冠心病42例血浆载脂蛋白E基因型及脂类、内皮素、一氧化氮水平检测
作者：张莉 季彦
单位：南通医学院第二附属医院心内科，南通226001
关键词：冠状动脉疾病；载脂蛋白E类基因型；血脂；内皮素；一氧化氮
南通医学院学报000211 [摘 要] 目的：为了观察血浆载脂蛋白E(AOPE)基因多态性与冠心病(CHD)患者血浆脂类水平及动脉粥样硬化病变进程的关系。方法：测定42例CHD患者的血浆ApoE基因型，分别测定Ⅰ：E2/2+E2/3+E3/3和Ⅱ：E2/4+E3/4+E4/4两组患者血浆甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白—胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白—胆固醇(LDL-C)、ApoE、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白(α)(LP(α))、内皮素(ET)和一氧化氮(NO)水平。结果：Ⅱ组血浆LDL-C水平高于Ⅰ组，有显著性差异(P<0.05)，Ⅱ组血浆NO水平低于Ⅰ组，有显著性差异(P<0.05)。结论：含E4等位基因的CHD患者在血脂(LDL-C)水平升高和动脉粥样硬化进程方面较不含E4等位基因者显著，ApoE基因型测定对临床上CHD患者的病情估计有一定帮助。
, 百拇医药
[中图分类号] R541.4 [文献标识码] A
[文章编号]1000-2057(2000)02-0144-02
THE MEASUREMENT OF SERUM ApoE GENOTYPE,LIPIDS AND ET、NO IN 42 PATIENTS WITH CORONARY HEART DISEASE
ZHANG Li，JI Yan
(Department of Cardiology,the 2nd Affiliated Hospital of Nantong Medical College,Nantong 226001)
[Abstract] Objective:To investigate the relationship between ApoE genotic polymorphisms,serum lipids and the progression of arteriosclerosis in 42 patients with coronary heart disease(CHD).Methods:To measure ApoE genotype in these patients and Serum TG,TC,HDL-C,LDL-C,ApoE,ApoA1,ApoB,LP(α) and ET/NO in two groups(Ⅰ:E2/2+E2/3+E3/3 and Ⅱ:E2/4+E3/4+E4/4) respectively. Results:The serum LDL-C level of group Ⅱ was significantly higher than that of groupⅠ(P<0.05),the serum NO level of groupⅡ was significantly lower than that of groupⅠ(P<0.05).Conclusion: The increase of serum lipid levels and progression of arteriosclerosis, CHD patients of ApoE4 genotype is significantly higher than that of none.And we can say the measurement of serum ApoE genotype helps a lot for the diagnosis of patients with CHD.
, 百拇医药
[Key words] coronary heart disease;apolipoprotein E genotype;serum Lipids;endothelin;nitric Oxide
载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与高脂血症及冠心病(CHD)的发生和危险度的关系甚为密切[1]。通过对本院1999年3月至1999年7月收住院的42例CHD患者ApoE基因型测定，比较了含E4等位基因者与不含E4等位基因者的各项血浆脂类和ET、NO水平，探讨了ApoE基因型测定对CHD患者病情估计方面的价值。
1 资料与方法
1.1 研究对象 CHD 42例中男26例，女16例，年龄48～74岁，平均60.5岁，均符合1979年世界卫生组织(WHO)的诊断标准。均除外家族性高胆固醇血症，无糖尿病及肾脏、甲状腺功能异常，近3个月内未使用调血脂药。
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1.2 血浆脂类检测 空腹12～14小时后，周围静脉取血5ML，用2%乙二胺四乙酸1：9抗凝，室温下离心10分钟，取上层血浆测定脂质及载脂蛋白，血细胞用于提取染色体DNA。TG、TC采用氧化酶法测定，HDL-C用磷钨酸镁法，LDL-C采用FRIDEWALD公式计算。ApoE、ApoA1、ApoB、LP(α)用透射免疫比浊法测定。
1.3 ApoE基因型分析 采用中恒博奥基因诊断技术有限公司ApoE基因检测试验盒测定。
1.4 血浆ET、NO测定 采用北京东亚免疫技术研究所血浆ET放免药盒测定血浆ET。采用南京弘阳生物技术有限公司NO检测盒测定血浆NO。
1.5 统计学处理 计量资料以均数±标准差(
±s)表示，资料比较采用非配对t检验。
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2 结 果
2.1 42例CHD患者ApoE基因型及等位基因频度 42例CHD患者的ApoE基因片段均得到满意扩增。由于第112位和158位脱氧核糖核苷酸不同，经HhaI限制性酶切反应后产生不同的片段，从而区分为3种等位基因及6种基因型，本研究发现5种基因型，以E3/3型最常见，E3/4型次之。根据ApoE基因型频度及ApoE基因复等位共显性特点，计算出ApoE3种等位基因频度，E2，E3，E4频度分别为7.1%,75.0%,17.9%。由于样本例数相对较少，未设对照组。42例CHD患者的ApoE基因型频度及ApoE3种等位基因频度见表1。
2.2 不同ApoE基因型血浆脂类及ET、NO水平比较 为研究E4等位基因对血浆脂类及ET、NO水平的影响，将42例CHD患者按不同ApoE基因型分为两组：Ⅰ：(n 29例)E2/2+E2/3+E3/3和Ⅱ：(n 13例)E2/4+E3/4+E4/4。两组在年龄，性别方面均无显著性差异(P>0.05)。Ⅱ组较Ⅰ组胸闷，心前区疼痛，心力衰竭程度及心肌缺血情况均更明显，且有显著差异(P<0.05)，见表2。表1 42例CHD患者基因型及等位基因频度
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总体
E2/2
E2/3
E2/4
E3/3
E3/4
E4/4
E2
E3
E4
例数
频度
42
, http://www.100md.com
100
0
0
4
9.5
2
4.8
25
59.5
9
21.4
2
4.8
7.1
, http://www.100md.com
75.0
17.9
表2 42例CHD患者ApoE基因型与血浆脂类及ET、NO水平的关系(±s) 项 目
Ⅰ组
Ⅱ组
TG(mmol/L)
TC(mmol/L)
HDL-C(mmol/L)
LDL-C(mmol/L)
ApoE(mg/L)
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ApoA1(g/L)
ApoB(g/L)
LP(α)(mg/L)
ET(pg/L)
NO(umol/L)
3.10±1.47
4.48±0.66
1.33±0.26
1.82±0.81
70.86±31.72
1.00±0.23
, http://www.100md.com 0.69±0.24
249.79±225.42
92.13±42.79
126.2±48.64
2.13±0.57
4.94±0.84
1.24±0.33
2.74±0.47*
44.85±15.07
1.22±0.27
0.89±0.24
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443.23±282.67
132.74±62.25
70.85±29.6*
*P<0.05(t检验)
3 讨 论
在形成动脉粥样硬化(AS)的各因素中，血脂代谢异常起着重要作用，是CHD的发病基础。Apo是一类能与血浆脂类结合的蛋白质，为构成血浆脂蛋白的主要成分，它不仅对血浆脂蛋白的代谢起着决定性的作用，而且对AS的发生和发展亦有很大的影响。ApoE主要存在于乳糜微粒(CM)，极低密度脂蛋白(VLDL)，中间密度脂蛋白(IDL)和部分高密度脂蛋白(HDL)中，其浓度与血浆TG含量呈正相关[2]。ApoE是一个多态性蛋白，有3种常见的异构体，即E2，E3和E4，常见ApoE异构体是由3个等位基因编码，人群中有六种表型，即3种纯合子E2/2，E3/3和E4/4以及三种杂合子如E2/3，E2/4和E3/4。ApoE多态性是决定机体CHD易患性的主要因素之一。E4等位基因是CHD的遗传易患因子。本研究结果提示含E4等位基因的CHD患者血浆LDL-C高于不含E4等位基因者，统计学上有显著性差异(P<0.05)。这可能是由于ApoE4与LDL受体的结合能力较强，因而使CM和VLDL残粒代谢增速，使IDL向LDL转化也增多，其结果是引起血浆中CM残粒、VLDL和IDL水平下降，而LDL水平升高，本研究中Ⅱ组血TG水平较Ⅰ组低，但统计学上无显著性差异(P>0.05)。已经证实，血浆LDL-C水平升高是CHD发生发展的主要危险因素，而这与氧化修饰的LDL(OX-LDL)形成有关。同时，本研究中还可观察到含E4等位基因的CHD患者血浆NO水平较不含E4等位基因者低，有显著性差异(P<0.05)。NO是血管内皮细胞内的L-精氨酸经NO合成酶催化而成，是心血管系统的细胞间信息传递的重要调节因子[3]。在高脂血症时，血液中的LDL被捕获进入有损害倾向的动脉内皮下，并受内皮细胞，平滑肌细胞和单核、巨噬细胞氧化生成OX-LDL，OX-LDL能直接降解和灭活NO，使基础性NO产量减少，促进AS发展。
, 百拇医药
总之，本研究显示ApoE的不同基因型，由于与受体结合活性不同，从而影响CHD患者的LDL-C水平和AS病变的进程，含有E4等位基因的CHD患者，具有较高的LDL-C水平，并有病情加重的倾向，表现为血NO水平下降，血管内皮功能异常和AS的进展，临床上患者胸闷、心前区疼痛、心力衰竭及心电图上心肌缺血情况Ⅱ组较Ⅰ组为明显，治疗效果也较Ⅰ组差。应该认识到，ApoE基因多态性是否为CHD的独立危险因素，尚有待大系列前瞻性研究证实，故目前只能认为ApoE基因型测定在CHD患者病情估计方面具有一定的帮助价值。
[参考文献]
[1] 赵水平.载脂蛋白E研究进展[J].国内外医学科学进展，1995，1∶26.
[2] 赵水平.载脂蛋白E多形性与血脂代谢及其临床意义[J].国外医学生理病理科学与临床分册,1994，14∶231.
[3] Baligand JL ， Cannon PJ.Nitric oxide Synthases and cardiac muscle-autocriue and paracrine influences[J]. Arteriosclerosis Thrombosis Vascular Bidogy, 1997,17∶1846.
(1999-10-15收稿), http://www.100md.com
单位：南通医学院第二附属医院心内科，南通226001
关键词：冠状动脉疾病；载脂蛋白E类基因型；血脂；内皮素；一氧化氮
南通医学院学报000211 [摘 要] 目的：为了观察血浆载脂蛋白E(AOPE)基因多态性与冠心病(CHD)患者血浆脂类水平及动脉粥样硬化病变进程的关系。方法：测定42例CHD患者的血浆ApoE基因型，分别测定Ⅰ：E2/2+E2/3+E3/3和Ⅱ：E2/4+E3/4+E4/4两组患者血浆甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白—胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白—胆固醇(LDL-C)、ApoE、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白(α)(LP(α))、内皮素(ET)和一氧化氮(NO)水平。结果：Ⅱ组血浆LDL-C水平高于Ⅰ组，有显著性差异(P<0.05)，Ⅱ组血浆NO水平低于Ⅰ组，有显著性差异(P<0.05)。结论：含E4等位基因的CHD患者在血脂(LDL-C)水平升高和动脉粥样硬化进程方面较不含E4等位基因者显著，ApoE基因型测定对临床上CHD患者的病情估计有一定帮助。
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[中图分类号] R541.4 [文献标识码] A
[文章编号]1000-2057(2000)02-0144-02
THE MEASUREMENT OF SERUM ApoE GENOTYPE,LIPIDS AND ET、NO IN 42 PATIENTS WITH CORONARY HEART DISEASE
ZHANG Li，JI Yan
(Department of Cardiology,the 2nd Affiliated Hospital of Nantong Medical College,Nantong 226001)
[Abstract] Objective:To investigate the relationship between ApoE genotic polymorphisms,serum lipids and the progression of arteriosclerosis in 42 patients with coronary heart disease(CHD).Methods:To measure ApoE genotype in these patients and Serum TG,TC,HDL-C,LDL-C,ApoE,ApoA1,ApoB,LP(α) and ET/NO in two groups(Ⅰ:E2/2+E2/3+E3/3 and Ⅱ:E2/4+E3/4+E4/4) respectively. Results:The serum LDL-C level of group Ⅱ was significantly higher than that of groupⅠ(P<0.05),the serum NO level of groupⅡ was significantly lower than that of groupⅠ(P<0.05).Conclusion: The increase of serum lipid levels and progression of arteriosclerosis, CHD patients of ApoE4 genotype is significantly higher than that of none.And we can say the measurement of serum ApoE genotype helps a lot for the diagnosis of patients with CHD.
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[Key words] coronary heart disease;apolipoprotein E genotype;serum Lipids;endothelin;nitric Oxide
载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与高脂血症及冠心病(CHD)的发生和危险度的关系甚为密切[1]。通过对本院1999年3月至1999年7月收住院的42例CHD患者ApoE基因型测定，比较了含E4等位基因者与不含E4等位基因者的各项血浆脂类和ET、NO水平，探讨了ApoE基因型测定对CHD患者病情估计方面的价值。
1 资料与方法
1.1 研究对象 CHD 42例中男26例，女16例，年龄48～74岁，平均60.5岁，均符合1979年世界卫生组织(WHO)的诊断标准。均除外家族性高胆固醇血症，无糖尿病及肾脏、甲状腺功能异常，近3个月内未使用调血脂药。
, 百拇医药
1.2 血浆脂类检测 空腹12～14小时后，周围静脉取血5ML，用2%乙二胺四乙酸1：9抗凝，室温下离心10分钟，取上层血浆测定脂质及载脂蛋白，血细胞用于提取染色体DNA。TG、TC采用氧化酶法测定，HDL-C用磷钨酸镁法，LDL-C采用FRIDEWALD公式计算。ApoE、ApoA1、ApoB、LP(α)用透射免疫比浊法测定。
1.3 ApoE基因型分析 采用中恒博奥基因诊断技术有限公司ApoE基因检测试验盒测定。
1.4 血浆ET、NO测定 采用北京东亚免疫技术研究所血浆ET放免药盒测定血浆ET。采用南京弘阳生物技术有限公司NO检测盒测定血浆NO。
1.5 统计学处理 计量资料以均数±标准差(
±s)表示，资料比较采用非配对t检验。, http://www.100md.com
2 结 果
2.1 42例CHD患者ApoE基因型及等位基因频度 42例CHD患者的ApoE基因片段均得到满意扩增。由于第112位和158位脱氧核糖核苷酸不同，经HhaI限制性酶切反应后产生不同的片段，从而区分为3种等位基因及6种基因型，本研究发现5种基因型，以E3/3型最常见，E3/4型次之。根据ApoE基因型频度及ApoE基因复等位共显性特点，计算出ApoE3种等位基因频度，E2，E3，E4频度分别为7.1%,75.0%,17.9%。由于样本例数相对较少，未设对照组。42例CHD患者的ApoE基因型频度及ApoE3种等位基因频度见表1。
2.2 不同ApoE基因型血浆脂类及ET、NO水平比较 为研究E4等位基因对血浆脂类及ET、NO水平的影响，将42例CHD患者按不同ApoE基因型分为两组：Ⅰ：(n 29例)E2/2+E2/3+E3/3和Ⅱ：(n 13例)E2/4+E3/4+E4/4。两组在年龄，性别方面均无显著性差异(P>0.05)。Ⅱ组较Ⅰ组胸闷，心前区疼痛，心力衰竭程度及心肌缺血情况均更明显，且有显著差异(P<0.05)，见表2。表1 42例CHD患者基因型及等位基因频度
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总体
E2/2
E2/3
E2/4
E3/3
E3/4
E4/4
E2
E3
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例数
频度
42
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17.9
表2 42例CHD患者ApoE基因型与血浆脂类及ET、NO水平的关系(
±s) 项 目Ⅰ组
Ⅱ组
TG(mmol/L)
TC(mmol/L)
HDL-C(mmol/L)
LDL-C(mmol/L)
ApoE(mg/L)
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ApoA1(g/L)
ApoB(g/L)
LP(α)(mg/L)
ET(pg/L)
NO(umol/L)
3.10±1.47
4.48±0.66
1.33±0.26
1.82±0.81
70.86±31.72
1.00±0.23
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249.79±225.42
92.13±42.79
126.2±48.64
2.13±0.57
4.94±0.84
1.24±0.33
2.74±0.47*
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443.23±282.67
132.74±62.25
70.85±29.6*
*P<0.05(t检验)
3 讨 论
在形成动脉粥样硬化(AS)的各因素中，血脂代谢异常起着重要作用，是CHD的发病基础。Apo是一类能与血浆脂类结合的蛋白质，为构成血浆脂蛋白的主要成分，它不仅对血浆脂蛋白的代谢起着决定性的作用，而且对AS的发生和发展亦有很大的影响。ApoE主要存在于乳糜微粒(CM)，极低密度脂蛋白(VLDL)，中间密度脂蛋白(IDL)和部分高密度脂蛋白(HDL)中，其浓度与血浆TG含量呈正相关[2]。ApoE是一个多态性蛋白，有3种常见的异构体，即E2，E3和E4，常见ApoE异构体是由3个等位基因编码，人群中有六种表型，即3种纯合子E2/2，E3/3和E4/4以及三种杂合子如E2/3，E2/4和E3/4。ApoE多态性是决定机体CHD易患性的主要因素之一。E4等位基因是CHD的遗传易患因子。本研究结果提示含E4等位基因的CHD患者血浆LDL-C高于不含E4等位基因者，统计学上有显著性差异(P<0.05)。这可能是由于ApoE4与LDL受体的结合能力较强，因而使CM和VLDL残粒代谢增速，使IDL向LDL转化也增多，其结果是引起血浆中CM残粒、VLDL和IDL水平下降，而LDL水平升高，本研究中Ⅱ组血TG水平较Ⅰ组低，但统计学上无显著性差异(P>0.05)。已经证实，血浆LDL-C水平升高是CHD发生发展的主要危险因素，而这与氧化修饰的LDL(OX-LDL)形成有关。同时，本研究中还可观察到含E4等位基因的CHD患者血浆NO水平较不含E4等位基因者低，有显著性差异(P<0.05)。NO是血管内皮细胞内的L-精氨酸经NO合成酶催化而成，是心血管系统的细胞间信息传递的重要调节因子[3]。在高脂血症时，血液中的LDL被捕获进入有损害倾向的动脉内皮下，并受内皮细胞，平滑肌细胞和单核、巨噬细胞氧化生成OX-LDL，OX-LDL能直接降解和灭活NO，使基础性NO产量减少，促进AS发展。
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总之，本研究显示ApoE的不同基因型，由于与受体结合活性不同，从而影响CHD患者的LDL-C水平和AS病变的进程，含有E4等位基因的CHD患者，具有较高的LDL-C水平，并有病情加重的倾向，表现为血NO水平下降，血管内皮功能异常和AS的进展，临床上患者胸闷、心前区疼痛、心力衰竭及心电图上心肌缺血情况Ⅱ组较Ⅰ组为明显，治疗效果也较Ⅰ组差。应该认识到，ApoE基因多态性是否为CHD的独立危险因素，尚有待大系列前瞻性研究证实，故目前只能认为ApoE基因型测定在CHD患者病情估计方面具有一定的帮助价值。
[参考文献]
[1] 赵水平.载脂蛋白E研究进展[J].国内外医学科学进展，1995，1∶26.
[2] 赵水平.载脂蛋白E多形性与血脂代谢及其临床意义[J].国外医学生理病理科学与临床分册,1994，14∶231.
[3] Baligand JL ， Cannon PJ.Nitric oxide Synthases and cardiac muscle-autocriue and paracrine influences[J]. Arteriosclerosis Thrombosis Vascular Bidogy, 1997,17∶1846.
(1999-10-15收稿), http://www.100md.com