2000年研究生毕业论文摘要
作者：
单位：
关键词：
福建医科大学学报000345
脂质体介导转染bcl-2反义核酸进入HL60细胞的动力学模式
和生物学效应硕士研究生 朱元贵
专 业 临床检验诊断学(血液学)
导 师 卓光生 主任医师, 陈志哲 教授, 胡建达 副教授
bcl-2基因是重要的抗凋亡和耐药基因,在造血系统恶性肿瘤细胞中普遍高表达。利用bcl-2反义核酸有望抑制bcl-2基因的表达,促进细胞凋亡,提高肿瘤对化疗的敏感性。 目的 应用阳离子脂质体介导或寡核苷酸直接转染技术,建立HL60细胞摄入荧光素标记的bcl-2寡核苷酸的动力学模式,研究脂质体介导下bcl-2反义核酸对HL60细胞的生物学效应,初步探讨脂质体的生物学作用。 方法 应用荧光素标记的寡核苷酸,凝胶电泳观察脂质体寡核苷酸复合物的形成,流式细胞仪测定细胞内的平均荧光强度和bcl-2蛋白的表达,荧光显微镜观察细胞内荧光物质的分布,3H-TdR掺入法和MTT法检测HL60细胞的生长,RT-PCR法检测细胞内bcl-2 mRNA的表达水平。 结果 (1)当脂质体与寡核苷酸的质量比合适时,两者可形成复合物。(2)脂质体介导转染法显著提高HL60细胞对寡核苷酸的摄入,当脂质体与寡核苷酸的质量比(μg/μg)为2.0/1时,细胞内相对平均荧光强度可达寡核苷酸直接转染时的40倍,而且HL60细胞对寡核苷酸的摄入与其浓度和作用时间有关,未标记的寡核苷酸竞争性抑制细胞对标记寡核苷酸的摄取。(2)细胞内的寡核苷酸可向胞外转运,脂质体介导转染后,胞内荧光强度衰减缓慢,t1/2约为4 h,而寡核苷酸直接作用后,t1/2约为0.5 h;(3)脂质体介导转染4 h后,细胞内荧光物质主要以明亮的点状聚集在细胞核和细胞浆的部分细胞器中,而寡核苷酸直接转染时,荧光物质则弥漫分布于胞浆中。(3)细胞的增殖活性影响细胞对寡核苷酸的摄取。(4)阳离子脂质体可减少寡核苷酸产生一定生物学效应时的剂量,在脂质体与寡核苷酸质量比优化选择下,1.0 mol的反义核酸可抑制HL60细胞的生长,下调bcl-2蛋白和mRNA的表达水平。 结论 (1)阳离子脂质体可以增加寡核苷酸的细胞摄入,改变其胞内分布,可能是阳离子脂质体增加bcl-2反义核酸生物活性的重要原因。(2)bcl-2反义核酸可通过下调bcl-2 mRNA和/或蛋白表达水平而发挥生物学效应。
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关键词 寡核苷酸,反义; 阳离子脂质体; HL60细胞; bcl-2基因; 基因转染
(现在福建医科大学附属协和医院)
心肌细胞外基质与高血压大鼠左心室肥厚的关系硕士研究生
陈水龙
专 业 内科学(心血管疾病)
导 师 吴可贵 教授, 谢良地 副教授
目的 探讨苯那普利治疗后自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞外基质(FN、LN、Ⅳ型胶原)的变化,心肌成纤维细胞产生细胞外基质的调控机制及其在左心室肥厚发生中的可能作用。 方法 (1)雄性SHR(n=21),从10周龄起分别给予苯那普利3,10,30 mg*kg-1*d-1治疗16周,年龄、性别配对的SHR和Wistar(WKY)大鼠作对照。测量收缩压(SBP)、左心室重量(WM);血浆纤维粘连蛋白(FN)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和尿蛋白(UP);放射免疫法测定左心室组织血管紧张素(AngⅡ)浓度;紫外分光光度法测定血浆和左心室组织血管紧张素转换酶(ACE)活性;免疫组织化学染色结合计算机图像分析方法测定左心室心肌细胞外基质(FN、层粘连蛋白/LN、Ⅳ型胶原/ColⅣ)和转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。(2)以来源于12周龄的SHR和WKY大鼠的培养心肌成纤维细胞(CFb)为模型,观察三种生长活性因子[AngⅡ、TGF-β1、血小板源生长因子(PDGF)]对CFb增殖、胶原合成的影响;苯那普利和洛沙坦对CFb增殖、胶原合成的影响;FN对CFb增殖、胶原合成和DNA合成的影响。 结果 (1)与未治疗SHR相比,苯那普利呈剂量依赖性降低SHR的血压和心体比(LVM/BW)。苯那普利治疗对大鼠的Scr无影响,BUN和尿蛋白显著降低。高剂量(30 mg*kg-1*d-1)治疗降低SHR血浆中的FN含量(101±19.1 vs 122±11 mg*L-1,P<0.05)。苯那普利治疗降低SHR左心室组织局部AngⅡ浓度和ACE活性。SHR左心室中的FN、LN、ColⅣ和TGF-1含量均显著高于WKY(FN:16.9%±3.8% vs 9.2%±2.9%,P<0.01; LN:16.3%±2.9% vs 10.2%±1.5%,P<0.01; ColⅣ:13.7%±1.2% vs 8.2%±0.9%,P<0.01; TGF-β1:5435±622 vs 2462±554 IOD,P<0.01)。长期苯那普利治疗后,三种ECM和TGF-β1的含量不同程度减少。(2)无血清(0.4%FCS)条件下,各种浓度的AngⅡ(10-10～10-6mol/L)和苯那普利(10-9～10-5mol/L)对CFb的增殖无影响,PDGF(3,10,30 ng*ml-1)和TGF-β1(1,3,10 ng*ml-1)呈浓度依赖性促进两种来源的CFB增殖;在10%FCS条件下,FN可促进两种CFb的增殖(SHR 3.75±0.57 vs 2.29±0.29×104 cell*ml-1,P<0.01;WKY 2.42±0.44 vs 1.42±0.2×104 cell*ml-1,P<0.01)。AngⅡ、TGF-β1和PDGF呈浓度依赖性促进CFb的胶原合成。苯那普利抑制CFb的胶原合成,洛沙坦(10-10～10-6mol/L)呈浓度依赖性抑制10-7mol/L AngⅡ诱导的CFb胶原合成。FN显著促进CFb的DNA合成和胶原合成,SHR的CFb对上述各种因子的反应性高于WKY大鼠。 结论 苯那普利延缓SHR高血压左心室肥厚的发展,同时减少左心室中增生的细胞外基质(FN、LN、Col Ⅳ)和TGF-β1。CFb的增殖和胶原合成受AngⅡ、TGF-β1、PDGF和FN的调控。
, 百拇医药
关键词 细胞外基质; 高血压; 左心室肥厚; 苯那普利; 血管紧张素Ⅱ; 心肌成纤维细胞; 洛沙坦; 自发性高血压大鼠
(现在福建医科大学附属第一医院)
一氧化氮诱导弓形虫速殖子凋亡及其钙信号机制硕士研究生
林 京
专 业 病原生物学
导 师 林建银 教授, 郑志, 章 涛 副教授
目的 探讨一氧化氮(NO)能否诱导弓形虫速殖子凋亡以及Ca2+信号传导途径是否参与NO诱导的虫体凋亡。 方法 采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的缺口末端标记法(TUNEL)、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳检测凋亡以及应用Fura-2荧光负载技术测定胞浆游离钙浓度[Ca2+]i。 结果 (1)TUNEL标记法检测表明NO供体亚硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO,SNP]可诱导弓形虫速殖子凋亡,并呈剂量和时间依赖性。(2)NO清除剂,N-乙酰半胱氨酸能明显抑制SNP诱导的速殖子凋亡,而不含NO的SNP类似物,K3Fe(CN)6不能诱导速殖子凋亡。(3)透射电镜下见SNP处理的速殖子具有凋亡的典型形态学特征:核染色质凝集,核固缩,凋亡小体形成。(4)琼脂糖凝胶电泳显示SNP处理的速殖子DNA片段呈现凋亡特征性的梯形条带。(5)静息状态下弓形虫速殖子胞浆游离钙[Ca2+]i为108.49±4.87 nmol/L(n=15)。(6)SMP诱导速殖子凋亡过程胞浆[Ca2+]i明显升高并呈剂量和时间依赖性。(7)N-乙酰半胱氨酸能明显抑制SNP诱导的速殖子胞浆[Ca2+]i升高,而K3Fe(CN)6不能诱导速殖子胞浆[Ca2+]i升高。(8)胞外钙螯合剂EGTA,和L型电压依赖性钙通道阻滞剂,维拉帕米完全或部分抑制SNP引起的速殖子胞浆[Ca2+]i升高,同时也明显抑制SNP诱导的速殖子凋亡。 结论 (1)从形态学和生化特征证明NO的供体SNP可诱导弓形虫速殖子凋亡,表明NO可通过诱导弓形虫速殖子凋亡而发挥其抗弓形虫感染作用。(2)NO诱导的弓形虫速殖子凋亡主要通过促进胞外钙内流,胞浆[Ca2+]i升高所致。(3)从细胞和分子水平阐述NO在抗弓形虫感染中的作用机制,为设计弓形虫病的免疫预防和临床治疗方案提供理论和实验依据。
, 百拇医药
关键词 一氧化氮; 刚地弓形虫; 细胞凋亡; 钙
(现在福建医科大学生物化学教研室)
肝胆管结石合并肝胆管癌cyclin D1、p27kipl、ki-67的表达及意义硕士研究生
周浩辉
专 业 外科学(肝胆外科)
导 师 黄长玉、 殷凤峙 教授
目的 通过研究肝胆管结石合并肝胆管癌和肝胆管结石症组织中cyclin D1和p27kipl及ki-67表达,探讨肝胆管结石与合并肝胆管癌之间的关系,以及临床应用价值。 方法 以32例肝胆管结石合并肝胆管癌患者为研究对象,49例肝胆管结石症作为对照,将各例手术切除标本的石蜡组织块重新作4 μm切片,应用免疫组织化学SP法检测cyclin D1、p27kipl和ki-67表达。 结果 (1)在正常胆管组织、肝胆管结石胆管上皮呈单纯增生、不典型增生,肝胆管结石合并肝胆管癌及癌旁组织各组中ki-67抗原平均指数、cyclin D1阳性分级表达均呈现正常<单纯增生<不典型增生<癌,而p27kipl阳性表达分级呈现正常>单纯增生>不典型增生>癌,经统计学分析均有显著意义(P<0.001)。(2)结石合并肝胆管癌组织中ki-67抗原、cyclin D1表达与肝胆管癌分化程度呈正相关(P<0.01),而p27kipl阳性表达与肝胆管癌分化程度无明显关系。(3)高分化肝胆管癌与肝胆管结石症胆管组织不典型增生两组间cyclin D1和p27kipl的表达差异无显著性(P>0.05),而ki-67表达差异有显著性(P<0.01)。(4)结石合并肝胆管癌与肝胆管结石症组织中,cyclin D1阳性分级表达与ki-67抗原表达呈正相关,Kandell相关分析有极显著意义(P<0.001)。(5)结石合并肝胆管癌及肝胆管结石症组织中,p27kipl阳性表达与ki-67抗原表达呈负相关,Kandell相关分析有显著意义(P<0.05)。(6)结石合并肝胆管癌及肝胆管结石症组织中p27kipl与cyclin D1表达呈负相关,Kandell相关分析有显著意义(P<0.001)。(7)多因素分析肝胆管结石症发生肝胆管癌的可能影响因素,ki-67抗原、结石病史长短、p27kipl、cyclin D1对肝胆管结石症并发肝胆管癌有显著影响(P<0.05)。 结论 肝胆管结石与肝胆管癌有密切联系,胆管上皮癌变过程从单纯增生、不典型增生发展到癌,其中不典型增生属癌前病变。cyclin D1可强烈促进胆管上皮细胞的增殖,其表达异常增高可能参与了肝胆管结石并发肝胆管癌的过程;缺乏p27kipl表达的肝胆管结石合并肝胆管癌上皮细胞常伴有cyclin D1和增殖指标ki-67的表达增高。由于细胞躲避了细胞周期调控系统G1/S转换过程中p27kipl的有效抑制,导致细胞恶性增殖和浸润。检测肝胆管结石症手术切除标本中cyclin D1、p27kipl、ki-67抗原表达情况有助于观察肝胆管结石病变的进展情况。
, 百拇医药
关键词 肝胆管癌; 肝胆管结石; 细胞周期素; p27kipl; ki-67抗原; 免疫组织化学
(现在福建医科大学附属协和医院)
风心病人体外循环围术期炎性介质水平的改变及抑肽酶的影响
硕士研究生 林 潮
专 业 外科学(心脏外科)
导 师 廖崇先 主任医师、教授, 陈道中 主任医师、副教授
体外循环(CPB)过程中诸多非生理因素可诱发机体产生全身性非细菌性炎症反应(又称系统性炎症反应综合征,SIRS)。目前CPB诱发SIRS的机制和防治正在不断的认识和进展中。 目的 于CPB过程中应用抑肽酶(aprotinin),观察风湿性心脏瓣膜病病人CPB围术期不同时段炎性介质水平的改变,探讨作用机制。 方法 以拟行心内直视手术的风湿性心脏瓣膜病病人为研究对象,选取30例术前相关条件相似的病人,随机分为对照组和抑肽酶组(n=15)。抑肽酶组于CPB开始之前一次性在预充液中加入抑肽酶(5万U/kg),分别于转流前、转流毕、CPB后4 h、24 h、72 h共5个时间段抽取静脉血。测定补体C3a、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素10(IL-10)、血栓素B2(TXB2)。转流前、术后4 h的部分血样通过流式细胞仪测定粘附分子CD11/CD18比值(CR3)。 结果 (1)CPB后血液中的炎性介质水平较CPB前增高(P<0.05);(2)围术期抑肽酶组补体C3a水平与对照组比较差异无显著性(P>0.05);(3)CPB后抑肽酶组IL-6、TNF、TXB2、CR3水平较对照组显著降低(P<0.01);(4)抑肽酶组抗炎因子IL-10的水平较对照组升高明显(P<0.01)。 结论 (1)CPB可导致血液中多级炎症介质水平明显增高,是诱发SIRS的重要因素;(2)CPB期间应用抑肽酶可明显降低CPB后血液中多级促炎介质水平,增高抗炎因子IL-10的水平,但对补体系统环节无明显影响;(3)CPB围术期应用抑肽酶具抗炎意义。
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关键词 抑肽酶; 体外循环; 炎症介质; 炎症反应
(现在福建医科大学附属协和医院)
异丙酚、异氟醚对自发性高血压大鼠心脏β-肾上腺素能受体/腺苷酸环化酶
系统和血浆神经肽Y、心钠素的影响硕士研究生 张永洪
专 业 麻醉学
导 师 林财珠 主任医师、副教授, 杨锡馨 主任医师、教授
异丙酚和异氟醚是临床常用的麻醉药,都有明显的心血管抑制效应,作用机制不清楚。临床高血压病人手术麻醉时维持血流动力学稳定十分重要。 目的 观察异丙酚和异氟醚麻醉时自发性高血压大鼠(SHR)心脏β-肾上腺素能受体(β-AR)及其亚型、腺苷酸环化酶(AC)及血浆心钠素(ANP)、神经肽Y(NPY)的变化,探讨异丙酚和异氟醚对SHR心血管影响的机制,指导临床麻醉过程中对高血压病人的合理用药。 方法 成年SHR 40只,随机分为5组(n＝8):空白对照组、异氟醚1.0MAC组、异氟醚1.5MAC组、异丙酚5 mg/kg(低剂量,L组),异丙酚12 mg/kg(高剂量,H组)。麻醉期间观察SHR血压和心率。放射性配基法测心脏β-AR及其亚型,用LIGAND软件分析β-AR密度及亚型比例。用放射免疫法测定cAMP、ANP和NPY。AC活性用cAMP间接表示。 结果 与对照组比较,(1)异氟醚和异丙酚麻醉都可使SHR血压明显下降(P<0.05),异氟醚使心率明显增加(P<0.05),而异丙酚组心率变化不明显(P>0.05)。(2)SHR心脏共存β1、β2两种受体,两者比例为76∶24。(3)异丙酚L组Bmax值降低(P<0.05)而KD值不变(P>0.05)。H组Bmax值和KD值都降低(P<0.05),两组中β1比例增高。异氟醚1.0MAC组和1.5MAC组中Bmax值和KD值不变(P>0.05),β1与β2比例不变。(4)异丙酚L组心脏AC活性明显降低(P<0.05),H组活性显著降低(P<0.01)。而异氟醚组AC活性无变化(P>0.05)。(5)异氟醚两组NPY、ANP增高(P<0.05),异丙酚两组NPY降低(P<0.05),但ANP无变化(P>0.05)。 结论 (1)异丙酚和异氟醚以剂量依赖性方式抑制心血管系统;(2)异丙酚影响SHR心脏β-AR/AC系统和NPY分泌,但对ANP影响不明显;(3)异氟醚对SHR心脏β-AR/AC系统无影响,但NPY和ANP增高(P<0.05)。推测异丙酚抑制心脏的作用机制部分是通过改变β-AR/AC系统,而异氟醚作用则可能与改变内分泌有关。
关键词 异丙酚; 异氟醚; β-肾上腺素能受体; 腺苷酸环化酶; 心钠素; 神经肽Y; 自发性高血压大鼠
(现在福建医科大学附属第一医院), http://www.100md.com
单位：
关键词：
福建医科大学学报000345
脂质体介导转染bcl-2反义核酸进入HL60细胞的动力学模式
和生物学效应硕士研究生 朱元贵
专 业 临床检验诊断学(血液学)
导 师 卓光生 主任医师, 陈志哲 教授, 胡建达 副教授
bcl-2基因是重要的抗凋亡和耐药基因,在造血系统恶性肿瘤细胞中普遍高表达。利用bcl-2反义核酸有望抑制bcl-2基因的表达,促进细胞凋亡,提高肿瘤对化疗的敏感性。 目的 应用阳离子脂质体介导或寡核苷酸直接转染技术,建立HL60细胞摄入荧光素标记的bcl-2寡核苷酸的动力学模式,研究脂质体介导下bcl-2反义核酸对HL60细胞的生物学效应,初步探讨脂质体的生物学作用。 方法 应用荧光素标记的寡核苷酸,凝胶电泳观察脂质体寡核苷酸复合物的形成,流式细胞仪测定细胞内的平均荧光强度和bcl-2蛋白的表达,荧光显微镜观察细胞内荧光物质的分布,3H-TdR掺入法和MTT法检测HL60细胞的生长,RT-PCR法检测细胞内bcl-2 mRNA的表达水平。 结果 (1)当脂质体与寡核苷酸的质量比合适时,两者可形成复合物。(2)脂质体介导转染法显著提高HL60细胞对寡核苷酸的摄入,当脂质体与寡核苷酸的质量比(μg/μg)为2.0/1时,细胞内相对平均荧光强度可达寡核苷酸直接转染时的40倍,而且HL60细胞对寡核苷酸的摄入与其浓度和作用时间有关,未标记的寡核苷酸竞争性抑制细胞对标记寡核苷酸的摄取。(2)细胞内的寡核苷酸可向胞外转运,脂质体介导转染后,胞内荧光强度衰减缓慢,t1/2约为4 h,而寡核苷酸直接作用后,t1/2约为0.5 h;(3)脂质体介导转染4 h后,细胞内荧光物质主要以明亮的点状聚集在细胞核和细胞浆的部分细胞器中,而寡核苷酸直接转染时,荧光物质则弥漫分布于胞浆中。(3)细胞的增殖活性影响细胞对寡核苷酸的摄取。(4)阳离子脂质体可减少寡核苷酸产生一定生物学效应时的剂量,在脂质体与寡核苷酸质量比优化选择下,1.0 mol的反义核酸可抑制HL60细胞的生长,下调bcl-2蛋白和mRNA的表达水平。 结论 (1)阳离子脂质体可以增加寡核苷酸的细胞摄入,改变其胞内分布,可能是阳离子脂质体增加bcl-2反义核酸生物活性的重要原因。(2)bcl-2反义核酸可通过下调bcl-2 mRNA和/或蛋白表达水平而发挥生物学效应。
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关键词 寡核苷酸,反义; 阳离子脂质体; HL60细胞; bcl-2基因; 基因转染
(现在福建医科大学附属协和医院)
心肌细胞外基质与高血压大鼠左心室肥厚的关系硕士研究生
陈水龙
专 业 内科学(心血管疾病)
导 师 吴可贵 教授, 谢良地 副教授
目的 探讨苯那普利治疗后自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞外基质(FN、LN、Ⅳ型胶原)的变化,心肌成纤维细胞产生细胞外基质的调控机制及其在左心室肥厚发生中的可能作用。 方法 (1)雄性SHR(n=21),从10周龄起分别给予苯那普利3,10,30 mg*kg-1*d-1治疗16周,年龄、性别配对的SHR和Wistar(WKY)大鼠作对照。测量收缩压(SBP)、左心室重量(WM);血浆纤维粘连蛋白(FN)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和尿蛋白(UP);放射免疫法测定左心室组织血管紧张素(AngⅡ)浓度;紫外分光光度法测定血浆和左心室组织血管紧张素转换酶(ACE)活性;免疫组织化学染色结合计算机图像分析方法测定左心室心肌细胞外基质(FN、层粘连蛋白/LN、Ⅳ型胶原/ColⅣ)和转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。(2)以来源于12周龄的SHR和WKY大鼠的培养心肌成纤维细胞(CFb)为模型,观察三种生长活性因子[AngⅡ、TGF-β1、血小板源生长因子(PDGF)]对CFb增殖、胶原合成的影响;苯那普利和洛沙坦对CFb增殖、胶原合成的影响;FN对CFb增殖、胶原合成和DNA合成的影响。 结果 (1)与未治疗SHR相比,苯那普利呈剂量依赖性降低SHR的血压和心体比(LVM/BW)。苯那普利治疗对大鼠的Scr无影响,BUN和尿蛋白显著降低。高剂量(30 mg*kg-1*d-1)治疗降低SHR血浆中的FN含量(101±19.1 vs 122±11 mg*L-1,P<0.05)。苯那普利治疗降低SHR左心室组织局部AngⅡ浓度和ACE活性。SHR左心室中的FN、LN、ColⅣ和TGF-1含量均显著高于WKY(FN:16.9%±3.8% vs 9.2%±2.9%,P<0.01; LN:16.3%±2.9% vs 10.2%±1.5%,P<0.01; ColⅣ:13.7%±1.2% vs 8.2%±0.9%,P<0.01; TGF-β1:5435±622 vs 2462±554 IOD,P<0.01)。长期苯那普利治疗后,三种ECM和TGF-β1的含量不同程度减少。(2)无血清(0.4%FCS)条件下,各种浓度的AngⅡ(10-10～10-6mol/L)和苯那普利(10-9～10-5mol/L)对CFb的增殖无影响,PDGF(3,10,30 ng*ml-1)和TGF-β1(1,3,10 ng*ml-1)呈浓度依赖性促进两种来源的CFB增殖;在10%FCS条件下,FN可促进两种CFb的增殖(SHR 3.75±0.57 vs 2.29±0.29×104 cell*ml-1,P<0.01;WKY 2.42±0.44 vs 1.42±0.2×104 cell*ml-1,P<0.01)。AngⅡ、TGF-β1和PDGF呈浓度依赖性促进CFb的胶原合成。苯那普利抑制CFb的胶原合成,洛沙坦(10-10～10-6mol/L)呈浓度依赖性抑制10-7mol/L AngⅡ诱导的CFb胶原合成。FN显著促进CFb的DNA合成和胶原合成,SHR的CFb对上述各种因子的反应性高于WKY大鼠。 结论 苯那普利延缓SHR高血压左心室肥厚的发展,同时减少左心室中增生的细胞外基质(FN、LN、Col Ⅳ)和TGF-β1。CFb的增殖和胶原合成受AngⅡ、TGF-β1、PDGF和FN的调控。
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关键词 细胞外基质; 高血压; 左心室肥厚; 苯那普利; 血管紧张素Ⅱ; 心肌成纤维细胞; 洛沙坦; 自发性高血压大鼠
(现在福建医科大学附属第一医院)
一氧化氮诱导弓形虫速殖子凋亡及其钙信号机制硕士研究生
林 京
专 业 病原生物学
导 师 林建银 教授, 郑志, 章 涛 副教授
目的 探讨一氧化氮(NO)能否诱导弓形虫速殖子凋亡以及Ca2+信号传导途径是否参与NO诱导的虫体凋亡。 方法 采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的缺口末端标记法(TUNEL)、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳检测凋亡以及应用Fura-2荧光负载技术测定胞浆游离钙浓度[Ca2+]i。 结果 (1)TUNEL标记法检测表明NO供体亚硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO,SNP]可诱导弓形虫速殖子凋亡,并呈剂量和时间依赖性。(2)NO清除剂,N-乙酰半胱氨酸能明显抑制SNP诱导的速殖子凋亡,而不含NO的SNP类似物,K3Fe(CN)6不能诱导速殖子凋亡。(3)透射电镜下见SNP处理的速殖子具有凋亡的典型形态学特征:核染色质凝集,核固缩,凋亡小体形成。(4)琼脂糖凝胶电泳显示SNP处理的速殖子DNA片段呈现凋亡特征性的梯形条带。(5)静息状态下弓形虫速殖子胞浆游离钙[Ca2+]i为108.49±4.87 nmol/L(n=15)。(6)SMP诱导速殖子凋亡过程胞浆[Ca2+]i明显升高并呈剂量和时间依赖性。(7)N-乙酰半胱氨酸能明显抑制SNP诱导的速殖子胞浆[Ca2+]i升高,而K3Fe(CN)6不能诱导速殖子胞浆[Ca2+]i升高。(8)胞外钙螯合剂EGTA,和L型电压依赖性钙通道阻滞剂,维拉帕米完全或部分抑制SNP引起的速殖子胞浆[Ca2+]i升高,同时也明显抑制SNP诱导的速殖子凋亡。 结论 (1)从形态学和生化特征证明NO的供体SNP可诱导弓形虫速殖子凋亡,表明NO可通过诱导弓形虫速殖子凋亡而发挥其抗弓形虫感染作用。(2)NO诱导的弓形虫速殖子凋亡主要通过促进胞外钙内流,胞浆[Ca2+]i升高所致。(3)从细胞和分子水平阐述NO在抗弓形虫感染中的作用机制,为设计弓形虫病的免疫预防和临床治疗方案提供理论和实验依据。
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关键词 一氧化氮; 刚地弓形虫; 细胞凋亡; 钙
(现在福建医科大学生物化学教研室)
肝胆管结石合并肝胆管癌cyclin D1、p27kipl、ki-67的表达及意义硕士研究生
周浩辉
专 业 外科学(肝胆外科)
导 师 黄长玉、 殷凤峙 教授
目的 通过研究肝胆管结石合并肝胆管癌和肝胆管结石症组织中cyclin D1和p27kipl及ki-67表达,探讨肝胆管结石与合并肝胆管癌之间的关系,以及临床应用价值。 方法 以32例肝胆管结石合并肝胆管癌患者为研究对象,49例肝胆管结石症作为对照,将各例手术切除标本的石蜡组织块重新作4 μm切片,应用免疫组织化学SP法检测cyclin D1、p27kipl和ki-67表达。 结果 (1)在正常胆管组织、肝胆管结石胆管上皮呈单纯增生、不典型增生,肝胆管结石合并肝胆管癌及癌旁组织各组中ki-67抗原平均指数、cyclin D1阳性分级表达均呈现正常<单纯增生<不典型增生<癌,而p27kipl阳性表达分级呈现正常>单纯增生>不典型增生>癌,经统计学分析均有显著意义(P<0.001)。(2)结石合并肝胆管癌组织中ki-67抗原、cyclin D1表达与肝胆管癌分化程度呈正相关(P<0.01),而p27kipl阳性表达与肝胆管癌分化程度无明显关系。(3)高分化肝胆管癌与肝胆管结石症胆管组织不典型增生两组间cyclin D1和p27kipl的表达差异无显著性(P>0.05),而ki-67表达差异有显著性(P<0.01)。(4)结石合并肝胆管癌与肝胆管结石症组织中,cyclin D1阳性分级表达与ki-67抗原表达呈正相关,Kandell相关分析有极显著意义(P<0.001)。(5)结石合并肝胆管癌及肝胆管结石症组织中,p27kipl阳性表达与ki-67抗原表达呈负相关,Kandell相关分析有显著意义(P<0.05)。(6)结石合并肝胆管癌及肝胆管结石症组织中p27kipl与cyclin D1表达呈负相关,Kandell相关分析有显著意义(P<0.001)。(7)多因素分析肝胆管结石症发生肝胆管癌的可能影响因素,ki-67抗原、结石病史长短、p27kipl、cyclin D1对肝胆管结石症并发肝胆管癌有显著影响(P<0.05)。 结论 肝胆管结石与肝胆管癌有密切联系,胆管上皮癌变过程从单纯增生、不典型增生发展到癌,其中不典型增生属癌前病变。cyclin D1可强烈促进胆管上皮细胞的增殖,其表达异常增高可能参与了肝胆管结石并发肝胆管癌的过程;缺乏p27kipl表达的肝胆管结石合并肝胆管癌上皮细胞常伴有cyclin D1和增殖指标ki-67的表达增高。由于细胞躲避了细胞周期调控系统G1/S转换过程中p27kipl的有效抑制,导致细胞恶性增殖和浸润。检测肝胆管结石症手术切除标本中cyclin D1、p27kipl、ki-67抗原表达情况有助于观察肝胆管结石病变的进展情况。
, 百拇医药
关键词 肝胆管癌; 肝胆管结石; 细胞周期素; p27kipl; ki-67抗原; 免疫组织化学
(现在福建医科大学附属协和医院)
风心病人体外循环围术期炎性介质水平的改变及抑肽酶的影响
硕士研究生 林 潮
专 业 外科学(心脏外科)
导 师 廖崇先 主任医师、教授, 陈道中 主任医师、副教授
体外循环(CPB)过程中诸多非生理因素可诱发机体产生全身性非细菌性炎症反应(又称系统性炎症反应综合征,SIRS)。目前CPB诱发SIRS的机制和防治正在不断的认识和进展中。 目的 于CPB过程中应用抑肽酶(aprotinin),观察风湿性心脏瓣膜病病人CPB围术期不同时段炎性介质水平的改变,探讨作用机制。 方法 以拟行心内直视手术的风湿性心脏瓣膜病病人为研究对象,选取30例术前相关条件相似的病人,随机分为对照组和抑肽酶组(n=15)。抑肽酶组于CPB开始之前一次性在预充液中加入抑肽酶(5万U/kg),分别于转流前、转流毕、CPB后4 h、24 h、72 h共5个时间段抽取静脉血。测定补体C3a、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素10(IL-10)、血栓素B2(TXB2)。转流前、术后4 h的部分血样通过流式细胞仪测定粘附分子CD11/CD18比值(CR3)。 结果 (1)CPB后血液中的炎性介质水平较CPB前增高(P<0.05);(2)围术期抑肽酶组补体C3a水平与对照组比较差异无显著性(P>0.05);(3)CPB后抑肽酶组IL-6、TNF、TXB2、CR3水平较对照组显著降低(P<0.01);(4)抑肽酶组抗炎因子IL-10的水平较对照组升高明显(P<0.01)。 结论 (1)CPB可导致血液中多级炎症介质水平明显增高,是诱发SIRS的重要因素;(2)CPB期间应用抑肽酶可明显降低CPB后血液中多级促炎介质水平,增高抗炎因子IL-10的水平,但对补体系统环节无明显影响;(3)CPB围术期应用抑肽酶具抗炎意义。
, http://www.100md.com
关键词 抑肽酶; 体外循环; 炎症介质; 炎症反应
(现在福建医科大学附属协和医院)
异丙酚、异氟醚对自发性高血压大鼠心脏β-肾上腺素能受体/腺苷酸环化酶
系统和血浆神经肽Y、心钠素的影响硕士研究生 张永洪
专 业 麻醉学
导 师 林财珠 主任医师、副教授, 杨锡馨 主任医师、教授
异丙酚和异氟醚是临床常用的麻醉药,都有明显的心血管抑制效应,作用机制不清楚。临床高血压病人手术麻醉时维持血流动力学稳定十分重要。 目的 观察异丙酚和异氟醚麻醉时自发性高血压大鼠(SHR)心脏β-肾上腺素能受体(β-AR)及其亚型、腺苷酸环化酶(AC)及血浆心钠素(ANP)、神经肽Y(NPY)的变化,探讨异丙酚和异氟醚对SHR心血管影响的机制,指导临床麻醉过程中对高血压病人的合理用药。 方法 成年SHR 40只,随机分为5组(n＝8):空白对照组、异氟醚1.0MAC组、异氟醚1.5MAC组、异丙酚5 mg/kg(低剂量,L组),异丙酚12 mg/kg(高剂量,H组)。麻醉期间观察SHR血压和心率。放射性配基法测心脏β-AR及其亚型,用LIGAND软件分析β-AR密度及亚型比例。用放射免疫法测定cAMP、ANP和NPY。AC活性用cAMP间接表示。 结果 与对照组比较,(1)异氟醚和异丙酚麻醉都可使SHR血压明显下降(P<0.05),异氟醚使心率明显增加(P<0.05),而异丙酚组心率变化不明显(P>0.05)。(2)SHR心脏共存β1、β2两种受体,两者比例为76∶24。(3)异丙酚L组Bmax值降低(P<0.05)而KD值不变(P>0.05)。H组Bmax值和KD值都降低(P<0.05),两组中β1比例增高。异氟醚1.0MAC组和1.5MAC组中Bmax值和KD值不变(P>0.05),β1与β2比例不变。(4)异丙酚L组心脏AC活性明显降低(P<0.05),H组活性显著降低(P<0.01)。而异氟醚组AC活性无变化(P>0.05)。(5)异氟醚两组NPY、ANP增高(P<0.05),异丙酚两组NPY降低(P<0.05),但ANP无变化(P>0.05)。 结论 (1)异丙酚和异氟醚以剂量依赖性方式抑制心血管系统;(2)异丙酚影响SHR心脏β-AR/AC系统和NPY分泌,但对ANP影响不明显;(3)异氟醚对SHR心脏β-AR/AC系统无影响,但NPY和ANP增高(P<0.05)。推测异丙酚抑制心脏的作用机制部分是通过改变β-AR/AC系统,而异氟醚作用则可能与改变内分泌有关。
关键词 异丙酚; 异氟醚; β-肾上腺素能受体; 腺苷酸环化酶; 心钠素; 神经肽Y; 自发性高血压大鼠
(现在福建医科大学附属第一医院), http://www.100md.com