。
1 材料
三氯乙酸(TCA,Sigma Co.)；维生素E(Vit E，山东淄博化工厂)；胶原酶(Collagenase Ⅱ, Sigma Co.)；胰岛素(Insulin,上海第一生化药业公司)；牛血清白蛋白(BSA，北京红星生化试剂厂)；硫代巴比妥酸(TBA，Feinbiochem GmbH Co.)；1640培养基(Sigma Co.)；ALT、AST试剂盒(重庆东方试剂厂)；0.20 μm微孔滤膜(上海医药工业研究院)；艾纳香二氢黄酮(BF-Ⅰ～V光谱纯，结构见图1，香港理工大学应用生物化学技术系陈荣礼教授提供)。
, 百拇医药
图1 艾纳香二氢黄酮的化学结构
2 方法
2.1 肝细胞分离：采用胶原酶灌流法[4]分离大鼠肝细胞，所得肝细胞以台盼蓝法检测活性(约88%)，计数后以1640培养液(含1% BSA，10 μg/mL链霉素及1 mmol/L胰岛素)，37 ℃振荡培养。
2.2 CCl4致肝细胞损伤：将细胞以1×106细胞/mL的密度接种于培养试管中(1 mL/管)，加入CCl4 7.5 mmol/L(终浓度)[5]；给药组在加入CCl4前10 min加入不同浓度的BFs或VitE(浓度见表1)。加药后37 ℃振荡孵育3 h，1 000 r/min离心5 min，取上清液以赖氏法测转氨酶(ALT，AST)活性；细胞沉淀以4 ℃磷酸缓冲液(PBS，0.015 mol/L，pH 7.4，含2%磺基水杨酸)悬浮后，TBA显色法测丙二醛(MDA)生成量，DTNB法测还原型谷胱甘肽(GSH)含量[6]。
, 百拇医药
2.3 FeSO4-Cys致肝细胞损伤：孵育及检测方法同2.2，FeSO4-Cys致细胞损伤的浓度为FeSO4 50 μmol/L；Cys 200 μmol/L(均为终浓度)。检测时间为加入FeSO4-Cys后90 min。
3 结果
BFs对CCl4及FeSO4-Cys损伤的肝细胞有保护作用，结果见表1，2及图2。
表1 BFs对CCl4损伤的原代培养大鼠肝细胞的保护作用(n=8，
±s) 组别剂量
, 百拇医药 (mol/L)
CCl4 7.5 mmol
MDA
GSH
ALT
AST
(nmol/106 cells)
(karman's U/mL medium)
损伤组
-
2.43±0.27
13.4±0.6
, 百拇医药
57.8±6.8
92.3±7.7
BF-Ⅰ
1×10-5
1.58±0.09*
18.3±0.8*
31.1±4.1*
53.0±7.2*
1×10-4
1.00±0.05*
, http://www.100md.com
21.2±1.3*
16.4±2.1*
33.7±5.3*
BF-Ⅱ
1×10-7
2.06±0.14*
14.5±0.7*
40.4±5.2*
80.2±12.2*
1×10-6
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1.55±0.13*
17.4±0.6*
25.4±2.5*
62.9±3.9*
1×10-5
1.10±0.08*
19.3±0.9*
18.5±3.9*
38.6±7.6*
, 百拇医药 1×10-4
0.57±0.19*
22.3±1.1*
10.6±4.9*
13.7±6.5*
BF-Ⅲ
1×10-5
1.73±0.15*
15.6±0.6*
43.3±3.3*
, http://www.100md.com
56.8±10.5*
1×10-4
1.56±0.10*
18.0±1.0*
32.2±3.2*
47.3±3.5*
BF-Ⅳ
1×10-5
1.70±0.13*
16.6±1.2*
, 百拇医药
36.3±5.0*
63.4±4.7*
1×10-4
1.38±0.11*
17.9±1.0*
25.9±3.6*
48.1±7.8*
BF-Ⅴ
1×10-5
2.12±0.13*
, 百拇医药
16.2±0.7*
40.1±7.0*
72.9±6.5*
1×10-4
1.86±0.22*
16.9±0.9*
28.3±3.5*
51.9±8.4*
VitE
1×10-5
, 百拇医药
1.43±0.16*
20.8±1.1*
35.1±4.1*
52.3±8.3*
对照组
-
0.38±0.08*
25.4±0.9*
2.3±0.5*
7.5±0.5*
, 百拇医药
与损伤组比较：*P<0.05表2 BFs对FeSO4-Cys损伤的原代培养大鼠肝细胞的保护作用(n=8，
±s) 组别剂量
(mol/L)
FeSO4 50 μmol/L+Cys 200 μmol/L
MDA
GSH
ALT
AST
(nmol/106 cells)
, 百拇医药
(karman's U/mL medium)
损伤组
-
3.08±0.27
11.0±0.8
29.0±2.2
52.8±4.2
BF-Ⅰ
1×10-5
1.70±0.17*
16.2±1.3*
, 百拇医药
12.3±1.0*
32.5±2.3*
1×10-4
1.25±0.13*
21.2±0.8*
9.9±0.9*
18.4±3.5*
BF-Ⅱ
1×10-7
2.56±0.28*
, 百拇医药
13.7±0.9*
14.9±1.3*
43.4±3.5*
1×10-6
1.95±0.21*
16.5±1.0*
11.2±0.6*
33.9±3.9*
1×10-5
1.27±0.10*
, 百拇医药
18.9±1.3*
8.9±0.8*
21.5±4.0*
1×10-4
0.85±0.20*
22.3±1.0*
6.7±0.9*
9.6±2.7*
BF-Ⅲ
1×10-5
, http://www.100md.com
2.18±0.24*
13.2±0.8*
21.8±2.8*
38.4±3.3*
1×10-4
1.60±0.27*
17.2±0.8*
14.5±0.8*
31.9±3.5*
, 百拇医药 BF-Ⅳ
1×10-5
2.13±0.21*
12.6±1.3*
16.6±1.0*
40.3±4.5*
1×10-4
1.70±0.20*
16.0±0.8*
13.6±2.8*
, 百拇医药
32.6±3.0*
BF-Ⅴ
1×10-5
2.52±0.13*
12.9±0.8*
26.1±1.6*
46.8±5.3*
1×10-4
2.15±0.30*
15.6±0.5*
, 百拇医药
15.9±1.8*
37.6±2.2*
VitE
1×10-5
1.76±0.37*
21.0±0.8*
8.9±1.6*
14.9±2.4*
对照组
-
, 百拇医药
0.68±0.15*
25.5±1.4*
2.1±1.6*
4.3±0.8*
与损伤组比较： *P<0.05
结果表明，原代培养肝细胞经CCl4或FeSO4-Cys损伤后，其培养液中转氨酶含量分别上升24倍和14倍，肝细胞中MDA含量增加7倍和6倍，CSH耗竭58%和40%。艾纳香二氢黄酮可明显对抗CCl4或FeSO4-Cys的肝细胞损伤作用，1×10-4和1×10-5 mol/L的5种艾纳香二氢黄酮均能明显抑制受损伤细胞的转氨酶逸出、MDA产生及GSH耗竭。其中以BF-Ⅱ的作用最强，在CCl4所致肝细胞损伤实验中，其抑制MDA产生的ED50约为2.6×10-6 mol/L，保护GSH的ED50约为1.08×10-5 mol/L，抑制ALT逸出细胞的ED50约为9.39×10-6 mol/L。
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A-CCl4致损伤 B-FeSO4-Cys致损伤
1-损伤组 2-BF-Ⅱ 10-7 mol/L 3-BF-Ⅱ 10-6 mol/L 4-BF-Ⅱ 10-5 mol/L 5-BF-Ⅱ 10-4 mol/L 6-对照组
图2 BF-Ⅱ对原代培养大鼠肝细胞的保护作用(n=8，
±s)4 讨论
研究表明，BFs对多种化学物质所致急性肝损伤具有保护作用[7]，对多种自由基发生系统所致的组织脂质过氧化也有较强的抑制作用[8]。考虑到CCl4、扑热息痛等所致急性肝损伤均与脂质过氧化密切相关[9]，笔者研究BFs对CCl4和FeSO4-Cys损伤的原代培养肝细胞损伤的保护作用，以进一步探讨BFs肝保护与抗氧化的关系。结果表明BFⅠ～Ⅴ均能抑制CCl4和FeSO4-Cys所致的肝细胞脂质过氧化：MDA产生减少，GSH耗竭降低，同时保护了肝细胞膜的稳定性。转氨酶渗出减少，并呈现出一定的相关性。提示BFs的抗氧化作用可能是其肝保护作用的机制。此外，在BFs中，BF-Ⅰ的作用强于BF-Ⅲ-Ⅴ，此与“黄酮类化合物中3，4-OH是抗氧化活性基团”的理论[10]相符。而活性最强的BF-Ⅱ是具有2，5-OH的黄酮类化合物，这一结果可能对进一步研究黄酮类化合物的抗氧化作用的构效关系有一定的提示作用。■
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蒲含林 男，有机化学专业硕士，讲师，97级生理学专业博士研究生，研究方向是天然产物的药学研究，参与导师主持的多项国家基金课题及“九.五”攻关课题的工作，完成部分横向科研项目工作，在国内刊物发表论文数篇。
参考文献
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2，林永成，等.中山大学学报，1988，27(2)：77
3，许实波，等.中国药理学报，1993，14(4)：376
4，Diane J B， et al. Biochemical Toxicology: A Pratical Approach. Oxford: ILK Press Let, 1987:56
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5，樊爱平，等.生理科学，1987，7(6)：357
6，许实波，等.中国药理学通报，1988，14(2)：191
7，徐叔云，等.药理实验方法学(第二版).北京：人民卫生出版社，1994：488
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9，Plaa G L, et al. Annv Rev Pharmacol Toxical, 1976, 16:125
10，Younes M, et al. Planta Medica, 1981, 43:240
(1999-07-16 收稿), http://www.100md.com