青皮对大鼠离体子宫平滑肌运动的影响
作者：刘恒 马永明 瞿颂义 丁永辉 卫玉玲
单位：刘恒 马永明 瞿颂义(兰州医学院生理教研室 730000)；丁永辉 卫玉玲(甘肃省药品检验所)
关键词：青皮；离体子宫平滑肌；心得安
中草药000323 摘 要 为了观察青皮水煎剂对人工动情期大鼠离体子宫平滑肌条的作用及探讨其作用机制，我们将子宫平滑肌条悬挂于离体平滑肌灌流肌槽装置内，采用累积加药的方法以观察青皮对肌条自发运动的影响。结果发现青皮水煎剂抑制大鼠离体子宫平滑肌的收缩活动并有剂量依赖性关系；六烃季胺、消炎痛、L-NNA、雷尼替丁未阻断青皮对大鼠离体子宫平滑肌的作用；而心得安可完全阻断青皮的作用。该研究说明，青皮对大鼠离体子宫平滑肌条的抑制作用，可能是通过作用于平滑肌细胞膜的肾上腺素能β受体而实现。
青皮属理气药，为芸香科柑橘属植物橘Citrus reticulata Blanco的干燥 幼果或未成熟果实的外层果皮。《本草图经》记载“主气滞，下食，破积结及膈气”。功能 疏肝破气，散结消滞。已发现青皮对胃肠道平滑肌和膀胱平滑肌都有作用，在不同的平滑肌 上青皮通过不同的受体而起作用[1]。但青皮对子宫平滑肌的影响及其作用机制， 尚未见报道。我们观察青皮对大鼠离体子宫平滑肌条的作用并初步探讨其作用机制。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料：体重200～250 g，健康Wistar雌性大鼠，实验前24 h禁食，饮水不限，并于实 验前72 h sc苯甲酸雌二醇0.5 mg/kg[2]，造成人工动情期，以提高子宫对药物的 敏感性。青皮水煎剂由甘肃省药检所鉴定、制备，为0.1%，0.5%，1%和5%(g/mL)4种浓度 。受体拮抗剂及抑制剂分别为六烃季胺，终浓度为2×10-5 mol/L；消炎痛，pH7.4 溶液，终浓度为2×10-5 mol/L；L-NNA，终浓度为2×10-4 mol/L；雷尼替丁，终浓度为2×10-6 mol/L；心得安，终浓度为2×10-5 mol /L。
1.2 方法：取卵巢及子宫叉处之间的中段子宫角，沿系膜纵轴剖开子宫角[3]， 将其平铺在石蜡盘中，去粘膜层后，取若干条2 mm×5 mm的纵行肌条。将其分别悬挂于盛有 5 mL，37 ℃缓冲液的灌流肌槽中[4]。
, 百拇医药
采用累积加药的方法，青皮依次由低浓度到高浓度各100 μL。当分别加入不同的受体拮抗 剂各100 μL 5 min后，再加入药物观察结果。此后，用37 ℃ Krebs液冲洗多次。药物终 浓度指的是溶于肌槽中5 mL溶液后的浓度。以给药前5 min子宫平滑肌条的收缩波平均振幅 作为对照值，以给药后5 min的数值作为效应值，用变化百分数来表示[变化百分数=(效应 值-对照值)÷对照值×100%]。收缩频率则计算每分钟的收缩波次数。数据以([ AKx-〗+s)表示，作均数的t显著性检验。
2 实验结果
2.1 青皮对大鼠离体子宫平滑肌的作用：见表1。青皮水煎剂明显减小大鼠子宫平滑肌条 的收缩波平均振幅(r=-0.633 6，P<0.001)，减慢收缩频率(r=-0.480 4，P<0.001)，有明显剂量效应关系。对平滑肌条的张力无明显 影响(P<0.05)。
2.2 心得安对青皮效应的影响：见表2。心得安(2×10-5 mol/L)对大鼠子宫平 滑肌张力、收缩波平均振幅和收缩频率无明显影响，5 min后加入青皮水煎剂(2×10-4 g/mL)，青皮减小大鼠子宫平滑肌的收缩波平均振幅，减慢收缩频率的作用被阻断。
, 百拇医药
2.3 其他拮抗剂对青皮效应的影响：见表2。六烃季胺(2×10-5 mol/L)、消炎痛(2 ×10-5 mol/L)、L-NNA(2×10-4 mol/L)和雷尼替丁(2×10 -6 g/mL)，均不影响子宫平滑肌条的收缩活动。5 min后再加青皮水煎剂(2×10 -4 g/mL)，大鼠子宫平滑肌肌条的反应性同单独加青皮水煎剂(2×10-4 g/mL)时的 反应性无明显差别(P均>0.05)。
3 讨论
青皮对胃肠道平滑肌和膀胱平滑肌都有作用，青皮煎剂和青皮注射液能抑制胃肠平滑肌的收 缩，而且兴奋膀胱平滑肌。研究认为对胃肠作用可能通过胆碱能M受体实现，对膀胱可能通 过肾上腺素能表1 青皮水煎剂对大鼠离体子宫平滑肌条收缩波平均振幅和收 缩频率的影响(n=12)
, 百拇医药
对照
青皮(g/mL)
2×10-5
1.2×10-4
3.2×10-4
1.32×10-3
平均振幅
-
1.04±1.99
-6.17±3.52*
-83.71±11.51***
, http://www.100md.com
- 91.30±8.98***
频率(次/分钟)
0.85±0.21
0.75±0.27
0.60±0.35
0.37±0.3 2**
0.23±0.29**
与对照组比较：*P<0.05 **P< 0.01 ***P<0.001表2 拮抗剂加青皮水煎剂(2×10-4 g/mL)对大 鼠子宫平滑肌条收缩频率和收缩波平均振幅的影响 组别
, http://www.100md.com
n
频率(次/分钟)
振幅
加拮抗剂
加青皮
加拮抗剂
加青皮
青皮(Q)(2×10-4 g/mL)
12
0.78±0.16
0.26±0.33***
0
, 百拇医药
- 85.25±10.13***
六烃季胺(2×10-5 mol/L)+Q
12
0.81±0.19
0.28±0.31***
0
-84.22±14.32***
消炎痛(2×10-5 mol/L)+Q
12
0.83±0.19
, http://www.100md.com
0.22±0.30***
0
-89.23±15.42***
L-NNA(2×10-4 mol/L)+Q
12
0.82±0.16
0.40±0.3 8***
0
-82.58±13.08***
雷尼替丁(2×10-6 mol/L)+Q
, 百拇医药
12
0.75±0.27
0.22±0.33***
0
-92.33±9.97***
心得安(2×10-5 mol/L)+Q
12
0.85±0.21
0.83±0.27△△△
0
-1.66±9.37△△△
, http://www.100md.com
与自身加拮抗剂比：***P<0.001； 与青皮组比： △△△P<0.001
α受体而发挥作用[1]。而青皮与子宫平滑肌之间的关系尚未见报道。本 实验结果表明：青皮水煎剂可抑制大鼠离体子宫平滑肌的自发收缩活动，并有剂量依赖性关 系。消炎痛、六烃季胺、雷尼替丁、L-NNA(NO合成抑制剂)不断阻断青皮 水煎剂抑制大鼠离体子宫平滑肌的作用，而心得安可完全阻断青皮水煎剂抑制大鼠离体子宫 平滑肌的作用，从而说明青皮水煎剂对大鼠离体子宫平滑肌条的抑制作用，可能是通过作用 于子宫平滑肌细胞膜的肾上腺素能β受体而实现的。
对于子宫平滑肌来说，刺激肾上腺素能β受体引起子宫平滑肌的松弛，其中β2受体主要 介导产生松弛作用[5]。目前研究指出[6]，无论β1和β2受体，都通 过一个中间媒介G蛋白与腺苷酸环化酶结合，活化的腺苷酸环化酶激活cAMP依赖性激酶，从 而导致cAMP的增加。而cAMP又通过降低肌浆Ca2+浓度而导致松弛作用。有报道[ 8]对于大鼠纵行肌来说，抑制性的肾上腺素能β受体的作用在整个妊娠期间具有优势直 至分娩。本实验同时说明动情期大鼠子宫平滑肌上也存在一定数量的肾上腺素能β受体。
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甘肃省自然科学基金资助项目No.ZR-97-071
刘恒，男，现为兰州大学生命科学学院博士生，已发表论文3篇，从事细胞工程与细胞生物学研究。
马永明，女，医学硕士，副教授。现从事中草药抗早孕方面的研究。曾参与完成甘肃省科委及教委科研课题4项，并分别通过了甘肃省科委科学技术成果鉴定，其中2项分别获国家教委科技进步三等奖和甘肃省科委科学技术进步三等奖。
参考文献
1，李仪奎，等主编.中药药理学.北京：中国中医药出版社，1992：118
2，Samira Y H,et al.Acta Phamacologica Sinica,1997,18(2):97
3，Catherine Y,et al.Am J Obstet Gyneeol,1996,May:1637
, 百拇医药
4，瞿颂义，等.生理学报，1995，47(3)：305
5，bulbring E,et al.Pharmacol Rev,1987,39:49
6，Badia E,et al.Pfluegers Arch,1986,407:670
7，Krall J F,et al.Biochim Biophys Acta,1976,448:578
8，Wray S.Am J Physiol,1993,264:1
(收稿日期：1999-05-30), http://www.100md.com
单位：刘恒 马永明 瞿颂义(兰州医学院生理教研室 730000)；丁永辉 卫玉玲(甘肃省药品检验所)
关键词：青皮；离体子宫平滑肌；心得安
中草药000323 摘 要 为了观察青皮水煎剂对人工动情期大鼠离体子宫平滑肌条的作用及探讨其作用机制，我们将子宫平滑肌条悬挂于离体平滑肌灌流肌槽装置内，采用累积加药的方法以观察青皮对肌条自发运动的影响。结果发现青皮水煎剂抑制大鼠离体子宫平滑肌的收缩活动并有剂量依赖性关系；六烃季胺、消炎痛、L-NNA、雷尼替丁未阻断青皮对大鼠离体子宫平滑肌的作用；而心得安可完全阻断青皮的作用。该研究说明，青皮对大鼠离体子宫平滑肌条的抑制作用，可能是通过作用于平滑肌细胞膜的肾上腺素能β受体而实现。
青皮属理气药，为芸香科柑橘属植物橘Citrus reticulata Blanco的干燥 幼果或未成熟果实的外层果皮。《本草图经》记载“主气滞，下食，破积结及膈气”。功能 疏肝破气，散结消滞。已发现青皮对胃肠道平滑肌和膀胱平滑肌都有作用，在不同的平滑肌 上青皮通过不同的受体而起作用[1]。但青皮对子宫平滑肌的影响及其作用机制， 尚未见报道。我们观察青皮对大鼠离体子宫平滑肌条的作用并初步探讨其作用机制。
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1 材料与方法
1.1 材料：体重200～250 g，健康Wistar雌性大鼠，实验前24 h禁食，饮水不限，并于实 验前72 h sc苯甲酸雌二醇0.5 mg/kg[2]，造成人工动情期，以提高子宫对药物的 敏感性。青皮水煎剂由甘肃省药检所鉴定、制备，为0.1%，0.5%，1%和5%(g/mL)4种浓度 。受体拮抗剂及抑制剂分别为六烃季胺，终浓度为2×10-5 mol/L；消炎痛，pH7.4 溶液，终浓度为2×10-5 mol/L；L-NNA，终浓度为2×10-4 mol/L；雷尼替丁，终浓度为2×10-6 mol/L；心得安，终浓度为2×10-5 mol /L。
1.2 方法：取卵巢及子宫叉处之间的中段子宫角，沿系膜纵轴剖开子宫角[3]， 将其平铺在石蜡盘中，去粘膜层后，取若干条2 mm×5 mm的纵行肌条。将其分别悬挂于盛有 5 mL，37 ℃缓冲液的灌流肌槽中[4]。
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采用累积加药的方法，青皮依次由低浓度到高浓度各100 μL。当分别加入不同的受体拮抗 剂各100 μL 5 min后，再加入药物观察结果。此后，用37 ℃ Krebs液冲洗多次。药物终 浓度指的是溶于肌槽中5 mL溶液后的浓度。以给药前5 min子宫平滑肌条的收缩波平均振幅 作为对照值，以给药后5 min的数值作为效应值，用变化百分数来表示[变化百分数=(效应 值-对照值)÷对照值×100%]。收缩频率则计算每分钟的收缩波次数。数据以([ AKx-〗+s)表示，作均数的t显著性检验。
2 实验结果
2.1 青皮对大鼠离体子宫平滑肌的作用：见表1。青皮水煎剂明显减小大鼠子宫平滑肌条 的收缩波平均振幅(r=-0.633 6，P<0.001)，减慢收缩频率(r=-0.480 4，P<0.001)，有明显剂量效应关系。对平滑肌条的张力无明显 影响(P<0.05)。
2.2 心得安对青皮效应的影响：见表2。心得安(2×10-5 mol/L)对大鼠子宫平 滑肌张力、收缩波平均振幅和收缩频率无明显影响，5 min后加入青皮水煎剂(2×10-4 g/mL)，青皮减小大鼠子宫平滑肌的收缩波平均振幅，减慢收缩频率的作用被阻断。
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2.3 其他拮抗剂对青皮效应的影响：见表2。六烃季胺(2×10-5 mol/L)、消炎痛(2 ×10-5 mol/L)、L-NNA(2×10-4 mol/L)和雷尼替丁(2×10 -6 g/mL)，均不影响子宫平滑肌条的收缩活动。5 min后再加青皮水煎剂(2×10 -4 g/mL)，大鼠子宫平滑肌肌条的反应性同单独加青皮水煎剂(2×10-4 g/mL)时的 反应性无明显差别(P均>0.05)。
3 讨论
青皮对胃肠道平滑肌和膀胱平滑肌都有作用，青皮煎剂和青皮注射液能抑制胃肠平滑肌的收 缩，而且兴奋膀胱平滑肌。研究认为对胃肠作用可能通过胆碱能M受体实现，对膀胱可能通 过肾上腺素能表1 青皮水煎剂对大鼠离体子宫平滑肌条收缩波平均振幅和收 缩频率的影响(n=12)
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对照
青皮(g/mL)
2×10-5
1.2×10-4
3.2×10-4
1.32×10-3
平均振幅
-
1.04±1.99
-6.17±3.52*
-83.71±11.51***
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- 91.30±8.98***
频率(次/分钟)
0.85±0.21
0.75±0.27
0.60±0.35
0.37±0.3 2**
0.23±0.29**
与对照组比较：*P<0.05 **P< 0.01 ***P<0.001表2 拮抗剂加青皮水煎剂(2×10-4 g/mL)对大 鼠子宫平滑肌条收缩频率和收缩波平均振幅的影响 组别
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n
频率(次/分钟)
振幅
加拮抗剂
加青皮
加拮抗剂
加青皮
青皮(Q)(2×10-4 g/mL)
12
0.78±0.16
0.26±0.33***
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- 85.25±10.13***
六烃季胺(2×10-5 mol/L)+Q
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0.81±0.19
0.28±0.31***
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消炎痛(2×10-5 mol/L)+Q
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-89.23±15.42***
L-NNA(2×10-4 mol/L)+Q
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0.82±0.16
0.40±0.3 8***
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-82.58±13.08***
雷尼替丁(2×10-6 mol/L)+Q
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0.75±0.27
0.22±0.33***
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-92.33±9.97***
心得安(2×10-5 mol/L)+Q
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0.85±0.21
0.83±0.27△△△
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-1.66±9.37△△△
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与自身加拮抗剂比：***P<0.001； 与青皮组比： △△△P<0.001
α受体而发挥作用[1]。而青皮与子宫平滑肌之间的关系尚未见报道。本 实验结果表明：青皮水煎剂可抑制大鼠离体子宫平滑肌的自发收缩活动，并有剂量依赖性关 系。消炎痛、六烃季胺、雷尼替丁、L-NNA(NO合成抑制剂)不断阻断青皮 水煎剂抑制大鼠离体子宫平滑肌的作用，而心得安可完全阻断青皮水煎剂抑制大鼠离体子宫 平滑肌的作用，从而说明青皮水煎剂对大鼠离体子宫平滑肌条的抑制作用，可能是通过作用 于子宫平滑肌细胞膜的肾上腺素能β受体而实现的。
对于子宫平滑肌来说，刺激肾上腺素能β受体引起子宫平滑肌的松弛，其中β2受体主要 介导产生松弛作用[5]。目前研究指出[6]，无论β1和β2受体，都通 过一个中间媒介G蛋白与腺苷酸环化酶结合，活化的腺苷酸环化酶激活cAMP依赖性激酶，从 而导致cAMP的增加。而cAMP又通过降低肌浆Ca2+浓度而导致松弛作用。有报道[ 8]对于大鼠纵行肌来说，抑制性的肾上腺素能β受体的作用在整个妊娠期间具有优势直 至分娩。本实验同时说明动情期大鼠子宫平滑肌上也存在一定数量的肾上腺素能β受体。
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甘肃省自然科学基金资助项目No.ZR-97-071
刘恒，男，现为兰州大学生命科学学院博士生，已发表论文3篇，从事细胞工程与细胞生物学研究。
马永明，女，医学硕士，副教授。现从事中草药抗早孕方面的研究。曾参与完成甘肃省科委及教委科研课题4项，并分别通过了甘肃省科委科学技术成果鉴定，其中2项分别获国家教委科技进步三等奖和甘肃省科委科学技术进步三等奖。
参考文献
1，李仪奎，等主编.中药药理学.北京：中国中医药出版社，1992：118
2，Samira Y H,et al.Acta Phamacologica Sinica,1997,18(2):97
3，Catherine Y,et al.Am J Obstet Gyneeol,1996,May:1637
, 百拇医药
4，瞿颂义，等.生理学报，1995，47(3)：305
5，bulbring E,et al.Pharmacol Rev,1987,39:49
6，Badia E,et al.Pfluegers Arch,1986,407:670
7，Krall J F,et al.Biochim Biophys Acta,1976,448:578
8，Wray S.Am J Physiol,1993,264:1
(收稿日期：1999-05-30), http://www.100md.com