大肠腺癌DNA和RNA测定与转移及预后的关系
作者：刘同亭 陈桂荣 孙自勤 王要军 赵立群
单位：刘同亭 陈桂荣 孙自勤 王要军(中国人发解放军济南军区总医院医务部 济南 250031)；赵立群(山东中医药大学附属医院 济南 250011)
关键词：组织；大肠癌；DNA；RNA；流式细胞术
中国现代医学杂志000308 目的：探讨大肠腺癌DNA和RNA含量的变化意义及预后的关系。方法：对我院1985年～1992年收治的术后随访74例病人的大肠腺癌石腊标本重新切片，用流式细胞技术进行DNA和RNA含量测定，探讨其变化意义与转移预后的关系。结果：大肠腺癌DNA异倍体与组织学类型无关，RNA含量与组织学类型关系密切。DNA异倍体和RNA含量大肠腺癌的Dukes'分期、淋巴结转移、其它脏器转移和根治术后复发均有关。术后生存5年以上病人的DNA异倍体出现率和RNA含量较术后1年内死亡病人为低，两者有显著性差异(P<0.01)。结论：DNA和RNA含量测定可作为判断大肠腺癌的恶性程度、估价预后的客观可靠指标。
, http://www.100md.com
分类号 735.3
THE RELATIONSHIP BETWEEN THE MENSURATION
AND METASTATIC AND PROGNOSIS OF INTESTINAL
GLANDS CARCINOMA DAND AND RNA
Liu Tontin, Chen Guirong, Shun Ziqing, Wang Yaojun
(Jinan P.L.A. General Hospital )
Objective: To study the significance of the change of DNA and RNA quantity large intestinal adeno carcinoma, and its relationship with prognosis. Methods: Slice of the specimens from 74 large intestinal adeno carcinoma patients in our hospital from 1985-1992, using flowmetry to detect the quantity of DNA and RNA and study the significance of its change and its relationship with metastasis and prognosis. Results: DNA Heteroploid of large intestinal adeno carcinoma has no connection with the histological type, while the quantity of RNA is intimately correlated with the histological type. DNA heteroploid is correlated with Duke's stage, lymph node metastasis, systemic metastasis and recurrence after radical operation. The occurred rate of DNA heleroploid and RNA quantity in patients lived over 5 years after operation is lower than patients died in a year, the difference is significantly (P<0.01). Conclusion: Quantity of DNA and RNA can be used as a reliable index of different degree and prognosis of large intestinal adeno carcinoma.
, 百拇医药
Key words: Texture； Large intestinal carcinoma； DNA； RNA； Flow cell technology
我们采用流式细胞技术对我院74例大肠腺癌术后随访病人的标本进行了DNA和RNA含量测定，旨在探讨大肠腺癌DNA和RNA含量的变化意义及与预后的关系。
1 材料和方法
1.1 病例选择
我院1985年～1992年收治的74例大肠腺癌，男性48例，女性26例，年龄24～86岁，平均56.9岁。其中结肠癌42例，直肠癌32例。全部病例均经手术治疗和病理确诊，术后定期随访。
1.2 方法
1.2.1 单细胞悬液的制备 将存档肿瘤组织蜡块切厚为80～100μm的4～5片，分别放入试管中，加入二甲苯3～5ml,每3h加入1次，共加3次。常规水化，将脱蜡及已水化的组织片置于重叠的100目铜网和260目尼龙网上，以眼科镊轻搓，边搓边以生盐水冲洗入小烧杯中，直至组织完全搓完。以1500r/min离心5min，再以磷酸缓冲液漂洗离心(800r/min)，共2次，去上清液后将每份样品分别放入两支试管内待测。
, http://www.100md.com
1.2.2 DNA和RNA含量测定 采用溴化乙啶插入DNA染色法[1]染色DNA(染液含溴化乙啶10mg/L，RNA酶10mg/L、细胞打孔剂1.0%)；用FACScan型流式细胞仪(美国BD公司生产，变异系数CV在5.0%以内)，分别测试每份样品的DNA和RNA含量，每份样品测104个细胞。用DNA指数(DI)表示DNA含量，用RNA指数(RI)表示RNA含量，DI与RI计算公式如下。
1.2.3 诊断标准及方法 二倍体(2C)及异倍体(An)DI诊断标准：DI为0.95～1.05(DI＝1±CV，CV取0.05)，近二倍体诊断标准：DI为0.90～1.10(DI＝1±2CV)，DI≥11.1为含量高于正常。
1.3 统计学处理方法
DNA异倍体计数资料用χ2检验，RNA含量计算资料用t检验。
, 百拇医药
2 结果
表1 大肠癌病期、组织学类型与DNA异倍体和RNA含量的关系
例数
DNA
RNA含量(
±s)
2C
An
%
Dukes'病期
A
7
, http://www.100md.com
3
4
57.14
11.73±0.48
B
36
10
26
72.22
20.66±4.52
C
22
3
, http://www.100md.com
33
86.36
24.71±3.02
D
9
0
9
100
26.54±2.18
组织学类型
高分化
17
5
, 百拇医药
12
70.59
17.76±2.06
中分化
42
8
34
80.95
22.04±4.98
低分化
15
3
12
, 百拇医药
80.00
25.91±2.17
表2 大肠癌转移、复发与DNA异倍体和RNA含量的关系
例数
DNA
RNA含量(±s)
2C
An
%
淋巴结转移
+
, 百拇医药
26
3
23
880.46
24.77±4.82
-
48
18
30
62.50
18.74±5.26
其它脏器转移
+
, 百拇医药
29
4
25
86.21
29.35±6.21
-
45
16
29
64.44
19.87±4.37
根治术后复发
+
, 百拇医药
22
1
21
95.45
27.90±7.13
-
34
8
26
76.47
20.12±4.29
表3 不同生存时间与DNA异倍体和RNA含量的关系 生存时间(年)
, 百拇医药
例数
DNA
RNA含量(±s)
2C
An
%
<1
13
1
12
92.31
25.83±2.73
, http://www.100md.com
>1
61
15
46
75.41
22.43±4.21
>3
47
14
33
70.25
21.84±3.35
>5
, 百拇医药
38
14
24
63.16
18.41±2.04
3 讨论
应用流式细胞术分析肿瘤细胞DNA和RNA含量，可从核酸代谢水平上了解肿瘤细胞的增殖力学规律。我们研究发现，大肠腺癌组织的DNA异倍率与组织类型无明显关系，但与Dukes分期关系密切，病变越晚，异倍体检出率越高。RNA含量与病变分期和组织学类型的均有显著相关性，病变越晚、分化越差，RNA含量越高。
本研究中，有淋巴结转移或其它脏器转移的大肠腺癌DNA异倍体体出和RNA含量均比无转移者高，尤其是原发病变较早就有淋巴结转移病人的DNA异倍体检出率更高，RNA含量显著升高。另外，淋巴结和其它脏器转移的越多，DNA异倍体检出率的RNA含量也越高。因此检测DNA和RNA有利于判断肿瘤转移的程度。
, 百拇医药
文献报道[3]，大肠癌二倍体癌的5年生存率明显高于异倍体癌。我们研究结果表明，术后生存5年的标本DNA异倍体检出和RNA含量与1年内死亡病人相比均有非常显著性差异(P<0.01)。22例根治术后复发病人DNA异倍体检出率为95.45%，RNA含量为27.90±7.13，明显高于未复发病人。因此，DNA和RNA含量测定可作为临床判断肿瘤恶性程度、估价临床预后的客观指标，为术中、术后近期有针对性的治疗提供可靠依据。
参考文献：
1 Taylor IW.A rapid single step staining teachnipue for DNA analysis by flow microfturometry.J Histochem Cytochem,1980;28:1021
2 Andreeff M,Darzynkiewicz Z.Sharpless P K,et al.Discrimination of human lewkemia swthtypes by flow lytometric analysis of cellular DNA and RNA.Blood,1980,55:282
3 Merkel DE,Mcguire WL,Ploidy proliferative activity and prognosis,DNA flow cytometry of soldi sumors.Cancer,1990;65:1194
(2000-01-19收稿), 百拇医药
单位：刘同亭 陈桂荣 孙自勤 王要军(中国人发解放军济南军区总医院医务部 济南 250031)；赵立群(山东中医药大学附属医院 济南 250011)
关键词：组织；大肠癌；DNA；RNA；流式细胞术
中国现代医学杂志000308 目的：探讨大肠腺癌DNA和RNA含量的变化意义及预后的关系。方法：对我院1985年～1992年收治的术后随访74例病人的大肠腺癌石腊标本重新切片，用流式细胞技术进行DNA和RNA含量测定，探讨其变化意义与转移预后的关系。结果：大肠腺癌DNA异倍体与组织学类型无关，RNA含量与组织学类型关系密切。DNA异倍体和RNA含量大肠腺癌的Dukes'分期、淋巴结转移、其它脏器转移和根治术后复发均有关。术后生存5年以上病人的DNA异倍体出现率和RNA含量较术后1年内死亡病人为低，两者有显著性差异(P<0.01)。结论：DNA和RNA含量测定可作为判断大肠腺癌的恶性程度、估价预后的客观可靠指标。
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分类号 735.3
THE RELATIONSHIP BETWEEN THE MENSURATION
AND METASTATIC AND PROGNOSIS OF INTESTINAL
GLANDS CARCINOMA DAND AND RNA
Liu Tontin, Chen Guirong, Shun Ziqing, Wang Yaojun
(Jinan P.L.A. General Hospital )
Objective: To study the significance of the change of DNA and RNA quantity large intestinal adeno carcinoma, and its relationship with prognosis. Methods: Slice of the specimens from 74 large intestinal adeno carcinoma patients in our hospital from 1985-1992, using flowmetry to detect the quantity of DNA and RNA and study the significance of its change and its relationship with metastasis and prognosis. Results: DNA Heteroploid of large intestinal adeno carcinoma has no connection with the histological type, while the quantity of RNA is intimately correlated with the histological type. DNA heteroploid is correlated with Duke's stage, lymph node metastasis, systemic metastasis and recurrence after radical operation. The occurred rate of DNA heleroploid and RNA quantity in patients lived over 5 years after operation is lower than patients died in a year, the difference is significantly (P<0.01). Conclusion: Quantity of DNA and RNA can be used as a reliable index of different degree and prognosis of large intestinal adeno carcinoma.
, 百拇医药
Key words: Texture； Large intestinal carcinoma； DNA； RNA； Flow cell technology
我们采用流式细胞技术对我院74例大肠腺癌术后随访病人的标本进行了DNA和RNA含量测定，旨在探讨大肠腺癌DNA和RNA含量的变化意义及与预后的关系。
1 材料和方法
1.1 病例选择
我院1985年～1992年收治的74例大肠腺癌，男性48例，女性26例，年龄24～86岁，平均56.9岁。其中结肠癌42例，直肠癌32例。全部病例均经手术治疗和病理确诊，术后定期随访。
1.2 方法
1.2.1 单细胞悬液的制备 将存档肿瘤组织蜡块切厚为80～100μm的4～5片，分别放入试管中，加入二甲苯3～5ml,每3h加入1次，共加3次。常规水化，将脱蜡及已水化的组织片置于重叠的100目铜网和260目尼龙网上，以眼科镊轻搓，边搓边以生盐水冲洗入小烧杯中，直至组织完全搓完。以1500r/min离心5min，再以磷酸缓冲液漂洗离心(800r/min)，共2次，去上清液后将每份样品分别放入两支试管内待测。
, http://www.100md.com
1.2.2 DNA和RNA含量测定 采用溴化乙啶插入DNA染色法[1]染色DNA(染液含溴化乙啶10mg/L，RNA酶10mg/L、细胞打孔剂1.0%)；用FACScan型流式细胞仪(美国BD公司生产，变异系数CV在5.0%以内)，分别测试每份样品的DNA和RNA含量，每份样品测104个细胞。用DNA指数(DI)表示DNA含量，用RNA指数(RI)表示RNA含量，DI与RI计算公式如下。
1.2.3 诊断标准及方法 二倍体(2C)及异倍体(An)DI诊断标准：DI为0.95～1.05(DI＝1±CV，CV取0.05)，近二倍体诊断标准：DI为0.90～1.10(DI＝1±2CV)，DI≥11.1为含量高于正常。
1.3 统计学处理方法
DNA异倍体计数资料用χ2检验，RNA含量计算资料用t检验。
, 百拇医药
2 结果
表1 大肠癌病期、组织学类型与DNA异倍体和RNA含量的关系
例数
DNA
RNA含量(
±s)2C
An
%
Dukes'病期
A
7
, http://www.100md.com
3
4
57.14
11.73±0.48
B
36
10
26
72.22
20.66±4.52
C
22
3
, http://www.100md.com
33
86.36
24.71±3.02
D
9
0
9
100
26.54±2.18
组织学类型
高分化
17
5
, 百拇医药
12
70.59
17.76±2.06
中分化
42
8
34
80.95
22.04±4.98
低分化
15
3
12
, 百拇医药
80.00
25.91±2.17
表2 大肠癌转移、复发与DNA异倍体和RNA含量的关系
例数
DNA
RNA含量(
±s)2C
An
%
淋巴结转移
+
, 百拇医药
26
3
23
880.46
24.77±4.82
-
48
18
30
62.50
18.74±5.26
其它脏器转移
+
, 百拇医药
29
4
25
86.21
29.35±6.21
-
45
16
29
64.44
19.87±4.37
根治术后复发
+
, 百拇医药
22
1
21
95.45
27.90±7.13
-
34
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76.47
20.12±4.29
表3 不同生存时间与DNA异倍体和RNA含量的关系 生存时间(年)
, 百拇医药
例数
DNA
RNA含量(
±s)2C
An
%
<1
13
1
12
92.31
25.83±2.73
, http://www.100md.com
>1
61
15
46
75.41
22.43±4.21
>3
47
14
33
70.25
21.84±3.35
>5
, 百拇医药
38
14
24
63.16
18.41±2.04
3 讨论
应用流式细胞术分析肿瘤细胞DNA和RNA含量，可从核酸代谢水平上了解肿瘤细胞的增殖力学规律。我们研究发现，大肠腺癌组织的DNA异倍率与组织类型无明显关系，但与Dukes分期关系密切，病变越晚，异倍体检出率越高。RNA含量与病变分期和组织学类型的均有显著相关性，病变越晚、分化越差，RNA含量越高。
本研究中，有淋巴结转移或其它脏器转移的大肠腺癌DNA异倍体体出和RNA含量均比无转移者高，尤其是原发病变较早就有淋巴结转移病人的DNA异倍体检出率更高，RNA含量显著升高。另外，淋巴结和其它脏器转移的越多，DNA异倍体检出率的RNA含量也越高。因此检测DNA和RNA有利于判断肿瘤转移的程度。
, 百拇医药
文献报道[3]，大肠癌二倍体癌的5年生存率明显高于异倍体癌。我们研究结果表明，术后生存5年的标本DNA异倍体检出和RNA含量与1年内死亡病人相比均有非常显著性差异(P<0.01)。22例根治术后复发病人DNA异倍体检出率为95.45%，RNA含量为27.90±7.13，明显高于未复发病人。因此，DNA和RNA含量测定可作为临床判断肿瘤恶性程度、估价临床预后的客观指标，为术中、术后近期有针对性的治疗提供可靠依据。
参考文献：
1 Taylor IW.A rapid single step staining teachnipue for DNA analysis by flow microfturometry.J Histochem Cytochem,1980;28:1021
2 Andreeff M,Darzynkiewicz Z.Sharpless P K,et al.Discrimination of human lewkemia swthtypes by flow lytometric analysis of cellular DNA and RNA.Blood,1980,55:282
3 Merkel DE,Mcguire WL,Ploidy proliferative activity and prognosis,DNA flow cytometry of soldi sumors.Cancer,1990;65:1194
(2000-01-19收稿), 百拇医药