实验性糖尿病大鼠血清一氧化氮含量的变化
作者：王莞 马娟 王福青
单位：王莞(牡丹江医学院病生教研室 157011)；马娟(牡丹江医学院病生教研室 157011)；王福青(牡丹江医学院病生教研室 157011)
关键词：实验性糖尿病；一氧化氮；一氧化氮合成酶
黑龙江医药科学000304 提要 目的：研究实验性糖尿病大鼠血清一氧化氮(nitric oxide, NO)含量和一氧化氮合成酶(NO synthetase, NOS)活力的变化，为糖尿病发生机制的研究提供理论依据。方法：用链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)复制糖尿病动物模型，用比色法测定其血清NO含量和NOS活力。结果：糖尿病大鼠血清NO含量和NOS活力，与对照组比较，随病程逐渐增加，在1周内不明显，至第4周时明显升高。结论：在糖尿病晚期，血清NO含量升高，使β细胞损伤加重，糖尿病不易缓解。
Changes in serum nitric oxide content in experimental diabetic rats
Wang Guan, et al
Abstract Objective: To study the changes in the serum nitric oxide (NO) content and the NO synthetase (NOS) activity and to provide the theoretical basis for the pathogenesis, prevention and treatment of diabetes. Methods: Using streptozotocin (STZ) to induce rat diabetic experimental model. The NO content and NOS activity in serum were tested with colorimeter. Results: Compared with the control group, the serum NO content and NOS activity increased with increasing diabetic course in rat, with no marked rise within week 1 and significant rise at week 4. Conclusion: the serum NO content is increased in advanced diabetes, which makes β-cell injury severe and the disease remission difficult.
Key word diabets; nitric oxide; NO synthetase; rat
糖尿病是由胰岛的β细胞损伤所致，最近研究证实，诱导NO合成在I型糖尿病过程中对胰岛β细胞的破坏有一定作用[1]。给大鼠腹腔一次大剂量注射STZ所制得的速发型糖尿病系胰岛β细胞直接受损所致，是目前国内外使用较多的一种制备糖尿病动物模型的方法，接近于人的I型糖尿病[2]。我们利用该模型，研究糖尿病大鼠不同时期血清内NO含量的变化，发现NO主要在糖尿病晚期起作用。
1 材料和方法
1.1 药品与试剂
STZ为Sigma公司产品；NO试剂盒和NOS活力测定试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品。
1.2 动物模型的建立和实验分组
Wistar大鼠32只，均为雄性，鼠龄11个月，体重250～400g，无显著差异，由本院实验动物中心提供。随机分为正常对照组和实验组，实验组又分为给STZ后3天组、1周组和4周组。实验组均在乙醚麻醉下，腹腔注射STZ60mg/kg(0.1mol/L)枸橼酸 枸橼酸钠缓冲液，pH4.2)，术后72h测定空腹血糖，血糖16～30mmol/L者纳入糖尿病实验组。正常组一次腹腔注射与STZ等量生理盐水。第4周组有2只大鼠因麻醉、采血等失误中途死亡。
1.3 血糖NO含量和NOS活力的测定
分别采用NO试剂盒(硝酸还原酶法)和NOS活力测定试剂盒，测定按试剂盒说明书进行，血糖采用邻甲苯胺法测定。
1.4 数据处理
数据以均数±标准差(
±s)表示，各组间差异的比较采用t检验。2 结果
2.1 血糖的变化
血糖正常(5.97±0.65)mmol/L，糖尿病3天组(20.43±4.32)mmol/L，糖尿病1周组(24.57±3.11)mmol/L，糖尿病4周组(20.41±2.84)mmol/L，与正常对照组比较，3个实验组血糖均明显高于正常对照组(P<0.05)。
2.2 糖尿病大鼠血清NO含量和NOS活力的变化
血清NO含量和NOS活力与其正常对照组比较，糖尿病3天组和1周组均呈上升趋势，但无显著性差异(P>0.05)；糖尿病4周组则明显高于正常对照组，有显著差异(P<0.05)。
详见附表。
附表 糖尿病大鼠血清NO含量和NOS活力的变化(
±s) 组别n
NOS活力(u/ml)
NO含量(μmol/L)
正常对照组
8
68.7±12.9
169.1±28.2
糖尿病3天组
8
70.8±5.51
189.7±25.1*
糖尿病1周组
8
83.3±11.11
191.4±46.0*
糖尿病4周组
6
103.0±13.42
383.0±106.3△
注：与正常对照组比较*P>0.05，△P<0.05
3 讨论
血清NO含量代表体内NO水平，高浓度NO是损伤β细胞的终末效应因子。据McDaniel等[3]的研究表明，使β细胞自身产生高浓度的NO而死亡的机制是IL-1可特异性地诱导纯化β细胞表达iNOS。本研究表明，实验性糖尿病大鼠随着患病时间的延长，血清NOS活力增强和NO含量增加，但在早期(1周内)无显著变化，而到后期(至第4周)则出现显著变化，说明高浓度NO主要在糖尿病晚期起作用，造成β细胞死亡，加重糖尿病，使糖尿病不易缓解。
参考文献
1.Corbett JA. Proc Natl Acad Sci USA, 1993;90:8922
2.孙子林,葛祖恺.糖尿病动物模型及其进展.中国糖尿病杂志,1999;7(4):227
3.McDaniel ML, Kwon G, hILL JR, et al. Cytokines and nitric oxide in islet inflammation and diabetes (43950D). PSEBM, 1996,211:24
(2000-04-14收稿)