哇巴因的升压作用及哇巴因抗体对高血压大鼠血压的影响
作者：原卫清 王颢 吕卓人 袁育康 任会勋
单位：原卫清 王颢 吕卓人(710061 陕西省西安市,西安医科大学第一附属医院,心内科)；袁育康 任会勋(西安医科大学，免疫学教研室)
关键词：哇巴因；抗体；高血压
中国循环杂志000329 摘要
目的：探讨内源性哇巴因在高血压发病中的作用。
方法：分别给予正常SD大鼠每天腹腔注射外源性哇巴因(25 μg/kg,哇巴因组)及等量生理盐水(对照组),观察用药10周血压的动态变化;“一肾一夹”高血压大鼠分别给予舌下静脉注射哇巴因抗体(哇巴因抗体组)、生理盐水(生理盐水组)及正常兔免疫球蛋白G(正常兔IgG组),颈动脉插管监测血压,观察用药后3小时内血压的动态改变。
, 百拇医药
结果：与对照组比较哇巴因组大鼠注射哇巴因后3周血压即开始升高[120.5±15.4 mmHg 比109.4±11.8 mmHg (1 mmHg=0.133 kPa),P<0.05],第10周时血压明显高于对照组(143.6±17.3 mmHg 比121.3±15.3 mmHg,P<0.01);哇巴因抗体对“一肾一夹”高血压大鼠具有明显的降压作用,而正常兔IgG组与生理盐水组比较降压作用不明显。
结论：体内哇巴因含量升高可能是高血压发病因素之一,在血压升高中发挥着较为重要的作用。
中图分类号:R544.1 文献标识码:A
文章编号:1000-3614(2000)03-0184-03
The Pressor Reaction of Ouabain and the Effect of Anti-Ouabain Antibody on Blood Pressure of Hypertensive Rats
, 百拇医药
Yuan Weiqing,Wang Hao,Lu Zhuoren,et al.
(Department of Cardiology,the First Teaching Hospital of Xi'an Medical University,Xi'an 710061,Shaanxi)
Abstract
Objective:To investigate the role of endogenous ouabain (EO) in the pathogenesis of hypertension.
Methods:①Sprague-dawley rats,which were divided into 2 groups,were injected with ouabain〔25 μg/(kg*day),i.p.〕or normal saline once a day for 10 weeks，respectively.Systolic blood pressure was recorded weekly.②1klc (one kidney,one clip) hypertensive rats were randomly divided into 3 groups and injected with anti-ouabain antibody,normal rabbit immunoglobulin G and normal saline from sublingual vein,respectively.The direct systolic blood pressure of all the rats were recorded from carotid artery before and after injection for 3 hours.
, 百拇医药
Results:①After 3 weeks,blood pressure of rats received ouabain increased significantly and was much higher than those of rats injected with normal saline at the end of week 10.②Anti-ouabain antibody could significantly decrease the blood pressure of 1klc hypertensive rats,while the normal rabbit immunoglobulin G or normal saline could not.
Conclusions:EO might play an important role in the pathogenesis of hypertension.
Key words Ouabain;Antibody;Hypertension
, 百拇医药
内源性哇巴因(endogenous ouabain,EO)是新近发现的由肾上腺皮质分泌的一种类固醇激素,可抑制钠泵(Na+-K+-ATP酶)活性,具有强心、排钠、利尿、收缩血管等多种生理和病理生理意义,尤其是内源性哇巴因与高血压发病的关系为该领域研究的重点与热点之一[1,2]。本研究通过给予正常大鼠注射外源性哇巴因以及给予“一肾一夹”高血压大鼠注射哇巴因抗体,动态观察血压的改变,旨在进一步揭示内源性哇巴因在高血压发病中的作用。
1 材料和方法
哇巴因对正常大鼠血压的影响 1997年6月～1998年3月选择体重180～210 g正常雄性SD大鼠20只(鼠龄5～8周,购自本校实验动物中心),随机分为两组,哇巴因组(n=10),每天给予腹腔注射外源性哇巴因25 μg/kg,购自美国Sigma公司,对照组(n=10)每天给予等体积生理盐水,每周1次间接法尾动脉监测血压(MRB-ⅢA型大鼠血压心率测定仪,上海高血压研究所监制),观察用药后10周内血压的动态变化。
, 百拇医药
哇巴因抗体对“一肾一夹”高血压大鼠的降压作用：①哇巴因抗体的制备参阅本实验室建立的方法[3],酶联免疫吸附试验测定其效价为1∶(5×105);经盐析法提取正常兔血清免疫球蛋白G(IgG);用Folin-酚法对哇巴因抗体及正常兔IgG进行定量。②参照文献介绍的方法制备“一肾一夹”高血压大鼠模型(n=25)[4]:用一直径为0.3 mm的银夹夹住左肾动脉,1周后切除右肾。每周2次间接法尾动脉监测大鼠收缩压,待收缩压升高至140 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)以上或较术前升高30 mmHg并稳定1周后进行降压实验。③降压实验:“一肾一夹”高血压大鼠随机分为3组,均经25%乌拉坦麻醉,颈动脉插管监测血压,待血压稳定后分别给予舌下静脉注射哇巴因抗体4.6 mg/kg,具体剂量由预实验得出(哇巴因抗体组,n=9)、等体积的生理盐水(生理盐水组,n=8)及注射正常兔IgG 4.6 mg/kg(正常兔IgG组,n=8),观察用药后3小时内血压的动态改变。
, 百拇医药 统计学处理 实验数据以均数±标准差表示,应用MS Excel 5.0统计软件处理,各组间相同时间点血压值比较采用配对t检验。
2 结果
哇巴因对正常大鼠血压的影响见图1。哇巴因组与对照组比较注射哇巴因后3周大鼠血压即开始升高(120.5±15.4 mmHg比109.4±11.8 mmHg，P<0.05),第10周时血压明显高于对照组(143.6±17.3 mmHg比121.3±15.3 mmHg,P<0.01)。
图1 正常SD大鼠注射哇巴因后血压的动态改变。与对照组比较*P<0.05 **P<0.01。1 mmHg=0.133 kPa
“一肾一夹”大鼠术后血压的动态变化 “一肾一夹”大鼠在肾切除术后与术前比,术后1周血压开始升高(138±16.8 mmHg比106.2±16.3 mmHg,P<0.01),4周后血压较术前明显升高(179.3±18.2 mmHg比106.2±16.3 mmHg,P<0.001)。
, 百拇医药
哇巴因抗体对“一肾一夹”高血压大鼠的降压作用见图2。
图2 “一肾一夹”高血压大鼠注射哇巴因抗体后血压的动态变化。与生理盐水组比较*P<0.05 **P<0.01。IgG：免疫球蛋白G。1 mmHg=0.133 kPa
由图2可见,哇巴因抗体对“一肾一夹”高血压大鼠具有明显的降压作用,给予“一肾一夹” 高血压大鼠注射哇巴因抗体后1分,血压开始下降,2～5分血压达最低,降压作用持续约30分。而正常兔IgG组与生理盐水组比较降压作用不明显。
3 讨论
以前人们对内源性哇巴因的化学本质并不完全认识,根据其可抑制钠泵活性,具有强心、利钠等作用的特点,常将其称之为“内源性类洋地黄物质”、“内源性钠泵抑制物”、“地高辛样因子”或“利钠因子”等。近年来大量证据表明该物质的分子结构及理化特性与外源性哇巴因相同,是主要由肾上腺皮质分泌的一种类固醇激素,可称之为内源性哇巴因,具有重要的生理和病理生理意义[1,2]。有证据显示,内源性哇巴因在原发性高血压、继发性高血压以及高血压动物模型体内含量均可增高,与高血压的发病有着密切的联系[1,2]。本研究结果表明,长期给予小剂量哇巴因可使正常大鼠的血压升高,而且哇巴因抗体可通过特异性地与体内内源性哇巴因结合而使“一肾一夹”高血压大鼠的血压下降,提示体内内源性哇巴因升高可能是高血压发病因素之一。
, 百拇医药
本研究选用“一肾一夹”高血压大鼠作为降压试验的动物模型,主要是因为参阅相关文献,推测该模型体内内源性哇巴因含量可能升高,并且在其血压升高的机制中起着重要作用:“一肾一夹”高血压大鼠体内存在着明显的钠水潴留、肾素—血管紧张素系统激活以及交感神经活性增高[4],而研究表明这些因素均可引起内源性哇巴因分泌增加,并在多种高血压动物模型血压升高过程中起着重要作用[5～8]。最近,我们应用高度敏感及特异的检测方法证明了“一肾一夹”高血压大鼠血中内源性哇巴因含量明显高于正常大鼠(2.25±0.92 μg/L比1.12±0.17 μg/L,P<0.05),且血中内源性哇巴因水平与大鼠收缩压呈显著正相关(r=0.59,P<0.05,另文报道)。哇巴因抗体可能主要是通过与“一肾一夹”高血压大鼠体内升高的内源性哇巴因相结合而产生降压作用,间接证明了内源性哇巴因可能是高血压的发病因素之一。
哇巴因升高血压的机制尚未完全清楚,可能是通过抑制钠泵活性,增加细胞内Na+,继发性引起一系列细胞生物学效应的改变[1,2]。①细胞内Na+含量升高,Na+-Ca2+交换增加,细胞内Ca2+增多,可直接引起血管收缩;②钠泵抑制后中枢交感神经活性增加;③增加神经突触释放神经递质,外周交感神经活性增强;④增加阻力血管对内源性血管加压物质的敏感性,降低驰张因子的作用;⑤促进醛固酮分泌,进一步增加钠水潴留,提高血管张力;⑥刺激血管平滑肌增生,使周围小血管阻力增加。从而通过多种途径的综合作用引起血压升高。
, http://www.100md.com
国家自然科学基金(No.39670325)及国家医药技术创新博士项目(98-B-07)资助课题
原卫清(1968-)女,主治医师,博士研究生,主要从事高血压及心脏内分泌学研究
参考文献
1，Hamlyn JM,Lu ZR,Manunta P,et al.Observation on the nature,biosynthesis,secretion,and significance of endogenous ouabain.Clin Exp Hypertens,1998,20:523—533.
2，Hamlyn JM,Hamiltong BP,Manunta P.Endogenous ouabain,sodium balance and blood pressure:a review and a hypothesis.J Hypertens,1996,14:151—167.
, 百拇医药
3，王颢,吕卓人,袁育康,等.酶联免疫吸附试验测定血清内源性哇巴因.中华医学检验杂志,1998,21:85—87.
4，徐叔云,卞如廉,陈修主编.药理实验方法学.第2版.北京:人民卫生出版社,1991,819.
5，Yamada K,Goto A,Hui C,et al.Role of ouabainlike compound in rats with reduced renal mass-saline hypertension.Am J Physiol,1994,266:H1357—H1362.
6，Komiyama Y,Mori T,Murakami T,et al.Production of ouabain-like factors of hypothalamo-pituitary origin,determined by a sensitive ELISA for ouabain,is increased in DOCA-salt hypertensive rats.Pathophysiology,1995,2:35—40.
, 百拇医药
7，Laredo J,Shah JR,Lu ZR,et al.Angiotensin Ⅱ stimulates secretion of endogenous ouabain from bovine adrenocortical cells via angiotensin type 2 receptors.Hypertension,1997,29:401—407.
8，Yamada K,Goto A,Omata M.Modulation of the levels of ouabain-like compound by central catecholamine neurons in rats.FEBS Letters,1995,360:67—69.
1999-09-27
2000-03-09, 百拇医药
单位：原卫清 王颢 吕卓人(710061 陕西省西安市,西安医科大学第一附属医院,心内科)；袁育康 任会勋(西安医科大学，免疫学教研室)
关键词：哇巴因；抗体；高血压
中国循环杂志000329 摘要
目的：探讨内源性哇巴因在高血压发病中的作用。
方法：分别给予正常SD大鼠每天腹腔注射外源性哇巴因(25 μg/kg,哇巴因组)及等量生理盐水(对照组),观察用药10周血压的动态变化;“一肾一夹”高血压大鼠分别给予舌下静脉注射哇巴因抗体(哇巴因抗体组)、生理盐水(生理盐水组)及正常兔免疫球蛋白G(正常兔IgG组),颈动脉插管监测血压,观察用药后3小时内血压的动态改变。
, 百拇医药
结果：与对照组比较哇巴因组大鼠注射哇巴因后3周血压即开始升高[120.5±15.4 mmHg 比109.4±11.8 mmHg (1 mmHg=0.133 kPa),P<0.05],第10周时血压明显高于对照组(143.6±17.3 mmHg 比121.3±15.3 mmHg,P<0.01);哇巴因抗体对“一肾一夹”高血压大鼠具有明显的降压作用,而正常兔IgG组与生理盐水组比较降压作用不明显。
结论：体内哇巴因含量升高可能是高血压发病因素之一,在血压升高中发挥着较为重要的作用。
中图分类号:R544.1 文献标识码:A
文章编号:1000-3614(2000)03-0184-03
The Pressor Reaction of Ouabain and the Effect of Anti-Ouabain Antibody on Blood Pressure of Hypertensive Rats
, 百拇医药
Yuan Weiqing,Wang Hao,Lu Zhuoren,et al.
(Department of Cardiology,the First Teaching Hospital of Xi'an Medical University,Xi'an 710061,Shaanxi)
Abstract
Objective:To investigate the role of endogenous ouabain (EO) in the pathogenesis of hypertension.
Methods:①Sprague-dawley rats,which were divided into 2 groups,were injected with ouabain〔25 μg/(kg*day),i.p.〕or normal saline once a day for 10 weeks，respectively.Systolic blood pressure was recorded weekly.②1klc (one kidney,one clip) hypertensive rats were randomly divided into 3 groups and injected with anti-ouabain antibody,normal rabbit immunoglobulin G and normal saline from sublingual vein,respectively.The direct systolic blood pressure of all the rats were recorded from carotid artery before and after injection for 3 hours.
, 百拇医药
Results:①After 3 weeks,blood pressure of rats received ouabain increased significantly and was much higher than those of rats injected with normal saline at the end of week 10.②Anti-ouabain antibody could significantly decrease the blood pressure of 1klc hypertensive rats,while the normal rabbit immunoglobulin G or normal saline could not.
Conclusions:EO might play an important role in the pathogenesis of hypertension.
Key words Ouabain;Antibody;Hypertension
, 百拇医药
内源性哇巴因(endogenous ouabain,EO)是新近发现的由肾上腺皮质分泌的一种类固醇激素,可抑制钠泵(Na+-K+-ATP酶)活性,具有强心、排钠、利尿、收缩血管等多种生理和病理生理意义,尤其是内源性哇巴因与高血压发病的关系为该领域研究的重点与热点之一[1,2]。本研究通过给予正常大鼠注射外源性哇巴因以及给予“一肾一夹”高血压大鼠注射哇巴因抗体,动态观察血压的改变,旨在进一步揭示内源性哇巴因在高血压发病中的作用。
1 材料和方法
哇巴因对正常大鼠血压的影响 1997年6月～1998年3月选择体重180～210 g正常雄性SD大鼠20只(鼠龄5～8周,购自本校实验动物中心),随机分为两组,哇巴因组(n=10),每天给予腹腔注射外源性哇巴因25 μg/kg,购自美国Sigma公司,对照组(n=10)每天给予等体积生理盐水,每周1次间接法尾动脉监测血压(MRB-ⅢA型大鼠血压心率测定仪,上海高血压研究所监制),观察用药后10周内血压的动态变化。
, 百拇医药
哇巴因抗体对“一肾一夹”高血压大鼠的降压作用：①哇巴因抗体的制备参阅本实验室建立的方法[3],酶联免疫吸附试验测定其效价为1∶(5×105);经盐析法提取正常兔血清免疫球蛋白G(IgG);用Folin-酚法对哇巴因抗体及正常兔IgG进行定量。②参照文献介绍的方法制备“一肾一夹”高血压大鼠模型(n=25)[4]:用一直径为0.3 mm的银夹夹住左肾动脉,1周后切除右肾。每周2次间接法尾动脉监测大鼠收缩压,待收缩压升高至140 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)以上或较术前升高30 mmHg并稳定1周后进行降压实验。③降压实验:“一肾一夹”高血压大鼠随机分为3组,均经25%乌拉坦麻醉,颈动脉插管监测血压,待血压稳定后分别给予舌下静脉注射哇巴因抗体4.6 mg/kg,具体剂量由预实验得出(哇巴因抗体组,n=9)、等体积的生理盐水(生理盐水组,n=8)及注射正常兔IgG 4.6 mg/kg(正常兔IgG组,n=8),观察用药后3小时内血压的动态改变。
, 百拇医药 统计学处理 实验数据以均数±标准差表示,应用MS Excel 5.0统计软件处理,各组间相同时间点血压值比较采用配对t检验。
2 结果
哇巴因对正常大鼠血压的影响见图1。哇巴因组与对照组比较注射哇巴因后3周大鼠血压即开始升高(120.5±15.4 mmHg比109.4±11.8 mmHg，P<0.05),第10周时血压明显高于对照组(143.6±17.3 mmHg比121.3±15.3 mmHg,P<0.01)。
图1 正常SD大鼠注射哇巴因后血压的动态改变。与对照组比较*P<0.05 **P<0.01。1 mmHg=0.133 kPa
“一肾一夹”大鼠术后血压的动态变化 “一肾一夹”大鼠在肾切除术后与术前比,术后1周血压开始升高(138±16.8 mmHg比106.2±16.3 mmHg,P<0.01),4周后血压较术前明显升高(179.3±18.2 mmHg比106.2±16.3 mmHg,P<0.001)。
, 百拇医药
哇巴因抗体对“一肾一夹”高血压大鼠的降压作用见图2。
图2 “一肾一夹”高血压大鼠注射哇巴因抗体后血压的动态变化。与生理盐水组比较*P<0.05 **P<0.01。IgG：免疫球蛋白G。1 mmHg=0.133 kPa
由图2可见,哇巴因抗体对“一肾一夹”高血压大鼠具有明显的降压作用,给予“一肾一夹” 高血压大鼠注射哇巴因抗体后1分,血压开始下降,2～5分血压达最低,降压作用持续约30分。而正常兔IgG组与生理盐水组比较降压作用不明显。
3 讨论
以前人们对内源性哇巴因的化学本质并不完全认识,根据其可抑制钠泵活性,具有强心、利钠等作用的特点,常将其称之为“内源性类洋地黄物质”、“内源性钠泵抑制物”、“地高辛样因子”或“利钠因子”等。近年来大量证据表明该物质的分子结构及理化特性与外源性哇巴因相同,是主要由肾上腺皮质分泌的一种类固醇激素,可称之为内源性哇巴因,具有重要的生理和病理生理意义[1,2]。有证据显示,内源性哇巴因在原发性高血压、继发性高血压以及高血压动物模型体内含量均可增高,与高血压的发病有着密切的联系[1,2]。本研究结果表明,长期给予小剂量哇巴因可使正常大鼠的血压升高,而且哇巴因抗体可通过特异性地与体内内源性哇巴因结合而使“一肾一夹”高血压大鼠的血压下降,提示体内内源性哇巴因升高可能是高血压发病因素之一。
, 百拇医药
本研究选用“一肾一夹”高血压大鼠作为降压试验的动物模型,主要是因为参阅相关文献,推测该模型体内内源性哇巴因含量可能升高,并且在其血压升高的机制中起着重要作用:“一肾一夹”高血压大鼠体内存在着明显的钠水潴留、肾素—血管紧张素系统激活以及交感神经活性增高[4],而研究表明这些因素均可引起内源性哇巴因分泌增加,并在多种高血压动物模型血压升高过程中起着重要作用[5～8]。最近,我们应用高度敏感及特异的检测方法证明了“一肾一夹”高血压大鼠血中内源性哇巴因含量明显高于正常大鼠(2.25±0.92 μg/L比1.12±0.17 μg/L,P<0.05),且血中内源性哇巴因水平与大鼠收缩压呈显著正相关(r=0.59,P<0.05,另文报道)。哇巴因抗体可能主要是通过与“一肾一夹”高血压大鼠体内升高的内源性哇巴因相结合而产生降压作用,间接证明了内源性哇巴因可能是高血压的发病因素之一。
哇巴因升高血压的机制尚未完全清楚,可能是通过抑制钠泵活性,增加细胞内Na+,继发性引起一系列细胞生物学效应的改变[1,2]。①细胞内Na+含量升高,Na+-Ca2+交换增加,细胞内Ca2+增多,可直接引起血管收缩;②钠泵抑制后中枢交感神经活性增加;③增加神经突触释放神经递质,外周交感神经活性增强;④增加阻力血管对内源性血管加压物质的敏感性,降低驰张因子的作用;⑤促进醛固酮分泌,进一步增加钠水潴留,提高血管张力;⑥刺激血管平滑肌增生,使周围小血管阻力增加。从而通过多种途径的综合作用引起血压升高。
, http://www.100md.com
国家自然科学基金(No.39670325)及国家医药技术创新博士项目(98-B-07)资助课题
原卫清(1968-)女,主治医师,博士研究生,主要从事高血压及心脏内分泌学研究
参考文献
1，Hamlyn JM,Lu ZR,Manunta P,et al.Observation on the nature,biosynthesis,secretion,and significance of endogenous ouabain.Clin Exp Hypertens,1998,20:523—533.
2，Hamlyn JM,Hamiltong BP,Manunta P.Endogenous ouabain,sodium balance and blood pressure:a review and a hypothesis.J Hypertens,1996,14:151—167.
, 百拇医药
3，王颢,吕卓人,袁育康,等.酶联免疫吸附试验测定血清内源性哇巴因.中华医学检验杂志,1998,21:85—87.
4，徐叔云,卞如廉,陈修主编.药理实验方法学.第2版.北京:人民卫生出版社,1991,819.
5，Yamada K,Goto A,Hui C,et al.Role of ouabainlike compound in rats with reduced renal mass-saline hypertension.Am J Physiol,1994,266:H1357—H1362.
6，Komiyama Y,Mori T,Murakami T,et al.Production of ouabain-like factors of hypothalamo-pituitary origin,determined by a sensitive ELISA for ouabain,is increased in DOCA-salt hypertensive rats.Pathophysiology,1995,2:35—40.
, 百拇医药
7，Laredo J,Shah JR,Lu ZR,et al.Angiotensin Ⅱ stimulates secretion of endogenous ouabain from bovine adrenocortical cells via angiotensin type 2 receptors.Hypertension,1997,29:401—407.
8，Yamada K,Goto A,Omata M.Modulation of the levels of ouabain-like compound by central catecholamine neurons in rats.FEBS Letters,1995,360:67—69.
1999-09-27
2000-03-09, 百拇医药