髓母细胞瘤PCNA和c-erbB-2表达与预后关系的研究
作者：姜曙 鞠延 毛伯镛 张尚福
单位：华西医科大学附属第一医院神经外科 成都 610041
关键词：髓母细胞瘤；PCNA；c-erbB-2；预后
华西医学000344摘要：目的：探讨PCNA和c-erbB-2表达与髓母细胞瘤病人预后的关系。方法：应用免疫组化(SP法)结合临床随访，检测PCNA和c-erbB-2在62例PCNA和c-erbB-2组织和10例正常脑组织中的表达并分析其与病人预后的关系。结果：在62例髓母细胞瘤组织中，PCNA表达明显增强，且表达水平不一，其中45例PCNA表达阳性(增殖指数≥25%)。43例有c-erbB-2表达，其中22例c-erbB-2表达阳性(阳性细胞百分率≥5%)；随访资料分析显示，PCNA和c-erbB-2表达阳性者的平均生存时间较其表达阴性者低，预后差。结论：PCNA和c-erbB-2在髓母细胞瘤中表达明显增强，其阳性表达可做为髓母细胞瘤患者预后判断的指标。
, http://www.100md.com
[中图分类号]R730.264；R329.2+8 [文献标识码]B
[文章编号]1002-0179(2000)03-0339-02
Analysis PCNA and c-erB-2 Expression in Medulloblastoma：Relationships and Prognostic Value
JIANG Shu,JU Yan,MAO Bo-yong,et al.
髓母细胞瘤是中枢神经系统常见的、高度恶性的儿童易患肿瘤，因其复发率高、预后差、治愈率低而受到临床重视，但目前对该肿瘤的治疗尚缺乏可靠的预后判断指标〔1〕。肿瘤细胞分子生物学理论和技术的发展推动了肿瘤的临床诊断、治疗和预后判断，研究表明，异常增殖是恶性肿瘤细胞区别于正常组织细胞的重要生物学特征，细胞增殖活性与肿瘤的生物学行为密切相关，细胞增殖动力学指标检测对指导临床肿瘤治疗和预后判断具有重要意义〔2〕。有关增殖细胞核抗原PCNA和原癌基因c-erbB-2表达与髓母细胞瘤预后关系的研究，国外研究极少，国内尚未见报道。本研究应用免疫组化技术检测髓母细胞瘤组织PCNA和c-erbB-2的表达，分析其与临床预后的关系，以期为髓母细胞瘤的临床治疗和预后判断提供理论和实验依据。
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表1.PCNA和c-erbB-2表达阳性和阴性组间的生存期比较 PCNA及(c-erbB-2)阳性细胞百分率
生存期均数(月)
标准差(月)
阴性组<25%(5%)
44.70(31.46)
20.49(19.99)
阳性组≥25%(5%)
4.93(14.93)
3.71(12.54)
PCNA及c-erbB-2两组间生存期分别经t检验，P<0.01，认为两组有显著差异。
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1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 标本及来源 62例髓母细胞瘤石蜡标本均为华西医科大学附一院手术切除的病理标本，并经本院病理科复检确诊，随访资料完全；另有10例正常脑组织。所有标本均制成5μm切片备用。
1.1.2 试剂 PCNA和c-erbB-2单克隆抗体(鼠抗人)均为DAKO公司产品，生物素标记羊抗鼠IgG二抗为ZYMED公司产品，SP试剂盒和DAB显色剂购自北京中山生物技术公司。
1.2 方法 免疫组化SP法：将石蜡切片裱于玻片上并固定之，切片经脱蜡水化后先后用3%H2O2和PBS浸泡，血清封闭；去除血清后先后加1∶100稀释的一抗和1∶500稀释的二抗，再滴加1∶200稀释的SP(均37℃孵育30分钟)；DAB显色，适时终止，苏木素复染后封片。
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以PBS替代一抗作为阴性对照，以PCNA阳性表达的扁桃体组织标本和c-erbB-2染色阳性的肺癌标本作为阳性对照。
结果判断：细胞核内呈现棕黄色颗粒或弥漫分布者为PCNA表达阳性细胞；胞膜和胞浆呈现棕黄色颗粒者为c-erbB-2表达阳性细胞。每例肿瘤切片随机观察10个高倍视野(×400)，计数1000个肿瘤细胞中的阳性细胞数，取其平均数计算阳性细胞百分率。PCNA阳性细胞百分率(增殖指数)≥25%的标本计为PCNA表达阳性，<25%者计为阴性；c-erbB-2阳性细胞百分率≥5%的标本计为c-erbB-2表达阳性，<5%者计为阴性。
1.3 统计分析 采用t检验分析PCNA和c-erbB-2阳性与阴性组间生存期关系。
2 结果
2.1 髓母细胞瘤和正常脑组织PCNA表达 镜下可见PCNA阳性显色定位于细胞核，呈棕黄色颗粒或弥漫分布。
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正常脑组织PCNA表达极少，10例均为阴性，PCNA指数平均为0.27%。62例肿瘤组织PCNA表达明显增强，但其表达强度不一，增殖指数最高者为80.4%，最低者为0，PCNA增殖指数平均为27.4%，其中45例PCNA表达阳性(增殖指数≥25%)。
2.2 髓母细胞瘤c-erbB-2表达 镜下可见c-erbB-2阳性显色定位于胞膜和胞浆，呈棕黄色颗粒。
62例肿瘤标本中有43例存在c-erbB-2阳性细胞(69.4%)，而其中22例标本c-erbB-2表达阳性(阳性细胞百分率≥5%)。
2.3 PCNA和c-erbB-2表达与生存期分析 结合随访资料，用t检验分析PCNA和c-erbB-2的不同表达与病人生存期的相关性，结果见表1。
3 讨论
, http://www.100md.com 细胞增殖指标的检测和研究对探讨肿瘤生物学特性、指导临床治疗和预后判断等具有重要意义。目前用以评价细胞增殖能力的方法很多，各具优缺点，如流式细胞仪分析细胞周期分布和DNA含量、Brdu标记法、3H-TdR和125IudR掺入法分别检测DNA和蛋白合成能力〔2〕。
增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化检测是一种评价细胞增殖能力的可靠方法〔3〕。PCNA是DNA多聚酶σ的辅助蛋白，可与P21、Cychlin和CDKs形成四元复合体参与DNA合成，促进细胞从G1期进入S期，从而调控细胞周期和细胞增殖。研究表明，PCNA在增殖活跃的正常组织亦有表达，恶性肿瘤组织PCNA表达明显增强，其含量的增加可反映细胞增殖活性，且与细胞恶性程度呈正相关。Katsetos等研究发现，髓母细胞瘤PCNA表达与细胞分化有关，分化不良的髓母细胞瘤中PCNA表达高达46.4%〔4〕。另外，Del Bino报道，非何杰金氏淋巴瘤病人化疗前后PCNA检测可作为判断肿瘤化疗疗效的指标，为临床治疗提供依据〔5〕。本研究结果表明，正常脑组织PCNA表达均为阴性，平均增殖指数为0.28%，而髓母细胞瘤组织标本PCNA表达水平明显增强，且在不同标本之间PCNA表达水平差异较大，其增殖指数最高为80.4%，最低为0。经统计分析，45例PCNA表达阳性(增殖指数≥25%)者生存期明显缩短，PCNA是一个重要的危险因素和临床预后指标。
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原癌基因c-erbB-2定位于17号染色体长臂(17q)，属生长因子受体类原癌基因，其产物具有酪氨酸激酶活性，研究表明，c-erbB-2基因异常表达(主要为基因扩增)与人类许多肿瘤发生密切相关(如乳腺癌、卵巢癌等)，且对乳腺癌预后判断有重要意义；髓母细胞瘤常见17q染色体异常、c-erbB-2高表达〔6〕，提示c-erbB-2异常表达与髓母细胞瘤发生发展有关，有可能作为预后判断的指标〔7〕。本研究结果提示，髓母细胞瘤中43例显示c-erbB-2阳性细胞，结合随访资料统计分析，其中22例标本c-erbB-2表达阳性者(阳性细胞百分率≥5%)平均生存时间较c-erbB-2表达阴性者(阳性细胞百分率<5%)明显缩短，其阳性表达可以作为髓母细胞瘤预后不良的判断指标。
我们认为，PCNA和c-erbB-2在髓母细胞瘤呈阳性高表达，且与病人生存期明显相关；PCNA和c-erbB-2检测对髓母细胞瘤预后判断具有重要意义，可作为临床预后判断的指标。
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参考文献
1，Giangaspero F，Cenacchi G，Roncaroli F，et al.Medulloblastoma (Lipidized medulloblastoma prognosis)：a cerebellar neoplasm of adults with favorable.Am J Surg Pathol，1996；20∶656.
2，周丁华：细胞增殖动力学研究的方法学。国外医学肿瘤分册，1995；22(3)∶136。
3，Hall PA，Levison DA，Woods AL，et al.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) immunolocalization in paraffin section：an index of cell prolifeation with evidence of deregulated expression in some neoplasms.J Pathol，1990；162(4)∶285
, 百拇医药
4，Katsetos CD，Krishna L，Frankfurter A，et al.Acytomorphological Scheme of differentiating neuronal phenotypes in cerbellar medulloblastomas based on immunolocalization of Class Ⅲ Beta-tabulin isotyp (beta Ⅲ) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA)/Cyclin.Clin Neuropathol，1995；14(2)∶72.
5，Del Bino G.Morphologial and clinical significance of cell kinetics in non-Hodgekins lymphomas.Basic Appl histoche，1986；30∶197.
6，Bigner SH，Mark J，Friedman HS.Structural chromosomal abnormalities in human medulloblastomas.Cancer Genet Cytogenet，1988；30∶90.
7，Gilbertson RJ，Jaros EB，Perry RH，et al.Prognostic significance of the c-erbB-2 oncogene product in childhood medulloblastoma.Br J Cancer，1995；71∶743.
(收稿日期：2000-03-20), http://www.100md.com
单位：华西医科大学附属第一医院神经外科 成都 610041
关键词：髓母细胞瘤；PCNA；c-erbB-2；预后
华西医学000344摘要：目的：探讨PCNA和c-erbB-2表达与髓母细胞瘤病人预后的关系。方法：应用免疫组化(SP法)结合临床随访，检测PCNA和c-erbB-2在62例PCNA和c-erbB-2组织和10例正常脑组织中的表达并分析其与病人预后的关系。结果：在62例髓母细胞瘤组织中，PCNA表达明显增强，且表达水平不一，其中45例PCNA表达阳性(增殖指数≥25%)。43例有c-erbB-2表达，其中22例c-erbB-2表达阳性(阳性细胞百分率≥5%)；随访资料分析显示，PCNA和c-erbB-2表达阳性者的平均生存时间较其表达阴性者低，预后差。结论：PCNA和c-erbB-2在髓母细胞瘤中表达明显增强，其阳性表达可做为髓母细胞瘤患者预后判断的指标。
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[中图分类号]R730.264；R329.2+8 [文献标识码]B
[文章编号]1002-0179(2000)03-0339-02
Analysis PCNA and c-erB-2 Expression in Medulloblastoma：Relationships and Prognostic Value
JIANG Shu,JU Yan,MAO Bo-yong,et al.
髓母细胞瘤是中枢神经系统常见的、高度恶性的儿童易患肿瘤，因其复发率高、预后差、治愈率低而受到临床重视，但目前对该肿瘤的治疗尚缺乏可靠的预后判断指标〔1〕。肿瘤细胞分子生物学理论和技术的发展推动了肿瘤的临床诊断、治疗和预后判断，研究表明，异常增殖是恶性肿瘤细胞区别于正常组织细胞的重要生物学特征，细胞增殖活性与肿瘤的生物学行为密切相关，细胞增殖动力学指标检测对指导临床肿瘤治疗和预后判断具有重要意义〔2〕。有关增殖细胞核抗原PCNA和原癌基因c-erbB-2表达与髓母细胞瘤预后关系的研究，国外研究极少，国内尚未见报道。本研究应用免疫组化技术检测髓母细胞瘤组织PCNA和c-erbB-2的表达，分析其与临床预后的关系，以期为髓母细胞瘤的临床治疗和预后判断提供理论和实验依据。
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表1.PCNA和c-erbB-2表达阳性和阴性组间的生存期比较 PCNA及(c-erbB-2)阳性细胞百分率
生存期均数(月)
标准差(月)
阴性组<25%(5%)
44.70(31.46)
20.49(19.99)
阳性组≥25%(5%)
4.93(14.93)
3.71(12.54)
PCNA及c-erbB-2两组间生存期分别经t检验，P<0.01，认为两组有显著差异。
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1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 标本及来源 62例髓母细胞瘤石蜡标本均为华西医科大学附一院手术切除的病理标本，并经本院病理科复检确诊，随访资料完全；另有10例正常脑组织。所有标本均制成5μm切片备用。
1.1.2 试剂 PCNA和c-erbB-2单克隆抗体(鼠抗人)均为DAKO公司产品，生物素标记羊抗鼠IgG二抗为ZYMED公司产品，SP试剂盒和DAB显色剂购自北京中山生物技术公司。
1.2 方法 免疫组化SP法：将石蜡切片裱于玻片上并固定之，切片经脱蜡水化后先后用3%H2O2和PBS浸泡，血清封闭；去除血清后先后加1∶100稀释的一抗和1∶500稀释的二抗，再滴加1∶200稀释的SP(均37℃孵育30分钟)；DAB显色，适时终止，苏木素复染后封片。
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以PBS替代一抗作为阴性对照，以PCNA阳性表达的扁桃体组织标本和c-erbB-2染色阳性的肺癌标本作为阳性对照。
结果判断：细胞核内呈现棕黄色颗粒或弥漫分布者为PCNA表达阳性细胞；胞膜和胞浆呈现棕黄色颗粒者为c-erbB-2表达阳性细胞。每例肿瘤切片随机观察10个高倍视野(×400)，计数1000个肿瘤细胞中的阳性细胞数，取其平均数计算阳性细胞百分率。PCNA阳性细胞百分率(增殖指数)≥25%的标本计为PCNA表达阳性，<25%者计为阴性；c-erbB-2阳性细胞百分率≥5%的标本计为c-erbB-2表达阳性，<5%者计为阴性。
1.3 统计分析 采用t检验分析PCNA和c-erbB-2阳性与阴性组间生存期关系。
2 结果
2.1 髓母细胞瘤和正常脑组织PCNA表达 镜下可见PCNA阳性显色定位于细胞核，呈棕黄色颗粒或弥漫分布。
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正常脑组织PCNA表达极少，10例均为阴性，PCNA指数平均为0.27%。62例肿瘤组织PCNA表达明显增强，但其表达强度不一，增殖指数最高者为80.4%，最低者为0，PCNA增殖指数平均为27.4%，其中45例PCNA表达阳性(增殖指数≥25%)。
2.2 髓母细胞瘤c-erbB-2表达 镜下可见c-erbB-2阳性显色定位于胞膜和胞浆，呈棕黄色颗粒。
62例肿瘤标本中有43例存在c-erbB-2阳性细胞(69.4%)，而其中22例标本c-erbB-2表达阳性(阳性细胞百分率≥5%)。
2.3 PCNA和c-erbB-2表达与生存期分析 结合随访资料，用t检验分析PCNA和c-erbB-2的不同表达与病人生存期的相关性，结果见表1。
3 讨论
, http://www.100md.com 细胞增殖指标的检测和研究对探讨肿瘤生物学特性、指导临床治疗和预后判断等具有重要意义。目前用以评价细胞增殖能力的方法很多，各具优缺点，如流式细胞仪分析细胞周期分布和DNA含量、Brdu标记法、3H-TdR和125IudR掺入法分别检测DNA和蛋白合成能力〔2〕。
增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化检测是一种评价细胞增殖能力的可靠方法〔3〕。PCNA是DNA多聚酶σ的辅助蛋白，可与P21、Cychlin和CDKs形成四元复合体参与DNA合成，促进细胞从G1期进入S期，从而调控细胞周期和细胞增殖。研究表明，PCNA在增殖活跃的正常组织亦有表达，恶性肿瘤组织PCNA表达明显增强，其含量的增加可反映细胞增殖活性，且与细胞恶性程度呈正相关。Katsetos等研究发现，髓母细胞瘤PCNA表达与细胞分化有关，分化不良的髓母细胞瘤中PCNA表达高达46.4%〔4〕。另外，Del Bino报道，非何杰金氏淋巴瘤病人化疗前后PCNA检测可作为判断肿瘤化疗疗效的指标，为临床治疗提供依据〔5〕。本研究结果表明，正常脑组织PCNA表达均为阴性，平均增殖指数为0.28%，而髓母细胞瘤组织标本PCNA表达水平明显增强，且在不同标本之间PCNA表达水平差异较大，其增殖指数最高为80.4%，最低为0。经统计分析，45例PCNA表达阳性(增殖指数≥25%)者生存期明显缩短，PCNA是一个重要的危险因素和临床预后指标。
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原癌基因c-erbB-2定位于17号染色体长臂(17q)，属生长因子受体类原癌基因，其产物具有酪氨酸激酶活性，研究表明，c-erbB-2基因异常表达(主要为基因扩增)与人类许多肿瘤发生密切相关(如乳腺癌、卵巢癌等)，且对乳腺癌预后判断有重要意义；髓母细胞瘤常见17q染色体异常、c-erbB-2高表达〔6〕，提示c-erbB-2异常表达与髓母细胞瘤发生发展有关，有可能作为预后判断的指标〔7〕。本研究结果提示，髓母细胞瘤中43例显示c-erbB-2阳性细胞，结合随访资料统计分析，其中22例标本c-erbB-2表达阳性者(阳性细胞百分率≥5%)平均生存时间较c-erbB-2表达阴性者(阳性细胞百分率<5%)明显缩短，其阳性表达可以作为髓母细胞瘤预后不良的判断指标。
我们认为，PCNA和c-erbB-2在髓母细胞瘤呈阳性高表达，且与病人生存期明显相关；PCNA和c-erbB-2检测对髓母细胞瘤预后判断具有重要意义，可作为临床预后判断的指标。
, http://www.100md.com
参考文献
1，Giangaspero F，Cenacchi G，Roncaroli F，et al.Medulloblastoma (Lipidized medulloblastoma prognosis)：a cerebellar neoplasm of adults with favorable.Am J Surg Pathol，1996；20∶656.
2，周丁华：细胞增殖动力学研究的方法学。国外医学肿瘤分册，1995；22(3)∶136。
3，Hall PA，Levison DA，Woods AL，et al.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) immunolocalization in paraffin section：an index of cell prolifeation with evidence of deregulated expression in some neoplasms.J Pathol，1990；162(4)∶285
, 百拇医药
4，Katsetos CD，Krishna L，Frankfurter A，et al.Acytomorphological Scheme of differentiating neuronal phenotypes in cerbellar medulloblastomas based on immunolocalization of Class Ⅲ Beta-tabulin isotyp (beta Ⅲ) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA)/Cyclin.Clin Neuropathol，1995；14(2)∶72.
5，Del Bino G.Morphologial and clinical significance of cell kinetics in non-Hodgekins lymphomas.Basic Appl histoche，1986；30∶197.
6，Bigner SH，Mark J，Friedman HS.Structural chromosomal abnormalities in human medulloblastomas.Cancer Genet Cytogenet，1988；30∶90.
7，Gilbertson RJ，Jaros EB，Perry RH，et al.Prognostic significance of the c-erbB-2 oncogene product in childhood medulloblastoma.Br J Cancer，1995；71∶743.
(收稿日期：2000-03-20), http://www.100md.com